長春西汀在制備抗肺纖維化藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及長春西汀在制備抗肺纖維化藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 肺纖維化（pulmonary fibrosis, PF)是一種原因不明、以彌漫性肺泡炎和肺泡結(jié) 構(gòu)紊亂最終導(dǎo)致肺間質(zhì)纖維化為特征的疾病。是許多肺間質(zhì)疾病的最終結(jié)局。主要病理 特點(diǎn)為肺間質(zhì)和肺泡腔內(nèi)纖維化和炎細(xì)胞浸潤混合存在。就其解剖部位來說，雖發(fā)生在肺 間質(zhì)系統(tǒng)，但影響常常肺泡及支氣管。就其病因而言，它是炎癥、感染、變態(tài)反應(yīng)、免疫、肉芽 月中、腫瘤、增生、阻塞等多種因素所致肺疾病。目前的治療藥物以糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑、 免疫調(diào)節(jié)劑為主，但尚無特效藥。
[0003] 長春西汀（別名：卡蘭，長春西丁，阿撲長春胺酸乙酯，長春乙酯；外文名： Vinpocetine, Calan)是從夾竹桃科小蔓長春花中提取的Π 引噪生物堿長春胺經(jīng)結(jié)構(gòu)改造所 得衍生物，能抑制磷酸二酯酶活性、增加血管平滑肌松弛信使C-GMP的作用，是一種優(yōu)良的 腦血管疾病藥物。
[0004] 長春西汀有增加紅細(xì)胞變形能力，能提高血液流動性并改善微循環(huán)，降低血黏度 及抑制血小板凝聚作用，并具有增進(jìn)和改善大腦氧的供給，能選擇性的增加腦部血流量，改 善血液流動性和微循環(huán)促進(jìn)腦組織攝取葡萄糖、增加腦耗氧量、改善腦部新陳代謝。
[0005]目前長春西汀臨床用于治療由于大腦血液循環(huán)障礙而引起的精神性或神經(jīng)性癥 狀，如因腦栓塞、腦出血后遺癥、腦動脈硬化癥等引起的眩暈、頭沉、頭昏、頭痛、記憶力減 退、行動障礙、語言障礙等。此外，還可應(yīng)用于高血壓腦病、腦血管痙攣、腦動脈內(nèi)膜炎、進(jìn)行 性腦血管硬化。在眼科方面，用于視網(wǎng)膜和脈絡(luò)膜血管硬化及血管痙攣。在耳科方面，用于 治療老年性耳聾、眩暈等。
[0006] 長春西汀的藥理作用復(fù)雜多樣，有的還未得到很好的證實(shí)，作用機(jī)制也還不明確。 已有報道其具有腦血管擴(kuò)張和加強(qiáng)代謝活性的作用。目前還沒有一個作用機(jī)制能解釋該藥 在臨床應(yīng)用中所有的好處。體內(nèi)試驗(yàn)表明，在正常情況下或動脈缺氧時，長春西汀能增加腦 部血流，而對外周血流沒有明顯的影響，因此說明長春西汀具有選擇性血管擴(kuò)張作用。但 是，這種選擇性作用在離體試驗(yàn)中并未得到證實(shí)，其他研究者的體內(nèi)試驗(yàn)也沒有證實(shí)這種 腦血管擴(kuò)張效應(yīng)。在動物研究中報道長春西汀具有腦代謝刺激活性，在缺氧和三烷基錫引 起腦水腫時能延長生存率。抗缺氧的活性也在室息性缺氧和低比重性或貧血性缺氧模型中 有報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的技術(shù)目的是提供一種抗肺纖維化的藥物。
[0008] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：
[0009] 長春西汀在制備抗肺纖維化藥物中的應(yīng)用。
[0010] 本發(fā)明經(jīng)過研究表明，長春西汀有對抗博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化小鼠模型的肺纖 維化病作用，能夠預(yù)防和治療上述模型的肺纖維化，因此可將長春西汀用于制備抗肺纖維 化藥物。
[0011] 本發(fā)明提供了一種長春西汀治療肺纖維化疾病的應(yīng)用，所述應(yīng)用的方法一般是， 將長春西汀用冰醋酸溶解，再用生理鹽水稀釋后注射給藥；或?qū)㈤L春西汀與其他人體可接 受的藥用輔料制成片劑、膠囊等口服劑型給藥，用于治療肺纖維化。
[0012] 本發(fā)明采用博萊霉素誘導(dǎo)的肺纖維化小鼠模型，研究了不同濃度長春西汀的作 用，發(fā)現(xiàn)長春西汀具有明顯的治療肺纖維化的作用，對肺纖維化動物模型膠原的生成有明 顯的抑制作用。
[0013] 通常推薦的劑量用量是：l_10mg/kg。
[0014] 本發(fā)明經(jīng)過研究表明，長春西汀對肺纖維化動物模型TGFP有明顯的抑制作用， 可用于制備抗肺纖維化藥物。本發(fā)明開拓了長春西汀有利于肺纖維化機(jī)制及治療藥物的研 究，為新的治療肺纖維化的藥物提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【附圖說明】
[0015] 圖1模型組、對照組、預(yù)防組對博萊霉素誘導(dǎo)肺纖維化損傷的Masson染色照片， 20X鏡拍照，標(biāo)尺=10 μ m，圖1中，A組：BLM模型組；B組：正常對照組；C組：DEX陽性對照 組；D組：長春西汀預(yù)防低劑量lmg/kg組；E:組長春西汀預(yù)防中劑量3mg/kg組；F組：長 春西汀預(yù)防高劑量10mg/kg組。
[0016] 圖2模型組、對照組、治療組對博萊霉素誘導(dǎo)肺纖維化損傷的Masson染色照片， 20X鏡拍照，標(biāo)尺=10 μ m，圖2中，A組：BLM模型組；B組：正常對照組；C組：DEX陽性對照 組；D組：長春西汀治療低劑量lmg/kg組；E:組長春西汀治療中劑量3mg/kg組；F組：長 春西汀治療高劑量10mg/kg組。
[0017] 圖3長春西汀預(yù)防組和治療組對肺組織膠原含量的影響柱狀圖。數(shù)據(jù)以均值 土SEM表示，η = 6-8, *表示P〈0. 05, ***表示P〈0. 001，均是與BLM模型組進(jìn)行比較。
[0018] 圖4長春西汀預(yù)防組和治療組對肺組織MPO活性的影響柱狀圖，數(shù)據(jù)以均值土 SEM 表示，η = 6-8, *表示P〈0. 05, ***表示P〈0. 001，均與BLM模型組進(jìn)行比較。
[0019] 圖5長春西汀預(yù)防組和治療組的ashcroft評分柱狀圖。數(shù)據(jù)以均值土SEM表示， η = 6-8, *P〈0. 05,均與BLM模型組進(jìn)行比較。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面以具體實(shí)驗(yàn)來對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于 此。
[0021] 實(shí)施例1
[0022] 1材料與方法
[0023] I. 1實(shí)驗(yàn)動物、藥品、試劑和儀器
[0024] 藥品：
[0025] 長春西?。╯igma, V6383)批號 Lot Il8M68O3V ;輔料為：（0· 25_2· 5% )乙酸、生 理鹽水。博萊霉素（簡稱BLM):日本化藥株式會社，批號：410102 ;地塞米松磷酸鈉注射液 (浙江省仙琚制藥股份公司）；
[0026] 動物：
[0027] C57小鼠，雄性，8周，體重在20_22g，由浙江大學(xué)動物實(shí)驗(yàn)中心提供，動物合格證 號：2007000526749。動物飼養(yǎng)及操作過程均遵守浙江大學(xué)《實(shí)驗(yàn)動物管理?xiàng)l例》要求。
[0028] 試劑：
[0029] 膠原測定試劑盒：Biocolor ;小鼠 TGF- β IELISA試劑盒：R&D公司；MPO測定試劑： sigma公司；焚光定量PCR儀CFX96型：Bio-Rad ;垂直電泳槽、電泳儀：Biorad公司。
[0030] 1. 2模型建立與實(shí)驗(yàn)分組
[0031] 根據(jù)本實(shí)驗(yàn)室建立的小鼠肺纖維化造模方法，對小鼠進(jìn)行4 %水合氯醛麻醉 (280mg/kg)，然后有創(chuàng)氣道給藥法滴入生理鹽水配制的博萊霉素（2. 5g/L)，劑量為2. 5mg/ kg，記為模型組（簡稱BLM)?？瞻讓φ战M滴入同等體積的生理鹽水，記為對照組（簡稱 Con)。地塞米松組腹腔注射：2mg/kg，記為陽性對照組（簡稱Dex)。
[0032] 長春西汀溶液配制方法：溶液配制方法：稱量IOOmg長春西汀，加入1ml冰醋酸溶 解，作為原液，使用時取原液進(jìn)行稀釋，取25ul原液，加入975ul生理鹽水稀釋39倍，得到 高劑量藥物（1)，?。╨)300ul，加入700ul生理鹽水，得到中劑量藥物（2);?。╨)lOOul，加 入900ul生理鹽水，得到低劑量藥物（3)。腹腔注射給藥劑量分別為100ul/25g體重小鼠： 低劑量lmg/kg、中劑量3mg/kg、高劑量10mg/kg。冰醋酸的終濃度分別是0. 25%、0. 75%、 2. 5%。采用腹腔注射用藥。
[0033] 實(shí)驗(yàn)方案：預(yù)防組采用了 BLM用藥后1-8天早期連續(xù)給藥一周方案，希望能明確其 對早期炎癥的作用。治療組采用了 BLM用藥后14-21天后期連續(xù)給藥一周方案，希望能明 確對后期纖維化進(jìn)展的影響。預(yù)防組14天處理、治療組21天處理，進(jìn)行支氣管肺泡灌洗及 留取肺組織進(jìn)行病理學(xué)、蛋白及分子生物學(xué)檢測等。
[0034] 1