專利名稱：：一種鵝不食草總倍半萜內酯提取物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于中藥有效成分制備領域，特別涉及一種鵝不食草總倍半萜內酯提取物及其制備方法和應用。
背景技術：
：鵝不食草為菊科植物石胡荽Centipedaminima(L.)A.Br.et.Aschers的帶花全草，鵝不食草入藥始載于南唐《食性本草》，《本草綱目》中亦有記載。在我國，鵝不食草主產于浙江、湖北、江蘇、廣東等地，廣西、河南、江西、福建、安徽等地亦有分布。該草藥分別被2000版和2005版《中國藥典》收載，功能與主治為"通鼻竅，止咳，用于風寒頭痛，咳嗽痰多，鼻塞不通，鼻淵流涕"。鵝不食草的化學成分主要有揮發(fā)油、萜類、黃酮類和甾醇類化合物，其中黃酮類和倍半萜類化合物被認為是鵝不食草的有效成分藥理研究表明，鵝不食草具抗炎、抗菌、抗過敏和抗腫瘤等活性[1]。其中鵝不食草抗腫瘤活性成分的研究主要包括兩個方面(l)鵝不食草揮發(fā)油的抗腫瘤作用吳和珍等分別采用超臨界萃取和水蒸氣蒸餾的方法，提取鵝不食草揮發(fā)油，證明兩個揮發(fā)油均具有抗腫瘤活性，對該研究成果進行了專利保護[2];(2)鵝不食草中倍半萜內酯類化合物的抗腫瘤活性，其中鵝不食草中短葉老鸛草素的抗腫瘤活性具有較強的體內、外抗腫瘤活性，該研究成果也被專利[3]。盡管不少研究表明，倍半萜內酯類化合物是鵝不食草的抗腫瘤活性成分，但是，在國家知識產權局相關檢索和中國期刊網、ScifinderScholar的檢索中，未發(fā)現(xiàn)提取、分離鵝不食草中的總倍半萜內酯類化合物作為其抗腫瘤有效部位的工藝研究，更沒有含有新的活性倍半萜內酯的鵝不食草抗腫瘤有效部位的專利和文獻。
發(fā)明內容為了克服現(xiàn)有技術的缺點和不足，本發(fā)明的首要目的在于提供一種含有新化合物的鵝不食草(Centipedaminima)總倍半萜內酯提取物。本發(fā)明的另一目的在于提供一種上述鵝不食草總倍半萜內酯提取物的制備方法。本發(fā)明的再一目的在于提供上述鵝不食草總倍半萜內酯提取物作為制備具有抑制腫瘤增殖的藥物的用途。本發(fā)明的目的通過下述技術方案實現(xiàn)一種鵝不食草總倍半萜內酯提取物，其特征在于該提取物含有當歸酸鵝不食草素(式I)和異丁酸鵝不食草素(式II):(式I)(式II)上述鵝不食草總倍半萜內酯提取物的制備方法，包括以下操作步驟將鵝不食草的干燥全草粉碎，采用超臨界二氧化碳(C02)萃取方法提取得到鵝不食草揮發(fā)油；再將鵝不食草揮發(fā)油經大孔吸附樹脂柱層析法富集或硅膠柱層析法富集得到鵝不食草總倍半萜內酯提取物；所述大孔吸附樹脂柱層析法富集，是將所述鵝不食草揮發(fā)油過大孔樹脂柱，以乙醇水溶液梯度洗脫，采用氣相色譜-質譜(GC-MS)方法分析跟蹤檢測，收集含倍半萜內酯化合物的流份，合并流份，減壓濃縮，干燥，得到鵝不食草總倍半萜內酯提取物；所述硅膠柱層析方法富集，是將所述鵝不食草揮發(fā)油過硅膠柱，以混合有機溶劑梯度洗脫，采用氣相色譜-質譜(GC-MS)方法分析跟蹤檢測，收集含倍半萜內酯化合物的流份，合并流份，減壓濃縮，干燥，得鵝不食草總倍半萜內酯提取物。所述鵝不食草是菊科植物石胡荽的帶花全草。所述超臨界二氧化碳萃取方法的萃取壓力為2040兆帕，萃取溫度為305(TC，流速為20升/小時，提取時間為14小時。所述超臨界二氧化碳萃取方法中加入了提攜劑。所述提攜劑是乙醇。所述以乙醇水溶液梯度洗脫是依次采用質量百分比濃度為2030%和5080%的乙醇水溶液進行梯度洗脫，即先用質量百分比濃度為2030%的乙醇水溶液洗脫除去雜質，再用質量百分比濃度為5080%的乙醇水溶液洗脫。所述混合有機溶劑以體積比計為石油醚丙酮=9:ii:9、石油醚乙酸乙酯=9:ii:9、己烷乙酸乙酯=9:ii:9或己烷丙酮=9:ii:9。所述鵝不食草總倍半萜內酯提取物中短葉老鸛草素的質量百分含量不少于50%。上述的鵝不食草總倍半萜內酯提取物作為制備抑制腫瘤增殖的藥物的用途。本發(fā)明相對現(xiàn)有技術具有如下的優(yōu)點及有益效果(1)首次從中藥鵝不食草中提取并富集具有抑制腫瘤增殖作用的有效部位——總倍半萜內酯；(2)該提取物含富含短葉老鸛草素；(3)該提取物含有至少9個倍半萜內酯類化合物(包括短葉老鸛草素)，其中當歸酸鵝不食草素和異丁酸鵝不食草素為新的活性倍半萜內酯類化合物；(4)該制備工藝得率高、適合工業(yè)化生產，具有抑制腫瘤細胞增殖作用，可用于制備具有抗腫瘤作用的各種藥物或保健品。圖1為短葉老鸛草素標準樣品的GC-MS分析結果圖。圖2為采用未添加提攜劑的方法所得的鵝不食草揮發(fā)油的GC-MS分析結果圖。圖3為采用添加提攜劑的方法所得的鵝不食草揮發(fā)油的GC-MS分析結果圖。圖4為水蒸汽蒸餾的揮發(fā)油的GC-MS分析結果圖。圖5為采用大孔吸附吸附樹脂柱層析富集所得鵝不食草總倍半萜內酯提取物的GC-MS分析結果圖。圖6為采用硅膠柱層析方法富集所得鵝不食草總倍半萜內酯提取物的GC-MS分析結果圖。具體實施例方式下面結合實施例及附圖對本發(fā)明作進一步詳細的描述，但本發(fā)明的實施方式不限于此。以下實施方式采用的氣相色譜_質譜(GC-MS)分析的條件如下實驗儀器為Agilent6890N系列氣質聯(lián)用儀，柱子為HP_5毛細管柱(30mX0.25mmX25iim)，載氣為氦氣，流量為1.5mL/min，檢測器溫度為300°C。分析條件如下色譜柱初始溫度60°C，以3°C/min的速度程序升溫到15(TC維持5min，再以1.5°C/min的速度程序升溫到24(TC維持10min，最后以2°C/min的速度程序升溫到30(TC維持lOmin。電離方式EI，能量70eV。實施例1鵝不食草揮發(fā)油制備將300g鵝不食草(采自廣東，由廣州市藥材公司高級工程師麥振球鑒定)的干燥全草粉碎，過60目篩，置于超臨界0)2萃取儀中，萃取壓力為20兆帕、萃取溫度為40°C、流速為20升/小時、提取時間為2小時，得到鵝不食草揮發(fā)油15.2g。實施例2:鵝不食草揮發(fā)油制備將300g鵝不食草的干燥全草粉碎，過60目篩，置于超臨界C02萃取儀中，萃取壓力為25兆帕、萃取溫度為38tV流速為20升/小時、100mL質量百分比濃度為95%乙醇為提攜劑、提取時間為2小時，得到鵝不食草揮發(fā)油16.7g。實施例3:鵝不食草總倍半萜內酯提取物制備稱取DIOI大孔吸附樹脂150g，加蒸餾水800mL，攪拌均勻，用水浮選法除去樹脂單體或碎片，然后在室溫下放置24h，待樹脂充分溶脹后，將樹脂抽干；再用乙醇濕法將樹脂裝入柱子(內徑X長度=6X100cm，裝完柱后，柱子的保留體積為550mL)中，用乙醇流動清洗柱子至流出液與水(流出液與水的體積比為1:5)混合不呈白色渾濁，然后用蒸餾水充分淋洗柱子至流出液無乙醇的味道，放置過夜平衡柱子，得到大孔樹脂柱。稱取實施例1中所得的鵝不食草揮發(fā)油3.8g，溶于30mL的質量百分比濃度為95%乙醇中，超聲波脫氣后，加入上述處理和平衡過的大孔樹脂柱中，先用質量百分比濃度為20%乙醇洗脫柱子至流出液無色，再用質量百分比濃度為50%乙醇水溶液洗脫柱子至流出液無色，收集質量百分比濃度為50%乙醇水溶液洗脫所得的流份，用GC-MS分析跟蹤檢測，收集保留時間在70min120min之間的流份，減壓濃縮，干燥，得到鵝不食草總倍半萜內酯提取物O.8g。實施例4:鵝不食草總倍半萜內酯提取物制備按實施例3的方法處理D101大孔吸附樹脂；稱取實施例1中所制得的鵝不食草揮發(fā)油4.Og，溶于30mL的質量百分比濃度為95%乙醇中，超聲波脫氣后，加入上述處理和平衡過的大孔樹脂柱(內徑X長度=6X100cm，保留體積550mL)中，先用質量百分比濃度為20%乙醇洗脫柱子至流出液無色，再用質量百分比濃度為80%乙醇溶液洗脫柱子至流出液無色，收集質量百分比濃度為80%乙醇溶液洗脫所得的洗脫液，用GC-MS分析跟蹤檢測，收集保留時間在70min120min之間的流份，減壓濃縮，干燥，得到鵝不食草總倍半萜內酯提取物1.2g。實施例5:稱取實施例1中所制得的鵝不食草揮發(fā)油9.5g，用乙酸乙酯溶解后，用12g硅膠(100200目)拌樣，減壓蒸干，得到樣品；另取90g硅膠(200300目)干法裝柱(內徑X長度=3.5X50cm)，將樣品裝入柱上，再覆上一層硅膠，用石油醚丙酮梯度洗脫，收集石油醚丙酮體積比為9:i到i:9的洗脫流份，用gc-ms分析跟蹤檢測，收集保留時間在70min120min之間的流份，減壓濃縮，干燥，得到鵝不食草總倍半萜內酯提取物1.8g。實施例6:稱取實施例1中所制得的鵝不食草揮發(fā)油9.5g，用乙酸乙酯溶解后，用12g硅膠(100200目)拌樣，減壓蒸干，得到樣品；另取90g硅膠(200300目)干法裝柱(內徑X長度=3.5X50cm)，將樣品裝入柱上，再覆上一層硅膠，用石油醚乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫，收集石油醚乙酸乙酯體積比為9:i到i:9的洗脫流分，用GC-MS分析跟蹤檢領"收集保留時間在70min120min之間的流份，減壓濃縮，干燥，得到鵝不食草總倍半萜內酯提取物1.6g。實施例7:稱取實施例1中所制得的鵝不食草揮發(fā)油9.5g，用乙酸乙酯溶解后，用12g硅膠(100200目)拌樣，減壓蒸干，得到樣品；另取90g硅膠(200300目)干法裝柱(內徑X長度=3.5X50cm)，將樣品裝入柱上，再覆上一層硅膠，用己烷乙酸乙酯系統(tǒng)梯度洗脫，收集己烷乙酸乙酯體積比為9:i至iji:9洗脫流分，用gc-ms分析跟蹤檢測，收集保留時間在70min120min之間的流份，減壓濃縮，干燥得到鵝不食草總倍半萜內酯提取物1.3g。實施例8:稱取實施例1中所制得的鵝不食草揮發(fā)油9.5g，用乙酸乙酯溶解后，用12g硅膠(100200目)拌樣，減壓蒸干，得到樣品；另取90g硅膠(200300目)干法裝柱(內徑X長度=3.5X50cm)，將樣品裝入柱上，再覆上一層硅膠，用己烷丙酮系統(tǒng)梯度洗脫，收集己烷丙酮體積比為9:i到i:9的洗脫流分，用GC-MS分析跟蹤檢測，收集保留時間在70min120min之間的流份，減壓濃縮，干燥得到鵝不食草總倍半萜內酯提取物1.5g。實施例9:鵝不食草揮發(fā)油和總倍半萜內酯提取物中短葉老鸛草素的含量測定方法將308g鵝不食草的干燥全草粉碎，過60目篩，加入8倍質量水，用水蒸汽蒸餾法，加熱蒸餾5小時，所得揮發(fā)油用無水硫酸鈉干燥，得到0.4g水蒸汽蒸餾的揮發(fā)油。將短葉老鸛草素標準樣品、實施例1中采用未添加提攜劑的方法所得的鵝不食草揮發(fā)油、實施例2中采用添加提攜劑的方法所得的鵝不食草揮發(fā)油、水蒸汽蒸餾的揮發(fā)油、實施例3采用大孔吸附吸附樹脂柱層析富集所得鵝不食草總倍半萜內酯提取物和實施例5采用硅膠柱層析方法富集所得鵝不食草總倍半萜內酯提取物分別進行氣相色譜_質譜(GC-MS)分析，結果如圖15所示。由圖1可見短葉老鸛草素標準樣品中的短葉老鸛草素的純度為96.0%。由圖2可見，采用未添加提攜劑的方法所得的鵝不食草揮發(fā)油中短葉老鸛草素的相對質量含量為22.8%;另外，根據(jù)MS分析結果，在保留時間70min120min之間出峰的化合物大多有231,247(246)，264(263)的碎片離子，說明在這個時間段出峰的化合物大多為偽愈創(chuàng)木內酯型倍半萜，該時間段出峰的化合物的相對含量為42.3%。由圖3可見，采用添加提攜劑的方法所得的鵝不食草揮發(fā)油中短葉老鸛草素的相對質量含量為28.7%;同樣，在保留時間70min120min之間出峰的化合物大多有231，247(246)，264(263)的碎片離子，說明在這個時間段出峰的化合物大多為偽愈創(chuàng)木內酯型倍半萜，在GC圖中保留時間為70min120min之間出峰的化合物的相對含量為45.9%。由圖4可見，水蒸汽蒸餾所得揮發(fā)油不含短葉老鸛草素，在GC圖中保留時間為70min120min之間出峰的化合物的相對含量為0%。由圖5可見，采用大孔吸附吸附樹脂柱層析富集所得鵝不食草總倍半萜內酯提取物中短葉老鸛草素的相對質量含量為51.9%;在GC圖保留時間70min120min之間出峰的化合物的相對含量為99.0%，大多有231,247(246)，264(263)的碎片離子，說明大多為偽愈創(chuàng)木內酯型倍半萜。由圖6可見，采用硅膠柱層析方法富集所得鵝不食草總倍半萜內酯提取物中短葉老鸛草素的相對質量含量為63.7%;在GC圖保留時間70min120min之間出峰的化合物的相對含量為97.9%，大多有231，247(246)，264(263)的碎片離子，說明大多為偽愈創(chuàng)木內酯型倍半萜。結論采用超臨界萃取的方法提取鵝不食草揮發(fā)油，無論是否加入提攜劑，所得的鵝不食草揮發(fā)油中短葉老鸛草素的相對含量均>20%;采用水蒸汽蒸餾方法所得的鵝不食草揮發(fā)油中短葉老鸛草素的含量為o。采用超臨界萃取方法提取所得的鵝不食草揮發(fā)油，無論是經大孔吸附樹脂柱層析富集還是經硅膠柱層析富集，所得的鵝不食草總倍半萜內酯提取物中短葉老鸛草素的相對含量均>50%。實施例10:鵝不食草總倍半萜內酯提取物中倍半萜內酯類化合物的分離和結構鑒定將鵝不食草總倍半萜內酯提取物過硅膠柱層析，用石油醚乙酸乙酯、石油醚丙酮、氯仿甲醇、氯仿丙酮、二氯甲烷丙酮等溶劑體系洗脫，然后再經s印hadexLH-20凝膠柱層析純化，得到9個倍半萜內酯類化合物，它們的化學結構采用光譜分析結合化學反應的方法鑒定。結果從該揮發(fā)油中分離得到9個倍半萜內酯類化合物，分別為短葉老鸛草素、多梗白菜菊素、堆心菊靈、異丁酸堆心菊內酯、異戊酸堆心菊內酯、當歸酸堆心菊內酯、異戊酸天人菊靈、當歸酸鵝不食草素和異丁酸鵝不食草素，其中鵝當歸酸鵝不食草素和異丁酸鵝不食草素為新化合物。GC-MS分析(分析條件與揮發(fā)油的條件一致)結果顯示，這9個倍半萜內酯類化物均在保留時間70min120min之間出峰。它們的結構如下圖所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>短葉老鸛草素(Brevilin-A)菊靈(Helenalin)多梗白菜菊素(Plenolin)堆心異丁酸堆心菊內酯異戊酸堆心菊內酯當歸酸堆心菊內酯(Florilenalin_2_0_isobutyrate)(Florilenalin_2_0_isovalerate)(Florilenalin_2_0_angelate)(Centipedin_2_0_isobutyrate)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>當歸酸鵝不食草素和異丁酸鵝不食草素的光譜數(shù)據(jù)和理化性質如下當歸酸鵝不食草素無色油狀物，香草醛濃硫酸反應顯紅色。UV(Me0H):241nm;HR-ESI-MS:369.1671([M+Na]+，C20H2605Na，calc.369.1678)/HNMR^CNMR禾P2DNMR數(shù)據(jù)見表l。表1當歸酸鵝不食草素的^NMR、"CNMR和2DNMR數(shù)據(jù)異戊酸天人菊靈酸鵝不食草素(Pulchel1in_2_0_isovalerate)當歸酸鵝不食草素(Centipedin_2_0ingelate)異丁<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>異丁酸鵝不食草素無色油狀物，香草醛濃硫酸反應顯紅色。UV(MeOH):241nm;HR-ESI-MS:357.1662([M+Na]+，C19H2605Na，calc.357.1678)^HNMR^CNMR禾P2DNMR數(shù)據(jù)見表2。<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>結論鵝不食草總倍半萜內酯提取物由至少9個倍半萜內酯類化合物組成，其中短葉老鸛草素在提取物中的相對含量不少于50%，還含有2個新化合物當歸酸鵝不食草素和異丁酸鵝不食草素。實施例11:鵝不食草各樣品抑制腫瘤細胞增殖活性測定細胞株肝癌細胞H印G-2、前列腺癌細胞PC-3、乳腺癌細胞MCF7、白血病細胞HL-60、鼻咽癌細胞CNE，除CNE細胞購于中國科學院上海生命科學研究院細胞庫外，其它細胞均來源于ATCC(由香港中文大學生物系提供)。以短葉老鸛草素、實施例1中采用未添加提攜劑的方法所得的鵝不食草揮發(fā)油、實施例2中采用添加提攜劑的方法所得的鵝不食草揮發(fā)油、水蒸汽蒸餾的揮發(fā)油、實施例3采用大孔吸附吸附樹脂柱層析富集所得鵝不食草總倍半萜內酯提取物、實施例5采用硅膠柱層析方法富集所得鵝不食草總倍半萜內酯提取物、當歸酸鵝不食草素和異丁酸鵝不食草素為樣品，以順鉑為陽性對照藥。用四唑鹽(MTT)比色法測定樣品對腫瘤細胞的增殖抑制作用將細胞培養(yǎng)在96孔培養(yǎng)板中，等單層細胞長好后，加入用生長液(含質量分數(shù)10%小牛血清)稀釋好的樣品(濃度為100.08iig/mL)，在37°C、5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天。加入20yL的MTT溶液(5mg/mL，用磷酸緩沖溶液配置)，繼續(xù)培養(yǎng)4小時。吸出樣品溶液，加入二甲亞砜溶解，室溫下，將96孔板置于微空孔板振蕩器中振蕩IO分鐘。用酶標儀測定各孔的OD值，測量波長為570nm，參比波長為630nm，計算樣品對細胞生長的半數(shù)抑制濃度(IC5。)。每組設4個平衡孔，每組實驗重復3次。結果見表3。表3鵝不食草各樣品體外抑制腫瘤細胞增殖活性測定結果(IC5。，yg/mL)樣品細胞株(IC5Q，^ig/mL)CNEPC-3HI^60超臨界萃取所得揮發(fā)油(不加提攜劑)5.25.02.3超臨界萃取所得揮發(fā)油(加入乙醇提攜劑)6.45.82.5水蒸汽蒸餾所得揮發(fā)油83.389.160.2大孔吸附樹脂柱層析方法富集所得鵝不食草總倍半萜內酯提取物2.01.71.9硅膠柱層析富集所得鵝不食草總倍半萜內酯提取物1.71.31.8短葉老鸛草素1.5--當歸酸鵝不食草素3.9--異丁酸鵝不食草素5.8-一順鉬(陽性對照藥)1,0--"-"為未測定。結論(1)采用超臨界萃取法所得的揮發(fā)油，無論提取過程中是否加入提攜劑，對腫瘤細胞均具有很好增殖抑制活性；(2)經過有效部位富集后得到的總倍半萜內酯提取物14活性增強；(3)總倍半萜內酯提取物中的短葉老鸛草素和兩個新倍半萜內酯單體化合物均具有很好的活性。上述實施例為本發(fā)明較佳的實施方式，但本發(fā)明的實施方式并不受上述實施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實質與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護范圍之內。權利要求一種鵝不食草總倍半萜內酯提取物，其特征在于該提取物含有當歸酸鵝不食草素(式I)和異丁酸鵝不食草素(式II)(式I)(式II)F2009102137417C00011.tif2.根據(jù)權利要求1所述的一種鵝不食草總倍半萜內酯提取物的制備方法，其特征在于包括以下操作步驟將鵝不食草的干燥全草粉碎，采用超臨界二氧化碳萃取方法提取得到鵝不食草揮發(fā)油；再將鵝不食草揮發(fā)油經大孔吸附樹脂柱層析法富集或硅膠柱層析法富集得到鵝不食草總倍半萜內酯提取物；所述大孔吸附樹脂柱層析法富集，是將所述鵝不食草揮發(fā)油過大孔樹脂柱，以乙醇水溶液梯度洗脫，采用氣相色譜-質譜方法分析跟蹤檢測，收集含倍半萜內酯化合物的流份，合并流份，減壓濃縮，干燥，得到鵝不食草總倍半萜內酯提取物；所述硅膠柱層析方法富集，是將所述鵝不食草揮發(fā)油過硅膠柱，以混合有機溶劑梯度洗脫，采用氣相色譜_質譜方法分析跟蹤檢測，收集含倍半萜內酯化合物的流份，合并流份，減壓濃縮，干燥，得鵝不食草總倍半萜內酯提取物。3.根據(jù)權利要求2所述的一種鵝不食草總倍半萜內酯提取物的制備方法，其特征在于所述鵝不食草是菊科植物石胡荽的帶花全草。4.根據(jù)權利要求2所述的一種鵝不食草總倍半萜內酯提取物的制備方法，其特征在于所述超臨界二氧化碳萃取方法的萃取壓力為2040兆帕，萃取溫度為305(TC，流速為20升/小時，提取時間為14小時。5.根據(jù)權利要求2所述的一種鵝不食草總倍半萜內酯提取物的制備方法，其特征在于所述超臨界二氧化碳萃取方法中加入了提攜劑。6.根據(jù)權利要求5所述的一種鵝不食草總倍半萜內酯提取物的制備方法，其特征在于所述提攜劑是乙醇。7.根據(jù)權利要求2所述的一種鵝不食草總倍半萜內酯提取物的制備方法，其特征在于所述以乙醇水溶液梯度洗脫是依次采用質量百分比濃度為2030%和5080%的乙醇水溶液進行梯度洗脫。8.根據(jù)權利要求2所述的一種鵝不食草總倍半萜內酯提取物的制備方法，其特征在于所述混合有機溶劑以體積比計為石油醚丙酮=9:ii:9、石油醚乙酸乙酯=9:ii:9、己烷乙酸乙酯=9:ii:9或己烷丙酮=9:ii:9。9.根據(jù)權利要求2所述的一種鵝不食草總倍半萜內酯提取物的制備方法，其特征在于所述鵝不食草總倍半萜內酯提取物中短葉老鸛草素的質量百分含量不少于50%。10.根據(jù)權利要求1所述的鵝不食草總倍半萜內酯提取物作為制備抑制腫瘤增殖的藥物的用途。(式I)(式II)全文摘要本發(fā)明提供一種鵝不食草總倍半萜內酯提取物及其制備方法和用途。制備方法包括步驟將鵝不食草的干燥全草粉碎，采用超臨界二氧化碳萃取方法提取得到鵝不食草揮發(fā)油；再將鵝不食草揮發(fā)油經大孔吸附樹脂柱層析法富集或硅膠柱層析法富集得到鵝不食草總倍半萜內酯提取物。本發(fā)明首次從中藥鵝不食草中提取并富集具有抑制腫瘤增殖作用的有效部位——總倍半萜內酯；該提取物含富含短葉老鸛草素；該提取物含有至少9個倍半萜內酯類化合物，其中當歸酸鵝不食草素和異丁酸鵝不食草素為新的活性倍半萜內酯類化合物；該制備工藝得率高、適合工業(yè)化生產，具有抑制腫瘤細胞增殖作用，可用于制備具有抗腫瘤作用的各種藥物或保健品。文檔編號C07D493/10GK101732383SQ20091021374公開日2010年6月16日申請日期2009年12月11日優(yōu)先權日2009年12月11日發(fā)明者葉文才,吳鵬,張曉琦,李藥蘭,王英申請人:暨南大學