專利名稱：一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制藥領(lǐng)域，涉及一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法。
背景技術(shù)：
黑麥草內(nèi)酯(Loliolide)，分子式為C11H16O3，分子量196. 25，為針狀結(jié)晶，是從忍冬科(Caprifoliaceae)英蓮Viburnum dilatatum Thunb.的葉中分離得到的單職化合物。藥理研究表明，黑麥草內(nèi)酯具有中等免疫抑制活性，在本品IOii g/ml濃度時，對小鼠T-淋巴細(xì)胞增生抑制率為27. 2%，對B-淋巴細(xì)胞增生抑制率為8. 1% ;黑麥草內(nèi)酯具有強(qiáng)的細(xì)胞毒活性，對艾氏腹水瘤的ED50為0. 5 ii g/ml。目前，國內(nèi)尚未見黑麥草內(nèi)酯的萃取純化方法方面的專利報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明旨在克服上述技術(shù)缺陷，提供一種分離效果好、收率高、產(chǎn)品純度好，適合工業(yè)化生產(chǎn)的黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案
一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法，其特征是以莢蓮葉為原料，采用亞臨界流體萃取，控制萃取壓力為6-9MPa，萃取溫度為38-55°C，通入丙烷，靜態(tài)萃取25min后動態(tài)萃取30-80min,所得萃取物進(jìn)行高壓硅膠柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，薄層層析，收集含黑麥草內(nèi)酯的組分，濃縮成浸膏后用甲醇溶解，經(jīng)制備型液相色譜進(jìn)行純化，甲醇水溶液進(jìn)行洗脫，濃縮相應(yīng)組分，放置結(jié)晶，二氯甲烷-甲醇重結(jié)晶即得黑麥草內(nèi)酯。所述丙燒的流量為5_8g/min。所述高壓硅膠柱的柱壓為2. 2-3. 2MPa，柱內(nèi)徑為150_250mm，層析柱徑高比為1:12-20，硅膠目數(shù)為100-300目，石油醚-丙酮體積比為100 :7-25。所述甲醇水溶液的體積百分比濃度為65-70%。本發(fā)明的有益效果是
1、本發(fā)明方法通過亞臨界流體萃取、柱層析及制備型液相色譜分離、重結(jié)晶等步驟制備黑麥草內(nèi)酯，耗時短，得率高，操作簡單，易于工業(yè)化生產(chǎn)；
2、使用特制高壓柱層析，上樣量大，周期短，分離度好，產(chǎn)品純度高；
3、本發(fā)明為黑麥草內(nèi)酯的進(jìn)一步開發(fā)利用提供藥理原料、理論和實踐支持。
具體實施例方式 本發(fā)明內(nèi)容通過以下的實施例作進(jìn)一步的闡述，但并不限制本發(fā)明的范圍。實施例I :
取干燥莢蓮葉粗粉5kg，裝入萃取釜中，通入丙烷流體，控制丙烷流量為8g/min，萃取壓力為8MPa，萃取溫度為48°C，靜態(tài)萃取25min后動態(tài)萃取80min，溶于丙烷的黑麥草內(nèi)酯在分離釜中減壓析出，所得萃取物用甲醇溶解濕法上樣至填料為300目硅膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為2. 2MPa，柱內(nèi)徑為150mm，層析柱徑高比為1:18，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100:10、100:15、100:20、100:25洗脫，分段收集各流分，將含黑麥草內(nèi)酯流分合并，減壓回收溶劑，加甲醇溶解，注入制備型液相色譜中，以70%的甲醇水溶液為流動相，流速為15ml/min，紫外檢測器在線監(jiān)測，檢測波長214nm，收集高純度黑麥草內(nèi)酯流分，濃縮，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，用二氯甲烷-甲醇(5:1)重結(jié)晶即得黑麥草內(nèi)酯，HPLC檢測，含量為98. 7%。實施例2:
取干燥莢蓮葉粗粉5kg，裝入萃取釜中，通入丙烷流體，控制丙烷流量為8g/min，萃取壓力為7MPa，萃取溫度為55°C，靜態(tài)萃取25min后動態(tài)萃取30min，溶于丙烷的黑麥草內(nèi)酯在分離釜中減壓析出，所得萃取物用甲醇溶解濕法上樣至填料為200目硅膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為3. 2MPa，柱內(nèi)徑為200mm，層析柱徑高比為1:12，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100:7、100:15、100:20、100:24洗脫，分段收集各流分，將含黑麥草內(nèi)酯流分合并，減壓回收溶劑，加甲醇溶解，注入制備型液相色譜中，以65%的甲醇水溶液為流動相，流速為25ml/min，紫外檢測器在線監(jiān)測，檢測波長214nm，收集高純度黑麥草內(nèi)酯流 分，濃縮，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，用二氯甲烷-甲醇(5:1)重結(jié)晶即得黑麥草內(nèi)酯，HPLC檢測，含量為98. 4%。實施例3:
取干燥莢蓮葉粗粉5kg，裝入萃取釜中，通入丙烷流體，控制丙烷流量為5g/min，萃取壓力為6MPa，萃取溫度為38°C，靜態(tài)萃取25min后動態(tài)萃取50min，溶于丙烷的黑麥草內(nèi)酯在分離釜中減壓析出，所得萃取物用甲醇溶解濕法上樣至填料為100目硅膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為2. 8MPa，柱內(nèi)徑為250mm，層析柱徑高比為1:20，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100:8、100:12、100:18、100:25洗脫，分段收集各流分，將含黑麥草內(nèi)酯流分合并，減壓回收溶劑，加甲醇溶解，注入制備型液相色譜中，以65%的甲醇水溶液為流動相，流速為20ml/min，紫外檢測器在線監(jiān)測，檢測波長214nm，收集高純度黑麥草內(nèi)酯流分，濃縮，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，用二氯甲烷-甲醇(5:1)重結(jié)晶即得黑麥草內(nèi)酯，HPLC檢測，含量為98. 2%。實施例4:
取干燥莢蓮葉粗粉5kg，裝入萃取釜中，通入丙烷流體，控制丙烷流量為6g/min，萃取壓力為9MPa，萃取溫度為45°C，靜態(tài)萃取25min后動態(tài)萃取60min，溶于丙烷的黑麥草內(nèi)酯在分離釜中減壓析出，所得萃取物用甲醇溶解濕法上樣至填料為300目硅膠高壓柱，其中高壓柱的柱壓為2. 5MPa，柱內(nèi)徑為180mm，層析柱徑高比為1:18，以石油醚-丙酮的混合溶劑，依次按體積比100:7、100:12、100:20、100:25洗脫，分段收集各流分，將含黑麥草內(nèi)酯流分合并，減壓回收溶劑，加甲醇溶解，注入制備型液相色譜中，以68%的甲醇水溶液為流動相，流速為25ml/min，紫外檢測器在線監(jiān)測，檢測波長214nm，收集高純度黑麥草內(nèi)酯流分，濃縮，放置結(jié)晶，濾出結(jié)晶，用二氯甲烷-甲醇(5:1)重結(jié)晶即得黑麥草內(nèi)酯，HPLC檢測，含量為98. 1%。
權(quán)利要求
1.一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法，其特征是以莢蓮葉為原料，采用亞臨界流體萃取，控制萃取壓力為6-9MPa，萃取溫度為38-55 °C，通入丙烷，靜態(tài)萃取25min后動態(tài)萃取30-80min,所得萃取物進(jìn)行高壓硅膠柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，薄層層析，收集含黑麥草內(nèi)酯的組分，濃縮成浸膏后用甲醇溶解，經(jīng)制備型液相色譜進(jìn)行純化，甲醇水溶液進(jìn)行洗脫，濃縮相應(yīng)組分，放置結(jié)晶，二氯甲烷-甲醇重結(jié)晶即得黑麥草內(nèi)酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法，其特征在于所述丙烷的流量為 5-8g/min。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法，其特征在于所述高壓硅膠柱的柱壓為2. 2-3. 2MPa，柱內(nèi)徑為150_250mm，層析柱徑高比為1:12-20，硅膠目數(shù)為100-300目，石油醚-丙酮體積比為100 :7-25。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法，其特征在于所述甲醇水溶 液的體積百分比濃度為65-70%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種黑麥草內(nèi)酯的提取純化方法，其特征是以莢蒾葉為原料，采用亞臨界流體萃取，控制萃取壓力為6-9MPa，萃取溫度為38-55℃，通入丙烷，靜態(tài)萃取25min后動態(tài)萃取30-80min，所得萃取物進(jìn)行高壓硅膠柱層析，用石油醚-丙酮梯度洗脫，薄層層析，收集含黑麥草內(nèi)酯的組分，濃縮成浸膏后用甲醇溶解，經(jīng)制備型液相色譜進(jìn)行純化，甲醇水溶液進(jìn)行洗脫，濃縮相應(yīng)組分，放置結(jié)晶，二氯甲烷-甲醇重結(jié)晶即得黑麥草內(nèi)酯。本發(fā)明生產(chǎn)周期短，制備量大、收率高、產(chǎn)品純度好，適合工業(yè)化生產(chǎn)。
文檔編號C07D307/83GK102827119SQ20121037123
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月29日
發(fā)明者劉東鋒, 萬冬梅 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司