一種從柏樹(shù)中提取紅松內(nèi)酯的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種從柏樹(shù)中提取紅松內(nèi)酯的方法，包括如下步驟：(1)將柏樹(shù)的樹(shù)干或樹(shù)葉或樹(shù)枝粉碎，經(jīng)過(guò)醇提取，過(guò)濾，合并濾液；(2)將濾液濃縮成浸膏，浸膏混懸在水中，經(jīng)過(guò)萃取劑萃取，合并萃取液；(3)將萃取液濃縮成浸膏，直接進(jìn)行柱分離，有機(jī)溶劑洗脫得洗脫液；(4)洗脫液揮干溶劑，得到紅松內(nèi)酯粗品；將紅松內(nèi)酯粗品經(jīng)多次重結(jié)晶，得紅松內(nèi)酯單體。本發(fā)明的紅松內(nèi)酯提取方法，具有提取工藝簡(jiǎn)單、提取率高，提前得到的紅松內(nèi)酯單體純度高等優(yōu)勢(shì)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種從柏樹(shù)中提取紅松內(nèi)酯的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及一種倍半萜類(lèi)化合物提取方法，特別涉及一種從柏樹(shù)中提取紅松內(nèi)酯單體的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]紅松內(nèi)酯是一種倍半萜類(lèi)化合物，是多種藥材的主要有效成分之一。已有研究表明，紅松內(nèi)酯具有改善高血糖引起的胰島素抵抗、抗白血病、抗炎、神經(jīng)保護(hù)等作用。
[0003]紅松內(nèi)酯廣泛存在于各種中藥材及樹(shù)種中，例如柏樹(shù)、北美翠柏、阿爾芒松、巴豆銀盾等。研究發(fā)現(xiàn)在柏樹(shù)中紅松內(nèi)酯含量較高。柏樹(shù)有多個(gè)變種，其中包括側(cè)柏、圓柏、扁柏、花柏等。
[0004]目前，紅松內(nèi)酯的獲得途徑，除了 Shults等(Shults ,Velder, Schmalz , et al.,B10rganic&Medicinal Chemistry letters, 2006,6( 16) ,4228-4232.)描述的合成方法進(jìn)行合成得到外，還可通過(guò)從藥材中提取獲得。很多藥材例如柏樹(shù)等藥材中紅松內(nèi)酯含量很高。山東臨沂側(cè)柏葉中的紅松內(nèi)酯含量就有1.0 %左右。但由于藥材中含有各種倍半萜類(lèi)、單萜類(lèi)、二萜類(lèi)、脂肪類(lèi)等物質(zhì)，而且倍半萜類(lèi)化合物含有多種結(jié)構(gòu)相似的物質(zhì)。要得到紅松內(nèi)酯單體，需要把紅松內(nèi)酯與其他各種化合物分離開(kāi)來(lái)。以往的研究，未能提供一種獲得紅松內(nèi)酯單體的可行、簡(jiǎn)單、有效的提取分離方法。從藥材(特別是柏樹(shù))中提取紅松內(nèi)酯單體的方法，尚無(wú)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]為克服上述技術(shù)缺陷和技術(shù)空白，本發(fā)明公開(kāi)了一種從柏樹(shù)中提取紅松內(nèi)酯單體的方法。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)方案如下:一種從柏樹(shù)中提取紅松內(nèi)酯的方法，包括如下步驟:
[0007](I)、將柏樹(shù)的樹(shù)干或樹(shù)葉或樹(shù)枝粉碎，經(jīng)過(guò)醇提取，過(guò)濾，合并濾液；
[0008](2)、將濾液濃縮成浸膏，浸膏混懸在水中，經(jīng)過(guò)萃取劑萃取，合并萃取液；
[0009](3)、將萃取液濃縮成浸膏，直接進(jìn)行柱分離，有機(jī)溶劑洗脫得洗脫液；
[0010](4)、洗脫液揮干溶劑，得到紅松內(nèi)酯粗品；將紅松內(nèi)酯粗品經(jīng)多次重結(jié)晶，得紅松內(nèi)酯單體。
[0011 ] 所述步驟(I)中粉碎至粒徑為40目以下。
[0012]所述步驟(I)中醇提取是在24至100°C條件下或者超聲條件下進(jìn)行;所述醇為甲醇或乙醇或甲醇溶液或乙醇溶液;提取次數(shù)為I至五次;提取時(shí)間為0.1-24小時(shí)。
[0013]所述步驟(2)中萃取劑為環(huán)己烷、石油醚或者氯仿。
[0014]所述步驟(3)中的柱分離采用的柱填料為硅膠、聚酰胺、大孔樹(shù)脂或葡聚糖凝膠填料。
[0015]所述步驟(3)中有機(jī)溶劑為純環(huán)己烷或石油醚、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇中任意一種或幾種混合物或環(huán)己烷或石油醚、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇的溶液中任意一種或幾種混合物。
[0016]所述步驟(4)中重結(jié)晶所用的溶劑為水或者有機(jī)溶劑，所述有機(jī)溶劑為環(huán)己烷、氯仿、二氯甲烷、石油醚、甲醇中任意一種;重結(jié)晶的次數(shù)為1-10次。
[0017]所述柏樹(shù)為側(cè)柏。
[0018]本發(fā)明的有益效果在于:(I)本發(fā)明工從柏樹(shù)Platycladus orientalis(L.)Francoptmxj jkmsc及其變種側(cè)柏等中提取紅松內(nèi)酯(單體)，提取率均在90%以上，提取率高；(2)采用本發(fā)明方法所得到的紅松內(nèi)酯單體，經(jīng)過(guò)《中華人民共和國(guó)藥典》2015版一部高效液相色譜法測(cè)定，以中國(guó)藥品生物制品檢定所提供的紅松內(nèi)酯對(duì)照品進(jìn)行外標(biāo)法定量，得到提取所得紅松內(nèi)酯樣品中紅松內(nèi)酯單體的含量。結(jié)果表明，樣品中紅松內(nèi)酯單體的含量高于95%，表明本發(fā)明工藝可行；(3)本發(fā)明的紅松內(nèi)酯提取方法，具有提取工藝簡(jiǎn)單、提取率高，提取得到的紅松內(nèi)酯單體純度高等優(yōu)勢(shì)。
【具體實(shí)施方式】
[0019]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明。
[0020]各實(shí)施例所涉及到的固體混合物中之固體，液體中之液體，以及液體中之固體的百分比分別是以wt/wt，vol/vol，wt/vol計(jì)算，除非另有說(shuō)明。
[0021]實(shí)施例1:
[0022]側(cè)柏的葉子切碎，加入95%乙醇沒(méi)過(guò)藥材，加熱50°C回流提取五次，每次三小時(shí)，過(guò)濾;濾液濃縮成浸膏，浸膏混懸在水中，按體積比為1:1的比例，進(jìn)行環(huán)己烷萃取，將環(huán)己烷萃取液進(jìn)行濃縮，得到環(huán)己烷萃取濃縮浸膏，過(guò)硅膠柱，先用環(huán)己烷:乙酸乙酯(30:1)比例洗脫，再用環(huán)己烷:乙酸乙酯(25:1)比例洗脫;收集洗脫液，揮干溶劑濃縮得到沉淀，干燥沉淀，用二氯甲烷重結(jié)晶三次后，得到紅松內(nèi)酯單體。得率為91.5%。
[0023]實(shí)施例2
[0024]側(cè)柏的葉子切碎至40目以下，加入甲醇沒(méi)過(guò)藥材，加熱60°C回流提取3次，每次5小時(shí)，過(guò)濾;濾液濃縮成浸膏，浸膏混懸在水中，按體積比為1:1的比例，進(jìn)行氯仿萃取，將氯仿萃取液進(jìn)行濃縮，得到氯仿萃取濃縮浸膏，過(guò)Sephadex LH-20柱，用氯仿:甲醇(7:3)洗脫，每20mL作為一個(gè)餾分進(jìn)行濃縮，根據(jù)薄層層析結(jié)果指導(dǎo)合并，合并含有紅松內(nèi)酯的餾分，濃縮得到沉淀，干燥沉淀，用二氯甲烷重結(jié)晶三次后，得到紅松內(nèi)酯單體。得率為96.1 %。
[0025]實(shí)施例3:
[0026]紅松內(nèi)酯單體純度測(cè)定實(shí)驗(yàn)
[0027]分別取實(shí)施例1、實(shí)施例2中制備得到的紅松內(nèi)酯適量，分別用甲醇溶解定溶于容量瓶中，再用微孔濾膜(0.45μπι)過(guò)濾后，注入高效液相色譜儀中，以中國(guó)藥品生物制品檢定所提供的紅松內(nèi)酯對(duì)照品進(jìn)行外標(biāo)法定量，得到提取所得紅松內(nèi)酯樣品中紅松內(nèi)酯單體的含量。
[0028]色譜條件:Agilent 1100高效液相色譜儀(自動(dòng)進(jìn)樣器，真空脫氣機(jī)，四元栗，柱溫箱，二極管陣列檢測(cè)器)；色譜柱= MAPKER ODS柱(5ym，4.0X250mm);流動(dòng)相:甲醇-水(85:15)；檢測(cè)波長(zhǎng):205nm ；柱溫:24°C ;流速:lmL/min ；進(jìn)樣量:5yL。
[0029]從結(jié)果發(fā)現(xiàn)，實(shí)施例1、實(shí)施例2中制備得到的紅松內(nèi)酯中紅松內(nèi)酯單體的含量均高于95%。說(shuō)明本發(fā)明提取方法所得到的紅松內(nèi)酯樣品純度高。說(shuō)明本發(fā)明的紅松內(nèi)酯提取方法，能有效地從柏樹(shù)中提取得到紅松內(nèi)酯單體，所得紅松內(nèi)酯樣品純度高，含量均高于95%以上。工藝簡(jiǎn)單可行。
[0030]綜上所述，但本發(fā)明并不局限于上述實(shí)施方式，本領(lǐng)域一般技術(shù)人員在本發(fā)明所揭露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到的變化，均在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種從柏樹(shù)中提取紅松內(nèi)酯的方法，其特征在于包括如下步驟: (1)將柏樹(shù)的樹(shù)干或樹(shù)葉或樹(shù)枝粉碎，經(jīng)過(guò)醇提取，過(guò)濾，合并濾液； (2)將濾液濃縮成浸膏，浸膏混懸在水中，經(jīng)過(guò)萃取劑萃取，合并萃取液； (3)將萃取液濃縮成浸膏，直接進(jìn)行柱分離，有機(jī)溶劑洗脫得洗脫液； (4)洗脫液揮干溶劑，得到紅松內(nèi)酯粗品；將紅松內(nèi)酯粗品經(jīng)多次重結(jié)晶，得紅松內(nèi)酯單體。2.如權(quán)利要求1所述的從柏樹(shù)中提取紅松內(nèi)酯的方法，其特征在于:所述步驟(I)中粉碎至粒徑為40目以下。3.如權(quán)利要求1所述的從柏樹(shù)中提取紅松內(nèi)酯的方法，其特征在于:所述步驟(I)中醇提取是在24至100°C條件下或者超聲條件下進(jìn)行;所述醇為甲醇或乙醇或甲醇溶液或乙醇溶液;提取次數(shù)為I至五次;提取時(shí)間為0.1-24小時(shí)。4.如權(quán)利要求1所述的從柏樹(shù)中提取紅松內(nèi)酯的方法，其特征在于:所述步驟(2)中萃取劑為環(huán)己烷、石油醚或者氯仿。5.如權(quán)利要求1所述的從柏樹(shù)中提取紅松內(nèi)酯的方法，其特征在于:所述步驟(3)中的柱分離采用的柱填料為硅膠、聚酰胺、大孔樹(shù)脂或葡聚糖凝膠填料。6.如權(quán)利要求1所述的從柏樹(shù)中提取紅松內(nèi)酯的方法，其特征在于:所述步驟(3)中有機(jī)溶劑為純環(huán)己烷或石油醚、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇中任意一種或幾種混合物或環(huán)己烷或石油醚、二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇的溶液中任意一種或幾種混合物。7.如權(quán)利要求1所述的從柏樹(shù)中提取紅松內(nèi)酯的方法，其特征在于:所述步驟(4)中重結(jié)晶所用的溶劑為水或者有機(jī)溶劑，所述有機(jī)溶劑為環(huán)己烷、氯仿、二氯甲烷、石油醚、甲醇中任意一種;重結(jié)晶的次數(shù)為1-10次。8.如權(quán)利要求1所述的從柏樹(shù)中提取紅松內(nèi)酯的方法，其特征在于:所述柏樹(shù)為側(cè)柏。
【文檔編號(hào)】C07D307/58GK105837537SQ201610206765
【公開(kāi)日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2016年4月5日
【發(fā)明人】曾小斌, 唐旭東, 王雪艷, 曾勇, 曾金平, 黃育冰
【申請(qǐng)人】深圳清華大學(xué)研究院, 深圳市盛東華科技有限公司