專利名稱：一種提取純化檜黃素的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于天然藥物領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及一種提取純化檜黃素的方法。
背景技術(shù)：
檜黃素(Hinokiflavone)是從漆樹科植物野漆TPAw1S succedanea L.的核果中提取分離的ー種黃酮類化合物，分子式C3tlH18Oltl,結(jié)構(gòu)式ザ於。
OH O檜黃素具有細(xì)胞毒活性，對KB細(xì)胞的ED5tl為2. O μ g/ml ;具有抗病毒活性，在Raji細(xì)胞中抑制EB病毒基因的表達(dá)；能抑制促凝血活性，IC50為O. 068 μ M0 野漆的根、葉及果入藥，有清熱解毒、散瘀生肌、止血、殺蟲之效，治跌打骨折、濕疹瘡毒、毒蛇咬傷，又可治尿血、血崩、白帶、外傷出血、子宮下垂等癥?，F(xiàn)有技術(shù)多是采用溶劑萃取黃酮的方法，所用的有機(jī)溶劑有甲醇、こ酸こ酷、丙酮等。存在的缺點是有機(jī)溶劑用量大，種類多，對環(huán)境有較大影響。目前，國內(nèi)很少見檜黃素的研究報道，該物質(zhì)的相關(guān)研究尚處于起步階段。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種適用于規(guī)模化生產(chǎn)、產(chǎn)品純度高的提取純化檜黃素的方法。為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下
(1)以野漆核果為原料，進(jìn)行干燥、粉碎，采用超臨界ニ氧化碳技術(shù)萃取野漆核果中的油脂類物質(zhì)；
(2)殘渣加7-10倍(V/W)70-90%丙酮溶液進(jìn)行超聲循環(huán)提取1_3次，每次30_50min，合并提取液；
(3)提取液濃縮后上聚酰胺樹脂柱，先用水和35%こ醇溶液洗脫，再用70%こ醇溶液洗脫，收集70%こ醇洗脫液；
(4)洗脫液濃縮，上硅膠短粗柱，柱徑高比為1:5-8，以こ酸こ酯-丙酮混合溶液為洗脫齊U，收集洗脫液，濃縮，放置結(jié)晶；
(5)分出結(jié)晶，丙酮-正己烷混合溶劑重結(jié)晶，濾出結(jié)晶，冷凍干燥即得檜黃素。所述步驟(I)中超臨界ニ氧化碳萃取溫度為38_50°C，壓カ為25_32MPa，萃取時間為 20_40min。
所述步驟(4)中こ酸こ酯-丙酮混合溶液體積比為1:6-15。所述步驟(5)中丙酮-正己烷混合溶劑體積比為I. 5: I。綜上所述，本發(fā)明存在以下優(yōu)點
(1)采用超臨界ニ氧化碳萃取技術(shù)脫除油脂類物質(zhì)，快速、高效；
(2)采用超聲循環(huán)提取的方法，提取效率高；
(3)采用大孔樹脂和硅膠短粗柱層析后進(jìn)行結(jié)晶，從而獲得含量98%以上的檜黃素，成本低，分離效果好；
(4)本發(fā)明所用試劑こ酸こ酷、丙酮等，可替代通常柱層析采用的氯仿、甲醇，降低毒性和污染。
具體實施例方式 下面將結(jié)合具體實施方式
對本發(fā)明做進(jìn)ー步闡述，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限于下列實施例。實施例I :
取野漆核果粗粉500g，采用超臨界ニ氧化碳技術(shù)萃取野漆核果中的油脂類物質(zhì)，萃取溫度為38°C，壓カ為25MPa，萃取時間為20min，殘渣加10倍(V/W) 90%丙酮溶液進(jìn)行超聲循環(huán)提取I次，毎次30min，合并提取液，濃縮后上聚酰胺樹脂柱，先用水和35%こ醇溶液洗脫，再用70%こ醇溶液洗脫，收集70%こ醇洗脫液，濃縮，與200目的硅膠按重量比I: I拌勻、陰干，上硅膠短粗柱，柱徑高比為1:5，以こ酸こ酷-丙酮混合溶液為洗脫劑，依次按1:6、1:10,1:15體積比進(jìn)行洗脫，收集含檜黃素的洗脫液，回收試劑，將所得檜黃素濃縮液置于結(jié)晶罐中靜置20小時使其結(jié)晶，過濾，分出結(jié)晶，采用丙酮-正己烷(I. 5:1)混合溶劑重結(jié)晶，濾出結(jié)晶，冷凍干燥即得檜黃素O. 35g，純度為98. 3%。實施例2
取野漆核果粗粉500g，采用超臨界ニ氧化碳技術(shù)萃取野漆核果中的油脂類物質(zhì)，萃取溫度為40°C，壓カ為25MPa，萃取時間為30min，殘渣加7倍(V/W)80%丙酮溶液進(jìn)行超聲循環(huán)提取2次，毎次30min，合并提取液，濃縮后上聚酰胺樹脂柱，先用水和35%こ醇溶液洗脫，再用70%こ醇溶液洗脫，收集70%こ醇洗脫液，濃縮，與200目的硅膠按重量比I: I拌勻、陰干，上硅膠短粗柱，柱徑高比為1: 6，以こ酸こ酷-丙酮混合溶液為洗脫劑，依次按1: 6、1: 9、I 13體積比進(jìn)行洗脫，收集含檜黃素的洗脫液，回收試劑，將所得檜黃素濃縮液置于結(jié)晶罐中靜置24小時使其結(jié)晶，過濾，分出結(jié)晶，采用丙酮-正己烷(I. 5:1)混合溶劑重結(jié)晶，濾出結(jié)晶，冷凍干燥即得檜黃素O. 31g，純度為98. 4%。實施例3:
取野漆核果粗粉500g，采用超臨界ニ氧化碳技術(shù)萃取野漆核果中的油脂類物質(zhì)，萃取溫度為45°C，壓カ為28MPa，萃取時間為40min，殘渣加10倍(V/W) 90%丙酮溶液進(jìn)行超聲循環(huán)提取I次，毎次50min，合并提取液，濃縮后上聚酰胺樹脂柱，先用水和35%こ醇溶液洗脫，再用70%こ醇溶液洗脫，收集70%こ醇洗脫液，濃縮，與200目的硅膠按重量比I: I拌勻、陰干，上硅膠短粗柱，柱徑高比為1:5，以こ酸こ酷-丙酮混合溶液為洗脫劑，依次按1:6、1:10,1:15體積比進(jìn)行洗脫，收集含檜黃素的洗脫液，回收試劑，將所得檜黃素濃縮液置于結(jié)晶罐中靜置12小時使其結(jié)晶，過濾，分出結(jié)晶，采用丙酮-正己烷(I. 5:1)混合溶劑重結(jié)晶，濾出結(jié)晶，冷凍干燥即得檜黃素O. 38g，純度為98. 6%。
實施例4:
取野漆核果粗粉lkg，采用超臨界ニ氧化碳技術(shù)萃取野漆核果中的油脂類物質(zhì)，萃取溫度為50°C，壓カ為32MPa，萃取時間為35min，殘渣加7倍(V/W)70%丙酮溶液進(jìn)行超聲循環(huán)提取3次，毎次30min，合并提取液，濃縮后上聚酰胺樹脂柱，先用水和35%こ醇溶液洗脫，再用70%こ醇溶液洗脫，收集70%こ醇洗脫液，濃縮，與200目的硅膠按重量比I: I拌勻、陰干，上硅膠短粗柱，柱徑高比為1:8，以こ酸こ酷-丙酮混合溶液為洗脫劑，依次按1:6、1:11、I 14體積比進(jìn)行洗脫，收集含檜黃素的洗脫液，回收試劑，將所得檜黃素濃縮液置于結(jié)晶罐中靜置18小時使其結(jié)晶，過濾，分出結(jié)晶，采用丙酮-正己烷(I. 5:1)混合溶劑重結(jié)晶，濾出結(jié)晶，冷凍干燥即得檜黃素O. 69g，純度為98. 5%。實施例5:
取野漆核果粗粉5kg，采用超臨界ニ氧化碳技術(shù)萃取野漆核果中的油脂類物質(zhì)，萃取溫度為38°C，壓カ為30MPa，萃取時間為35min，殘渣加10倍(V/W)80%丙酮溶液進(jìn)行超聲循環(huán)提取3次，毎次30min，合并提取液，濃縮后上聚酰胺樹脂柱，先用水和35%こ醇溶液洗脫，再 用70%こ醇溶液洗脫，收集70%こ醇洗脫液，濃縮，與100目的硅膠按重量比I: I拌勻、陰干，上硅膠短粗柱，柱徑高比為1:7，以こ酸こ酷-丙酮混合溶液為洗脫劑，依次按1:6、1:11、I 15體積比進(jìn)行洗脫，收集含檜黃素的洗脫液，回收試劑，將所得檜黃素濃縮液置于結(jié)晶罐中靜置12小時使其結(jié)晶，過濾，分出結(jié)晶，采用丙酮-正己烷(I. 5:1)混合溶劑重結(jié)晶，濾出結(jié)晶，冷凍干燥即得檜黃素2. 33g，純度為98. 0%。
權(quán)利要求
1.一種提取純化檜黃素的方法，其特征在于按如下工藝步驟進(jìn)行 (1)以野漆核果為原料，進(jìn)行干燥、粉碎，采用超臨界二氧化碳技術(shù)萃取野漆核果中的油脂類物質(zhì)； (2)殘渣加7-10倍(V/W)70-90%丙酮溶液進(jìn)行超聲循環(huán)提取1-3次，每次30_50min，合并提取液； (3)提取液濃縮后上聚酰胺樹脂柱，先用水和35%乙醇溶液洗脫，再用70%乙醇溶液洗脫，收集70%乙醇洗脫液； (4)洗脫液濃縮，上硅膠短粗柱，柱徑高比為1:5-8，以乙酸乙酯-丙酮混合溶液為洗脫齊U，收集洗脫液，濃縮，放置結(jié)晶； (5 )分出結(jié)晶，丙酮-正己烷混合溶劑重結(jié)晶，濾出結(jié)晶，冷凍干燥即得檜黃素。
2.如權(quán)利要求I所述的一種提取純化檜黃素的方法，其特征在于，所述步驟(I)中超臨界二氧化碳萃取溫度為38-50°C，壓力為25-32MPa，萃取時間為20_40min。
3.如權(quán)利要求I所述的一種提取純化檜黃素的方法，其特征在于，所述步驟(4)中乙酸乙酯-丙酮混合溶液體積比為1:6-15。
4.如權(quán)利要求I所述的一種提取純化檜黃素的方法，其特征在于，所述步驟(5)中丙酮-正己烷混合溶劑體積比為1.5:1。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種提取純化檜黃素的方法，包括以下步驟(1)以野漆核果為原料，進(jìn)行干燥、粉碎，采用超臨界二氧化碳技術(shù)萃取野漆核果中的油脂類物質(zhì)；(2)殘渣加丙酮溶液進(jìn)行超聲循環(huán)提??；(3)提取液濃縮后上聚酰胺樹脂柱，先用水和35%乙醇溶液洗脫，再用70%乙醇溶液洗脫，收集70%乙醇洗脫液；(4)洗脫液濃縮，上硅膠短粗柱，以乙酸乙酯-丙酮混合溶液為洗脫劑，收集洗脫液，濃縮，放置結(jié)晶；(5)分出結(jié)晶，丙酮-正己烷混合溶劑重結(jié)晶，濾出結(jié)晶，冷凍干燥即得檜黃素。本發(fā)明方法操作簡單，可實現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。
文檔編號C07D311/30GK102827128SQ20121037121
公開日2012年12月19日 申請日期2012年9月29日 優(yōu)先權(quán)日2012年9月29日
發(fā)明者劉東鋒, 萬冬梅 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司