專利名稱：商陸皂苷甲在制備預(yù)防或治療肺纖維化藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種從傳統(tǒng)中藥商陸中分離到的三 萜皂苷一商陸皂苷甲在制備預(yù)防或治療肺纖維化藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
傳統(tǒng)中藥商陸(P/^to/MM"c/"M)應(yīng)用歷史悠久，為歷屆中國(guó)藥典收錄 品種。商陸性苦、寒，歸肺、脾、腎、大腸經(jīng)。中醫(yī)認(rèn)為具有逐水消腫、解 毒散結(jié)之功效。多年來，發(fā)明人應(yīng)用現(xiàn)代技術(shù)與方法對(duì)商陸皂苷進(jìn)行了系統(tǒng)
的化學(xué)成分研究，分離鑒定了所含的30多種皂苷成分，其中18種為新化合
我們的研究發(fā)現(xiàn)，商陸皂苷主要有效成分是商陸皂苷甲，商陸皂苷甲 (Esculentoside A ， EsA)是一個(gè)良好的COX-II抑制劑，具有良好的抑制炎 癥反應(yīng)的作用(Fei Wu, Yanghua Yi, Peng Sun, Dazhi Zhang, Synthesis, in vitro inhibitory activity towards COX-2and haemolytic activity of derivatives of Esculentoside A. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2007, 17, 6430.)。商 陸皂苷甲抗炎作用主要是通過抑制巨噬細(xì)胞釋放血小板激活因子(PAF)、 IL-lou IL-lp、 TNF和PGE2等多種炎癥介質(zhì)釋放而產(chǎn)生的，具有不同于傳統(tǒng) 抗炎藥物的機(jī)制(方軍，商陸皂苷甲抑制大鼠腹腔巨噬細(xì)胞釋放血小板活化 因子，第二軍度丈學(xué),叛1990， (5)， 409。鄭欽岳，方軍，王洪斌，商陸皂甙 甲對(duì)人外周血單核細(xì)胞產(chǎn)生腫瘤壞死因子的抑制作用，^^"二^"^X:學(xué)學(xué)/^ 1997， 18(5) ， 415。鄭向民，鄭欽岳，王元和，商陸皂苷甲對(duì)人體淋巴細(xì)胞 TNF表達(dá)的影響，^房^"潘學(xué)會(huì)疆諷1998， 15(4)， 21 。 Xiao Z., Sun Y.， Yang S.， Yin L.， Wang W., Yi Y., Fenton B. M.， Zhang L., Okunieff P. Protective effect of esculentoside A on radiation-induced dermatitis and fibrosis. /wtewaZ/owa/ Jowr"o/i fl(iz'加'w7 Owco/ogy祝o/ogy戶/z，'c51 2006， 65, 882)。
肺纖維化是一種以彌漫性肺泡炎和肺泡結(jié)構(gòu)紊亂并最終導(dǎo)致肺間質(zhì)纖 維化為特征的疾病。多種肺疾病包括各種致病原感染、過敏性肺炎、急性呼 吸窘迫綜合征、間質(zhì)性肺炎、慢性阻塞性肺炎、腫瘤以及藥物副作用(腫瘤放療和化療、濫用大劑量糖皮質(zhì)激素等)都會(huì)引起不同程度的肺纖維化。肺 纖維化的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制至今尚不完全清楚，目前認(rèn)為至少涉及內(nèi)皮和上皮
細(xì)胞損傷、TH1/TH2/Treg免疫失衡、成纖維細(xì)胞增殖、成肌纖維細(xì)胞分化、 細(xì)胞外基質(zhì)調(diào)節(jié)失衡、氧化應(yīng)激以及凋亡等多種不同分子機(jī)制。
肺纖維化發(fā)病機(jī)理不明、診斷治療困難、死亡率高，相應(yīng)的藥物研究一 直是近年來醫(yī)藥研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。由于肺纖維化發(fā)病原因復(fù)雜多樣， 導(dǎo)致其藥物治療出現(xiàn)了對(duì)應(yīng)多靶點(diǎn)、多通道的多元性藥物研發(fā)，包括作用于 肺泡上皮細(xì)胞的藥物、作用于成纖和成肌纖維細(xì)胞的藥物、抗氧化藥物、抑 制新生血管藥物、抗細(xì)胞因子抗體及抑制劑等(崔冰，胡卓偉?？狗卫w維化 藥物治療研究進(jìn)展。主:^矜學(xué)遂展2008， 39 (3) ， 233)。
中藥及天然產(chǎn)物可多通道、多靶點(diǎn)治療肺纖維化，具有毒性低、副作用 少等優(yōu)點(diǎn)，是開發(fā)抗纖維化藥物的巨大資源庫(kù)。除了已經(jīng)用于治療肺纖維化 的秋水仙堿外，目前已經(jīng)在多種肺纖維化的動(dòng)物模型上證明有效的藥物還包 括丹參、當(dāng)歸、漢防己甲素、川芎嗪、雷公藤、銀杏葉制劑、刺五加、槲皮 素、己酮可可堿、三七總苷等(崔冰，胡卓偉。抗肺纖維化藥物治療研究進(jìn) 展。全潘辟#^展2008， 39 (3) ， 233)。目前，尚無有關(guān)商陸皂苷甲在 預(yù)防或治療肺纖維化藥物中應(yīng)用的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供商陸皂苷甲在制備預(yù)防或治療肺纖維化藥物中的應(yīng)用。
商陸皂苷甲(Esculentoside A， EsA， 3-0-[^-D-吡喃葡萄糖-(l,4)-^-D-吡. 喃木糖淨(jìng)羥基商陸酸-29-甲酯,3-0-[A-D-glucopyranosyl-(l，4)-/ 畫D-xylopyranosyl] phytolaccagenin)由傳統(tǒng)中藥商陸分離純化得到，經(jīng)1D、 2D NMR， IR， ESIMS，["]等波譜手段確定其分子式為(3421166016，白色結(jié)晶 性粉末，m.p.251 251.5。C, [a]D18 = 57.1° (c = 0.4，甲醇)，具有如下分子結(jié)構(gòu)商陸皂苷甲(EsculentosideA)
商陸皂苷甲經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)證明，無論低劑量(7.5 mg/kg)還是高低劑量(15 mg/kg)，無論造模同時(shí)給藥還是7天后開始給藥，都能夠顯著對(duì)抗肺組織纖維 化形成，可用于相關(guān)疾病的預(yù)防和治療，具有良好的應(yīng)用前景。


圖1是博萊霉素造模4周時(shí)的大鼠肺臟照片
其中A空白對(duì)照組；B模型組；C EsA低劑組；D EsA高劑組；
E EsA 7天給藥組 圖2是博萊霉素造模4周時(shí)的大鼠肺組織切片(400倍)
其中A空白對(duì)照組；B模型組；CEsA低劑組；D EsA高劑組
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)描述。
實(shí)施例l:商陸皂苷甲對(duì)肺纖維化的治療作用
動(dòng)物雄性SD大鼠50只，體重230-250 g， 8周齡，購(gòu)自上海市中國(guó)科 學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(SPF級(jí))。
試劑注射用鹽酸博萊霉素,規(guī)格15mg(生產(chǎn)商日本化藥株式會(huì)社)。 藥物商陸皂苷甲(分離提純方法見易揚(yáng)華，王著錄。商陸有效成分
的研究II三萜皂苷的分離與鑒定。第二軍度乂學(xué)學(xué)叛1984，增刊，71) 造模大鼠稱重后，10%水合氯醛麻醉，按3.5mg/kg氣管直接注射法給
予博萊霉素造模。肺組織的病理學(xué)檢査分離肺臟，注入10%福爾馬林液固定1周，切片，
行Masson染色，光鏡下觀察肺組織炎癥及纖維化情況。
方法將大鼠隨機(jī)分成5組空白對(duì)照組(給予生理鹽水)，博萊霉素
模型組，EsA低劑量組，EsA高劑量組，EsA7天給藥組?？瞻讓?duì)照組及博萊 霉素模型組每天灌胃生理鹽水lmL，造模當(dāng)天開始給藥；EsA低劑量組按7.5 mg/kg， EsA高劑量組按15mg/kg，每天灌胃一次，造模當(dāng)天開始給藥，直到 造模后4周實(shí)驗(yàn)結(jié)束。EsA7天給藥組按30 mg/kg，每天灌胃一次，造模后第 7天開始給藥，直到造模后4周實(shí)驗(yàn)結(jié)束。
造模28天后，10%水合氯醛麻醉各組動(dòng)物，分離肺臟，肉眼觀察各組肺 纖維化的程度，并作組織切片對(duì)其纖維化程度作進(jìn)一步比對(duì)。
肉眼觀察到A空白對(duì)照組觀察到表面光潔的正常肺組織；B模型組雙 測(cè)肺組織表面多斑痕、大面積纖維化；C EsA低劑組可見雙測(cè)肺葉均有部分 纖維化組織形成，但程度較模型組顯著降低；D EsA高劑組更加接近正常肺 組織，散見有纖維化組織。EEsA7天給藥組部分肺臟形成纖維化組織，但其 纖維化程度顯著低于模型組，可見，高劑量組和低劑量組商陸皂苷甲對(duì)博萊 霉素導(dǎo)致的大鼠肺纖維化均具有顯著的抑制作用，高劑量組效果優(yōu)于低劑量 組，這種差異僅憑肉眼就能觀察到。更重要的是，實(shí)驗(yàn)證實(shí)EsA7天給藥組 商陸皂苷甲對(duì)博萊霉素導(dǎo)致的大鼠肺纖維化同樣顯示顯著的抑制作用，這種 差異僅憑肉眼就能觀察到(見圖l)。
光鏡觀察相應(yīng)的組織切片，A空白對(duì)照組正常肺組織；B模型組膠原染色 區(qū)域(藍(lán)染區(qū)為膠原纖維著色部位)增加，部分肺泡腔消失，或被淋巴細(xì)胞、 成纖維細(xì)胞團(tuán)和膠原纖維填塞；CEsA低劑組肺纖維化病變程度明顯減輕；D EsA高劑組膠原纖維增生進(jìn)一步降低，進(jìn)一步證實(shí)了商陸皂苷甲對(duì)肺纖維化 的治療作用(見圖2)。
實(shí)驗(yàn)表明，商陸皂苷甲體內(nèi)能夠顯著對(duì)抗肺組織纖維化的形成，對(duì)肺纖維 化有良好的預(yù)防或治療效果，具有良好的藥物應(yīng)用前景。
權(quán)利要求
1、商陸皂苷甲在制備預(yù)防或治療肺纖維化藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，傳統(tǒng)中藥商陸(Phytolacca acinsa)應(yīng)用歷史悠久，商陸皂苷主要有效成分是商陸皂苷甲(Esculentoside A，EsA)是一個(gè)良好的COX-II抑制劑，具有良好的抑制炎癥反應(yīng)的作用。本發(fā)明的目的是提供商陸皂苷甲在制備預(yù)防或治療肺纖維化藥物中的新用途。本發(fā)明經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)證明，商陸皂苷甲能夠顯著對(duì)抗肺組織纖維化形成，可用于相關(guān)疾病的預(yù)防和治療，具有良好的藥物應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61P11/00GK101502528SQ20091004798
公開日2009年8月12日 申請(qǐng)日期2009年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月23日
發(fā)明者劉寶姝, 文 張, 易楊華, 玲 李, 華 湯 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)