一種青黛酮的制備方法及抗腫瘤應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明公開了一種植物提取物的制備方法及應(yīng)用，特別涉及一種青黛酮的制備 方法及抗腫瘤應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 青黛酮（Qingdainone)為生物堿類物質(zhì)，暗紫色細(xì)針晶，CAS號(hào)97457-31-3， 分子式 C23H13N3O2，分子量 363. 38,來(lái)源于爵床科（Acanthaceae)馬蘭 Cusia(Nees)Brem.的莖葉。研宄表明，青黛酮具有抗腫瘤活性。對(duì)小鼠 Lewis肺癌及黑色 素瘤細(xì)胞株B16均有抑制作用。
[0003] 馬蘭味辛，性微寒。歸肝、腎、胃、大腸經(jīng)。能清熱解毒，散瘀止血，利濕，消食，消 積。用于感冒發(fā)燒，咳嗽，急性咽炎，扁桃體炎，流行性腮腺炎，傳染性肝炎，胃、十二指腸潰 瘍，小兒疳積，腸炎，痢疾，吐血，崩漏，月經(jīng)不調(diào)；外用治瘡癤腫痛，乳腺炎，外傷出血；痢疾 或濕熱腹瀉；咽喉腫痛，癰腫瘡瘍；血熱衄血、便血；濕熱黃疸；或水腫，小便不利；飲食積 滯，脘腹脹滿。
[0004] 通過(guò)文獻(xiàn)檢索，國(guó)內(nèi)尚未見青黛酮用于制備抗腫瘤藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為滿足臨床需要，擴(kuò)大用藥品種，更好地治療癌癥，提供一種青黛酮的制備方法及 抗腫瘤應(yīng)用。
[0006] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案： 青黛酮的制備方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 以馬蘭的莖葉為原料，切成段狀，放入高速組織搗碎機(jī)，在轉(zhuǎn)速為18000rpm條件下 保持3-5min后，過(guò)40目篩備用； (2) 原料按照料液比1:4-6 (g/ml)的比例加入乙醇水溶液后，再加入0. 3-0. 5%的纖維 素酶，在超聲功率500-700W、45-60°C條件下酶解60-90min，得到酶解原料； (3) 將酶解原料投入加入閃式提取器中，加入提取溶劑，進(jìn)行閃式提取，過(guò)濾得到提取 液，濃縮干燥得到粗提物； (4) 將所得粗提物用甲醇溶解，干法上樣至高壓硅膠柱層析純化，氯仿-甲醇溶劑系統(tǒng) 梯度洗脫，收集青黛酮流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶； (5) 將粗晶用乙酸乙酯重結(jié)晶得到青黛酮結(jié)晶。
[0007] 所述步驟（2)中乙醇水溶液體積百分比為70-80%。
[0008] 所述步驟（2)中提取溶劑為70-85%的乙醇溶液。
[0009] 所述步驟（3)中閃式提取電壓為150V，提取時(shí)間為3-5min。
[0010] 所述步驟（4)中所述高壓硅膠柱層析，硅膠目數(shù)為200目，耐壓35MPa，柱內(nèi)徑為 250_，層析柱徑高比為1 :10。
[0011] 所述步驟（4)中氯仿-甲醇的體積比為1:1-1:13。
[0012] 所述制備的青黛酮，在其口服配方中添加腸吸收促進(jìn)劑，包含中鏈脂肪酸鹽、膽酸 鹽、鵝去氧膽酸鹽、殼聚糖及其衍生物中的一種或幾種。
[0013] 采用本法制備青黛酮，工藝簡(jiǎn)便易操作，制備量大，產(chǎn)品得率高，而且低污染；添加 腸吸收促進(jìn)劑，有利于提高生物利用度。
[0014] 下面將結(jié)合【具體實(shí)施方式】進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護(hù)的范圍并不局限 于下列實(shí)施方式。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 實(shí)施例1 : 青黛酮的制備 以馬蘭的莖葉為原料，切成Icm左右段狀，放入高速組織搗碎機(jī)，在轉(zhuǎn)速為18000rpm條 件下保持5min后，過(guò)40目篩備用，稱取lkg，按照料液比1:4 (g/ml)的比例加入80%乙醇 水溶液后，再加入〇. 5%的纖維素酶，在超聲功率700W、50°C條件下酶解70min，得到酶解原 料，加入閃式提取器中，加入6L80%的乙醇溶液作為提取溶劑，提取電壓為150V，提取時(shí)間 為3min，進(jìn)行閃式提取2次，過(guò)濾得到提取液，提取液濃縮干燥后得到粗提物，用甲醇溶解， 干法上樣至高壓硅膠(硅膠目數(shù)為200目）柱層析純化，耐壓35MPa，柱內(nèi)徑為250mm，層析柱 徑高比為1 :1〇,氯仿-甲醇按體積比為1:1、1:6、1:13梯度洗脫，收集青黛酮流分，減壓濃 縮，冷卻析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重結(jié)晶得到青黛酮結(jié)晶，含量為95. 8%。
[0016] 實(shí)施例2: 青黛酮的制備 以馬蘭的莖葉為原料，切成Icm左右段狀，放入高速組織搗碎機(jī)，在轉(zhuǎn)速為18000rpm條 件下保持3min后，過(guò)40目篩備用，稱取lkg，按照料液比1:6 (g/ml)的比例加入70%乙醇 水溶液后，再加入〇. 4%的纖維素酶，在超聲功率700W、45°C條件下酶解90min，得到酶解原 料，加入閃式提取器中，加入4. 5L75%的乙醇溶液作為提取溶劑，提取電壓為150V，提取時(shí) 間為5min，進(jìn)行閃式提取2次，過(guò)濾得到提取液，提取液濃縮干燥后得到粗提物，用甲醇溶 解，干法上樣至高壓硅膠(硅膠目數(shù)為200目）柱層析純化，耐壓35MPa，柱內(nèi)徑為250mm，層 析柱徑高比為1 :1〇,氯仿-甲醇按體積比為1:1、1:7、1:13梯度洗脫，收集青黛酮流分，減 壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重結(jié)晶得到青黛酮結(jié)晶，含量為94. 4%。
[0017] 實(shí)施例3: 青黛酮的制備 以馬蘭的莖葉為原料，切成Icm左右段狀，放入高速組織搗碎機(jī)，在轉(zhuǎn)速為18000rpm條 件下保持5min后，過(guò)40目篩備用，稱取lkg，按照料液比1:5 (g/ml)的比例加入75%乙醇 水溶液后，再加入〇. 5%的纖維素酶，在超聲功率600W、55°C條件下酶解75min，得到酶解原 料，加入閃式提取器中，加入4L70%的乙醇溶液作為提取溶劑，提取電壓為150V，提取時(shí)間 為4min，進(jìn)行閃式提取2次，過(guò)濾得到提取液，提取液濃縮干燥后得到粗提物，用甲醇溶解， 干法上樣至高壓硅膠(硅膠目數(shù)為200目）柱層析純化，耐壓35MPa，柱內(nèi)徑為250mm，層析柱 徑高比為1 :1〇,氯仿-甲醇按體積比為1:1、1:5、1:12梯度洗脫，收集青黛酮流分，減壓濃 縮，冷卻析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重結(jié)晶得到青黛酮結(jié)晶，含量為95. 4%。
[0018] 實(shí)施例4: 青黛酮的制備 以馬蘭的莖葉為原料，切成Icm左右段狀，放入高速組織搗碎機(jī)，在轉(zhuǎn)速為18000rpm條 件下保持5min后，過(guò)40目篩備用，稱取lkg，按照料液比1:6 (g/ml)的比例加入75%乙醇 水溶液后，再加入〇. 3%的纖維素酶，在超聲功率500W、60°C條件下酶解60min，得到酶解原 料，加入閃式提取器中，加入5L85%的乙醇溶液作為提取溶劑，提取電壓為150V，提取時(shí)間 為3min，進(jìn)行閃式提取2次，過(guò)濾得到提取液，提取液濃縮干燥后得到粗提物，用甲醇溶解， 干法上樣至高壓硅膠(硅膠目數(shù)為200目）柱層析純化，耐壓35MPa，柱內(nèi)徑為250mm，層析柱 徑高比為1 :1〇,氯仿-甲醇按體積比為1:1、1:7、1:13梯度洗脫，收集青黛酮流分，減壓濃 縮，冷卻析晶，得粗晶，粗晶用乙酸乙酯重結(jié)晶得到青黛酮結(jié)晶，含量為94. 9%。
[0019] 實(shí)施例5: 青黛酮的抗腫瘤應(yīng)用 1、材料 動(dòng)物：昆明種小鼠，雌雄各半性，體重20±2g，由南京中醫(yī)藥大學(xué)提供。
[0020] 細(xì)胞株：Sarc〇ma 180腹水型瘤株（S180)，由中國(guó)科學(xué)院上海藥物研宄所提供。
[0021] 2、方法 取50只小鼠，每只小鼠左腋下接種S18tl瘤液，次日隨機(jī)分成5組，每組10只，分別為生 理鹽水對(duì)照組（NS組)、陽(yáng)性對(duì)照組、青黛酮低劑量組（2mg/kg)、中劑量組（4mg/kg)、高劑量 組（8mg/kg)。接種24h后青黛酮給藥組灌胃給藥，連續(xù)7,陽(yáng)性對(duì)照組試驗(yàn)期間腹腔注射2 次，隔日給藥。期間，每日觀察小鼠的一般活動(dòng)、皮毛、糞便等情況。最后一次給藥24h后斷 頸處死，稱重，并計(jì)算抑瘤率。
[0022] 3、結(jié)果 本發(fā)明植物提取物對(duì)小鼠 S18tl皮下荷瘤有明顯的抑制作用，抑瘤率為70. 86-76. 04%， 結(jié)果見表1。
[0023] 抑瘤率（％)=( 1-治療組平均瘤重/空白對(duì)照組平均瘤重）X% 表1本發(fā)明植物提取物對(duì)S18tl皮下荷瘤小鼠的抑瘤作用（n=10, i ±S)
注：與陽(yáng)性對(duì)照組相比，#P < 0. 01。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種青黛酮的制備方法，其特征在于包括以下步驟： (1) 以馬蘭的莖葉為原料，切成段狀，放入高速組織搗碎機(jī)，在轉(zhuǎn)速為18000rpm條件下 保持3-5min后，過(guò)40目篩備用； (2) 原料按照料液比1:4-6 (g/ml)的比例加入乙醇水溶液后，再加入0. 3-0. 5%的纖維 素酶，在超聲功率500-700W、45-60°C條件下酶解60-90min，得到酶解原料； (3) 將酶解原料投入加入閃式提取器中，進(jìn)行閃式提取，過(guò)濾得到提取液，濃縮干燥得 到粗提物； (4) 將所得粗提物用甲醇溶解，干法上樣至高壓硅膠柱層析純化，氯仿-甲醇溶劑系統(tǒng) 梯度洗脫，收集青黛酮流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶； (5) 將粗晶用乙酸乙酯重結(jié)晶得到青黛酮結(jié)晶。2. 如權(quán)利要求1所述的青黛酮的制備方法，其特征在于所述步驟（2)中乙醇水溶液體 積百分比為70-80%。3. 如權(quán)利要求1所述的青黛酮的制備方法，其特征在于所述步驟（2)中提取溶劑為 70-85%的乙醇溶液。4. 如權(quán)利要求1所述的青黛酮的制備方法，其特征在于所述步驟（3)中閃式提取電壓 為150V，提取時(shí)間為3-5min。5. 如權(quán)利要求1所述的青黛酮的制備方法，其特征在于所述步驟（4)中所述高壓硅膠 柱層析，硅膠目數(shù)為200目，耐壓35MPa，柱內(nèi)徑為250mm，層析柱徑高比為1 :10。6. 如權(quán)利要求1所述的青黛酮的制備方法，其特征在于所述步驟（4)中所述氯仿-甲 醇的體積比為1:1-1:13。7. 根據(jù)權(quán)利要求1~6所述方法制備的青黛酮，在其口服配方中添加腸吸收促進(jìn)劑。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的青黛酮，其特征在于腸吸收促進(jìn)劑包含中鏈脂肪酸鹽、膽酸 鹽、鵝去氧膽酸鹽、殼聚糖及其衍生物中的一種或幾種。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種植物提取物的制備方法及應(yīng)用，尤其涉及一種青黛酮的制備方法及抗腫瘤應(yīng)用。制備方法包括以下步驟：（1）以馬蘭的莖葉為原料，切成段狀，放入高速組織搗碎機(jī)，備用；（2）原料加入乙醇水溶液后，再加入纖維素酶，得到酶解原料；（3）將酶解原料投入加入閃式提取器中，進(jìn)行閃式提取，過(guò)濾，濃縮干燥得到粗提物；（4）將所得粗提物干法上樣至高壓硅膠柱層析純化，收集青黛酮流分，減壓濃縮，冷卻析晶，得粗晶；（5）將粗晶用乙酸乙酯重結(jié)晶得到青黛酮結(jié)晶。采用本發(fā)明制備方法，工藝操作簡(jiǎn)便、得率高，污染小，適合高純度青黛酮的生產(chǎn)。青黛酮具有抗腫瘤作用，在其口服配方中添加腸吸收促進(jìn)劑，利于提高生物利用度。
【IPC分類】C07D487/04, A61P35/00
【公開號(hào)】CN104910160
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510264601
【發(fā)明人】劉東鋒, 楊成東
【申請(qǐng)人】南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司
【公開日】2015年9月16日
【申請(qǐng)日】2015年5月22日