一種芒柄花素衍生物、制備方法及其用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種芒柄花素衍生物及其制備方法和用途，具體涉及一種芒柄花 素-7-丹酚酸酯、制備方法及其在制備預(yù)防和/或治療特發(fā)性肺纖維化的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 特發(fā)性肺纖維化（Idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)是一種原因不明、 以彌漫性肺泡炎和肺泡結(jié)構(gòu)紊亂最終導(dǎo)致肺間質(zhì)纖維化為特征的疾病，為間質(zhì)性肺疾病 (interstitial Iungdisease)最為嚴(yán)重的一種表現(xiàn)形式，按病程有急性、亞急性和慢性之 分，臨床多見的是亞急性和慢性型。該病多為散發(fā)，發(fā)病率一般為3~5 / 10萬，占所有間 質(zhì)性肺病的65%左右，且該病預(yù)后不良，早期病例即使對激素治療有反應(yīng)，生存期一般也僅 有5年。目前特發(fā)性肺纖維化沒有具有針對性的、療效可靠的藥物。臨床上主要依靠支持 治療和激素治療為主，療效有限且具有較大的副作用。
[0003] 本申請人在前期研究中，以芒柄花素和丹參素為原料，用化學(xué)合成的方法得到了 一個新化合物，命名為芒柄花素-7-丹酚酸酯。前期研究發(fā)現(xiàn)該化合物對博萊霉素誘發(fā)的 大鼠肺纖維化模型表現(xiàn)出良好的抗肺纖維化作用，能夠明顯改善肺功能，減輕肺內(nèi)膠原的 沉積。體外研究發(fā)現(xiàn)，該化合物能夠抑制肌成纖維細(xì)胞的激活并促進(jìn)其凋亡。因此，芒柄花 素-7-丹酚酸酯可以用作防治肺纖維化的一類特效藥物進(jìn)行開發(fā)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供一種新的用于制備預(yù)防和治療特發(fā)性肺纖維化的化合物。
[0005] 本發(fā)明所述預(yù)防和治療特發(fā)性肺纖維化的化合物為芒柄花素 -7-丹酚酸酯（簡稱 SF)，其化學(xué)式是：C25HM08,結(jié)構(gòu)式是：
[0006]
[0007] 本發(fā)明還提供了芒柄花素-7-丹酚酸酯的制備方法：
[0008] 取芒柄花素加入到3~10倍量吡啶中，攪拌溶解后加入1~2倍量的丹參素，并 按1 %~5 %的比例加入二環(huán)己基碳二亞胺（DCC)作活化劑，反應(yīng)1~3h。將反應(yīng)液倒入 適量飽和NaCl溶液中，靜置，沉淀，抽濾；濾餅用適量飽和NaCl溶液洗滌近中性后，加10~ 20倍量水加熱攪拌溶解，趁熱過濾，低溫冷藏結(jié)晶，過濾；濾餅再加入10~20倍量水，加熱 溶解，趁熱過濾，低溫冷藏結(jié)晶，過濾；濾餅再用適量60~95 %的乙醇重結(jié)晶，過濾，加熱減 壓干燥，粉碎，即得。
[0009] 本工藝中所采用的吡啶也可用丙酮、氯仿等溶劑中的一種或幾種代替；所采用的 DCC可用4-二甲氨基吡啶（DMAP)U-乙基-3-(3-二甲胺丙基）碳二亞胺鹽酸鹽（EDCI)等 溶劑中的一種或幾種代替；重結(jié)晶時所采用的乙醇可用甲醇、丙酮、氯仿等溶劑中的一種或 幾種代替。
[0010] 本發(fā)明還提供了該化合物在制備預(yù)防和治療特發(fā)性肺纖維化的藥物中的應(yīng)用。
[0011] 本發(fā)明的有益效果是本發(fā)明涉及的化合物能夠明顯使肺組織的肺泡炎和纖維化 程度減輕，降低肺組織和血清內(nèi)的羥脯氨酸（HYP)含量，增加總抗氧化能力（T-AOC)，說明 本發(fā)明涉及的化合物具有一定的防治肺纖維化的作用。因此，本發(fā)明可為特發(fā)性肺纖維化 疾病提供一種全新的治療藥物。
【附圖說明】
[0012] 圖1是肺纖維化大鼠給予芒柄花素-7-丹酚酸酯（SF) 28天后，肺組織HE染色結(jié) 果：
[0013] A為對照組，B為博萊霉素造模模型組，C為醋酸潑尼松陽性藥對照組，D為高劑量 芒柄花素-7-丹酚酸酯（SF)治療組，E為中劑量芒柄花素-7-丹酚酸酯（SF)治療組，F(xiàn)為 低劑量芒柄花素-7-丹酚酸酯（SF)治療組。
[0014] 圖2是肺纖維化大鼠給予芒柄花素-7-丹酚酸酯（SF) 28天后，肺組織Masson染 色結(jié)果：
[0015] A為對照組，B為博萊霉素造模模型組，C為醋酸潑尼松陽性藥對照組，D為高劑量 芒柄花素-7-丹酚酸酯（SF)治療組，E為中劑量芒柄花素-7-丹酚酸酯（SF)治療組，F(xiàn)為 低劑量芒柄花素-7-丹酚酸酯（SF)治療組。
[0016] 圖3是芒柄花素-7-丹酚酸酯（SF)抑制肌成纖維細(xì)胞（TGF- β 1誘導(dǎo)的A549和 MRC-5細(xì)胞）激活的結(jié)果。
[0017] 圖4是芒柄花素-7-丹酚酸酯（SF)促進(jìn)肌成纖維細(xì)胞（TGF-β 1誘導(dǎo)的Α549和 MRC-5細(xì)胞）凋亡的結(jié)果。 具體實施例
[0018] 下面的實驗例用以解釋本發(fā)明，但是并非對本發(fā)明實質(zhì)內(nèi)容的限制。
[0019] 實施例1.芒柄花素 -7-丹酚酸酯的制備
[0020] 取芒柄花素加入到4倍量吡啶中，攪拌溶解后加入1. 2倍量的丹參素，并按1 %的 比例加入DCC作活化劑，反應(yīng)lh。將反應(yīng)液倒入30倍量飽和NaCl溶液中，靜置，沉淀，抽 濾。濾餅用20倍量飽和NaCl溶液洗滌近中性后，加10倍量水加熱攪拌溶解，趁熱過濾，低 溫冷藏結(jié)晶，過濾。濾餅再加入10倍量水，加熱溶解，趁熱過濾，低溫冷藏結(jié)晶，過濾。濾餅 再用8倍量70%乙醇重結(jié)晶，過濾，KKTC減壓干燥，粉碎，即得。
[0021] 為盡量減少反應(yīng)副產(chǎn)物，制備芒柄花素 -7-丹酚酸酯所用原料芒柄花素和丹參素 的純度應(yīng)在95%以上。
[0022] 實施例2.芒柄花素 -7-丹酚酸酯的制備
[0023] 取芒柄花素加入到10倍量丙酮中，攪拌溶解后加入2. 0倍量的丹參素，并按5%的 比例加入DMAP作活化劑，反應(yīng)lh。將反應(yīng)液倒入30倍量飽和NaCl溶液中，靜置，沉淀，抽 濾。濾餅用20倍量飽和NaCl溶液洗滌近中性后，加20倍量水加熱攪拌溶解，趁熱過濾，低 溫冷藏結(jié)晶，過濾。濾餅再加入20倍量水，加熱溶解，趁熱過濾，低溫冷藏結(jié)晶，過濾。濾餅 再用10倍量95%甲醇重結(jié)晶，過濾，60°C減壓干燥，粉碎，即得。
[0024] 為盡量減少反應(yīng)副產(chǎn)物，制備芒柄花素 -7-丹酚酸酯所用原料芒柄花素和丹參素 的純度應(yīng)在95%以上。
[0025] 實施例3.芒柄花素 -7-丹酚酸酯的制備
[0026] 取芒柄花素加入到10倍量氯仿中，攪拌溶解后加入I. 0倍量的丹參素，并按1 %的 比例加入EDCI作活化劑，反應(yīng)3h。將反應(yīng)液倒入30倍量飽和NaCl溶液中，靜置，沉淀，抽 濾。濾餅用20倍量飽和NaCl溶液洗滌近中性后，加20倍量水加熱攪拌溶解，趁熱過濾，低 溫冷藏結(jié)晶，過濾。濾餅再加入20倍量水，加熱溶解，趁熱過濾，低溫冷藏結(jié)晶，過濾。濾餅 再用8倍量95%丙酮重結(jié)晶，過濾，60°C減壓干燥，粉碎，即得。
[0027] 為盡量減少反應(yīng)副產(chǎn)物，制備芒柄花素-7-丹酚酸酯所用原料芒柄花素和丹參素 的純度應(yīng)在95%以上。
[0028] 實施例4.芒柄花素-7-丹酚酸酯對博萊霉素所致大鼠肺纖維化保護作用的實驗 研究
[0029] 1.材料
[0030] SD大鼠，雄性，體重200±20克，清潔級，由山東綠葉制藥股份有限公司實驗動物 中心提供，合格證號：SYXK (魯）20030020,在清潔級動物觀察室，適應(yīng)性喂養(yǎng)3天，給藥期 間自由飲水進(jìn)食；芒柄花素-7-丹酚酸酯（自制，批號：20121201);博萊霉素（日本化藥株 式會社產(chǎn)品，批號：850300);醋酸潑尼松片（江蘇徐州平光制藥有限責(zé)任公司，生產(chǎn)批號： 080140);羥脯氨酸（HYP)含量測定、總抗氧化能力（T-AOC)測定、谷胱甘肽（GSH)含量測定 等試劑盒均購自南京建成生物工程公司。
[0031] 2.儀器
[0032] UV-2550紫外可見分光光度計（日本島津）；XHF_D型高速分散器（寧波新芝生物 科技有限公司）；5417R型高速低溫離心機（德國Effendorf公司）。
[0033] 3.方法
[0034] 3. 1動物建模與分組：
[0035] 60只SD大鼠隨機分為6組：正常組、模型組、3個給藥組（芒柄花素-7-丹酚酸 酯大、中、小3個劑量組）、陽性藥物組（醋酸潑尼松片），每組大鼠10只。模型組、給藥組、 陽性藥物組大鼠用4%水合氯醛（0.0 lml · f1)腹腔注射麻醉，常規(guī)消毒鋪巾，按無菌操作 原則切開頸部皮膚，由氣管一次性注入博萊霉素溶液（5mg / kg)，完畢后縫合皮膚，將大鼠 直立、旋轉(zhuǎn)，盡量使藥液在肺內(nèi)均勻分布；正常組由氣管內(nèi)一次性注入等體積無菌生理鹽水 0.2ml。術(shù)后動物置于干燥、溫暖條件下喂養(yǎng)，定期消毒喂養(yǎng)場所。3天后給藥組經(jīng)由口腔灌 胃芒柄花素-7-丹酚酸酯，給藥濃度分別為2. 5mg / kg, 5mg / kg, IOmg / kg;陽性藥物組 給予醋酸潑尼松，劑量為3. 33mg · kg4 · 0-1。給藥28d，每天I次。
[0036] 3. 2檢測與病理學(xué)觀察：
[0037] 各組實驗大鼠分別于給藥28d后處死，取血清與肺組織。嚴(yán)格按相應(yīng)試劑盒說明 書操作，檢測各組實驗大鼠血清中MDA、GSH、SOD、T-AOC含量以及肺組織中HYP、GSH、MDA含 量；取右肺，4%甲醛溶液固定，常規(guī)病理學(xué)方法脫水、包埋、切片、染色（HE、Masson)，染色 結(jié)果用Image-Pro Plus處理并用SPSS軟件統(tǒng)計分析。肺泡炎和肺纖維化程度評價標(biāo)準(zhǔn) 為：①肺泡炎分級：〇級，無肺泡炎；1級，輕度肺泡炎，肺泡隔因細(xì)胞浸潤增寬，病變范圍局 限在全肺的20 %以下；2級，中度肺泡炎，病變范圍占全肺的20 %~50 %; 3級，重度肺泡炎， 呈彌漫性分布，病變范圍大于50%。②肺纖維化分級：0級，無肺間質(zhì)纖維化；1級，輕度肺 間質(zhì)纖維化，病變范圍局限在全肺20 %以下；2級，中度肺間質(zhì)纖維化，病變范圍占全肺的 20%~50%，肺泡結(jié)構(gòu)紊亂；3級，重度肺間質(zhì)纖維化，病變范圍大于50 %，肺泡融合，肺實 質(zhì)結(jié)構(gòu)紊亂。
[0038] 4.結(jié)果
[0039] 4. 1芒柄花素 -7-丹酚酸酯對肺纖維化大鼠血清中MDA、GSH、SOD、T-AOC的影響
[0040] 與正常組相比，模型組