藤黃酸在制備預(yù)防或治療臟器纖維化的藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了藤黃酸的藥物新用途，具體涉及藤黃酸通過抑制血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、血小板衍生因子(PDGF)和成纖維細(xì)胞生長因子(FGF)的表達(dá)從而抑制肺纖維化和肝纖維化的發(fā)生發(fā)展，以致于預(yù)防或治療肺纖維化和肝纖維化。在上述應(yīng)用中，其注射使用劑量范圍是2mg～100mg；優(yōu)選5～50mg。其口服使用劑量范圍是5mg～500mg；優(yōu)選10～200mg。
【專利說明】藤黃酸在制備預(yù)防或治療臟器纖維化的藥物中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及藤黃酸抑制臟器纖維化的發(fā)生發(fā)展從而預(yù)防或治療臟器纖維化；具體 涉及藤黃酸通過抑制血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)、血小板衍生因子（PDGF)和成纖維細(xì)胞生 長因子（FGF)的表達(dá)從而抑制肺纖維化和肝纖維化的發(fā)生發(fā)展，以致于預(yù)防或治療肺纖維 化和肝纖維化。

【背景技術(shù)】
[0002] 特發(fā)性肺纖維化（idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)又稱為隱源性致纖 維化性肺泡炎（cryptogenicfibrosing alveolitis, CFA)，是一種慢性炎癥性間質(zhì)性疾 病，以普通型間質(zhì)性肺炎（usual interstitialpneumonia，UIP)為特征性病理改變且 病因不明。主要表現(xiàn)為成纖維細(xì)胞灶（fibroblastic foci)的出現(xiàn)致大量細(xì)胞外基質(zhì) (extracellular matrix, ECM)沉，膠原積聚，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，最終導(dǎo)致正常肺組織結(jié)構(gòu)的 破壞，是一種慢性、進(jìn)行性、不可逆轉(zhuǎn)也是最常見的一種致命性肺疾病【King TJ，Pardo A， Selman M. Idiopathic pulmonary fibrosis[J]. Lancet,2011,378(9807) :1949-1961. ]〇 臨床表現(xiàn)為進(jìn)行性呼吸困難并伴有刺激性干咳，肺功能為限制性通氣障礙，病情一般持續(xù) 惡化，最終因呼吸衰竭而死亡。流行病學(xué)研究顯示，IPF發(fā)病率呈不斷上升趨勢，目前約 為 16. 3/100, 000,且 3 年內(nèi)急性惡化發(fā)生率為 20. 7%【Navaratnam V，F(xiàn)leming KM，West J et al. The rising incidence of idiopathic pulmonary fibrosis in the UK[J]. Thorax,2011,66 (6) :462-467. ;Song JW,Hong SB, Lim CM et al. Acute exacerbation of idiopathic pulmonary fibrosis !incidence,risk factors and outcome[J]. Eur Respir J，2011，37(2) :356-363.】。已知肺纖維化主要是肺組織受損后修復(fù)調(diào)節(jié)失控、重建異常所 引起的病變，在這過程中，一系列細(xì)胞因子和生長因子等表達(dá)異常、炎癥反應(yīng)參與肺纖維化 的發(fā)病過程。由此造成上皮細(xì)胞缺損、成纖維細(xì)胞增生和ECM積聚等主要病變，最終結(jié)果是 成纖維細(xì)胞替代了行使正常功能的肺泡上皮細(xì)胞（alveolar epithelial cells, AECs),導(dǎo) 致了纖維化的發(fā)生。
[0003] 肝纖維化是指由各種致病因子所致肝內(nèi)結(jié)締組織異常增生，導(dǎo)致肝內(nèi)彌漫性細(xì) 胞外基質(zhì)過度沉淀的病理過程，其降解活性相對或絕對不足，因此大量細(xì)胞外基質(zhì)沉積下 來形成肝纖維化。肝纖維化不是一個獨立的疾病，而是許多慢性肝臟疾病均可引起肝纖 維化。如果肝纖維化同時伴有肝小葉結(jié)構(gòu)的破壞（肝再生結(jié)節(jié)），則稱為肝硬化。肝硬化 則是不可逆的。因此，在慢性肝病的治療過程中，肝纖維化的防治占有重要地位。肝纖維 化是由許多在肝星狀細(xì)胞和肌異常激活的纖維母細(xì)胞中的纖維化介質(zhì)，產(chǎn)生ECM的沉積 和其他生長因子，形成肝纖維化【Friedman SL. Mechanisms of hepatic fibrogenesis. Gastroenterology. 2008 ;134 :1655-1669.】。
[0004] VEGF、PDGF和FGF在IPF扮演重要作用，抑制VEGF、PDGF和FGF可以明顯抑制 IPF 的發(fā)生和進(jìn)展（Fehrenbach H，Haase M，Kasper M，Koslowski R，Schuh D，Muller M.Alterations in the immunohistochemical distribution patterns of vascular endothelial growth factor receptors Flkl and Fltl in bleomycin-induced rat lung fibrosis.Virchows Archl999 ;435 :20-31. ；Hetzel M, Bachem M, Anders D, Trischler G,Faehling M. Different effects of growth factors on proliferation and matrix production of normal and fibrotic human lung fibroblasts. Lung2005 ；183 ： 225-237. ；Lappi-Blanco E, Soini Y, Kinnula V, Paakko P· VEGF and bFGF are highly expressed in intraluminal fibromyxoid lesions in bronchiolitis obliterans organizing pneumonia. J Pathol2002；196 :220-227. ；Chaudhary NI, Roth GJ, Hilberg F, Miiller-Quernheim J, Prasse A, Zissel G, Schnapp A, Park JE.Inhibition of PDGF, VEGF and FGF signalling attenuates fibrosis. Eur Respir J. 2007 ；29(5) :976-985.； Gurujeyalakshmi G, Hollinger MA, Giri SN.Pirfenidone inhibits PDGF isoforms in bleomycin hamster model of lung fibrosis at the translational level. Am J Physiol. 1999 ;276(2Ptl) :L311-318.)。吡非尼酮抑制通過抑制 VEGF、TOGF 和 FGF 表達(dá) 抑制肝纖維化【Salazar-Montes A, Ruiz-Corro L，Lopez-Reyes Al. Potent antioxidant role of pirfenidone in experimental cirrhosis. Eur J Pharmacol. 2008 ;595 :69-77.]
[0005] 藤黃（gamboge)為藤黃科植物藤黃樹Garcinia hanbaryi Hook. f.分泌的干燥樹 月旨。其主產(chǎn)于柬埔寨、印度、泰國和越南，我國廣東省和海南省均有栽培。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)對其早 有記載，藤黃性寒，味酸、辛、澀，有毒，具破血散結(jié)、解毒、止血、殺蟲之功效，被用于治療瘰 疬、癰疸、癤腫等頑疾【楊企錚，賈淑杰，李德華.中藥藤黃的近代研究[J].中國腫瘤臨床， 1994, 2U6) :464-466.】。藤黃在國外常被用作利尿劑，治療水腫和腦出血時的血壓升高，現(xiàn) 已收載于《美國藥典》第10版【王鳴，馮煦，趙友誼.中藥藤黃的研究和應(yīng)用[J].中國野生 植物資源,2003,22(1) :1-3.】。藤黃酸為藤黃的主要活性成分。藤黃酸分子式為C38H44O9, 相對分子質(zhì)量為628. 34,為橙黃色無定型粉末。文獻(xiàn)報道藤黃酸對于多數(shù)腫瘤細(xì)胞都具有 抑制作用【郭青龍，趙麗，尤啟東，等.藤黃誘導(dǎo)人胃癌SGC-7901細(xì)胞的凋亡作用[J].中國 天然藥物，2004, 2 (2) :106-108.;劉靜冰，秦叔逵，李進(jìn).藤黃酸抗胰腺癌作用的實驗研究 [J].臨床腫瘤學(xué)雜志，2005,10(3) :472.】，但藤黃酸在預(yù)防或治療肝纖維化和肺纖維化的 藥理作用未見報道。本發(fā)明人通過大量的研究發(fā)現(xiàn)藤黃酸可以通過抑制VEGF、PDGF和FGF 的表達(dá)從而在預(yù)防或治療肝纖維化和肺纖維化方面有明顯的作用?；诖?，本發(fā)明人發(fā)明 了藤黃酸通過抑制VEGF、TOGF和FGF的表達(dá)從而抑制肺纖維化的發(fā)生發(fā)展，以致于預(yù)防或 治療肝纖維化和肺纖維化。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供了藤黃酸在抑制VEGF、PDGF和FGF表達(dá)的藥物中的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明提供了藤黃酸在制備預(yù)防或治療臟器纖維化的藥物中的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明提供了藤黃酸在制備預(yù)防或治療肺纖維化的藥物中的應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明提供了藤黃酸在制備預(yù)防或治療肝纖維化的藥物中的應(yīng)用。
[0010] 發(fā)明提供的藥物在用于肝纖維化和肺纖維化時，其注射使用劑量范圍是2mg? IOOmg ;優(yōu)選5?50mg。其口服使用劑量范圍是5mg?500mg ;優(yōu)選10?200mg。
[0011] 本發(fā)明還提供了由藤黃酸和藥學(xué)上可接受的載體或輔料組成的藥物，該藥物可以 以藥學(xué)常規(guī)方法制備成片劑、膠囊劑、滴丸劑、注射液、凍干粉針，優(yōu)選以片劑或凍干粉針形 式存在。

【具體實施方式】
[0012] 實施例1藤黃酸凍干粉針制備
[0013] 取藤黃酸5. 0g，加注射用水2000ml使其溶解，以NaOH調(diào)pH = 5. 5?7. 5,加甘露 醇8g，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，灌入IOml西林瓶中，2ml/只，按凍干粉針工藝 凍干，制成每支含藤黃酸5. Omg的凍干粉針。
[0014] 實施例2藤黃酸片劑制備
[0015] 稱取10. Og藤黃酸、65. Og糖粉、70. Og乳糖和53. Og羧甲基淀粉鈉充分混合均勻 后過100目篩，加入適量的3% PVPk3ci水溶液適量制軟材，20目篩制粒，60°C干燥3小時，18 目篩整粒，加入2. Og硬脂酸鎂，混合均勻后淺凹沖壓，調(diào)節(jié)片重約200mg，即得。

【具體實施方式】 [0016]
[0017] 試驗例1藤黃酸對A549細(xì)胞株VEGF、PDGF和FGF表達(dá)的影響
[0018] 1.1實驗材料
[0019] DMEM培養(yǎng)基為Gibco公司產(chǎn)品，新生牛血清為杭州四季青公司產(chǎn)品，TGF-β 1購自 PeproTech公司，A549細(xì)胞購自中國典型培養(yǎng)物保藏中心，用含10%胎牛血清（Hyclone公 司）的低糖DMEM培養(yǎng)基（GIBC0公司），常規(guī)培養(yǎng)于5%的C0 2 , 37°C人工培養(yǎng)箱中，細(xì)胞呈 貼壁生長。VEGF、PDGF和FGF -抗購買于sigma公司。
[0020] 藤黃酸（純度98. 9%，購買于廣州牌牌生物科技有限公司）
[0021] 1.2試驗方法
[0022] 當(dāng)細(xì)胞生長融合至70% -80 %，用無血清培養(yǎng)基饑餓24h，換新鮮培養(yǎng)液，將傳 代的A549細(xì)胞分為：（1)陰性對照組；（2) TGF- β 1處理組（5 μ g/L作用時間48h) ; (3) TGF- β 1處理組（5 μ g/L作用時間48h) +藤黃酸0. 1 μ M ; (4) TGF- β 1處理組（5 μ g/L作用 時間48h) +藤黃酸0. 3 μ M ; (5) TGF- β I處理組（5 μ g/L作用時間48h) +藤黃酸I μ M。BCA 蛋白測定試劑盒（Pierce公司）測定蛋白濃度后，取50 μ g樣品蛋白進(jìn)行10%的十二烷基 磺酸鈉2聚丙烯酰胺（SDS-PAGE)凝膠變性電泳、然后轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯（PVDF)膜，加入 VEGF、PDGF 和 FGF -抗，β -actin 作內(nèi)參，Western blot 檢測細(xì)胞 VEGF、PDGF 和 FGF 蛋白 的表達(dá)。以TGF-β 1未刺激組作為對照，計為相應(yīng)蛋白的100%，分析各藥物濃度對VEGF、 TOGF和FGF蛋白的表達(dá)差異。組間進(jìn)行T檢驗。
[0023] 表1藤黃酸對TGF- β 1刺激A549細(xì)胞的VEGF、PDGF和FGF表達(dá)影響（η = 5)
[0024]

【權(quán)利要求】
1. 本發(fā)明提供了藤黃酸在制備預(yù)防或治療臟器纖維化的藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，藤黃酸是通過抑制血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)、血小板 衍生因子（PDGF)和成纖維細(xì)胞生長因子（FGF)表達(dá)達(dá)到預(yù)防或治療臟器纖維化的藥物中 的應(yīng)用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，預(yù)防或治療臟器纖維化具體包括預(yù)防或治療肝纖維化 和肺纖維化的藥物中的應(yīng)用。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，藤黃酸在用于預(yù)防或治療肝纖維化和肺纖維化時，其 注射使用劑量范圍是2mg?lOOmg ;優(yōu)選5?50mg。其口服使用劑量范圍是5mg?500mg ; 優(yōu)選10?200mg。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，藤黃酸是由藥學(xué)上可接受的載體或輔料組成的藥物， 以藥學(xué)常規(guī)方法制備成片劑、膠囊劑、注射液、凍干粉針。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，由藤黃酸組成的藥物優(yōu)選以片劑或凍干粉針存在。
【文檔編號】A61K31/352GK104274438SQ201310295644
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2013年7月8日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月8日
【發(fā)明者】蔣王林, 呂長俊, 欒海云, 亢澤春 申請人:濱州醫(yī)學(xué)院