一種高純度的中藥丹參有效成分丹酚酸b的制備方法、藥物制劑及臨床應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種藥物有效成分的制備方法、制劑及臨床應(yīng)用，尤其是從中藥丹參 制備丹酚酸B的方法、藥物制劑及其臨床應(yīng)用，屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 心腦血管疾病是中老年人常見(jiàn)病、多發(fā)病之一，全世界每年有6000萬(wàn)病人接受肝 素治療（其中我國(guó)有1000萬(wàn)以上）。用化學(xué)藥治療各種血栓栓塞疾病效果不盡理想，且不 能標(biāo)本兼治，中藥治療多能標(biāo)本兼治，但因中藥質(zhì)量受產(chǎn)地、生長(zhǎng)環(huán)境、生長(zhǎng)年限等多因素 制約，其有效成分懸殊很大，因而造成中藥的療效不穩(wěn)定，測(cè)定或提取中藥的有效成分，制 定數(shù)字化量化的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是中藥現(xiàn)代化當(dāng)務(wù)之急。中藥丹參注射液、三七注射液、脈絡(luò)寧注 射液是目前用于治療血管閉塞性疾病的常用藥，用于保護(hù)心肌缺血、缺氧，改善微循環(huán)，降 低血液粘度，抑制血小板聚集，血栓形成，中樞鎮(zhèn)靜及抗菌消炎等，治療胸中憋悶，冠心病， 心絞痛和心肌梗塞，脈管炎等疾病，取得了令人滿(mǎn)意的效果。
[0003] 丹參是最重要用量最大的祛瘀劑之一，丹參制劑品種較多，產(chǎn)量較大，據(jù)不完全統(tǒng) 計(jì)，每年僅丹參注射液的用量就達(dá)到30億支以上，丹參滴注液數(shù)億瓶。僅丹參滴丸的年銷(xiāo) 售額達(dá)10億元以上。丹參注射劑工藝技術(shù)日益提高，其活性最強(qiáng)的丹酚酸B含量已達(dá)到 50% -80%，并且制定了數(shù)字化量化的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，這無(wú)疑是中藥注射劑領(lǐng)域一大突破。申請(qǐng) 人了解到現(xiàn)有技術(shù)中已存在從中藥丹參藥材中提取分離純化，制備高純度丹酚酸B，具體見(jiàn) 表1。
[0004] 表1已有專(zhuān)利制備丹酚酸B的流程一覽表
[0005]
[0006] 上述專(zhuān)利技術(shù)或工藝過(guò)程復(fù)雜，或費(fèi)時(shí)，或費(fèi)事，或耗煤耗能，或成本太高，或僅為 小試，或未見(jiàn)收率?，F(xiàn)有的技術(shù)存在兩大瓶頸，一是工藝繁瑣，大多要經(jīng)4-5步反復(fù)處理過(guò) 柱，很難實(shí)現(xiàn)連續(xù)化工業(yè)化生產(chǎn)；二是丹酚酸B的穩(wěn)定性相對(duì)較差，在加熱提取和分離純化 過(guò)程中產(chǎn)生的降解和轉(zhuǎn)化率在10%~15%，總收率較低。特別是用減壓加熱濃縮分離純化 得到的丹酚酸B純度在98. 5%以上稀洗脫液過(guò)程中造成降解約5%，使已經(jīng)純化好的產(chǎn)品 又不合格，并且是很難彌補(bǔ)的。凡此，本領(lǐng)域迫切需要一種綠色化、智能化、工藝簡(jiǎn)單、收率 高、成本低、能工業(yè)化的制備高純度丹酚酸B的工藝，盡快使丹酚酸B作為一類(lèi)新藥推上臨 床，為人類(lèi)的健康服務(wù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷，提供一種制備高純度丹酚酸B的方 法、制劑及其應(yīng)用，實(shí)現(xiàn)完全綠色化、智能化，操作更簡(jiǎn)單，收率更高，成本更低的目的。
[0008] 本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案解決技術(shù)問(wèn)題：一種高純度的中藥丹參有效成分丹酚酸 B的制備方法，包括以下步驟：
[0009] 第一步，將丹參藥材在室溫下以水為溶劑進(jìn)行常規(guī)攪拌提取，提取時(shí)間5-10分 鐘，丹參藥材與水之比為1 : 4-10,得到提取液；
[0010] 第二步，調(diào)整所述提取液的pH為5. 0-6. 5 (優(yōu)選是5. 5-6. 0)后，再過(guò)大孔樹(shù)脂樹(shù) 脂柱，分離、純化，得到第一次洗脫液；
[0011] 第三步，調(diào)整所述第一次洗脫液的pH為1.5-3. 5 (優(yōu)選是2. 0-2. 5)后，第二次過(guò) 大孔樹(shù)脂柱，富集得到第二次洗脫液；
[0012] 第四步，將所述第二次洗脫液過(guò)濾，濾液經(jīng)過(guò)噴霧干燥，得到丹酚酸B。
[0013] 發(fā)明人在制備丹酚的研宄中發(fā)現(xiàn)，丹參中的丹酚酸B在長(zhǎng)時(shí)間高溫水煮、高溫高 壓滅菌和強(qiáng)酸強(qiáng)堿調(diào)節(jié)pH的過(guò)程中有10-15%的丹酚酸B被降解轉(zhuǎn)化為丹參素、原兒茶醛、 丹酚酸A、丹酚酸D、丹酚酸E等，采用超短時(shí)間水提方法即所述第一步中，提取的次數(shù)為2 次，第一次提取時(shí)間10分鐘，丹參藥材與水之比為1 : 10;第二次提取時(shí)間5分鐘，丹參藥 材與水之比為1 : 4。所述提取液經(jīng)過(guò)三足離心機(jī)甩濾粗濾除去大部分濾渣后，調(diào)節(jié)濾液 pH為3. 0~4. 0,再用錯(cuò)流過(guò)濾精濾，調(diào)濾液pH為5. 5~6. 0,得提取液備用。
[0014] 以上步驟的藥渣經(jīng)檢測(cè)水溶性成分已經(jīng)提取完全。該藥渣可以加乙醇使醇濃度達(dá) 75%左右，攪拌提取丹參酮II A等脂溶性成分；醇提后的藥渣可用來(lái)制備沼氣，作為能源； 制沼氣的廢料可做種植丹參的肥料，如此實(shí)現(xiàn)了循環(huán)經(jīng)濟(jì)的目標(biāo)。
[0015] 本發(fā)明的提取方法完全避免了丹酚酸B的降解轉(zhuǎn)化，既不需要像浸漬、滲漉等提 取花幾十小時(shí)到一百多小時(shí)繁瑣操作，也不要像閃式、超聲、微波、C02臨界萃取等需要特殊 提取設(shè)備，省時(shí)省事，成本低廉。實(shí)踐證明，藥材用"室溫超短時(shí)間水常規(guī)攪拌提取"，提取液 中含丹酚酸B在80%左右（歸一化法），而用水煮醇沉老工藝得到的丹參提取物中丹酚酸 B的含量在10%以下（歸一化法），最差的工藝甚至為3.6%。在丹參提取的工作中，水提 取液的成分復(fù)雜，各種細(xì)小的有機(jī)和無(wú)機(jī)的微粒，泥沙，皂甙，使其成為一種"類(lèi)膠體"，過(guò)濾 很難，沉淀也很難，有時(shí)幾天都沉淀不好，水提取液的過(guò)濾難以實(shí)現(xiàn)，500L丹參水提取液過(guò) 濾需要3-4個(gè)人忙碌10小時(shí)以上，過(guò)濾的質(zhì)量還得不到保證，過(guò)濾已成為生產(chǎn)的瓶頸，經(jīng)反 復(fù)摸索試驗(yàn)，用三足離心機(jī)甩濾粗濾與錯(cuò)流過(guò)濾精濾聯(lián)合應(yīng)用，可以獲得非常滿(mǎn)意的過(guò)濾 效果，效率提高40倍以上，并且實(shí)現(xiàn)了人-機(jī)對(duì)話(huà)，智能化控制過(guò)濾。
[0016] 在丹參提取液過(guò)分離2號(hào)或色譜3號(hào)大孔樹(shù)脂之前，提取液的pH必須調(diào)為 5. 0-6. 5 (優(yōu)選是5. 5-6. 0)，否則是無(wú)法實(shí)現(xiàn)分離純化，洗脫得到的產(chǎn)物的純度在85%以 下；本發(fā)明調(diào)節(jié)的PH及其相關(guān)操作與現(xiàn)有的專(zhuān)利文獻(xiàn)報(bào)道截然不同，丹參水提液以3-9BV/ h流速過(guò)大孔樹(shù)脂柱至結(jié)束，純化水以3-9BV/h流速充分洗滌后，用15-25%乙醇以3-9BV/ h流速洗脫至無(wú)丹酚酸B止，丹酚酸B的分離純化工作即告完成，不需要反復(fù)蒸餾濃縮，反 復(fù)調(diào)節(jié)酸堿、反復(fù)醇沉和反復(fù)上柱等復(fù)雜的處理過(guò)程。操作簡(jiǎn)捷，收率可提高10%以上。如 此操作，分離純化在一個(gè)樹(shù)脂柱中完成，具體是所述第二步中，分離純化時(shí)洗滌的醇濃度為 0% -15%，洗脫液的醇濃度為15% -25% ;洗滌和/或洗脫速度為2-10BV。大孔樹(shù)脂柱為 分離2號(hào)或色譜3號(hào)，樹(shù)脂柱的徑高比1 : 8~15;提取液以3-9BV/h流速過(guò)大孔樹(shù)脂至 結(jié)束，純化水以3-9BV/h流速充分洗滌后，用15-25%乙醇以3-9BV/h流速洗脫至無(wú)丹酚酸 B止，丹酚酸B的分離純化完成。所述提取液中丹酚酸B的量與大孔樹(shù)脂用量之比為1 : 50-100。
[0017] 本發(fā)明通過(guò)創(chuàng)造性勞動(dòng)，反復(fù)試驗(yàn)，摸索出很稀的分離純化洗脫液過(guò)富集柱前，必 須先調(diào)節(jié)稀洗脫液的PHI. 0-3. 5 (優(yōu)選是2. 0-2. 5)，如果不調(diào)節(jié)pH，而將分離純化的洗脫 液直接過(guò)富集柱，會(huì)有15% -20%甚至更多的丹酚酸B泄漏，無(wú)法實(shí)現(xiàn)富集過(guò)程，調(diào)節(jié)稀洗 脫液的PH后，既可以增加樹(shù)脂的吸附量，也能夠降低泄漏率，富集的效果最理想，富集時(shí)還 可以用適量的純化水洗滌以進(jìn)一步純化，即以3-9BV/h流速過(guò)相同和/或不同的大孔樹(shù)脂， 用適量的稀乙醇洗滌后，再用50%-95%乙醇洗脫至無(wú)丹酚酸B止即可，避免加熱減壓濃縮 操作，不僅節(jié)省能源，而且可避免引起丹酚酸B的降解轉(zhuǎn)化，在浴溫為40°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)時(shí)，會(huì) 造成丹酚酸B的降解轉(zhuǎn)化達(dá)5 %，浴溫越高，時(shí)間越長(zhǎng)，造成降解轉(zhuǎn)化率越高，此時(shí)的降解轉(zhuǎn) 化會(huì)對(duì)產(chǎn)品純度產(chǎn)生極其重要的影響，并且是很難彌補(bǔ)的，因此本發(fā)明所述第三步中，富集 時(shí)，洗脫液以3-9BV/h流速過(guò)大孔樹(shù)脂柱，所述大孔樹(shù)脂柱是非極性或弱極性的大孔樹(shù)脂， 如分離2號(hào)、色譜3號(hào)、D101、D101-l、AB-8中的至少一種，用純化水稀釋的乙醇洗滌后，再 以50% -95%乙醇洗脫至無(wú)丹酚酸B止，丹酚酸B的富集完成。
[0018] 所述第四步中，噴霧干燥的暖風(fēng)溫度為50°C ±10°C，出風(fēng)溫度為23°C ±2°C，流速 應(yīng)以所用設(shè)備的生產(chǎn)能力而調(diào)定。高純度丹酚酸B的醇洗脫液的醇濃度約為70%左右，噴 霧干燥，即得高純度丹酚酸B ;如果其晶形、色澤或純度不夠理想時(shí)，可以重新精制，甚至重 新過(guò)柱，必要時(shí)可以加適量的針用活性炭助濾和脫色；本發(fā)明制備丹酚酸B的提取率提高 到到65% -76% (由于丹參藥材中丹酚酸B的含量是相差很大，本發(fā)明以丹參提取液中含 有的丹酚酸B計(jì)）。
[0019] 本發(fā)明進(jìn)一步提供含有高純度的中藥丹參有效成分丹酚酸B及藥學(xué)上可接受的 載體和制劑，方法可以是常規(guī)方法或新方法，如注射用丹酚酸B、丹酚酸B注射液、可溶片、 口崩片、分散片、滴丸、微丸、控釋片、控釋微丸、軟膠囊、片劑、膠囊、復(fù)方丹酚酸B制劑等口 服制劑，眼用制劑，凝膠劑，外用制劑等。
[0020] 本發(fā)明再進(jìn)一步提供上述制劑的在預(yù)防和治療包括心腦血管、肝、腎、眼科和燙傷 在內(nèi)的疾病的應(yīng)用，是根據(jù)病人治療需要，選擇適當(dāng)劑型和劑量，治療患者的心腦血管、肝、 腎、眼科和燙傷外科等疾病的治療和心腦血管病等的預(yù)防。
[0021] 本發(fā)明在從中藥丹參藥材中提取分離純化制備高純度丹酚酸B的過(guò)程中，克服了 技術(shù)困難，取得了突破性的進(jìn)展，主要如下：
[0022] (1)室溫超短時(shí)間的水常規(guī)攪拌提取，避免了因受熱而引起降解轉(zhuǎn)化，收率提高 10%以上；
[0023] (2)創(chuàng)造性運(yùn)用調(diào)節(jié)溶液的pH，即將丹參提取液調(diào)pH為5. 5-6. 0過(guò)柱，加很稀的 乙醇梯度洗滌，再用稀乙醇洗脫，實(shí)現(xiàn)了一次