一種貞芪扶正制劑中芒柄花素的含量測(cè)定方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種貞芪扶正制劑中芒柄花素的含量測(cè)定方法，它是以芒柄花素對(duì)照品為對(duì)照，以甲醇:水/0.01%～5%磷酸水溶液/0.01%～5%冰醋酸/0.01%～0.5%甲酸水溶液=50～70：50～30或者乙腈:水/0.01%～5%磷酸水溶液/0.01%～5%冰醋酸/0.01%～0.5%甲酸水溶液=20～50:80～50為流動(dòng)相的高效液相色譜法。本發(fā)明方法的專(zhuān)屬性強(qiáng)、精密度高、重復(fù)性好、回收率高、穩(wěn)定性高、測(cè)量結(jié)果準(zhǔn)確，達(dá)到了有效控制藥物質(zhì)量的目的，確保了產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定以及臨床用藥的安全、有效。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種貞芪扶正制劑中芒柄花素的含量測(cè)定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種貞芪扶正制劑中芒柄花素的含量測(cè)定方法，屬于中藥質(zhì)量檢測(cè)【技術(shù)領(lǐng)域】。
【背景技術(shù)】
[0002]貞芪制劑有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、扶正固本之功效?，F(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)證明能提高人體免疫功能，保護(hù)骨髓和腎上腺皮質(zhì)功能，促進(jìn)干擾素產(chǎn)生；配合腫瘤患者放、化療，減輕病人放、化療期間的毒副作用，促進(jìn)正常功能的恢復(fù)的作用。其處方由黃芪、女貞子組成。目前，貞芪制劑供臨床選擇的劑型有片劑、膠囊劑、顆粒劑及滴丸劑等。
[0003]而黃芪中的主要有效成分為皂苷和黃酮類(lèi)化合物，研究證實(shí)黃芪中的黃酮類(lèi)成分具有多種藥理活性、可以清除氧自由基、抑制脂質(zhì)過(guò)氧化和維持血中NO濃度，保護(hù)缺血再灌注損傷。因此，黃芪黃酮類(lèi)成分是貞芪扶正制劑的主要藥物有效成分之一，而芒柄花素是黃芪黃酮類(lèi)成分中重要的一種，對(duì)芒柄花素的含量進(jìn)行測(cè)定也顯得尤為重要。
[0004]但是，現(xiàn)有的貞芪扶正制劑的質(zhì)量檢測(cè)方法并沒(méi)有對(duì)芒柄花素成分的含量進(jìn)行測(cè)定，為進(jìn)一步完善貞芪扶正制劑的質(zhì)量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)，以確保其藥品質(zhì)量，建立貞芪扶正制劑中芒柄花素的含量測(cè)定項(xiàng)目非常必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的目的在于，提供一種貞芪扶正制劑中芒柄花素的含量測(cè)定方法，該方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、精密度高、重復(fù)性好、回收率高、穩(wěn)定性高、測(cè)量結(jié)果準(zhǔn)確，達(dá)到了有效控制藥物質(zhì)量的目的，確保了產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定以及臨床用藥的安全、有效。
[0006]本發(fā)明所述的貞芪扶正制劑包括現(xiàn)有技術(shù)中的任意貞芪扶正制劑產(chǎn)品(顆粒、膠囊、片劑等)，例如按照發(fā)明專(zhuān)利200310122216.7,200610051146.4所述的方法制備得到的制劑。
[0007]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案:
[0008]一種貞芪扶正制劑中芒柄花素的含量測(cè)定方法，它是以芒柄花素對(duì)照品為對(duì)照，以甲醇:水/0.01%~5%磷酸水溶液/0.01%~5%冰醋酸/0.01%~0.5%甲酸水溶液=50~70:50~30或者乙腈:水/0.01%~5%磷酸水溶液/0.01%~5%冰醋酸/0.01%~0.5%甲酸水溶液=20~50:80~50為流動(dòng)相的高效液相色譜法。
[0009]具體的含量測(cè)定方法為:照高效液相色譜法、按下述步驟進(jìn)行測(cè)定:
[0010](I)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇:水/0.01%~5%磷酸水溶液/0.01%~5%冰醋酸/0.01%~0.5%甲酸水溶液=50~70:50~30或者乙腈:水/0.01%~5%磷酸水溶液/0.01%~5%冰醋酸/0.01%~0.5%甲酸水溶液=20~50:80~50為流動(dòng)相(乙腈較甲醇的優(yōu)點(diǎn)更明顯，如產(chǎn)生鬼峰少，壓力小等)；柱溫為20~40°C ;檢測(cè)波長(zhǎng)為230~270nm ;流速為0.5~1.5mL ? mirT1 ;理論板數(shù)按芒柄花素峰計(jì)算應(yīng)不低于5000 ；[0011](2)對(duì)照品溶液的制備:取芒柄花素對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成ImL含0.1mg的溶液，備用；
[0012](3)供試品溶液的制備:采用下述方法①-⑤中的任一種:
[0013]①精密稱(chēng)取貞芪扶正制劑或其內(nèi)容物2.0g，精密加入甲醇IOOmL,稱(chēng)定重量，超聲或回流提取30?60min，待冷卻后，用甲醇補(bǔ)足重量，過(guò)濾，取續(xù)濾液即得；
[0014]②精密稱(chēng)取貞芪扶正制劑或其內(nèi)容物2.0g，用適量石油醚索氏提取30min，殘?jiān)鼡]干后，精密加入甲醇IOOmL,稱(chēng)定重量，超聲或回流提取30?60min，待冷卻后，用甲醇補(bǔ)足重量，過(guò)濾，取續(xù)濾液即得；
[0015]③精密稱(chēng)取貞芪扶正制劑或其內(nèi)容物2.0g，精密加入70%?80%的乙醇IOOmL,稱(chēng)定重量，超聲提取lh，用乙醇補(bǔ)足重量，濾過(guò)；精密量取續(xù)濾液50mL，減壓濃縮至干，殘?jiān)舆m量水使溶解，上大孔吸附樹(shù)脂柱，靜置吸附30min，依次用水、40%乙醇、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，濃縮至干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至50mL的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得;
[0016]④精密稱(chēng)取貞芪扶正制劑或其內(nèi)容物2.0g，精密加入甲醇IOOmL,稱(chēng)定重量，超聲或回流提取lh，用甲醇補(bǔ)足重量，濾過(guò)；精密量取續(xù)濾液50mL，濃縮至干，殘留物用0.3%氫氧化鈉溶液溶解后，加稀鹽酸調(diào)至PH5?6，然后用乙酸乙酯或水飽和的正丁醇萃取四次，合并有機(jī)層，減壓蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ葜?0mL，搖勻，即得；
[0017]⑤精密稱(chēng)取貞芪扶正制劑或其內(nèi)容物2.0g，精密加入甲醇IOOmL,稱(chēng)定重量，超聲或回流提取lh，用甲醇補(bǔ)足重量，濾過(guò)；精密量取續(xù)濾液50mL，濃縮至干，殘?jiān)舆m量溫水溶解，用水飽和的正丁醇提取4次，充分提取后，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀甀OmL使溶解，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，以水50mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸干,殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；
[0018](4)測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ L，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。
[0019]前述的貞芪扶正制劑中芒柄花素的含量測(cè)定方法中，所述的流動(dòng)相為乙腈:0.5%磷酸水溶液=40:60。
[0020]前述的貞芪扶正制劑中芒柄花素的含量測(cè)定方法中，步驟(I)中的檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm,流速為 0.8 ?1.0mL/min,柱溫為 35°C。
[0021]為確保本發(fā)明含量測(cè)定方法科學(xué)、合理、可行， 申請(qǐng)人:進(jìn)行了一系列試驗(yàn)研究和考察。
[0022]一、儀器與試藥(見(jiàn)表I)
[0023]表I
[0024]
【權(quán)利要求】
1.一種貞芪扶正制劑中芒柄花素的含量測(cè)定方法，其特征在于:它是以芒柄花素對(duì)照品為對(duì)照，以甲醇:水/0.01%?5%磷酸水溶液/0.01%?5%冰醋酸/0.01%?0.5%甲酸水溶液=50?70:50?30或者乙腈:水/0.01%?5%磷酸水溶液/0.01%?5%冰醋酸/0.01%?0.5%甲酸水溶液=20?50:80?50為流動(dòng)相的高效液相色譜法。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的貞芪扶正制劑中芒柄花素的含量測(cè)定方法，其特征在于，照高效液相色譜法、按下述步驟進(jìn)行測(cè)定: (1)色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn):以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇:水/0.01%?5%磷酸水溶液/0.01%?5%冰醋酸/0.01%?0.5%甲酸水溶液=50?70:50?30或者乙腈:水/0.01%?5%磷酸水溶液/0.01%?5%冰醋酸/0.01%?0.5%甲酸水溶液=20?50:80?50為流動(dòng)相；柱溫為20?40°C ;檢測(cè)波長(zhǎng)為230?270nm ;流速為0.5?1.5mL.miiT1 ;理論板數(shù)按芒柄花素峰計(jì)算應(yīng)不低于5000 ； (2)對(duì)照品溶液的制備:取芒柄花素對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加甲醇制成ImL含0.1mg的溶液，備用； (3)供試品溶液的制備:采用下述方法①-⑤中的任一種: ①精密稱(chēng)取貞芪扶正制劑或其內(nèi)容物2.0g，精密加入甲醇IOOmL,稱(chēng)定重量，超聲或回流提取30?60min，待冷卻后，用甲醇補(bǔ)足重量，過(guò)濾，取續(xù)濾液即得； ②精密稱(chēng)取貞芪扶正制劑或其內(nèi)容物2.0g，用適量石油醚索氏提取30min，殘?jiān)鼡]干后，精密加入甲醇IOOmL,稱(chēng)定重量，超聲或回流提取30?60min，待冷卻后，用甲醇補(bǔ)足重量，過(guò)濾，取續(xù)濾液即得； ③精密稱(chēng)取貞芪扶正制劑或其內(nèi)容物2.0g，精密加入70%?80%的乙醇IOOmL,稱(chēng)定重量，超聲提取lh，用乙醇補(bǔ)足重量，濾過(guò)；精密量取續(xù)濾液50mL，減壓濃縮至干，殘?jiān)舆m量水使溶解，上大孔吸附樹(shù)脂柱，靜置吸附30min，依次用水、40%乙醇、70%乙醇洗脫，收集70%乙醇洗脫液，濃縮至干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至50mL的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； ④精密稱(chēng)取貞芪扶正制劑或其內(nèi)容物2.0g，精密加入甲醇IOOmL,稱(chēng)定重量，超聲或回流提取lh，用甲醇補(bǔ)足重量，濾過(guò)；精密量取續(xù)濾液50mL，濃縮至干，殘留物用0.3%氫氧化鈉溶液溶解后，加稀鹽酸調(diào)至PH5?6，然后用乙酸乙酯或水飽和的正丁醇萃取四次，合并有機(jī)層，減壓蒸干，殘?jiān)眉状级ㄈ葜?0mL，搖勻，即得； ⑤精密稱(chēng)取貞芪扶正制劑或其內(nèi)容物2.0g,精密加入甲醇IOOmL,稱(chēng)定重量，超聲或回流提取lh，用甲醇補(bǔ)足重量，濾過(guò)；精密量取續(xù)濾液50mL，濃縮至干，殘?jiān)舆m量溫水溶解，用水飽和的正丁醇提取4次，充分提取后，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，棄去氨試液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)铀甀OmL使溶解，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，以水50mL洗脫，棄去水液，再用40%乙醇洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇洗脫，收集洗脫液，蒸干,殘?jiān)眉状既芙獠⑥D(zhuǎn)移至50mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得； (4)測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ L，注入高效液相色譜儀，測(cè)定，即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的貞芪扶正制劑中芒柄花素的含量測(cè)定方法，其特征在于:所述的流動(dòng)相為乙腈:0.5%磷酸水溶液=40:60。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的貞芪扶正制劑中芒柄花素的含量測(cè)定方法，其特征在于:步驟(I)中的檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm ;流速為0.8?1.0mL/min ;柱溫為35。。。
【文檔編號(hào)】G01N30/02GK103592385SQ201310561658
【公開(kāi)日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2013年11月12日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月12日
【發(fā)明者】張觀(guān)福 申請(qǐng)人:貴州信邦制藥股份有限公司