組合物及其在治療或預(yù)防腎纖維化藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體設(shè)及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 腎纖維化(包括腎間質(zhì)纖維化和腎小球硬化)是各種原因引起的腎臟損害最后階 段的主要病理基礎(chǔ)，腎纖維化發(fā)生機(jī)制較為復(fù)雜，與多種因素有關(guān)，其中主要與細(xì)胞外基質(zhì) 細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞的增殖和活化，血管活性物質(zhì)、細(xì)胞因子W及細(xì)胞外基質(zhì)轉(zhuǎn)換失衡有關(guān)，腎間 質(zhì)纖維化幾乎是所W原發(fā)或繼發(fā)腎臟疾病進(jìn)展到終末期腎衰竭的共同途徑。急需研發(fā)高效 低毒的抗腎纖維化藥物。
[0003] 腎纖維化的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問(wèn)題，從天然產(chǎn)物中尋 找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物有重 要價(jià)值。
[0004] 本發(fā)明設(shè)及的化合物I是一個(gè)20 11年發(fā)表（Antone 1 Ia Maggio et al .， 2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia a化a(Asteraceae)from Sicily Jetr址e化on Letters,52(2011 )4543-4545)的化合物，我 們對(duì)化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個(gè)新的衍生物即化合物III和化合物IV，并用化合 物HI和化合物IV制備了組合物并對(duì)該組合物抗腎纖維化活性進(jìn)行了評(píng)價(jià)，其具有抗腎纖 維化活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明公開(kāi)了一個(gè)新的組合物，該組合物由化合物HI和化合物IV組成，該組合物 中化合物HI和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為85 %和15 %。
[0007] 本發(fā)明公開(kāi)的組合物可W制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。
[0008] 藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有較好的抗腎纖維化作用。本發(fā)明的藥學(xué)上 可接受的鹽具有同樣的藥效。
[0009] W下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加 W限定。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 實(shí)施例1化合物Arta化ic acid的制備
[0011] 化合物Arta化ic acid(I)的制備方法參照Antonella Maggio等人發(fā)表的文獻(xiàn) (Antonella Maggio et al.,2011.Artalbic acid,a sesquiterpene with an unusual skeleton from Artemisia alba(Asteraceae)from Sicily. Tetrahedron Letters ,52 (2011 )4543-4545)的方法。
[0013] 實(shí)施例2 Arta化ic acid的0-漠乙基衍生物（II)的合成
[0014] 將化合物I(266mg，l.OOmmol)溶于IOmL苯，向溶液中加入四下基漠化錠（TBAB) (0.08g)，1，2-二漠乙燒(3.760g，20.0 Ommol)和6mL的50%氨氧化鋼溶液?；旌衔镌?0攝氏 度攬拌16h"l加之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲燒萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然 后對(duì)有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗涂5次，再用無(wú)水硫酸鋼干燥，最后減壓濃縮去除 溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為:石油酸/丙酬= 100: l.〇，v/v)， 收集棟色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棟色粉末(272mg，73%)。
[001引 Ih NMR(500MHz，DMS0-d6)Sll.41(s，lH)，6.06(s，lH)，5.76(s，lH)，4.99(s，lH), 4.71(s,lH),4.56(s,lH),3.86(s,2H),3.54(s,2H),2.65(s,lH),2.43(s,2H),2.33(s,2H), 2.10(s，lH)，1.64(s，3H)，1.54(s，lH)，1.44(s，2H)，0.95(s，3H).Uc NMR(125MHz，DMS0-d6) 5201.95(s),175.93(s),149.13(s),148.15(s),117.05(s),109.43(s),81.86(s),70.27 (s),57.68(s),41.26(s),39.07(s),38.86(s),35.69(s),33.36(s),30.72(s),20.44(s), 18.42(s).
[0018] 實(shí)施例3 Arta化ic acid的0-(贓嗦基）乙基衍生物（III)的合成 [0019] 將化合物II(187mg，0.5mmo 1)溶于25mL乙臘當(dāng)中，向其中加入無(wú)水碳酸鐘（：M5mg， 2.5mmo 1)，艦化鐘(84mg，0.5mmo 1)和無(wú)水贓嗦（3446mg，40mmo 1)，混合物加熱回流4h。反應(yīng) 結(jié)束后將反應(yīng)液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲燒萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和 食鹽水洗涂合并之后的有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鋼干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn) 物粗品用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為:石油酸/丙酬= 100:1.5，v/v)，收集淡棟色集中洗脫 帶并揮去溶劑即得到化合物HI的棟色粉末（124.7mg，66 % )。
[0020] Ih 醒R(500MHz，DMS0-d6)Sll.56(s，lH)，6.22(dt，J=3.9，1.8Hz，lH)，5.92(dt，J = 4.0，1.9Hz，lH)，4.91-4.80(m，2H)，4.76-4.67(m，lH)，3.65(t，J = 7.6Hz，2H)，2.80(m， 5H)，2.70-2.62(m，6H)，2.45(td，J=12.2,0.6Hz，4H)，2.23(dd，J = 24.7，17.4Hz，lH)，1.79 (t，J = 2.0Hz，3H)，1.72-1.51(m，3H)，1.20(s，lH)，1.10(s，3H).
[00別]"C NMR(125MHz，DMS0-d6)S202.02(s),176.02(s),149.24(s),148.28(s),117.20 (s)，109.50(s)，81.95(s)，67.17(s)，57.81(s)，54.66(s)，54.31(s)，45.42(s)，41.39(s), 39.17(s)，38.98(s)，35.78(s)，30.84(s)，20.53(s)，18.53(s).
[0024] 實(shí)施例4 Arta化ic acid的0-(咪挫基）乙基衍生物（IV)的合成
[0025] 將化合物II(187mg，0.5mmo 1)溶于25mL乙臘當(dāng)中，向其中加入無(wú)水碳酸鐘（345mg， 2.5mmo 1)，艦化鐘(84mg，0.5mmo 1)和咪挫(870mg，IOmmo 1)，混合物加熱回流地。反應(yīng)結(jié)束后 將反應(yīng)液倒入35mL冰水中，用等量二氯甲燒萃取S次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽水 洗涂合并之后的有機(jī)相，再用無(wú)水硫酸鋼干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品 用硅膠柱層析純化(流動(dòng)相為:石油酸/丙酬=100:0.6，v/v)，收集褐色集中洗脫帶并揮去 溶劑即得到化合物IV的棟色粉末（109.8mg，61%)。
[0026] Ih NMR(500MHz，DMS0-d6)Sl9.91(s，lH)，8.07(s，lH)，7.：M(s，lH)，6.95(s，lH)， 6.28(s，lH)，5.93(s，lH)，4.86(d，J=12.0Hz，2H)，4.77(s，lH)，4.19(d，J=16.7Hz，2H)， 4.04(s，2H)，2.81(s，lH)，2.71(s，2H)，2.64(s，2H)，2.14(s，lH)，1.83(d J=12.0Hz，5H), 1.66(s，lH)，1.14(s，3H).
[0027] "C NMR(125MHz，DMS0-d6)S202.12(s),176.12(s),149.34(s),148.38(s),139.96 (s),128.96(s),119.59(s),117.28(s),109.63(s),82.08(s),67.99(s),57.89(s),44.05 (s)，41.50(s)，39.28(s)，39.04(s)，35.89(s)，30.95(s)，20.64(s)，18.64(s).
[002引 HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for C2地29化04:361.2127;found:361.2122。
[0030] 實(shí)施例5組合物對(duì)單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響
[0031] 1.1材料
[0032] 貝那普利，北京諾華制藥有限公司生產(chǎn);徑脯氨酸化YP)試劑盒，南京建成生物公 司;纖維連結(jié)蛋白（FN)試劑盒購(gòu)自上海生物制品所。
[0033] 組合物的制備：將研磨之后過(guò)200目網(wǎng)的85mg化合物III的粉末和研磨之后過(guò)200 目網(wǎng)的15mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用滿(mǎn)輪攬拌儀混合即得到IOOmg組合物， 使用時(shí)用水溶解運(yùn)IOOmg的組合物即得到組合物的溶液。
[0034] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:普通級(jí)Wistar大鼠，雄性，體重150-200g，SD大鼠。
[0035] 1.2試驗(yàn)方法與結(jié)果
[0036] 大鼠60只，隨機(jī)分6組，即假手術(shù)組、模型組、苯那普利灌胃lOmg/kg組、組合物灌胃 lOmg/kg組、化合物III灌胃lOmg/kg組、化合物IV灌胃lOmg/kg組，動(dòng)物喂養(yǎng)1周，各大鼠 W 10%水合氯醒3.OmLAg腹腔注射麻醉后，將大鼠右側(cè)邸位固定與手術(shù)臺(tái)上，剪毛后用艦酒、 75%酒精消毒手術(shù)區(qū)，行左側(cè)腹切口，逐層切開(kāi)皮膚、肌肉及腹壁各層，暴露并分離左側(cè)輸 尿管，假手術(shù)組僅切開(kāi)腹腔并游離左側(cè)輸尿管，但不結(jié)扎和剪斷，其他各組大鼠用4-0絲線 結(jié)扎兩道，上一道結(jié)扎點(diǎn)位于左腎下極水平，然后在兩道結(jié)扎點(diǎn)剪斷輸尿管，逐層縫合，術(shù) 后10天10%水合氯醒麻醉后處死各組動(dòng)物，取血，按纖維連結(jié)蛋白測(cè)定說(shuō)明測(cè)定說(shuō)明纖維 聯(lián)接蛋白（FN)。生理鹽水反復(fù)灌洗后留取左側(cè)腎臟，腎組織經(jīng)4%的多聚甲醒緩沖液固定。 切取適量腎組織，按徑脯氨酸試劑盒測(cè)定說(shuō)明測(cè)定徑脯氨酸。
[0037] 常規(guī)病理學(xué)檢①肉眼觀察:假手術(shù)組腎臟顏色鮮紅，表明光滑，包膜光澤，無(wú)粘連。 模型對(duì)照組腎臟體積增大，顏色蒼白，表明呈顆粒狀，類(lèi)似人體大白腎，少數(shù)區(qū)域腎包膜粘 連。②光鏡檢查:假手術(shù)組腎單位結(jié)果清晰，腎小球囊無(wú)擴(kuò)張或炎細(xì)胞浸潤(rùn)。模型對(duì)照組大 片腎小管壞死，腎間質(zhì)纖維細(xì)胞增生，腎小管擴(kuò)張，內(nèi)有大量棟黃色遮光物質(zhì)或壞死脫落的 上皮細(xì)胞，腎小球數(shù)目減少，部分腎小球纖維化并與包曼氏囊壁粘連，囊腔消失。組合物給 藥組病變與模型對(duì)照組類(lèi)似，但均有不同程度的形態(tài)學(xué)改善，與模型對(duì)照組比較有明顯差 異。而化合物HI給藥組和化合物IV給藥組與模型對(duì)照組無(wú)顯著性差異。
[0038] 表1組合物對(duì)單側(cè)輸尿管結(jié)扎大鼠腎間質(zhì)纖維化的影響
[0039]
[0040] *p<0.05,與模型組相比較
[0041 ] 對(duì)各組FN、HYP進(jìn)行T檢驗(yàn)。結(jié)果見(jiàn)表1，組合物灌胃lOmg/kg顯著降低FN、HYP水平 (與模型對(duì)照組比較，P<〇.05或0.01);而化合物III和化合物IV灌胃lOmg/kg未能顯著降低 FN、HYP 水平。
[0042] 結(jié)論:組合物能夠顯著降低腎間質(zhì)纖維化FN、肌P水平的升高，抑制腎間質(zhì)纖維化， 可W用來(lái)制備抗腎纖維化藥物。化合物III和化合物IV不能夠顯著降低腎間質(zhì)纖維化FN、 HYP水平的升高，不能抑制腎間質(zhì)纖維化，不可W用來(lái)制備抗腎纖維化藥物。
[0043] 實(shí)施例6本發(fā)明所設(shè)及組合物片劑的制備
[0044] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。
[0045] 實(shí)施例7本發(fā)明所設(shè)及組合物膠囊的制備
[0046] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為85%和15%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為85 %和15 %充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在治療腎纖維化藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療腎纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述腎纖維化 為腎間質(zhì)纖維化。5. 如權(quán)利要求4所述的組合物在治療腎纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述腎間質(zhì)纖 維化為單側(cè)輸尿管阻塞形成的腎間質(zhì)纖維化。6. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療腎纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物降 低腎纖維化引起的纖維連結(jié)蛋白FN的升高。7. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療腎纖維化藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述組合物降 低腎纖維化引起的羥脯氨酸的升高。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備預(yù)防或治療腎纖維化藥物上的用途。本發(fā)明公開(kāi)了一種組合物及其制備方法。藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明的組合物具有預(yù)防或治療腎纖維化的作用，具有開(kāi)發(fā)預(yù)防或治療腎纖維化藥物的價(jià)值。
【IPC分類(lèi)】A61P13/12, A61K31/495, A61K31/4164
【公開(kāi)號(hào)】CN105476993
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510888135
【發(fā)明人】丁秋菊
【申請(qǐng)人】南京海澳斯生物醫(yī)藥科技有限公司
【公開(kāi)日】2016年4月13日
【申請(qǐng)日】2015年12月7日