調(diào)節(jié)rac1輸入和治療肺纖維化的方法
【專(zhuān)利說(shuō)明】調(diào)節(jié)RAC1輸入和治療肺纖維化的方法
[0001] 發(fā)明優(yōu)先權(quán) 本申請(qǐng)要求2013年4月25日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?1/816057的優(yōu)先權(quán)。該臨時(shí)申 請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容通過(guò)引用結(jié)合到本文中。
[0002] 政府咨助聲明 本發(fā)明在國(guó)家衛(wèi)生研究院的政府資助5R01ES015981-08下進(jìn)行。政府享有本發(fā)明的一 定權(quán)利。
[0003] 背景 肺纖維化的重要和原型類(lèi)型在暴露于石棉后出現(xiàn)，其導(dǎo)致間質(zhì)性肺炎和后續(xù)的膠 原沉積。盡管已進(jìn)行嚴(yán)格的調(diào)節(jié)控制以抑制暴露，但每年超過(guò)1. 3百萬(wàn)工人持續(xù)暴露 于危險(xiǎn)水平的石棉（Attfield，M.D.等，（自MMWR再版，vol53，pg627-632， 2004),Jama-Journal of the American Medical Association2QQA, 292,795-796; 和Guidotti,T.L.等，American Journal of Respiratory and Critical Care Medicine2QQA, 170,691-715) 〇
[0004] 肺纖維化的發(fā)生是復(fù)雜過(guò)程，其導(dǎo)致肺組織的異常重塑。對(duì)在肺纖維化期間肺重 塑的調(diào)節(jié)了解較少，并且尚未提出有效治療選擇來(lái)阻止疾病發(fā)生。因此，了解異常重塑受調(diào) 節(jié)的機(jī)制可提供可能的治療靶標(biāo)。
[0005] 產(chǎn)生活性氧物類(lèi)（R0S)，包括H202，在組織損傷和后續(xù)的纖維化中通過(guò)調(diào)節(jié)胞外基 質(zhì)沉積起關(guān)鍵作用（Murthy,S.等，^ 2010，25062-25073;和He, C.等，^SioZ〇￡皿2011，之泌；15597-15607)。R0S的產(chǎn)生通過(guò)肺泡巨噬細(xì)胞無(wú)效吞B策石棉纖維而更為明顯（Mossman,Β·T.等，備 67，91-94)。已顯示，獲自肺纖維化患者的肺泡巨噬細(xì)胞產(chǎn)生高水平的H202和在肺纖 維化背景下在肺泡巨噬細(xì)胞中產(chǎn)生的H202的主要來(lái)源是線(xiàn)粒體（He，C.等，J. Biol. 〇￡皿2011，之泌；15597-15607)。H202的產(chǎn)生對(duì)于在肺損傷中的纖維化反應(yīng)是關(guān)鍵的， 因?yàn)樵谛∈笾袕U除線(xiàn)粒體氧化應(yīng)激或給予過(guò)氧化氫酶削弱肺纖維化的發(fā)生（He，C.等， J. Biol.2011，之浙，15597-15607;和Murthy,S.等，AzericawJoyraaJο/1 Physiology-Lung Cellular and Molecular Physiology2QQ9, 297,L846-L855)。Racl是鳥(niǎo)苷Y-三磷酸（GTP)-結(jié)合蛋白的Rho家族的成員。Racl調(diào)節(jié)數(shù)種細(xì)胞功能，例如肌 動(dòng)蛋白聚合和迀移、細(xì)胞粘附和巨噬細(xì)胞的吞噬作用，這些都是吞沒(méi)石棉纖維的必需過(guò)程 (Hall,A.B.等，/蕭"/?_/?τ2006，305-316;Roberts,A.W.等，/蕭 10,183-196;和Wells,C.Μ·等，7CeW5bi. 2004，77；； 1259-1268)。詘〇GTP-結(jié)合 蛋白（例如Racl)的C-末端半胱氨酸殘基可通過(guò)香葉基香葉基化（geranylgeranylation) 修飾。該翻譯后修飾對(duì)于Racl活化和與其它蛋白的相互作用是重要的（Zeng,P.Y.等， 之名 1124-1134)。
[0006] 最近顯示，Racl在獲自石棉沉著病的患者的肺泡巨噬細(xì)胞中具有活性 (Osborn-Heaford,H.L.等，^ 價(jià)〇丄β?·. 2012，況7，3301-3312·)。該報(bào)告還證 實(shí)，肺泡巨噬細(xì)胞的線(xiàn)粒體中的Racl活化增加肺中的活性氧物類(lèi)（R0S)例如過(guò)氧化物，并 且相對(duì)于野生型小鼠，無(wú)Racl的小鼠顯示較少的ROS和降低的纖維化。在這一點(diǎn)上，顯 示Racl的活性依賴(lài)于Racl的C-末端半胱氨酸殘基。美國(guó)專(zhuān)利號(hào)7, 268, 124和國(guó)際申請(qǐng) W02014/008407描述了經(jīng)報(bào)告具有作為GGPP合酶抑制劑的活性的化合物。
[0007] 目前對(duì)用于治療纖維化例如肺纖維化的化合物和方法存在需要。
[0008] 發(fā)明簡(jiǎn)沐 本發(fā)明提供用于治療纖維化（例如，肺纖維化）的方法，以及用于調(diào)節(jié)細(xì)胞中線(xiàn)粒體過(guò) 氧化物產(chǎn)生的方法，和用于調(diào)節(jié)將Racl輸入至細(xì)胞（尤其是巨噬細(xì)胞）的線(xiàn)粒體的方法。
[0009] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供在有需要的動(dòng)物（例如，哺乳動(dòng)物例如人）中治療 纖維化（例如，肺纖維化）的方法，包括給予所述動(dòng)物有效量的香葉基香葉基焦磷酸（GGPP) 合酶抑制劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥（例如，本文所述的式I、式II或式III的化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥）。
[0010] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供在動(dòng)物（例如，哺乳動(dòng)物例如人）中治療纖維化 (例如，肺纖維化）的方法，包括給予所述動(dòng)物式I、式II或式III的化合物：
其中： Ri是飽和或不飽和的（C5-C2。）烷基鏈，其任選在所述鏈中包含一個(gè)或多個(gè)芳基環(huán)和任 選被一個(gè)或多個(gè)鹵素、三氟甲基、_〇Ra、_P(=〇) (01〇2或_NRbR。取代； R2是飽和或不飽和的（C5-C2。）烷基鏈，其任選在所述鏈中包含一個(gè)或多個(gè)芳基環(huán)和任 選被一個(gè)或多個(gè)鹵素、三氟甲基、_〇Ra、_P(=〇) (01〇2或_NRbR。取代； 各個(gè)R3、R4、1?5和R6獨(dú)立地是OH或（C「C6)烷氧基； 各個(gè)Rjfe立地是H、（CfQ)烷基或芳基；和 各個(gè)Rb和R。獨(dú)立地是H、（C「C6)烷基或芳基；或Rb和R。連同它們所連接的氮一起形 成吡咯烷、哌啶、嗎啉或硫代嗎啉環(huán)； 其中&、R2、Ra、Rb或R。的任何芳基任選被一個(gè)或多個(gè)（(：「(；）烷基、（Q-Q)烷氧基、 (Q-Q)烷?；?、（Q-Q)烷酰基氧基、（Q-Q)烷氧基羰基、鹵素、氰基、硝基、羧基、三氟甲基、 三氟甲氧基、_NRdRe或-S(0) 2NRdRe取代，其中各個(gè)R,和RJ蟲(chóng)立地是Η或（CfC6)烷基； X是（C「C6)烷基； Y是（C「C6)烷基； R7是飽和或不飽和的（CfCj烷基鏈，其任選在所述鏈中包含一個(gè)或多個(gè)芳基或雜 芳基環(huán)，其中（Q-CJ烷基任選被一個(gè)或多個(gè)鹵素、氰基、硝基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧 基、芳基、雜芳基、-NRJU^KO) 2NRpRq取代，和其中任何芳基或雜芳基任選被一個(gè)或多個(gè) (C「C6)烷基、(C「C6)烷氧基、(C「C6)烷?；?、(C「C6)烷酰基氧基、(C「C6)烷氧基羰基，鹵 素、氰基、硝基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧基、-NRalRblS-S(0) 2NRclRdl取代； ^是Η或飽和或不飽和的（Ci-Cj烷基鏈，其任選在所述鏈中包含一個(gè)或多個(gè)芳基或 雜芳基環(huán)，其中（Q-CJ烷基任選被一個(gè)或多個(gè)鹵素、氰基、硝基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧 基、芳基、雜芳基、-NRJU^KO) 2NRpRq取代，和其中任何芳基或雜芳基任選被一個(gè)或多個(gè) (CfC6)烷基、（CfC6)烷氧基、（CfC6)烷酰基、（CfC6)烷?；趸?、（CfC6)烷氧基羰基、鹵 素、氰基、硝基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧基、-NRalRblS-S(0) 2NRclRdl取代； 各個(gè)R9、R1(：、Rn和R12獨(dú)立地是0H或（C「C6)烷氧基； R13是飽和或不飽和的（CfCj烷基鏈，其任選在所述鏈中包含一個(gè)或多個(gè)芳基或雜 芳基環(huán)，其中（Q-CJ烷基任選被一個(gè)或多個(gè)鹵素、氰基、硝基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧 基、芳基、雜芳基、-NRJU^KO) 2NRpRq取代，和其中任何芳基或雜芳基任選被一個(gè)或多個(gè) (CfC6)烷基、（CfC6)烷氧基、（CfC6)烷?；ⅲ–fC6)烷?；趸ⅲ–fC6)烷氧基羰基、鹵 素、氰基、硝基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧基、_NRalRbl、芳基、雜芳基或-S(0) 2NRclRdl取代； R14是飽和或不飽和的（CfCj烷基鏈，其任選在所述鏈中包含一個(gè)或多個(gè)芳基或雜 芳基環(huán)，其中（Q-CJ烷基任選被一個(gè)或多個(gè)鹵素、氰基、硝基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧 基、芳基、雜芳基、-NRJU^S^) 2NRpRq取代，和其中任何芳基或雜芳基任選被一個(gè)或多個(gè) (CfC6)烷基、（CfC6)烷氧基、（CfC6)烷酰基、（CfC6)烷酰基氧基、（CfC6)烷氧基羰基、鹵 素、氰基、硝基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧基、_NRalRbl、芳基、雜芳基或-S(0) 2NRclRdl取代； R15是飽和或不飽和的（CfCj烷基鏈，其任選在所述鏈中包含一個(gè)或多個(gè)芳基或雜 芳基環(huán)，其中（Q-CJ烷基任選被一個(gè)或多個(gè)鹵素、氰基、硝基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧 基、芳基、雜芳基、-NRJU^KO) 2NRpRq取代，和其中任何芳基或雜芳基任選被一個(gè)或多個(gè) (CfC6)烷基、（CfC6)烷氧基、（CfC6)烷?；ⅲ–fC6)烷?；趸?、（CfC6)烷氧基羰基、鹵 素、氰基、硝基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧基、-NRalRblS-S(0) 2NRclRdl取代； R16是Η或飽和或不飽和的（Ci-Cj烷基鏈，其任選在所述鏈中包含一個(gè)或多個(gè)芳基或 雜芳基環(huán)，其中（Q-CJ烷基任選被一個(gè)或多個(gè)鹵素、氰基、硝基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧 基、芳基、雜芳基、-NRJU^KO) 2NRpRq取代，和其中任何芳基或雜芳基任選被一個(gè)或多個(gè) (CfC6)烷基、（CfC6)烷氧基、（CfC6)烷?；?、（CfC6)烷?；趸ⅲ–fC6)烷氧基羰基、鹵 素、氰基、硝基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧基、-NRalRblS-S(0) 2NRclRdl取代； 各個(gè)Ral和Rbl獨(dú)立地是H、（C「C6)烷基或芳基；或Ral和Rbl連同它們所連接的氮一起 形成吡咯烷、哌啶、嗎啉或硫代嗎啉環(huán)； 各個(gè)RdPR&獨(dú)立地是H、（C「C6)烷基或芳基；或RdPRdl連同它們所連接的氮一起 形成吡咯烷、哌啶、嗎啉或硫代嗎啉環(huán)； 各個(gè)匕和R"獨(dú)立地是H、（C「C6)烷基或芳基；或匕和Rn連同它們所連接的氮一起形 成吡咯烷、哌啶、嗎啉或硫代嗎啉環(huán)； 各個(gè)Rp和Rq獨(dú)立地是H、（C「C6)烷基或芳基；或Rp和Rq連同它們所連接的氮一起形 成吡咯烷、哌啶、嗎啉或硫代嗎啉環(huán)；和 其中^^^^、《、心或心的任何芳基任選被一個(gè)或多個(gè)仏-^^烷基、^-^) 烷氧基、（Q-Q)烷酰基、（Q-Q)烷?；趸?、（Q-Q)烷氧基羰基、鹵素、氰基、硝基、羧基、 三氟甲基、三氟甲氧基、_NRsRt或-S(0) 2NRsRt取代，其中各個(gè)R3和R,獨(dú)立地是Η或（C「C6) 烷基； 或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。
[0011]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供在動(dòng)物（例如，哺乳動(dòng)物例如人）中治療纖維化 (例如，肺纖維化）的方法，包括給予所述動(dòng)物式I的化合物： 其中：
札是飽和或不飽和的（c5-c2。）烷基鏈，其任選在所述鏈中包含一個(gè)或多個(gè)芳基環(huán)和任 選被一個(gè)或多個(gè)鹵素、三氟甲基、-〇Ra、-p(=0) (01〇2或-NRbR。取代； R2是飽和或不飽和的（C5-C2。）烷基鏈，其任選在所述鏈中包含一個(gè)或多個(gè)芳基環(huán)和任 選被一個(gè)或多個(gè)鹵素、三氟甲基、_〇Ra、_P(=〇) (01〇2或_NRbR。取代； 各個(gè)R3、R4、1?5和R6獨(dú)立地是0H或（C「C6)烷氧基； 各個(gè)Rjfe立地是H、（CfQ)烷基或芳基；和 各個(gè)Rb和R。獨(dú)立地是H、（C「C6)烷基或芳基；或Rb和R。連同它們所連接的氮一起形 成吡咯烷、哌啶、嗎啉或硫代嗎啉環(huán)； 其中任何芳基任選被一個(gè)或多個(gè)（CfC6)烷基、（CfC6)烷氧基、（CfC6)烷?；?、（CfC6) 烷?；趸?、（Q-Q)烷氧基羰基、鹵素、氰基、硝基、羧基、三氟甲基、三氟甲氧基、-NRdRe 或-S(0) 2NRdRe取代，其中各個(gè)R,和RJ蟲(chóng)立地是Η或（C「C6)烷基； 或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥。
[0012] 本發(fā)明還提供調(diào)節(jié)細(xì)胞中線(xiàn)粒體過(guò)氧化物產(chǎn)生的方法，包括使所述細(xì)胞與式I、式 II或式III的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥接觸。
[0013] 本發(fā)明還提供調(diào)節(jié)將Racl輸入至細(xì)胞的線(xiàn)粒體的方法，包括使所述細(xì)胞與本文 所述的式I、式II或式III的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥接觸。
[0014] 本發(fā)明還提供調(diào)節(jié)細(xì)胞中線(xiàn)粒體過(guò)氧化物產(chǎn)生的方法，包括使所述細(xì)胞與本文所 述的式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥接觸。
[0015] 本發(fā)明還提供調(diào)節(jié)將Racl輸入至細(xì)胞的線(xiàn)粒體的方法，包括使所述細(xì)胞與本文 所述的式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥接觸。
[0016] 本發(fā)明還提供本文所述的式I、式II或式III的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或 前藥，其用于預(yù)防性或治療性治療纖維化。
[0017] 本發(fā)明還提供本文所述的式I、式II或式III的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或 前藥，其用于調(diào)節(jié)線(xiàn)粒體過(guò)氧化物產(chǎn)生。
[0018] 本發(fā)明還提供本文所述的式I、式II或式III的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或 前藥，其用于調(diào)節(jié)將Racl輸入至細(xì)胞的線(xiàn)粒體。
[0019] 本發(fā)明還提供本文所述的式I、式II或式III的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或 前藥在制備用于在動(dòng)物（例如，哺乳動(dòng)物例如人）中治療纖維化的藥物中的用途。
[0020] 本發(fā)明還提供本文所述的式I、式II或式III的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或 前藥在制備用于調(diào)節(jié)線(xiàn)粒體過(guò)氧化物產(chǎn)生的藥物中的用途。
[0021] 本發(fā)明還提供本文所述的式I、式II或式III的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或 前藥在制備用于調(diào)節(jié)將Racl輸入至細(xì)胞的線(xiàn)粒體的藥物中的用途。
[0022] 本發(fā)明還提供本文所述的式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥，其用于預(yù) 防性或治療性治療纖維化。
[0023] 本發(fā)明還提供本文所述的式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥，其用于調(diào) 節(jié)線(xiàn)粒體過(guò)氧化物產(chǎn)生。
[0024] 本發(fā)明還提供本文所述的式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥，其用于調(diào) 節(jié)將Racl輸入至細(xì)胞的線(xiàn)粒體。
[0025] 本發(fā)明還提供本文所述的式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥在制備用 于在動(dòng)物（例如，哺乳動(dòng)物例如人）中治療纖維化的藥物中的用途。
[0026] 本發(fā)明還提供本文所述的式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥在制備用 于調(diào)節(jié)線(xiàn)粒體過(guò)氧化物產(chǎn)生的藥物中的用途。
[0027] 本發(fā)明還提供本文所述的式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或前藥在制備用 于調(diào)節(jié)將Racl輸入至細(xì)胞的線(xiàn)粒體的藥物中的用途。
[0028] 附圖簡(jiǎn)沐 圖1.巨噬細(xì)胞在存在或不存在DGBP(10mM)下培養(yǎng)，然后暴露于溫石棉（10Pg/cm2)。H2〇2產(chǎn)生通過(guò)ρΗΡΑ測(cè)定法測(cè)定。λ= 3; */?〈 0.05〇
[0029] 圖2.巨噬細(xì)胞在存在或不存在DGBP(10mM)下培養(yǎng)，然后暴露于溫石棉（10Pg/ cm2)。分離線(xiàn)粒體，H202產(chǎn)生通過(guò)ρΗΡΑ測(cè)定法測(cè)定。/? = 3; */?〈 0. 05vs.所有其它組， 和**/?〈 0. 05vs.溫石棉+溶媒。
[0030] 圖3.巨噬細(xì)胞用空白或Flag-Racl轉(zhuǎn)染。然后將細(xì)胞在存在或不存在所示濃 度的DGBP下培養(yǎng)。第二天將細(xì)胞暴露于溫石棉（10Pg/cm2) 1h。（A)分離線(xiàn)粒體和對(duì) Flag-Racl進(jìn)行免疫印跡分析。（B)分離全細(xì)胞裂解物，并對(duì)RaplA進(jìn)行免疫印跡分析。
[0031] 圖4.DGBP抑制肺氧化應(yīng)激。將WT小鼠暴露于溫石棉（100ygi.t.)。經(jīng)過(guò)皮 下滲透栗給予水或DGBP。21天后將小鼠安樂(lè)死，取出肺用于谷胱甘肽測(cè)定法。/7=6/條件。 */?<0. 05。
[0032] 圖5.DGBP削弱石棉-誘導(dǎo)的肺纖維化。將WT小鼠暴露于溫石棉（100ygi.t.)。 經(jīng)過(guò)皮下滲透栗給予水或DGBP。21天后將小鼠安樂(lè)死，纖維化通過(guò)羥脯氨酸測(cè)定法測(cè)定。 ?=3/條件。*/?<0.05。
[0033] 圖6.DGBP削弱博來(lái)霉素誘導(dǎo)的肺纖維化。將WT小鼠暴露于博來(lái)霉素2. 0U/kg i.t。經(jīng)過(guò)皮下滲透栗給予水或DGBP。21天后將小鼠安樂(lè)死，纖維化通過(guò)羥脯氨酸測(cè)定法 測(cè)定。^=3/條件。*/<0. 05。
[0034] 圖7.來(lái)自IPF患者的肺泡巨噬細(xì)胞具有增加的氧化應(yīng)激和Racl活性。（Α)正常 受試者（n=5)和IPF患者（n=7)。H202活性通過(guò)ρΗΡΑ測(cè)定法測(cè)量。*p〈0. 05正常vs.IPF 線(xiàn)粒體。（B)正常受試者（n=3)和IPF患者（n=4)。分離線(xiàn)粒體和對(duì)Racl進(jìn)行免疫印跡分 析。線(xiàn)粒體Racl免疫印跡的密度測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化至VDAC。正常vs.IPF不顯著。（C)正常受試 者（n=5)和IPF患者（n=7)。分離全細(xì)胞裂解物，對(duì)Racl進(jìn)行免疫印跡。顯示代表性的免 疫印跡。（D)正常受試者（n=8)和IPF患者（n=6)。Racl活性通過(guò)G-LISA測(cè)量。*ρ〈0· 05。
[0035] 圖8.二香葉基雙膦酸酯削弱Racl線(xiàn)粒體輸入和線(xiàn)粒體Η202產(chǎn)生。（Α)類(lèi)異戊 二烯途徑的示意流程圖。（B)二香葉基雙膦酸酯（DGBP)的化學(xué)結(jié)構(gòu)。（C)DGBP抑制GGPP 合酶。（D)巨噬細(xì)胞用空白或Flag-Racl轉(zhuǎn)染（WT)。將細(xì)胞用水或DGBP培養(yǎng)過(guò)夜和暴露 于溫石棉（10μg/cm2) 90分鐘。在分離的線(xiàn)粒體中對(duì)Flag或VDAC進(jìn)行免疫印跡分析。 (E)巨噬細(xì)胞如（A)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。在分離的細(xì)胞質(zhì)中對(duì)RaplA進(jìn)行免疫印跡分析。（F)巨噬 細(xì)胞（n=5)在存在或不存在DGBP下培養(yǎng)過(guò)夜和暴露于溫石棉（10μg/cm2) 90分鐘。測(cè) 量氏02和表示為納摩爾/106個(gè)細(xì)胞。撲〈0.0001 ^.所有其它條件。
[0036]圖9. (A)DGBP廢除氧化應(yīng)激和博來(lái)霉素誘導(dǎo)的肺纖維化的發(fā)生。氣管內(nèi)給予 C57B1/6小鼠鹽水（n=6)或博來(lái)霉素（1. 3 (n=6)或2. 0 (n=4)U/kg)。21天后分離肺泡巨 細(xì)胞。分離線(xiàn)粒體，通過(guò)ρΗΡΑ測(cè)定法測(cè)量H202和表示為pmole/mg。*p〈0. 0001vs.鹽水， **pvs. 1. 3U/kg。（B)含溶媒（水）或DGBP的滲透栗經(jīng)皮下植入。以0· 2mg/kg/天 給予DGBP。氣管內(nèi)給予鹽水或博來(lái)霉素（2.0U/kg)。21天后獲得肺泡巨噬細(xì)胞。對(duì)Racl 在分離的線(xiàn)粒體中和對(duì)RaplA在細(xì)胞質(zhì)中進(jìn)行免疫印跡分析。（C)摘出肺和勻漿用于谷胱 甘肽測(cè)定法。二硫化物形式的總GSH表示為％GSSG。*ρ〈0·032水（n=6)vs.DGBP(n=7)。 (D)BAL流體中的活性TGF-β通過(guò)ELISA測(cè)量。ρ〈0·0002 水（n=7vs.DGBP(n=7)。（E) 和（F)摘出肺并處理，用于馬松三色染色。顯微照片代表了（E) 15水和（F) 15DGBP。（G) 將肺勾衆(zhòng)用于輕脯氨酸測(cè)定法，這表示為mg/g。*p〈 0.0125水（n=7)vs.DGBP(n=8)。
[0037] 圖10.DGBP削弱博來(lái)霉素誘導(dǎo)的肺纖維化的進(jìn)程。（A)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的示意圖。氣 管內(nèi)給予C57B1/6小鼠博來(lái)霉素（2. 0U/kg)。7天后，含水或DGBP的滲透栗經(jīng)皮下植入。 DGBP以0.2mg/kg/天遞送。博來(lái)霉素后21天將小鼠安樂(lè)死。取出肺并處理，用于馬松三 色染色。顯微照片代表了⑶8只水處理的動(dòng)物和（C) 11只DGBP治療的動(dòng)物。⑶將肺 勾衆(zhòng)用于輕脯氨酸測(cè)定法。ρ〈〇·〇5水（n=8)vs.DGBP(n=ll)。
[0038] 圖11.DGBP廢除氧化應(yīng)激和溫石棉-誘導(dǎo)的肺纖維化的發(fā)生。含水或DGBP的滲 透栗經(jīng)皮下植入C57B1/6WT小鼠。小鼠氣管內(nèi)暴露于鹽水或溫石棉（100yg/50mlNS)。 21天后，⑷肺泡巨噬細(xì)胞通過(guò)BAL分離。對(duì)Racl在分離的線(xiàn)粒體中進(jìn)行免疫印跡分析。 (B)摘出肺和在5-磺基水楊酸中勻漿用于谷胱甘肽測(cè)定法。二硫化物形式的總GSH表示 為％GSSG。* /?〈 0. 0210水（λ= 5)vs.DGBP(λ= 4)。取出肺并處理，用于馬松三色染 色。顯微照片代表了（C)水= 8)和（D)DGBP= 6)。（E)摘出肺和勻漿用于羥脯氨 酸測(cè)定法。* /?〈 0.0253 水（λ= 7)vs.DGBP(λ= 6)。（F)THP-1、（G)MLE-12 和（H) HLF-1細(xì)胞在存在或不存在DGBP(10μM)下培養(yǎng)過(guò)夜。將細(xì)胞暴露于溫石棉（10μg/ cm2) 1h。通過(guò)ρΗΡΑ測(cè)定法在分離的線(xiàn)粒體中測(cè)量H2〇2產(chǎn)生。（F) * /?〈 0.0001溫石棉 vs.所有其它條件；（G) * /?〈 0.0001 溫石棉（160-200min)vs.溫石棉+DGBP(160-200 min) ; (Η) * /7〈 0.0001 對(duì)照vs.溫石棉（160-200min) ;** /7〈 0.0001 溫石棉vs.溫 石棉+DGBP(120-200min)。對(duì)于所有條件λ= 3。
[0039] 詳沭 使用以下定義，除非另有說(shuō)明：鹵素是氟、氯、溴或碘。烷基、烷氧基等表示直鏈和支 鏈基團(tuán)兩者；但提及單個(gè)基團(tuán)例如丙基，僅包括直鏈基團(tuán)，支鏈異構(gòu)體例如異丙基將特別提 及。芳基表示苯基基團(tuán)或鄰位稠合的二環(huán)碳環(huán)基團(tuán)，其具有大約9-10個(gè)環(huán)原子，其中至少 一個(gè)環(huán)是芳族的。
[0040] 雜芳基包括包含5或6個(gè)環(huán)原子的單環(huán)芳環(huán)的基團(tuán)，其由碳和1-4個(gè)雜原子組成， 所述雜原子各自選自非過(guò)氧化物氧、硫和N(X)，其中X不存在或?yàn)镠、0、（CfC4)烷基、苯基 或芐基，以及包括1-4個(gè)雜原子的大約8-10個(gè)環(huán)原子的鄰位稠合的二環(huán)雜環(huán)的基團(tuán)，各個(gè) 雜原子選自非過(guò)氧化物氧、硫和N(X)，其中包含至少一個(gè)雜原子的至少一個(gè)環(huán)是芳族的。
[0041] 如本文所用，飽和或不飽和的（Q-CJ烷基鏈，其在所述鏈中包含一個(gè)或多個(gè)芳基 或雜芳基環(huán)；和飽和或不飽和的（c5-c2。）烷基鏈，其在所述鏈中包含一個(gè)或多個(gè)芳基或雜 芳基環(huán)，各自包括：1)烷基鏈，在所述鏈內(nèi)具有芳基或雜芳基，使得一部分的烷基鏈連接至 芳基或雜芳基的一個(gè)原子，和另一部分的烷基鏈連接至芳基或雜芳基的不同原子，和2)末 端具有芳基或雜芳基的烷基鏈。
[0042] 在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，在R7的鏈中包含一個(gè)或多個(gè)芳基或雜芳基環(huán)的飽和 或不飽和的（c5-c2。）烷基鏈，在所述鏈內(nèi)包括芳基或雜芳基，使得一部分的烷基鏈連接至芳 基或雜芳基的一個(gè)原子，和另一部分的烷基鏈連接至芳基或雜芳基的不同原子。
[0043] 術(shù)語(yǔ)〃氨基酸〃包括D或L形式的天然氨基酸殘基（例如Ala、Arg、ASn、ASp、Cys、 Glu、Gin、Gly、His、Hyl、Hyp、lie、Leu、Lys、Met、