一種藁本內(nèi)酯的快速檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種基于快速熱解-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（PY-GC/MS法）快速檢 測藁本內(nèi)酯含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 當歸別名秦歸、云歸、西歸、岷歸，為傘形科植物當歸的干燥根。其味甘、辛、性溫， 具有補血活血、調(diào)經(jīng)鎮(zhèn)痛、潤腸通便等功效，主要用于血虛萎黃、眩暈心悸、腸燥便秘、風濕 痹痛，是我國傳統(tǒng)特產(chǎn)藥材之一?，F(xiàn)代中藥學認為，藁本內(nèi)酯是當歸的重要和主要有效成 分，其含量約占當歸揮發(fā)油的50%左右。藁本內(nèi)酯具有解痙、止咳平喘、調(diào)經(jīng)止痛等多種生 理活性。最近的研究表明藁本內(nèi)酯能夠抑制星形膠質(zhì)細胞中NF-KB依賴的細胞因子的表 達，是治療和預(yù)防慢性疼痛疾病的候選藥物之一；此外，藁本內(nèi)酯對低鉀大鼠小腦顆粒神經(jīng) 元凋亡也有一定的保護作用。因此，針對藁本內(nèi)酯，建立新的當歸質(zhì)量控制方法對當歸資源 的深度開發(fā)是非常必要的?，F(xiàn)有對藁本內(nèi)酯的檢測和分析主要采用兩步法：第一步是用水 蒸氣蒸餾、有機溶劑或超臨界萃取等方法從當歸中分離得到揮發(fā)油；第二步是利用氣相色 譜和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS)技術(shù)，或薄層層析-光譜聯(lián)用技術(shù)（TLC-SP)等檢測其有 效成分。該兩步法的主要缺點是總體分析時間長、樣品需要量大。
[0003] 快速熱解-氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（PY-GC/MS)是一種高效的檢測易揮發(fā)性成 分的技術(shù)，近年來發(fā)展迅速。通過精確控制熱解的溫度和時間，可以使大分子化合物熱裂解 為小分子化合物，也可以使低沸點的復雜混合物質(zhì)進行初步的氣-液或氣-固相分離。而 分析檢測過程中的熱解時間、溫度、升溫速率、載氣流速、分流比、離子化溫度等對分析結(jié)果 的影響是很大的。因此，基于PY-GC/MS技術(shù)的特點，目前亟需提出一種針對藁本內(nèi)酯的快 速、微量檢測方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種藁本內(nèi)酯的快速檢測方法，并基于此，初步判斷當歸 及其制劑質(zhì)量的尚低。
[0005] 為達到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：
[0006] 1)準確稱取當歸或復方當歸制品0. 01~1.OOmg得樣品，將樣品加入熱解杯中；
[0007] 2)采用快速熱解-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對加入熱解杯中的樣品進行測定；
[0008] 3)經(jīng)過步驟2)后，根據(jù)測定的原始色譜數(shù)據(jù)及質(zhì)譜數(shù)據(jù)，定性樣品中藁本內(nèi)酯的 色譜峰，并獲得樣品中藁本內(nèi)酯的相對含量。
[0009] 所述樣品為塊狀或粉末狀固體。
[0010] 所述熱解的條件為：熱解溫度為1〇〇~400°c，熱解時間為0. 1~2min。
[0011] 所述氣相色譜的工作條件為：載氣為流速〇. 1~4. OmL/min的氦氣，分流比為0~ 500 :1，升溫程序為：初始溫度為40~80°C，并保持0~6min，然后以彡10°C /min升至 200°C，然后以5~15°C /min升至280°C，然后以5~20°C /min升至300~310°C后保持 0 ~10min〇
[0012] 所述質(zhì)譜的工作條件為：采用EI源、正離子檢測，電子能量為40~120eV，離子源 溫度為200~250°C，單四級桿溫度為130~200°C，掃描方式為全掃描方式，電子倍增器電 壓為1070~3120V，溶劑延遲為0? 1~lOmin。
[0013] 所述相對含量采用面積歸一化方法進行計算。
[0014] 所述藁本內(nèi)酯的色譜峰的定性采用NIST08軟件的自動匹配計算。
[0015] 本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在：
[0016] 1)總分析時間短，提高分析效率?，F(xiàn)有方法是將當歸通過水蒸氣蒸餾、有機溶劑 或超臨界萃取等方法分離得到揮發(fā)油，然后利用氣相色譜和氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS) 技術(shù)，或薄層層析_光譜聯(lián)用技術(shù)（TLC-SP)等檢測其有效成分；該方法的一般分析時間為 12~24小時。本發(fā)明中通過熱解方法直接對當歸及其制劑進行分析，大大節(jié)省了分析時 間，常規(guī)分析時間為〇. 5~1小時，提高了分析效率。
[0017] 2)靈敏度好，所需樣品量少?，F(xiàn)有方法因需要先分離得到揮發(fā)油，因此需要的樣品 量較大，通常是幾克到幾十克不等；本發(fā)明方法的一般分析所用樣品量為〇. 01~lmg，提高 了分析靈敏度。
[0018] 3)本發(fā)明優(yōu)化了熱解、色譜、質(zhì)譜等檢測條件，可以快速定性所需的色譜峰，實現(xiàn) 了快速和準確檢測。
【具體實施方式】
[0019] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明。
[0020] 實施例
[0021] -種基于PY-GC/MS檢測藁本內(nèi)酯的方法，以當歸為例，但本發(fā)明的保護范圍不局 限于該實施例，具體步驟如下：
[0022] 一、樣品準備
[0023] 將取得的當歸塊（陜西帕尼爾生物科技有限公司，西安）準確稱取 1. 00mg(±0. 02mg)放入50 y L的熱解小杯中；
[0024]二、熱解：
[0025]熱裂解爐采用 Frontiers 的 PY2020is，
[0026] ①熱解溫度：260°C，
[0027] ②熱解時間：0?2〇min。
[0028] 三、分離、檢測
[0029]色譜：
[0030] 氣相色譜采用安捷倫7890A:
[0031] ①分析柱是DB-5MS彈性石英毛細管柱（30m*0. 25id*0. 25um);
[0032] ②載氣：氦氣，流速為1. OmL/min ;
[0033] ③進樣方式為分流進樣，分流比為100 :1 ;
[0034]④進樣口溫度為280 °C，傳輸線溫度為290 °C ;
[0035]⑤程序升溫，初始溫度為40°C，保持3min，然后以4°C /min升至200°C，然后以 15°C /min 升至 280°C，再以 20°C /min 升至 310°C，保持 4min。
[0036] 質(zhì)譜（采用安捷倫5975C):
[0037] ①EI源，正離子檢測，電子能量為70eV ;
[0038] ②離子源溫度為230°C，單四級桿溫度為150°C ;
[0039] ③掃描方式為全掃描方式；
[0040] ④電子倍增器電壓為2082V，溶劑延遲為3min ;
[0041] 四、數(shù)據(jù)分析及處理
[0042] 色譜圖的保留時間和積分面積由工作站自動完成，利用NIST08譜庫定性色譜峰。 各揮發(fā)性成分的相對含量通過面積歸一化法得到。
[0043] 本樣品當歸熱解組分中可辨認的峰為82個，成分及其保留時間列于表1。保留時 間及峰面積用安捷倫Chemstation計算，相對含量用面積歸一化的方法計算。
[0044] 表1.當歸中揮發(fā)性成分的組成和含量匕=13. 567為藁本內(nèi)酯）
[0045]
[0046]
[0047]
[0048]
[0049] 五、精密度、重現(xiàn)性及穩(wěn)定性實驗
[0050] 1.精密度實驗：取同一當歸樣品5份，按照上述方法連續(xù)進樣5次，對相對峰面積 大于0. 5%的82個色譜峰進行分析，其相對保留時間和相對峰面積的RSD (相對標準偏差） 分別在〇~〇. 53%和0. 01~3%之間，說明該方法精密度良好。
[0051] 2.重現(xiàn)性實驗：取同一批次的樣品5份，按照上述方法連續(xù)進樣5次。結(jié)果82個 色譜峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD分別在0~1. 8%和0. 11~3. 8%之間，說明 該方法重現(xiàn)性良好。
[0052] 3.穩(wěn)定性實驗：取制備好的樣品1份，分別在0、2、4、8、12、24h進樣測定，結(jié)果82 個色譜峰的相對保留時間和相對峰面積的RSD均小于1. 8%，說明該方法在24h內(nèi)測定是穩(wěn) 定的。
[0053] 從根本上說當歸中的揮發(fā)性成分是當歸的主要活性成分，統(tǒng)稱為當歸揮發(fā)油。本 發(fā)明所針對的是當歸揮發(fā)油中主要和重要的活性成分之一藁本內(nèi)酯，并將其作為當歸品質(zhì) 的主要判斷標準，從而快速的鑒定當歸質(zhì)量。不同的當歸樣品因產(chǎn)地、季節(jié)、炮制方式的不 同，其含水量、密度等都有細微的不同，而其需要的熱解、分離和分析條件均不相同，據(jù)此得 出本發(fā)明中的條件范圍。
[0054] 本發(fā)明選擇PY-GC/MS技術(shù)對藁本內(nèi)酯含量進行檢測，是針對實際生產(chǎn)、生活中當 歸因產(chǎn)地、季節(jié)、炮制等不同而品質(zhì)不同的問題，提供一種藁本內(nèi)酯的快速、微量的檢測方 法，進而初步判斷當歸的質(zhì)量。本發(fā)明具有操作簡單，檢測限低，實驗重現(xiàn)性好，實驗數(shù)據(jù)直 觀可靠等特點，特別適用于微量樣品檢測（可低至10 y g)，并可對不同樣品間的質(zhì)量差別 進行定量的比較，應(yīng)用性廣，為當歸的質(zhì)量標準和中藥現(xiàn)代化提供了一條可以參考的思路 和方法。
【主權(quán)項】
1. 一種藁本內(nèi)酯的快速檢測方法，其特征在于：包括以下步驟： 1) 準確稱取當歸或復方當歸制品0.Ol~I.OOmg得樣品，將樣品加入熱解杯中； 2) 采用快速熱解-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對加入熱解杯中的樣品進行測定； 3) 經(jīng)過步驟2)后，根據(jù)測定的原始色譜數(shù)據(jù)及質(zhì)譜數(shù)據(jù)，定性樣品中藁本內(nèi)酯的色譜 峰，并獲得樣品中藁本內(nèi)酯的相對含量。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種藁本內(nèi)酯的快速檢測方法，其特征在于：所述樣品為塊狀 或粉末狀固體。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種藁本內(nèi)酯的快速檢測方法，其特征在于：所述熱解的條件 為：熱解溫度為100~400°C，熱解時間為0. 1~2min。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種藁本內(nèi)酯的快速檢測方法，其特征在于：所述氣相色譜的 工作條件為：載氣為流速〇. 1~4.OmL/min的氦氣，分流比為0~500 :1，升溫程序為：初 始溫度為40~80°C，并保持0~6min，然后以彡10°C/min升至200°C，然后以5~15°C/ min升至280°C，然后以5~20°C/min升至300~310°C后保持0~IOmin。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種藁本內(nèi)酯的快速檢測方法，其特征在于：所述質(zhì)譜的工作 條件為：采用EI源、正離子檢測，電子能量為40~120eV，離子源溫度為200~250°C，單四 級桿溫度為130~200 °C，掃描方式為全掃描方式，電子倍增器電壓為1070~3120V，溶劑 延遲為〇? 1~lOmin。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種藁本內(nèi)酯的快速檢測方法，其特征在于：所述相對含量采 用面積歸一化方法進行計算。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種藁本內(nèi)酯的快速檢測方法，其特征在于：所述藁本內(nèi)酯的 色譜峰的定性采用NIST08軟件的自動匹配計算。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種藁本內(nèi)酯的快速檢測方法：1)樣品的準備；2)PY-GC/MS檢測；3)數(shù)據(jù)分析及定性和定量分析。本發(fā)明選擇PY-GC/MS技術(shù)對當歸中藁本內(nèi)酯含量進行檢測，是針對實際生產(chǎn)、生活中當歸因產(chǎn)地、季節(jié)、炮制等不同而品質(zhì)不同的問題，提供一種藁本內(nèi)酯快速、微量的檢測方法，進而初步判斷當歸的質(zhì)量，本發(fā)明具有操作簡單，檢測限低，實驗重現(xiàn)性好，實驗數(shù)據(jù)直觀可靠等特點，特別適用于微量樣品檢測，并可對不同當歸樣品間的質(zhì)量差別進行定量的比較，應(yīng)用性廣，為當歸的質(zhì)量標準和中藥現(xiàn)代化提供了一條可以參考的思路和方法。
【IPC分類】G01N30/88
【公開號】CN105203688
【申請?zhí)枴緾N201510599046
【發(fā)明人】陳福欣, 龔頻, 周安寧, 馬筱嫻
【申請人】西安科技大學
【公開日】2015年12月30日
【申請日】2015年9月18日