專利名稱：一種利用微波逆流技術(shù)提取驢蹄草中驢蹄草內(nèi)酯的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
:本發(fā)明屬于天然有機化學領(lǐng)域，涉及一種驢蹄草內(nèi)酯的純化方法，特別是涉及一種利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附-柱層析耦聯(lián)技術(shù)富集純化驢蹄草中驢蹄草內(nèi)酯的方法。
背景技術(shù)：
:驢蹄草:英文名Herb of Membranaceous Marshmarigold,別名:驢蹄菜、立金花。多年生草本，高20-48cm，無毛，須根肉質(zhì)。莖直立，實心，具細縱溝，中部或中部以上分枝，稀不分枝?；~3-7，草質(zhì)，有長柄；柄長7-24cm ;葉片圓形、圓腎形或以形，長2.5-5cm,寬3-9cm，先端圓，基部深心形，邊緣密生小牙齒；莖生葉較小，具短柄或無柄。單超支聚傘花序生于莖或分枝頂端，通常有2朵花；花梗長2-10cm ;花兩性，直徑1.6-3.2cm ;萼片5，花瓣狀，黃色，倒卵形或狹倒卵形，長1-1.8cm,寬0.6-1.2cm,先端圓；花瓣無；雄蕊多數(shù)，長4.5-7mm,花絲狹線形，花藥長圓形，長1-1.6mm ;心皮7-12,與雄蕊近等長,無柄，花柱短，瞢莢果，長約Icm,寬約3mm,有橫脈紋長約1mm。種子多數(shù),狹卵球形，長1.5_2mm,黑色有光澤，具少數(shù)縱皺紋?；ㄆ?-9月，果期6-10月?；瘜W成分:全草含紫堇塊莖堿(corytuberine),木蘭花喊(magnof 1rine),煙喊(nicotine)，驢蹄草內(nèi)酉旨(caltholide),表驢蹄草內(nèi)酯(epiacltholide)等成分。驢蹄草內(nèi)酯是一種對人類健康有顯著保健作用的天然活性物質(zhì)，已引起國際社會的普遍關(guān)注。經(jīng)科學研究及臨床應用證明，驢蹄草內(nèi)酯具有清熱利濕，解毒。用于中暑，尿路感染；外 用治燒燙傷，毒蛇咬傷。近年來，人們發(fā)現(xiàn)天然植物驢蹄草中含有大量的驢蹄草內(nèi)酯，從中提取驢蹄草內(nèi)酯并且取得了可喜進展，原料驢蹄草來源較廣
發(fā)明內(nèi)容
:本發(fā)明的目的在于克服常規(guī)技術(shù)提取率相對較低、提取純度低等缺點，提供一種利用微波逆流提取大孔樹脂吸附-柱層析耦聯(lián)技術(shù)富集純化驢蹄草中驢蹄草內(nèi)酯的方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:一種利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附-柱層析聯(lián)用技術(shù)富集純化驢蹄草中驢蹄草內(nèi)酯的方法，其步驟如下:(I)將干驢蹄草粉碎后，加入純水混合，進行微波逆流提取，正向進料、反向進水，物料與水的流動為逆向連續(xù)動態(tài)流動，微波功率在400 800W，萃取時間為60min 120min ;萃取溫度為50 60°C，萃取三次，過濾，合并濾液，得到提取液；(2)將經(jīng)步驟(I)處理的驢蹄草提取液抽濾，得提取液并減壓濃縮得驢蹄草初提物:(3)將所獲初提物用水加熱溶解，加入乙酸乙酯萃取，靜置、抽濾、減壓濃縮得驢蹄草內(nèi)酷粗提物；(4)將所得驢蹄草內(nèi)酯粗提物用大孔吸附樹脂進行吸附；
(5)用不同濃度的乙醇對大孔吸附樹脂進行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集驢蹄草內(nèi)酯各階段洗脫液；(6)將驢蹄草內(nèi)酯各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得驢蹄草內(nèi)酯半成品，其含量在20%以上；(7)將所得驢蹄草內(nèi)酯半成品溶于乙酸乙酯加適量硅膠攪拌，烘干過60-80目篩，干法上樣，上工業(yè)級柱200-300目硅膠柱層析，并以乙醇、乙醚以不同體積比例進行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集驢蹄草內(nèi)酯各階段洗脫液；(8)將所收集的驢蹄草內(nèi)酯洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得驢蹄草內(nèi)酯，其含量在70%以上。所述的步驟(I)中，驢蹄草粉碎后過60 80目篩。所述的步驟(I)中，加入純化水的體積為驢蹄草粉碎體積的8 10倍。在所述的步驟(3)中，加入乙酸乙酯的量按體積計算為提取物溶解后的10 20倍。所述的步驟(4)中所用的大孔吸附樹脂為天津南開大學所產(chǎn)生的X-5、NKA-9、S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-1I型樹脂中的一種，吸附為靜態(tài)吸附或動態(tài)吸附。所述的步驟(5)中所述的洗脫為用10 90%的乙醇進行洗脫。所述的步驟( 5)和(7)中，所采取的檢測方法均為薄層色譜法跟蹤檢測。所述的步驟(7)中所采取的乙醇與乙醚的體積為I 5: I。本發(fā)明采用微波逆流提取，具有加熱均勻、過程易于控制，無需干燥等預處理，簡化了工藝，減少了投資，大大提高了萃取效率；大孔樹脂吸附技術(shù)和柱層析分離純化驢蹄草內(nèi)酯，對驢蹄草內(nèi)酯的吸附選擇性良好，吸附快解析也快，吸附容量較大，提取方便快捷，原料來源豐富，生產(chǎn)成本低廉，分離效果明顯，提取純度高，可以得到含量20%以上的驢蹄草內(nèi)酯半成品和含量70%以上的驢蹄草內(nèi)酯終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對較低、提取純度低的缺點。本發(fā)明選用理化性質(zhì)穩(wěn)定、表面積較大、交換速度較快、機械強度高、抗污染能力強、熱穩(wěn)定性好的大孔吸附樹脂，不溶于酸、堿及有機媒，對有機物選擇性較好，不受無機鹽類及強離子低分子化合物存在的影響，可以通過物理吸附從溶液中有選擇地吸附驢蹄草內(nèi)酯，吸附快、解析也快、吸附容量較大。
具體實施方式
:實施例1:一種利用微波逆流提取-大孔吸附樹脂-柱層析耦聯(lián)技術(shù)富集純化驢蹄草中驢蹄草內(nèi)酯的方法，其步驟如下:(I)將500g干驢蹄草粉碎后過60目篩，加入驢蹄草粉碎體積10倍的純水進行微波逆流提取，正向進料、反向進水，物料與水的流動為逆向連續(xù)動態(tài)流動。微波功率在400W，萃取時間為60min ;萃取溫度為50°C，萃取三次，過濾，合并濾液，得到提取液；(2)將經(jīng)步驟(I)處理的驢蹄草提取液抽濾，得提取液并減壓濃縮得驢蹄草初提物；(3)將所獲初提物用水加熱溶解，加入體積為提取物水溶液體積10倍的乙酸乙酯進行萃取，靜置、抽濾、減壓濃縮得驢蹄草內(nèi)酯粗提物；(4)將所得驢蹄草內(nèi)酯提物用大孔吸附樹脂進行吸附，所用的大孔樹脂為天津南開大學所生產(chǎn)的NKA-1I型樹脂；(5)用 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇在大
孔吸附樹脂層柱中依次進行梯度洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集驢蹄草內(nèi)酯各階段洗脫液；(6)將驢蹄草內(nèi)酯各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得到驢蹄草內(nèi)酯半成品，其含量在23.1% ；(7)將所得驢蹄草內(nèi)酯半成品溶于乙酸乙酯加適量硅膠攪拌，烘干過60目篩，干法上樣，上工業(yè)級柱200-300目硅膠柱層析，并以乙醇、乙醚依次以1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5:1的體積比進行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集驢蹄草內(nèi)酯各階段洗脫液；(8)將所收 集的驢蹄草內(nèi)酯洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到驢蹄草內(nèi)酯，其含量在72.3%。實施案例2:—種利用微波逆流提取-大孔吸附樹脂-柱層析耦聯(lián)技術(shù)富集純化驢蹄草中驢蹄草內(nèi)酯的方法，其步驟如下:(I)將500g干驢蹄草粉碎后過70目篩，加入驢蹄草粉碎體積15倍的純水進行微波逆流提取，正向進料、反向進水，物料與水的流動為逆向連續(xù)動態(tài)流動。微波功率在600W，萃取時間為90min ;萃取溫度為55°C，萃取三次，過濾，合并濾液，得到提取液；(2)將經(jīng)步驟(I)處理的驢蹄草提取液抽濾，得提取液并減壓濃縮得驢蹄草初提物；(3)將所獲初提物用水加熱溶解，加入體積為提取物水溶液體積15倍的乙酸乙酯進行萃取，靜置、抽濾、減壓濃縮得驢蹄草內(nèi)酯粗提物；(4)將所得驢蹄草內(nèi)酯提物用大孔吸附樹脂進行吸附，所用的大孔樹脂為天津南開大學所生產(chǎn)的AB-8H型樹脂；(5)用 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇在大
孔吸附樹脂層柱中依次進行梯度洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集驢蹄草內(nèi)酯各階段洗脫液；(6)將驢蹄草內(nèi)酯各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得到驢蹄草內(nèi)酯半成品，其含量在
23.7%:(7)將所得驢蹄草內(nèi)酯半成品溶于乙酸乙酯加適量硅膠攪拌，烘干過80目篩，干法上樣，上工業(yè)級柱200-300目硅膠柱層析，并以乙醇、乙醚依次以1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5:1的體積比進行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集驢蹄草內(nèi)酯各階段洗脫液；(8)將所收集的驢蹄草內(nèi)酯洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到驢蹄草內(nèi)酯，其含量在74.5%。實施案例3:—種利用微波逆流提取-大孔吸附樹脂-柱層析耦聯(lián)技術(shù)富集純化驢蹄草中驢蹄草內(nèi)酯的方法，其步驟如下:(I)將500g干驢蹄草粉碎后過80目篩，加入驢蹄草粉碎體積20倍的純水進行微波逆流提取，正向進料、反向進水，物料與水的流動為逆向連續(xù)動態(tài)流動。微波功率在800W，萃取時間為120min萃取溫度為60°C，萃取三次，過濾，合并濾液，得到提取液；(2)將經(jīng)步驟(I)處理的驢蹄草提取液抽濾，得提取液并減壓濃縮得驢蹄草初提物；(3)將所獲初提物用水加熱溶解，加入體積為提取物水溶液體積20倍的乙酸乙酯進行萃取，靜置、抽濾、減壓濃縮得驢蹄草內(nèi)酯粗提物；(4)將所得驢蹄草內(nèi)酯提物用大孔吸附樹脂進行吸附，所用的大孔樹脂為天津南開大學所生產(chǎn)的NKA-9型樹脂；(5)用 10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%不同濃度的乙醇在大
孔吸附樹脂層柱中依次進行梯度洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集驢蹄草內(nèi)酯各階段洗脫液；(6)將驢·蹄草內(nèi)酯各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得到驢蹄草內(nèi)酯半成品，其含量在
24.2%:(7)將所得驢蹄草內(nèi)酯半成品溶于乙酸乙酯加適量硅膠攪拌，烘干過80目篩，干法上樣，上工業(yè)級柱200-300目硅膠柱層析，并以乙醇、乙醚依次以1: 1、2: 1、3: 1、4: 1、5:1的體積比進行梯度洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集驢蹄草內(nèi)酯各階段洗脫液；(8)將所收集的驢蹄草內(nèi)酯洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得到驢蹄草內(nèi)酯，其含量在75.3%。
權(quán)利要求
1.一種利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附-柱層析聯(lián)用技術(shù)富集純化驢蹄草中驢蹄草內(nèi)酯的方法，其步驟如下: (1)將干驢蹄草粉碎后，加入純水混合，進行微波逆流提取，正向進料、反向進水，物料與水的流動為逆向連續(xù)動態(tài)流動。微波功率在400 800W，萃取時間為60min 120min ；萃取溫度為50 60°C，萃取三次，過濾，合并濾液，得到提取液； (2)將經(jīng)步驟(I)處理的驢蹄草提取液抽濾，得提取液并減壓濃縮得驢蹄草初提物； (3)將所獲初提物用水加熱溶解，加入乙酸乙酯萃取，靜置、抽濾、減壓濃縮得驢蹄草內(nèi)酷粗提物； (4)將所得驢蹄草內(nèi)酯粗提物用大孔吸附樹脂進行吸附； (5)用不同濃度的乙醇對大孔吸附樹脂進行洗脫，用薄層色譜法跟蹤檢測，收集驢蹄草內(nèi)酯各階段洗脫液； (6)將驢蹄草內(nèi)酯各階段洗脫液濃縮回收乙醇，得驢蹄草內(nèi)酯半成品，其含量在20%以上； (7)將所得驢蹄草內(nèi)酯半成品溶于乙酸乙酯加適量硅膠攪拌，烘干過60-80目篩，干法上樣，上工業(yè)級柱200-300目硅膠柱層析，并以乙醇、乙醚以不同體積比例進行洗脫，薄層色譜法跟蹤檢測，收集驢蹄草內(nèi)酯各階段洗脫液； (8)將所收集的驢蹄草內(nèi)酯洗脫液，采用活性炭脫色、重結(jié)晶方法精制得驢蹄草內(nèi)酯，其含量在70%以上。
所述的步驟(4)中所用 的大孔吸附樹脂為天津南開大學所產(chǎn)生的X-5、NKA-9、S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-1I型樹脂中的一種，吸附為靜態(tài)吸附或動態(tài)吸附。
所述的步驟(5)和(7)中，所采取的檢測方法均為薄層色譜法跟蹤檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附-柱層析聯(lián)用技術(shù)富集純化驢蹄草中驢蹄草內(nèi)酯的方法，其特質(zhì)是:所述的步驟(I)中，驢蹄草粉碎后過60 80目篩。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附一柱層析聯(lián)用技術(shù)富集純化驢蹄草中驢蹄草內(nèi)酯的方法，其特征是:所述的步驟(I)中，加入純化水的體積為驢蹄草粉碎體積的10 20倍。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附-柱層析聯(lián)用技術(shù)富集純化驢蹄草中驢蹄草內(nèi)酯的方法，其特征是；所述的步驟(3)中，加入乙酸乙酯的量按體積計為提取物溶解后的10 20倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附-柱層析聯(lián)用技術(shù)富集純化驢蹄草中驢蹄草內(nèi)酯的方法，其特征是:在所述的步驟(5)中，所述的洗脫液用10 90 %的乙醇水溶液進行洗脫。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的利用微波逆流提取-大孔樹脂吸附-柱層析聯(lián)用技術(shù)富集純化驢蹄草中驢蹄草內(nèi)酯的方法，其特征是:所述的步驟(7)中，所采用乙醇、乙醚的體積比為I 5: I。
全文摘要
本發(fā)明屬于天然有機化學領(lǐng)域，采用微波逆流提取，具有加熱均勻、過程易于控制，無需干燥等預處理，簡化了工藝，減少了投資，大大提高了萃取效率；利用大孔樹脂吸附-柱層析技術(shù)分離純化驢蹄草內(nèi)酯，對驢蹄草內(nèi)酯的吸附選擇性良好，吸附快、解析也快，吸附容量較大，提取方便快捷，生產(chǎn)成本低廉，分離效果明顯，提取純度高，可以通過物理吸附從溶液中有選擇地吸附驢蹄草內(nèi)酯，得到含量20％以上的驢蹄草內(nèi)酯半成品和含量70％以上的驢蹄草內(nèi)酯終產(chǎn)品，克服了常規(guī)提取率相對較低、提取純度低的缺點。
文檔編號C07J63/00GK103159820SQ20121059558
公開日2013年6月19日 申請日期2012年12月13日 優(yōu)先權(quán)日2012年12月13日
發(fā)明者萬莉, 姚德坤, 張亞紅, 姚德利 申請人:大興安嶺林格貝有機食品有限責任公司