專利名稱：啤酒中氨基酸的對乙酰氨基苯磺酰氟柱前衍生及毛細管電泳定量檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及啤酒中的氨基酸的鑒定方法，特別是通過毛細管電泳技術(shù)對啤酒中氨基酸進行分離和定量檢測的方法。
背景技術(shù)：
氨基酸是啤酒中的主要營養(yǎng)成分。啤酒中的氨基酸的種類和含量的多少是評價啤酒質(zhì)量好壞的一個重要指標。
目前用于測定啤酒中的氨基酸的方法主要有高效液相色譜法[1]、氣相色譜和質(zhì)譜聯(lián)用方法[2]，也有文獻報道用核磁共振方法測定[3]。但是這些方法有一些缺點，如高效液相色譜方法使用的流動相一般是甲醇和乙腈，它們對人體都有很大的傷害而且對環(huán)境造成污染，而后兩種方法儀器復(fù)雜而且極其昂貴。采用毛細管電泳儀進行的毛細管電泳因其具有分離效率高、分離速度快、進樣量少及操作成本低等優(yōu)點，越來越多地被用來作為食品中氨基酸的常規(guī)分析手段。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種利用對乙酰氨基苯磺酰氟衍生啤酒中氨基酸及毛細管電泳分離、定量檢測的方法，主要任務(wù)是衍生啤酒中的氨基酸，并且使衍生產(chǎn)物能在毛細管電泳上分離和測定。
本發(fā)明的是這樣實現(xiàn)的，啤酒中氨基酸的對乙酰氨基苯磺酰氟柱前衍生及毛細管電泳定量檢測方法，其特征是在已調(diào)pH為9.0-9.6的啤酒，加入對乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)的乙醇溶液和甲醇，混勻，在30℃-40℃的水浴中衍生化反應(yīng)25-35分鐘；進樣至含有SDS和NaCl的硼酸緩沖液的毛細管電泳上分離和測定氨基酸的種類和含量。
所述的啤酒中加入的對乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)的乙醇溶液和甲醇，分別為啤酒容積的1/4和1/800。
所述的硼酸緩沖液中含有的SDS(生化試劑，Alfa Aesar)為140mmol/L，含有的NaCl為20mmol/L(生化試劑，國藥集團)。
所述的毛細管電泳的毛細管電泳儀的毛細管總長為60cm，有效柱長為50cm，內(nèi)徑為50μm。
所述的毛細管電泳條件參數(shù)為毛細管內(nèi)徑為50μm，毛細管長度為50cm，電壓為30kV，溫度為25℃，壓力進樣0.5psi，5sec。
為了能夠連續(xù)檢測樣品和保證檢測結(jié)果的重現(xiàn)性，所述的進行毛細管電泳時，要對毛細管進行沖洗壓力為20psi沖洗，按照沖洗目的的需要，沖洗的程序為A、對于新的毛細管在使用前進行的沖洗CH3OH1min，H2O 0.5min，0.1mol/L HCl 2min，H2O 0.5min，0.1mol/LM NaOH 2min，H2O 0.5min，緩沖液 2min。
B、進樣前對毛細管進行的沖洗0.1mol/L NaOH2min，H2O 2min，緩沖液 2min。
C、檢測結(jié)束后對毛細管進行的沖洗0.1mol/L NaOH2min，
H2O 2min，空氣 2min。
所述的進樣前用0.22μm膜過濾。
本發(fā)明方法簡單，工藝先進，分離效率高、分離速度快、進樣量少，操作成本低。一般只需一些常用的試劑，所有試劑用量均很少，與傳統(tǒng)的使用高效液相色譜方法相比分析成本低得多。通過建立重要的標準氨基酸對照電泳譜圖，進而形成對啤酒中的氨基酸進行分離和檢測。其有益效果具體表現(xiàn)在(1)衍生反應(yīng)條件溫和，最佳衍生反應(yīng)溫度為35℃，特別適合于對啤酒等生物樣品的分析。
(2)樣品用量少按照上述毛細管分離條件，每次進樣所需樣品只有幾個nL，這樣可以大大節(jié)約資源(3)分離時間短利用上述電泳參數(shù)，一個樣品在14min內(nèi)分離完成，而一般高效液相色譜至少要30min。
(4)自動化程度高只要在電泳儀上輸入好設(shè)定的沖洗程序，進樣及分離程序，電泳儀可以自動操作，無須操作人員的存在。


圖1是20種常見的氨基酸柱前衍生化后的高效毛細管電泳圖；圖2是青島啤酒中氨基酸的高效毛細管電泳圖。
具體實施例方式
儀器與條件毛細管電泳儀，毛細管總長60cm，有效柱長50cm，內(nèi)徑50μm。20種氨基酸(生化試劑，國藥集團)。SDS(生化試劑，AlfaAesar)。
實驗步驟定量移取每種氨基酸(0.05mmol/L)40μL或0.8mL已調(diào)pH為9.3的啤酒至2mL的具塞磨口試管內(nèi)，并加入PAABS-F的乙醇溶液(0.05mmol/L)200μL和1μL甲醇，混勻，塞緊后將其放入35℃恒溫水浴中衍生化反應(yīng)30分鐘，用0.22μm膜過濾后，進樣至含有SDS和NaCl的硼酸緩沖液的毛細管電泳上分離和測定氨基酸的種類和含量。表1是用本發(fā)明的方法測定的青島啤酒中氨基酸的含量。
表1

權(quán)利要求
1.一種啤酒中氨基酸的對乙酰氨基苯磺酰氟柱前衍生及毛細管電泳定量檢測方法，其特征是在已調(diào)pH為9.0-9.6的啤酒，加入對乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)的乙醇溶液和甲醇，混勻，在30℃-40℃的水浴中衍生化反應(yīng)25-35分鐘；進樣至含有SDS和NaCl的硼酸緩沖液的毛細管電泳上分離和測定氨基酸的種類和含量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的啤酒中加入的對乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS-F)的乙醇溶液和甲醇，分別為啤酒容積的1/4和1/800。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的硼酸緩沖液中含有的SDS(生化試劑，Alfa Aesar)為140mmol/L，含有的NaCl為20mmol/L(生化試劑，國藥集團)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的毛細管電泳的毛細管電泳儀的毛細管總長為60cm，有效柱長為50cm，內(nèi)徑為50μm。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是所述的毛細管電泳條件參數(shù)為毛細管內(nèi)徑為50μm，毛細管長度為50cm，電壓為30kV，溫度為25℃，壓力進樣0.5psi，5sec。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是進行毛細管電泳時，要對毛細管進行沖洗壓力為20psi沖洗，按照沖洗目的的需要，沖洗的程序為A、對于新的毛細管在使用前進行的沖洗CH3OH 1min，H2O 0.5min，0.1mol/L HCl 2min，H2O 0.5min，0.1mol/LM NaOH 2min，H2O 0.5min，緩沖液 2min。B、進樣前對毛細管進行的沖洗0.1mol/L NaOH2min，H2O 2min，緩沖液 2min。C、檢測結(jié)束后對毛細管進行的沖洗0.1mol/L NaOH2min，H2O 2min，空氣 2min。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種啤酒中氨基酸的對乙酰氨基苯磺酰氟柱前衍生及毛細管電泳定量檢測方法，在已調(diào)pH為9.0－9.6的啤酒，加入對乙酰氨基苯磺酰氟(PAABS－F)的乙醇溶液和甲醇，混勻，在30℃－40℃的水浴中衍生反應(yīng)25－35分鐘；進樣至含有SDS和NaCl的硼酸緩沖液的毛細管電泳上分離和測定氨基酸的種類和含量。本發(fā)明方法簡單，工藝先進，分離效率高、分離速度快、進樣量少，操作成本低。一般只需一些常用的試劑，所有試劑用量均很少，與傳統(tǒng)的使用高效液相色譜方法相比分析成本低得多。通過建立重要的標準氨基酸對照電泳譜圖，進而形成對啤酒中的氨基酸進行分離和檢測。
文檔編號G01N27/447GK1825111SQ20061003907
公開日2006年8月30日 申請日期2006年3月21日 優(yōu)先權(quán)日2006年3月21日
發(fā)明者瞿其曙, 湯曉慶, 胡效亞, 劉尹, 陸曉 申請人:揚州大學(xué)