專利名稱：一種從臺(tái)灣含笑中提取分離含笑內(nèi)酯的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，特別是涉及一種從臺(tái)灣含笑中提取分離含笑內(nèi)酯的方法。
背景技術(shù)：
含笑內(nèi)酯(Micheliolide)屬于倍半萜內(nèi)酯類化合物,為愈創(chuàng)木烷型倍半萜內(nèi)酯類化合物。分子式為C15H2tlO3,分子量為248. 32，為無(wú)色結(jié)晶，mp. 142_145°C。再木蘭科植物黃蘭 Mickelia champaca L.的根皮、臺(tái)灣含笑#2.<^<97/<3 compressa (Maxim. ) Sarg.的根皮中均有分布。有報(bào)道發(fā)現(xiàn)含笑內(nèi)酯在治療白血病方面同小白菊內(nèi)酯的效果幾乎等同，且其對(duì)正常細(xì)胞無(wú)明顯殺傷作用。研究發(fā)現(xiàn)含笑內(nèi)酯及其衍生物可用于治療如下癌癥白血病、乳腺癌、前列腺癌、大腸癌或肺癌，另有報(bào)道含笑內(nèi)酯還具有治療肝癌、食道癌、胃癌、腸道癌、腎癌、口腔癌、何杰金淋巴癌、胰腺癌、直腸結(jié)腸癌等的用途。 現(xiàn)有制備含笑內(nèi)酯的方法主要通過(guò)化學(xué)合成，中國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?01010153685. 5公開了一種含笑內(nèi)酯的制備方法，以小白菊內(nèi)酯為原料，在適當(dāng)有機(jī)溶劑中，在酸催化劑下制備得到含笑內(nèi)酯，產(chǎn)率達(dá)60%以上。該方法副產(chǎn)物較多，不易分離，且重現(xiàn)性較差，不適用于工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)的不足和缺陷，提供一種從臺(tái)灣含笑中提取分離含笑內(nèi)酯的方法。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下
一種從臺(tái)灣含笑中提取分離含笑內(nèi)酯的方法，其特征在于包括以下步驟以臺(tái)灣含笑為原料，粉碎20-40目，加入萃取釜中，以無(wú)水甲醇為夾帶劑，采用超臨界CO2萃取，收集萃取液，回收甲醇，得萃取物，用石油醚回流脫除脂溶性雜質(zhì)，再將脫脂物用低碳醇熱溶，加入活性炭回流脫色，脫色液回收溶劑至適量體積，經(jīng)制備液相ODS RP-C18反相柱進(jìn)行純化，以甲醇和水的混合溶液進(jìn)行洗脫，濃縮對(duì)應(yīng)組分，石油醚-丙酮(2:1，V/V)重結(jié)晶，得含笑內(nèi)酯產(chǎn)品。所述超臨界CO2萃取條件為萃取溫度為45_60°C，萃取壓力為23_34MPa，分離釜I溫度為40-50°C，壓力為8-10MPa，分離釜II溫度為35_40°C，壓力為4_6MPa，萃取時(shí)間為2-6h。所述石油醚脫脂，加入2-5倍萃取物體積量的石油醚加熱回流脫脂1-3次，離心，分離固液，得脫脂物。所述低碳醇為C1-C4醇，優(yōu)選乙醇、甲醇或異丙醇。所述甲醇和水的混合溶液是指甲醇體積百分比為83%，水的體積百分比為17%的混合溶液。本發(fā)明優(yōu)勢(shì)在于方法采用超臨界CO2萃取，提取效率高、能耗低、綠色環(huán)保；用制備液相直接分離純化出高純度的晶體，為大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)提供了可能，大大節(jié)省了分離時(shí)間，提高了分離率。
具體實(shí)施例方式 下面將結(jié)合具體實(shí)施方式
進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實(shí)施例。實(shí)施例I :
臺(tái)灣含笑藥材粉碎40目，取IOkg原料加入超臨界CO2萃取釜中，開啟設(shè)備，設(shè)定參數(shù)萃取溫度為45°C，萃取壓力為34MPa，分離釜I溫度為40°C，壓力為lOMPa，分離釜II溫度為 38 0C，壓力為4MPa。通入CO2流體，達(dá)到上述參數(shù)后，以CO2液體22L/h流量萃取，并夾帶無(wú)水甲醇3L/h，動(dòng)態(tài)萃取3. 5h，收集萃取液，回收甲醇，加入2倍萃取物體積的石油醚，加熱回流提取I次，離心除去液體，再將脫脂物用甲醇加熱溶解，加入活性炭回流脫色，脫色液回收溶劑至原體積的1/3,以甲醇超聲溶解配制成20mg/ml濃度的溶液,用O. 45 μ m的尼龍膜濾過(guò)濾，用制備高效液相色譜儀分離純化，甲醇-水(83:17)等梯度洗脫，收集響應(yīng)組分旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后，得到純度為95. 3%的含笑內(nèi)酯晶體，再經(jīng)石油醚-丙酮(2:1，V/V)重結(jié)晶3次，得純度為98. 7%的含笑內(nèi)酯產(chǎn)品。實(shí)施例2:
臺(tái)灣含笑藥材粉碎20目，取IOkg原料加入超臨界CO2萃取釜中，開啟設(shè)備，設(shè)定參數(shù)萃取溫度為58°C，萃取壓力為31MPa，分離釜I溫度為50°C，壓力為8MPa，分離釜II溫度為40 0C，壓力為6MPa。通入CO2流體，達(dá)到上述參數(shù)后，以CO2液體22L/h流量萃取，并夾帶無(wú)水甲醇3L/h，動(dòng)態(tài)萃取4h，收集萃取液，回收甲醇，加入3倍萃取物體積的石油醚，加熱回流提取3次，離心除去液體，再將脫脂物用異丙醇加熱溶解，加入活性炭回流脫色，脫色液回收溶劑至原體積的1/3,以甲醇超聲溶解配制成20mg/ml濃度的溶液,用O. 45 μ m的尼龍膜濾過(guò)濾，用制備高效液相色譜儀分離純化，甲醇-水(83:17)等梯度洗脫，收集響應(yīng)組分旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后，得到純度為95. 6%的含笑內(nèi)酯晶體，再經(jīng)石油醚-丙酮(2:1，V/V)重結(jié)晶2次，得純度為99. 2%的含笑內(nèi)酯產(chǎn)品。實(shí)施例3
臺(tái)灣含笑藥材粉碎40目，取IOkg原料加入超臨界CO2萃取釜中，開啟設(shè)備，設(shè)定參數(shù)萃取溫度為46°C，萃取壓力為24MPa，分離釜I溫度為42°C，壓力為9MPa，分離釜II溫度為36 0C，壓力為5MPa。通入CO2流體，達(dá)到上述參數(shù)后，以CO2液體22L/h流量萃取，并夾帶無(wú)水甲醇3L/h，動(dòng)態(tài)萃取5h，收集萃取液，回收甲醇,加入5倍萃取物體積的石油醚，加熱回流提取2次，離心除去液體，再將脫脂物用乙醇加熱溶解，加入活性炭回流脫色，脫色液回收溶劑至原體積的1/3,以甲醇超聲溶解配制成20mg/ml濃度的溶液,用O. 45 μ m的尼龍膜濾過(guò)濾，用制備高效液相色譜儀分離純化，甲醇-水(83:17)等梯度洗脫，收集響應(yīng)組分旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后，得到純度為96. 1%的含笑內(nèi)酯晶體，再經(jīng)石油醚-丙酮(2:1，V/V)重結(jié)晶3次，得純度為98. 5%的含笑內(nèi)酯產(chǎn)品。實(shí)施例4:
臺(tái)灣含笑藥材粉碎40目，取IOkg原料加入超臨界CO2萃取釜中，開啟設(shè)備，設(shè)定參數(shù)萃取溫度為53°C，萃取壓力為27MPa，分離釜I溫度為48°C，壓力為8MPa，分離釜II溫度為35 0C，壓力為4MPa。通入CO2流體，達(dá)到上述參數(shù)后，以CO2液體22L/h流量萃取，并夾帶無(wú)水甲醇3L/h，動(dòng)態(tài)萃取3h，收集萃取液，回收甲醇，加入4倍萃取物體積的石油醚，加熱回流提取3次，離心除去液體，再將脫脂物用異丙醇加熱溶解，加入活性炭回流脫色，脫色液回收溶劑至原體積的1/3,以甲醇超聲溶解配制成20mg/ml濃度的溶液,用0. 45 y m的尼龍膜濾過(guò)濾，用制備高效液相色譜儀分離純化，甲醇-水(83:17)等梯度洗脫，收集響應(yīng)組分旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后，得到純度為95. 8%的含笑內(nèi)酯晶體，再經(jīng)石油醚-丙酮(2:1，V/V)重結(jié)晶2次，得純度為98. 2%的含笑內(nèi)酯產(chǎn)品。實(shí)施例5:
臺(tái)灣含笑藥材粉碎40目，取IOkg原料加入超臨界CO2萃取釜中，開啟設(shè)備，設(shè)定參數(shù)萃取溫度為60°C，萃取壓カ為23MPa，分離釜I溫度為43°C，壓カ為lOMPa，分離釜II溫度為380C，壓カ為6MPa。通入CO2流體，達(dá)到上述參數(shù)后，以CO2液體22L/h流量萃取，并夾帶無(wú)水甲醇3L/h，動(dòng)態(tài)萃取6h，收集萃取液，回收甲 醇，加入2倍萃取物體積的石油醚，加熱回流提取2次，離心除去液體，再將脫脂物用こ醇加熱溶解，加入活性炭回流脫色，脫色液回收溶劑至原體積的1/3,以甲醇超聲溶解配制成20mg/ml濃度的溶液,用0. 45 y m的尼龍膜濾過(guò)濾，用制備高效液相色譜儀分離純化，甲醇-水(83:17)等梯度洗脫，收集響應(yīng)組分旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后，得到純度為95. 5%的含笑內(nèi)酯晶體，再經(jīng)石油醚-丙酮(2:1，V/V)重結(jié)晶4次，得純度為98. 6%的含笑內(nèi)酯產(chǎn)品。實(shí)施例6:
臺(tái)灣含笑藥材粉碎20目，取IOkg原料加入超臨界CO2萃取釜中，開啟設(shè)備，設(shè)定參數(shù)萃取溫度為56°C，萃取壓カ為33MPa，分離釜I溫度為46°C，壓カ為9MPa，分離釜II溫度為360C，壓カ為5MPa。通入CO2流體，達(dá)到上述參數(shù)后，以CO2液體22L/h流量萃取，并夾帶無(wú)水甲醇3L/h，動(dòng)態(tài)萃取2h，收集萃取液，回收甲醇，加入5倍萃取物體積的石油醚，加熱回流提取I次，離心除去液體，再將脫脂物用甲醇加熱溶解，加入活性炭回流脫色，脫色液回收溶劑至原體積的1/3,以甲醇超聲溶解配制成20mg/ml濃度的溶液,用0. 45 y m的尼龍膜濾過(guò)濾，用制備高效液相色譜儀分離純化，甲醇-水(83:17)等梯度洗脫，收集響應(yīng)組分旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮后，得到純度為96. 3 %的含笑內(nèi)酯晶體，再經(jīng)石油醚-丙酮(2:1，V/V)重結(jié)晶5次，得純度為99. 5%的含笑內(nèi)酯產(chǎn)品。
權(quán)利要求
1.一種從臺(tái)灣含笑中提取分離含笑內(nèi)酯的方法，其特征在于包括以下步驟以臺(tái)灣含笑為原料，粉碎20-40目，加入萃取釜中，以無(wú)水甲醇為夾帶劑，采用超臨界CO2萃取，收集萃取液，回收甲醇，得萃取物，用石油醚回流脫除脂溶性雜質(zhì)，再將脫脂物用低碳醇熱溶，力口入活性炭回流脫色，脫色液回收溶劑至適量體積，經(jīng)制備液相ODS RP-C18反相柱進(jìn)行純化，以甲醇和水的混合溶液進(jìn)行洗脫，濃縮對(duì)應(yīng)組分，石油醚-丙酮(2:1，V/V)重結(jié)晶，得含笑內(nèi)酯產(chǎn)品。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述從臺(tái)灣含笑中提取含笑內(nèi)酯的方法，其特征在于所述超臨界CO2萃取條件為萃取溫度為45-60°C，萃取壓力為23-34MPa，分離釜I溫度為40_50°C，壓力為8-10MPa，分離釜II溫度為35-40°C，壓力為4_6MPa，萃取時(shí)間為2_6h。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述從臺(tái)灣含笑中提取含笑內(nèi)酯的方法，其特征在于所述石油醚脫月旨，加入2-5倍萃取物體積量的石油醚加熱回流脫脂1-3次，離心，分離固液，得脫脂物。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述從臺(tái)灣含笑中提取含笑內(nèi)酯的方法，其特征在于所述低碳醇為 C1-C4醇，優(yōu)選乙醇、甲醇或異丙醇。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述從臺(tái)灣含笑中提取含笑內(nèi)酯的方法，其特征在于所述甲醇和水的混合溶液是指甲醇體積百分比為83%，水的體積百分比為17%的混合溶液。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，公開了一種從臺(tái)灣含笑中提取分離含笑內(nèi)酯的方法。方法是以臺(tái)灣含笑為原料，粉碎20-40目，加入萃取釜中，以無(wú)水甲醇為夾帶劑，采用超臨界CO2萃取，收集萃取液，回收甲醇，得萃取物，用石油醚回流脫除脂溶性雜質(zhì)，再將脫脂物用低碳醇熱溶，加入活性炭回流脫色，脫色液回收溶劑至適量體積，經(jīng)制備液相ODSRP-C18反相柱進(jìn)行純化，以甲醇和水的混合溶液進(jìn)行洗脫，濃縮對(duì)應(yīng)組分，石油醚-丙酮(2∶1，V/V)重結(jié)晶，得含笑內(nèi)酯產(chǎn)品。
文檔編號(hào)C07D307/93GK102850310SQ20121036283
公開日2013年1月2日 申請(qǐng)日期2012年9月26日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月26日
發(fā)明者蘇劉花 申請(qǐng)人:南京澤朗農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司