落新婦苷在治療或預(yù)防肺纖維化的藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了落新婦苷的藥物新用途，具體涉及落新婦苷通過(guò)抑制高遷移率族蛋白B1(highmobility?group?box1，HMGB1)的表達(dá)從而抑制肺纖維化的發(fā)生發(fā)展，達(dá)到預(yù)防或治療特發(fā)性肺纖維化。在上述應(yīng)用中，落新婦苷口服使用劑量范圍是20mg～2000mg；優(yōu)選20～1000mg。落新婦苷注射使用劑量范圍是5mg～1000mg；優(yōu)選5～500mg。
【專利說(shuō)明】落新婦苷在治療或預(yù)防肺纖維化的藥物中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及落新婦苷抑制肺纖維化的發(fā)生發(fā)展從而預(yù)防或治療特發(fā)性肺纖維化； 具體涉及落新婦苷通過(guò)抑制高遷移率族蛋白Bl(highmobility group boxl，HMGBl)的表達(dá) 從而抑制肺纖維化的發(fā)生發(fā)展，達(dá)到預(yù)防或治療特發(fā)性肺纖維化。

【背景技術(shù)】：
[0002] 特發(fā)性肺纖維化（idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)又稱為隱源性致纖維化 性肺泡炎（cryptogenicfibrosing alveolitis, CFA)，是一種慢性炎癥性間質(zhì)性疾病，以普 通型間質(zhì)性肺炎（usual interstitialpneumonia，UIP)為特征性病理改變且病因不明。主 要表現(xiàn)為成纖維細(xì)胞灶（fibroblastic foci)的出現(xiàn)致大量細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix, ECM)沉，膠原積聚，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，最終導(dǎo)致正常肺組織結(jié)構(gòu)的破壞，是一種 慢性、進(jìn)行性、不可逆轉(zhuǎn)也是最常見(jiàn)的一種致命性肺疾病[King TJ，Pardo A, Selman M. Idiopathic pulmonary fibrosis [J]· Lancet. 2011，378 (9807) :1949-1961.]。臨床表 現(xiàn)為進(jìn)行性呼吸困難并伴有刺激性干咳，肺功能限制性通氣障礙，病情持續(xù)惡化，最終因呼 吸衰竭而死亡。流行病學(xué)研究顯示IPF發(fā)病率呈不斷上升趨勢(shì)，目前約為16. 3/100, 000， 且 3 年內(nèi)急性惡化發(fā)生率為 20.7% [Navaratnam V，F(xiàn)leming KM，West J et al.The rising incidence of idiopathic pulmonary fibrosis in the UK J. Thorax,2011, 66(6) :462-467. ;Song JW, Hong SB, Lim CM et al. Acute exacerbation of idiopathic pulmonary fibrosis ：incidence, risk factors and outcome[J]. Eur Respir J,2011, 37(2) :356-363.]。肺纖維化主要是肺組織受損后修復(fù)調(diào)節(jié)失控、重建異常所引起的病變， 期間一系列細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子等表達(dá)異常、炎癥反應(yīng)參與肺纖維化的發(fā)病過(guò)程。由此造 成上皮細(xì)胞缺損、成纖維細(xì)胞增生和ECM積聚等主要病變，最終結(jié)果是成纖維細(xì)胞替代了 行使正常功能的肺泡上皮細(xì)胞，導(dǎo)致了纖維化的發(fā)生。
[0003] HMGB1是一種重要的晚期炎癥因子，它作為晚期炎癥介質(zhì)在的內(nèi)毒素血癥敗血 癥，失血性休克中發(fā)揮作用[Wang H.et al.HMG-1 as a late mediator of endotoxin lethality in mice. Science. 1999,9;285(5425) :248-251·]。HMGB1 的拮抗劑特異性 地抑制內(nèi)源性的HMGB1能降低敗血癥的病死率[Yang H.et al. Reversing established sepsis with antagonists of endogenous high-mobility group boxl. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 2004,101 :296-301. ；ffang H, Czura CJ, Tracey KJ. Lipid unites disparate syndromes of sepsis. Nature Med. 2004,10 :124-125. ]〇
[0004] 最近研究表明HMGB1在IPF的發(fā)生發(fā)展中起重要作用【Hamada N, Maeyama T, Kawaguchi T, Yoshimi M, Fukumoto J, Yamada M, Yamada S, Kuwano K, Nakanishi Y. The role of high mobility group boxl in pulmonary fibrosis. Am J Respir Cell Mol Biol. 2008 ;39 (4) :440-447.】。
[0005] 落新婦苷具有抗心肌缺血、免疫調(diào)節(jié)、抗炎、鎮(zhèn)痛等藥理作用[邵春紅，新華，周 承明，等.赤土茯苓苷對(duì)大鼠心肌缺血的保護(hù)作用.新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2000,23(3): 205-207.;高思海，潘鐵成.落新婦甙的提取及對(duì)心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用研究.中 華實(shí)用中西醫(yī)雜志，2003, 3 :1693-1694]，但落新婦苷在制備預(yù)防或治療肺纖維化的藥理作 用未見(jiàn)報(bào)道。本發(fā)明人通過(guò)大量的研究發(fā)現(xiàn)落新婦苷可以通過(guò)HMGB1的表達(dá)從而在預(yù)防或 治療肺纖維化和腎纖維化方面有明顯的作用?；诖?，本發(fā)明人發(fā)明了落新婦苷通過(guò)抑制 HMGB1的表達(dá)從而抑制肺纖維化的發(fā)生發(fā)展，以達(dá)到預(yù)防或治療IPF。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供了落新婦苷在制備預(yù)防或治療肺纖維化的藥物中的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明提供了落新婦苷在抑制HMGB1表達(dá)達(dá)到預(yù)防或治療肺纖維化的藥物中的 應(yīng)用。
[0008] 發(fā)明提供的藥物在用于肺纖維化時(shí)，其使用劑量范圍是50mg?2000mg;優(yōu)選 100 ?lOOOmg。
[0009] 本發(fā)明還提供了由落新婦苷和藥學(xué)上可接受的載體或輔料組成的藥物，該藥物可 以以藥學(xué)常規(guī)方法制備成片劑、膠囊劑、注射液、凍干粉針，優(yōu)選以片劑或凍干粉針形式存 在。

【具體實(shí)施方式】
[0010] 實(shí)施例1落新婦苷凍干粉針制備
[0011] 取落新婦苷50. 0g，加注射用水2000ml使其溶解，以NaOH調(diào)pH = 5. 5?7. 5,加 甘露醇8g，攪拌溶解，超濾，得到無(wú)熱源的澄清液，灌入10ml西林瓶中，2ml/只，按凍干粉針 工藝凍干，制成每支含落新婦苷50. Omg的凍干粉針。
[0012] 實(shí)施例2落新婦苷片劑制備
[0013] 稱取100. 〇g落新婦苷、35. 0g糖粉、40. 0g乳糖和23. 0g羧甲基淀粉鈉充分混合均 勻后過(guò)100目篩，加入適量的3% PVPK3(I水溶液適量制軟材，20目篩制粒，60°C干燥3小時(shí)， 18目篩整粒，加入2. 0g硬脂酸鎂，混合均勻后淺凹沖壓，調(diào)節(jié)片重約200mg，即得。

【具體實(shí)施方式】 [0014]
[0015] 試驗(yàn)例1落新婦苷對(duì)A549細(xì)胞株HMGB1表達(dá)的影響
[0016] 1實(shí)驗(yàn)材料
[0017] DMEM培養(yǎng)基為Gibco公司產(chǎn)品，新生牛血清為杭州四季青公司產(chǎn)品，TGF-β 1購(gòu)自 PeproTech公司，A549細(xì)胞購(gòu)自中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，用含10%胎牛血清（Hyclone公 司）的低糖DMEM培養(yǎng)基（GIBC0公司），常規(guī)培養(yǎng)于5%的C0 2 , 37°C人工培養(yǎng)箱中，細(xì)胞呈 貼壁生長(zhǎng)。HMGB1、E-cad -抗購(gòu)買于sigma公司。
[0018] 落新婦苷（純度98. 5%，濱州醫(yī)學(xué)院藥物化學(xué)研究室制備）
[0019] 2試驗(yàn)方法
[0020] 當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)融合至70% -80 %，用無(wú)血清培養(yǎng)基饑餓24h，換新鮮培養(yǎng)液，將傳 代的A549細(xì)胞分為：（1)陰性對(duì)照組；（2) TGF- β 1處理組（5 μ g/L作用時(shí)間48h) ; (3) TGF- β 1處理組（5 μ g/L作用時(shí)間48h) +落新婦苷10 μ Μ ; (4) TGF- β 1處理組（5 μ g/L作 用時(shí)間48h) +落新婦苷30μΜ。48h后收獲并裂解細(xì)胞提取細(xì)胞總蛋白。BCA蛋白測(cè)定試 劑盒（Pierce公司）測(cè)定蛋白濃度后，取50 μ g樣品蛋白進(jìn)行10%的十二燒基磺酸鈉2聚 丙烯酰胺（SDS-PAGE)凝膠變性電泳、然后轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯（PVDF)膜，加入HMGBl、E-cad 一抗，β-actin作內(nèi)參，Western blot檢測(cè)細(xì)胞HMGB1和E-cad(上皮細(xì)胞標(biāo)記物）蛋白的 表達(dá)。以TGF- β 1未刺激組作為對(duì)照，分析HMGB1和E-cad蛋白的表達(dá)差異。
[0021] 表1落新婦苷對(duì)TGF- β 1刺激A549細(xì)胞的HMGB1和E-cad表達(dá)影響（η = 6)
[0022]

【權(quán)利要求】
1. 本發(fā)明提供了落新婦苷在制備預(yù)防或治療肺纖維化的藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，落新婦苷是通過(guò)抑制高遷移率族蛋白 Bl(highmobility group boxl，HMGBl)表達(dá)達(dá)到預(yù)防或治療肺纖維化的藥物中的應(yīng)用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，落新婦苷在用于預(yù)防或治療肺纖維化時(shí)，其口服使用 劑量范圍是20mg?2000mg ;優(yōu)選20?lOOOmg ;注射使用劑量范圍是5mg?lOOOmg ;優(yōu)選 5 ?500mg。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，落新婦苷是由藥學(xué)上可接受的載體或輔料組成的藥 物，以藥學(xué)常規(guī)方法制備成片劑、膠囊劑、注射液、凍干粉針，優(yōu)選以片劑或凍干粉針形式存 在。
【文檔編號(hào)】A61P11/00GK104107185SQ201310145073
【公開(kāi)日】2014年10月22日 申請(qǐng)日期:2013年4月18日 優(yōu)先權(quán)日:2013年4月18日
【發(fā)明者】蔣王林, 呂長(zhǎng)俊, 欒海云, 亢澤春 申請(qǐng)人:濱州醫(yī)學(xué)院