專利名稱：一種從土茯苓中提取落新婦苷的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然植物提取領(lǐng)域，涉及一種從土茯苓中提取落新婦苷的方法，尤其 涉及一種應(yīng)用高逆流色譜法分離落新婦苷的方法。
背景技術(shù)：
土茯苓為百合科菝莫屬植物光葉菝葜(Smilax glabra Roxb.)的干燥根莖，具有 除濕、解毒、通利關(guān)節(jié)之功效，用于濕熱淋濁，梅毒以及汞中毒所致的肢體拘攣，筋骨疼痛等 癥。土茯苓主要有效成分為皂苷和黃酮類化合物。據(jù)報道，土茯苓水提物有明顯的抗炎作 用，從土茯苓中提取分離的落新婦苷具有明顯的利尿及鎮(zhèn)痛作用。落新婦苷，即花旗松素-3-0- α -L-吡喃鼠李糖苷，黃酮苷類，易溶于沸水，幾乎不 溶于乙醚。落新婦苷具有多種顯著的生物學(xué)活性，包括抑制輔酶A還原酶，抑制醛糖還原 酶，保護(hù)肝臟，鎮(zhèn)痛，抗水腫等。近年又來有報道稱落新婦苷有顯著的選擇性免疫抑制作用， 且它的選擇性作用與以往的免疫抑制劑相比具有明顯優(yōu)勢，因此可以作為一種新的免疫抑 制劑用于免疫相關(guān)疾病的治療。張笑彥等“高效液相色譜法測定不同產(chǎn)地土茯苓藥材中落 新婦苷的含量”，研究顯示，落新婦苷在土茯苓藥材中含量在0. 5-1. 5%。有關(guān)落新婦苷提取工藝的報道較少，多數(shù)為總苷提取工藝，專屬性不強(qiáng)，如中國專 利(申請?zhí)?00910043236) “土茯苓皂甙、黃酮類提取物及其制備方法”，采用醇提和有機(jī) 溶劑萃取的方法，該方法得到的黃酮提取物中新落婦苷含量少，只適合粗提或總提取物的 制備。中國專利(申請?zhí)?00910194385. 9) “測定土茯苓乙醇水溶液提取物中的總苷有 效成分的方法”通過醇提、硅膠層析的方法得到了苷類物質(zhì)，但落新婦苷含量較低；有些只 研究了部分提純方法，還不能構(gòu)成完整的工藝，如王晉黃等“土茯苓中提取總黃酮的工藝研 究”；還有許多來源于測定方法，無法用于生產(chǎn)，如陳幸等“HPLC法測定土茯苓中落新婦苷的
含量”。中國專利(申請?zhí)?00510040944. 2) “一種落新婦苷的制備方法”，公開的方法是 將藥材粉碎，經(jīng)過兩種濃度乙醇水溶液分別滲漉提取，90 %-95 %重量的乙醇水提取液經(jīng)石 油醚脫脂后濃縮成浸膏，浸膏醇沉后，其母液與20% -80%重量乙醇水提取液合并，濃縮后 用含乙醇的乙酸乙酯液萃取，萃取物經(jīng)醇沉后與前述沉淀混合，溶解后過大孔吸附樹脂或 聚酰胺柱，20% -80%重量乙醇水溶液洗脫，洗脫液經(jīng)重結(jié)晶后得落新婦苷，該方法有機(jī)溶 劑使用量大，周期長，步驟繁復(fù)，不易于大規(guī)模生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明人經(jīng)工藝優(yōu)化試驗，發(fā)明了一種從土茯苓中提取落新婦苷的方法。該工藝簡 單易操作，生產(chǎn)時間短，產(chǎn)品收率高，生產(chǎn)成本低。本發(fā)明是采用以下技術(shù)方案實現(xiàn)的一種從土茯苓中提取落新婦苷的方法，其特征在于包含以下步驟
1)提取將干燥土茯苓粉碎至20-30目，加5-8倍(V/W)熱水超聲提取，合并提取 液，濃縮，得浸膏；2)堿溶上述浸膏加5% NaHCO3溶液至pH8_10，過濾，得澄清液；3)酸沉上述澄清液加酸至不再產(chǎn)生沉淀，過濾得到沉淀物；4)高逆流色譜分離上述沉淀物用下相溶解，通過高逆流色譜柱分離，收集落新 婦苷流分；5)結(jié)晶上述流分脫溶后，加熱水溶解，放冷結(jié)晶，重復(fù)2-3次，干燥即得產(chǎn)品。所述步驟1)中超聲提取頻率為20-35KHZ，提取2_3次，每次1_2小時。所述步驟幻中酸為lmol/L鹽酸或0. 5mol/L硫酸溶液。所述步驟4)中高逆流色譜以氯仿-甲醇-正丁醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，體積比為 6-10 5-7 2-5 8-12，以下相為流動相，上相位固定相，色譜儀轉(zhuǎn)速為750 IOOOr/ min，流動相的流速為1. 5 3. 5ml/min。綜上所述，本發(fā)明存在以下優(yōu)點1、加堿可以使游離的落新婦苷溶解，除去大量雜質(zhì)。2、本發(fā)明采用HSCCC，分離效果好，溶劑用量小，無需使用載體，減少了過程中的損失。3、本工藝對落新婦苷的提純專屬性高。下面將結(jié)合具體實施方式
進(jìn)一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限 于下列實施方式。
具體實施例方式實施例1 取土茯苓^ig,粉碎至20目，加入16L水，超聲提取1小時，提取3次，合并提取液， 濃縮至浸膏，加5% NaHCO3溶液至pH8，過濾，得澄清液，加lmol/L鹽酸至不再產(chǎn)生沉淀，過 濾得到沉淀物，取氯仿-甲醇-正丁醇-水按體積比6 :5:2: 8，超聲波振蕩混合，轉(zhuǎn)移 至分液漏斗，靜置分層，分出上下相，以上相為固定相，下相為流動相。上述結(jié)晶物用350ml 下相溶解，將上相用泵以lOml/min的流量灌滿色譜柱，將柱的首端與進(jìn)樣閥相接，開啟速 度控制器，使螺旋管柱順時針方向旋轉(zhuǎn)，當(dāng)色譜儀轉(zhuǎn)速為750r/min時，以流速為2. 5ml/min 泵入流動相，并通過進(jìn)樣閥進(jìn)樣，每次進(jìn)樣量為150mg，收集流出液，脫溶后溶于220ml熱 水，放冷結(jié)晶，養(yǎng)晶2小時，重復(fù)3次，濾出低溫干燥，得產(chǎn)品4. 7g，含量97. 2%。實施例2 取土茯苓^ig,粉碎至20目，加入12L水，超聲提取2小時，提取2次，合并提取液， 濃縮至浸膏，加5 % NaHCO3溶液至pHIO，過濾，得澄清液，加0. 5mol/L硫酸至不再產(chǎn)生沉 淀，過濾得到沉淀物，取氯仿-甲醇-正丁醇-水按體積比10 :7:5: 12，超聲波振蕩 混合，轉(zhuǎn)移至分液漏斗，靜置分層，分出上下相，以上相為固定相，下相為流動相。上述結(jié)晶 物用300ml下相溶解，將上相用泵以lOml/min的流量灌滿色譜柱，將柱的首端與進(jìn)樣閥相 接，開啟速度控制器，使螺旋管柱順時針方向旋轉(zhuǎn)，當(dāng)色譜儀轉(zhuǎn)速為lOOOr/min時，以流速 為3. 5ml/min泵入流動相，并通過進(jìn)樣閥進(jìn)樣，每次進(jìn)樣量為200mg，收集流出液，脫溶后溶 于ml熱水，放冷結(jié)晶，養(yǎng)晶2. 5小時，重復(fù)2次，濾出低溫干燥，得產(chǎn)品3. 9g，含量96. 5%。
實施例3 取土茯苓^ig,粉碎至30目，加入15L水，超聲提取1小時，提取3次，合并提取液， 濃縮至浸膏，加5% NaHCO3溶液至pH9，過濾，得澄清液，加lmol/L鹽酸至不再產(chǎn)生沉淀，過 濾得到沉淀物，取氯仿-甲醇-正丁醇-水按體積比8 :5:2: 8，超聲波振蕩混合，轉(zhuǎn)移 至分液漏斗，靜置分層，分出上下相，以上相為固定相，下相為流動相。上述結(jié)晶物用400ml 下相溶解，將上相用泵以lOml/min的流量灌滿色譜柱，將柱的首端與進(jìn)樣閥相接，開啟速 度控制器，使螺旋管柱順時針方向旋轉(zhuǎn)，當(dāng)色譜儀轉(zhuǎn)速為950r/min時，以流速為2ml/min泵 入流動相，并通過進(jìn)樣閥進(jìn)樣，每次進(jìn)樣量為200mg，收集流出液，脫溶后溶于200ml熱水， 放冷結(jié)晶，養(yǎng)晶3小時，重復(fù)3次，濾出低溫干燥，得產(chǎn)品4. 8g，含量97. 4%。實施例4 取土茯苓^cg,粉碎至30目，加入IOL水，超聲提取2小時，提取2次，合并提取 液，濃縮至浸膏，加5 % NaHCO3溶液至pH8. 5，過濾，得澄清液，加lmol/L鹽酸至不再產(chǎn)生 沉淀，過濾得到沉淀物，取氯仿-甲醇-正丁醇-水按體積比8 :7:3: 10，超聲波振蕩 混合，轉(zhuǎn)移至分液漏斗，靜置分層，分出上下相，以上相為固定相，下相為流動相。上述結(jié)晶 物用300ml下相溶解，將上相用泵以lOml/min的流量灌滿色譜柱，將柱的首端與進(jìn)樣閥相 接，開啟速度控制器，使螺旋管柱順時針方向旋轉(zhuǎn)，當(dāng)色譜儀轉(zhuǎn)速為800r/min時，以流速為 1.5ml/min泵入流動相，并通過進(jìn)樣閥進(jìn)樣，每次進(jìn)樣量為250mg，收集流出液，脫溶后溶于 280ml熱水，放冷結(jié)晶，養(yǎng)晶3小時，重復(fù)2次，濾出低溫干燥，得產(chǎn)品4. 2g，含量98. 8%。實施例5:取土茯苓^ig,粉碎至30目，加入IOL水，超聲提取2小時，提取2次，合并提取液， 濃縮至浸膏，加5% NaHCO3溶液至pHIO，過濾，得澄清液，加0. 5mol/L硫酸至不再產(chǎn)生沉淀， 過濾得到沉淀物，取氯仿-甲醇-正丁醇-水按體積比9 :6:3: 10，超聲波振蕩混合， 轉(zhuǎn)移至分液漏斗，靜置分層，分出上下相，以上相為固定相，下相為流動相。上述結(jié)晶物用 350ml下相溶解，將上相用泵以lOml/min的流量灌滿色譜柱，將柱的首端與進(jìn)樣閥相接，開 啟速度控制器，使螺旋管柱順時針方向旋轉(zhuǎn)，當(dāng)色譜儀轉(zhuǎn)速為850r/min時，以流速為:3ml/ min泵入流動相，并通過進(jìn)樣閥進(jìn)樣，每次進(jìn)樣量為200mg，收集流出液，脫溶后溶于200ml 熱水，放冷結(jié)晶，養(yǎng)晶3小時，重復(fù)3次，濾出低溫干燥，得產(chǎn)品5. 2g，含量98. 0%。
權(quán)利要求
1.一種從土茯苓中提取落新婦苷的方法，其特征在于包含以下步驟1)提取將干燥土茯苓粉碎至20-30目，加5-8倍(V/W)熱水超聲提取，合并提取液， 濃縮，得浸膏；2)堿溶上述浸膏加5%NaHCO3溶液至pH8_10，過濾，得澄清液；3)酸沉上述澄清液加酸至不再產(chǎn)生沉淀，過濾得到沉淀物；4)高逆流色譜分離上述沉淀物用下相溶解，通過高逆流色譜柱分離，收集落新婦苷 流分；5)結(jié)晶上述流分脫溶后，加熱水溶解，放冷結(jié)晶，重復(fù)2-3次，干燥即得產(chǎn)品。
2.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述步驟1)中超聲提取頻率為 20-35KHz，提取2-3次，每次1_2小時。
3.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述步驟3)中酸為lmol/L鹽酸或 0. 5mol/L硫酸溶液。
4.如權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于所述步驟4)中高逆流色譜以氯仿-甲 醇-正丁醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，體積比為6-10 5-7 2-5 8-12，以下相為流動相，上 相位固定相，色譜儀轉(zhuǎn)速為750 lOOOr/min，流動相的流速為1. 5 3. 5ml/min。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從土茯苓中提取落新婦苷的方法，工藝以土茯苓為原料，熱水超聲提取，提取液濃縮至浸膏，加5％NaHCO3溶液攪拌，過濾，得澄清液，加酸沉淀，濾出沉淀，以氯仿-甲醇-正丁醇-水為兩相溶劑系統(tǒng)，采用高速逆流色譜分離純化，流出物脫溶后用熱水溶解，放冷析晶，濾出結(jié)晶干燥即得產(chǎn)品。采用該法生產(chǎn)落新婦苷操作方便，成本低，無污染，工藝專屬性強(qiáng)，收率高，純度高。
文檔編號C07H17/07GK102070687SQ20101060397
公開日2011年5月25日 申請日期2010年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月24日
發(fā)明者萬冬梅, 劉東鋒, 楊成東 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司