原兒茶醛在制備治療或預(yù)防肺纖維化的藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了原兒茶醛的藥物新用途，具體涉及原兒茶醛通過抑制上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化和成纖維細(xì)胞增殖從而抑制肺纖維化的發(fā)生發(fā)展，達(dá)到預(yù)防或治療肺纖維化。在上述應(yīng)用中，原兒茶醛使用劑量范圍是20mg～2000mg；優(yōu)選20～1000mg。
【專利說明】原兒茶醛在制備治療或預(yù)防肺纖維化的藥物中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及原兒茶醛抑制肺纖維化的發(fā)生發(fā)展從而預(yù)防或治療肺纖維化；具體涉 及原兒茶醛通過抑制上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT)和抑制肺成纖維細(xì)胞異?；罨瘡亩种品?纖維化的發(fā)生發(fā)展，達(dá)到預(yù)防或治療肺纖維化。

【背景技術(shù)】：
[0002] 特發(fā)性肺纖維化（idiopathic pulmonary fibrosis, IPF)又稱為隱源性致纖維化 性肺泡炎（cryptogenicfibrosing alveolitis, CFA)，是一種慢性炎癥性間質(zhì)性疾病，以普 通型間質(zhì)性肺炎（usual interstitialpneumonia，UIP)為特征性病理改變且病因不明。主 要表現(xiàn)為成纖維細(xì)胞灶（fibroblastic foci)的出現(xiàn)致大量細(xì)胞外基質(zhì)（extracellular matrix, ECM)沉，膠原積聚，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，最終導(dǎo)致正常肺組織結(jié)構(gòu)的破壞，是一種 慢性、進(jìn)行性、不可逆轉(zhuǎn)也是最常見的一種致命性肺疾病[King TJ，Pardo A, Selman Μ· Idiopathic pulmonary fibrosis[J]· Lancet. 2011,378(9807) :1949-1961.]。臨床表 現(xiàn)為進(jìn)行性呼吸困難并伴有刺激性干咳，肺功能限制性通氣障礙，病情持續(xù)惡化，最終因呼 吸衰竭而死亡。流行病學(xué)研究顯示IPF發(fā)病率呈不斷上升趨勢，目前約為16. 3/100, 000， 且 3 年內(nèi)急性惡化發(fā)生率為 20. 7% [Navaratnam V，F(xiàn)leming KM，West J et al.The rising incidence of idiopathic pulmonary fibrosis in the UK J. Thorax,2011, 66(6) :462-467. ;Song JW, Hong SB, Lim CM et al. Acute exacerbation of idiopathic pulmonary fibrosis !incidence, risk factors and outcome[J]. Eur Respir J,2011, 37(2) :356-363.]。肺纖維化主要是肺組織受損后修復(fù)調(diào)節(jié)失控、重建異常所引起的病變， 期間一系列細(xì)胞因子和生長因子等表達(dá)異常、炎癥反應(yīng)參與肺纖維化的發(fā)病過程。由此 造成上皮細(xì)胞缺損、成纖維細(xì)胞增生和ECM積聚等主要病變，最終結(jié)果是成纖維細(xì)胞替代 了行使正常功能的肺泡上皮細(xì)胞，導(dǎo)致了纖維化的發(fā)生。肺泡上皮細(xì)胞（AECs)的上皮細(xì) 胞 -間質(zhì)轉(zhuǎn)化（epithelial-mesenchymal transition,EMT)是一種完全分化的肺泡上皮細(xì) 胞經(jīng)歷細(xì)胞表型改變轉(zhuǎn)化成完全分化的間質(zhì)細(xì)胞的過程，通常轉(zhuǎn)化成肺成纖維細(xì)胞和肌纖 維母細(xì)胞，與肺纖維化密切相關(guān)[Guarino M，Tosoni A，Nebuloni M. Direct contribution of epithelium to organ fibrosis ：epithelial-mesenchymal transition. Hum Pathol, 2009,40(10) :1365-1376.].成纖維細(xì)胞異常活化分化成肌成纖維細(xì)胞，是肺纖維化合成 大量的細(xì)胞外基質(zhì)（ECM)的來源（Coward WR，Saini G，Jenkins G. The pathogenesis of idiopathic pulmonary fibrosis. Ther Adv RespirDis. 2010 ;4 (6) :367-388.)〇 IPF 瘢痕肌成纖維細(xì)胞參與失調(diào)傷口愈合反應(yīng)，導(dǎo)致肺的結(jié)構(gòu)扭曲和功能失調(diào)，破壞肺的氣體 交換（Selman M, King TE, Pardo A. Idiopathic pulmonary fibrosis !prevailing and evolving hypotheses aboutits pathogenesis and implications for therapy. Ann Intern Med2001 ;134(2) :136-151;Sime PJ, 0' Reilly KM. Fibrosis of the lung and other tissues ：new concepts in pathogenesis and treatment. Clin Tmmunol2001 ； 99(3) :308-319.)，所以抑制成纖維細(xì)胞異常增殖很有意義。
[0003] 原兒茶醛是中藥丹參的一種水溶性有效成分，但原兒茶醛在制備預(yù)防或治療肺纖 維化的藥理作用未見報道。本發(fā)明人通過大量的研究發(fā)現(xiàn)原兒茶醛可以通過抑制EMT和成 纖維細(xì)胞異常活化從而在預(yù)防或治療肺纖維化方面有明顯的作用?；诖?，本發(fā)明人發(fā)明 了原兒茶醛通過抑制EMT和肺成纖維細(xì)胞異?；罨瘡亩种品卫w維化的發(fā)生發(fā)展，以達(dá)到 預(yù)防或治療IPF。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供了原兒茶醛在制備預(yù)防或治療肺纖維化的藥物中的應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明提供了原兒茶醛通過抑制EMT達(dá)到預(yù)防或治療肺纖維化的藥物中的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明提供了原兒茶醛通過抑制成纖維細(xì)胞異?；罨_(dá)到預(yù)防或治療肺纖維化 的藥物中的應(yīng)用。
[0007] 發(fā)明提供的藥物在用于肺纖維化時，其使用劑量范圍是50mg?2000mg;優(yōu)選 100 ?lOOOmg。
[0008] 本發(fā)明還提供了由原兒茶醛和藥學(xué)上可接受的載體或輔料組成的藥物，該藥物可 以以藥學(xué)常規(guī)方法制備成片劑、膠囊劑、注射液、凍干粉針，優(yōu)選以片劑或凍干粉針形式存 在。

【具體實施方式】
[0009] 實施例1原兒茶醛片劑制備
[0010] 稱取100. Og原兒茶醛、35. Og糖粉、40. Og乳糖和23. Og羧甲基淀粉鈉充分混合均 勻后過100目篩，加入適量的3% PVPk3ci水溶液適量制軟材，20目篩制粒，60°C干燥3小時， 18目篩整粒，加入2. Og硬脂酸鎂，混合均勻后淺凹沖壓，調(diào)節(jié)片重約200mg，即得。

【具體實施方式】 [0011]
[0012] 試驗例1原兒茶醛對TGF- β 1刺激肺成纖維細(xì)胞株上皮細(xì)胞鈣粘蛋白表達(dá)的影響
[0013] 1.1實驗材料
[0014] DMEM培養(yǎng)基為Gibco公司產(chǎn)品，新生牛血清為杭州四季青公司產(chǎn)品，TGF-β 1 購自PeproTech公司，肺成纖維細(xì)胞購自中國典型培養(yǎng)物保藏中心，用含10 %胎牛血清 (Hyclone公司）的低糖DMEM培養(yǎng)基（GIBC0公司），常規(guī)培養(yǎng)于5%的C02 , 37°C人工培養(yǎng) 箱中，細(xì)胞呈貼壁生長。E-cadherin -抗購買于sigma公司。
[0015] 原兒茶醛（純度98. 5%，濱州醫(yī)學(xué)院藥物化學(xué)研究室制備）
[0016] 1.2試驗方法
[0017] 當(dāng)細(xì)胞生長融合至70% -80 %，用無血清培養(yǎng)基饑餓24h，換新鮮培養(yǎng)液，將傳 代的A549細(xì)胞分為：（1)陰性對照組；（2) TGF- β 1處理組（10 μ g/L作用時間48h) ; (3) TGF-β 1處理組（10yg/L作用時間48h)+原兒茶醛lyM;(4)TGF-P 1處理組（10yg/L 作用時間481〇+原兒茶醛3以1;(4)了6?-3 1處理組（1(^8/1作用時間4811)+原兒茶醛 10 μ M。48h后收獲并裂解細(xì)胞提取細(xì)胞總蛋白。BCA蛋白測定試劑盒（Pierce公司）測定 蛋白濃度后，取50 μ g樣品蛋白進(jìn)行10 %的十二烷基磺酸鈉2聚丙烯酰胺（SDS-PAGE)凝膠 變性電泳、然后轉(zhuǎn)至聚偏二氟乙烯（PVDF)膜,加入上皮細(xì)胞I丐粘蛋白（E-cadherin) -抗， β-actin作內(nèi)參,Western blot檢測細(xì)胞E-cadherin (上皮細(xì)胞標(biāo)記物）蛋白的表達(dá)。以 TGF-β 1未刺激組作為對照，分析E-cadherin蛋白的表達(dá)差異。
[0018] L 3試驗結(jié)果
[0019] 表1原兒茶醒對TGF-β 1刺激肺成纖維細(xì)胞的E-cadherin表達(dá)影響（η = 6)
[0020]

【權(quán)利要求】
1. 本發(fā)明提供了原兒茶醛在制備預(yù)防或治療肺纖維化的藥物中的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是通過抑制EMT達(dá)到預(yù)防或治療肺纖維化的藥 物中的應(yīng)用。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是通過抑制成纖維細(xì)胞異?；罨_(dá)到預(yù)防或治 療肺纖維化的藥物中的應(yīng)用。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，原兒茶醛在用于肺纖維化時，其使用劑量范圍是 50mg ?2000mg。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，原兒茶醛在用于肺纖維化時，優(yōu)選使用劑量100? lOOOmg。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的應(yīng)用，由原兒茶醛和藥學(xué)上可接受的載體或輔料組成的藥 物，該藥物可以以藥學(xué)常規(guī)方法制備成片劑、膠囊劑。
7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，由原兒茶醛組成的藥物，優(yōu)選以片劑形式存在。
【文檔編號】A61P11/00GK104274430SQ201310295665
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2013年7月8日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月8日
【發(fā)明者】蔣王林, 呂長俊, 欒海云, 亢澤春, 刁慧玲 申請人:濱州醫(yī)學(xué)院