專利名稱：連續(xù)分配柱層析分離紫杉醇工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種連續(xù)分配柱層析分離紫杉醇工藝。
紫杉醇是由紅豆杉科植物中分離出的一抗癌新藥，其分離工藝多采用吸附柱層析或分配柱層析，即上一次分離完畢后，均需倒出柱中硅膠，洗滌、活化、工藝顯得煩雜，且由于須頻繁更換硅膠，成本高，在的批量生產(chǎn)中，更換清洗與活化臟硅膠工作量大，另一方面和紫杉醇結(jié)構(gòu)相似，極難分離的三尖杉寧堿，國內(nèi)外曾報道有中壓柱，四氧化鋨等工藝進(jìn)行分離，但均不理想。英國化學(xué)家JhonMR報道用溴的氯仿液處理兩者的混合物，反應(yīng)時間必須在5分鐘內(nèi)停止，然后通過化學(xué)反應(yīng)除去多余的溴，再用硅膠柱分離，可得紫杉醇純品。如反應(yīng)時間超出5分鐘，即產(chǎn)生溴的成物，操作控制難度大。
本發(fā)明提供了一種連續(xù)分配柱層析分離紫杉醇工藝，采用不倒出柱中硅膠，用溶劑清洗雜質(zhì)，溶劑恢復(fù)硅膠再生，同時采用瞬間溴穿越柱中硅膠樣品層的技術(shù)方案，具有工藝新穎、簡便、快速、節(jié)約成本、實用、利于大生產(chǎn)的優(yōu)點。
本發(fā)明的目的是通過這樣實現(xiàn)的本發(fā)明包括粗品柱洗脫液的分類、溴穿越紫杉醇及三尖杉寧堿漲合物樣品層、層析柱中硅膠的再生處理。
其具體工藝實施如下A、粗品柱洗脫液的分類粗品分離柱的洗脫液，用薄層檢識只分成兩類，薄層檢識中點樣是用含1％CMC-Na硅膠G板，氯仿一乙醇(9∶1)，顯色劑用濃度為5％硫酸乙醇液噴霧，電熱風(fēng)顯色，薄層檢識后，紫杉醇斑點為一類，反之為一類，大者經(jīng)結(jié)晶得含量達(dá)50％的半成品，小者重新上柱。
B、溴穿越紫杉醇及三尖杉寧堿漲合物樣品層取含量為50％的結(jié)晶混合物，加少量氯仿溶解，上樣于硅膠柱，待樣液滲入硅膠后，加入濃度為2％的溴氯仿液，待溴液滲入硅膠后，加脫脂棉封住，溴液滲入硅膠柱中形成紅棕色帶，在氯仿的洗脫下平行下移，3-5分鐘即穿越樣品，待溴液完全流出柱子后，加1-2％乙醇氯仿液洗脫，48-12小時即可分離完畢，得到含量為98％紫杉醇純品。
C、層析柱中硅膠的再生處理在粗品柱洗脫液的分類和溴穿越紫杉醇及三尖杉寧堿漲合物樣品層而樣品分離完畢后，用6％乙醇氯仿液清洗硅膠中的雜質(zhì)，然后用氯洗脫2-3小時，即可上樣，如此連續(xù)分配柱層析。本發(fā)明展開劑用濃度比為9∶1∶2的氯仿一乙醇-2％溴仿液。本發(fā)明按衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-492(X-427)-97號文檢驗，含量大于98％。
發(fā)明采用瞬間溴穿越柱中硅膠樣品層的技術(shù)方案，具有工藝新穎、簡便、快速、節(jié)約成本、實用、利于大生產(chǎn)的優(yōu)點。
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
A、粗品柱洗脫液的分類粗品分離柱的洗脫液，用薄層檢識只分成兩類，薄層檢識中點樣是用含1％CMC-Na硅膠G板，氯仿一乙醇(9∶1)；顯色劑用5％硫酸乙醇液噴霧，電熱風(fēng)顯色，薄層檢識后，紫杉醇斑點為一類，反之為一類。大者通過結(jié)晶得半成品，含量約達(dá)50％，小者重新上柱。
B、溴穿越紫杉醇及三尖杉寧堿漲合物樣品層。
取含量約為50％的混合物100g，加少量氯仿溶解，上樣于100×12cm硅膠柱，待樣液滲入硅膠后，加8cm厚的硅膠，再加一層濾紙，小心用直徑2cm的玻管將2％溴氯仿液200ml從濾紙的中心加入，待溴液滲入硅膠后，加脫脂棉封住，壓上石頭(此時溴液滲入硅膠柱中形成1cm厚的紅棕色帶，在氯仿的洗脫下平行下移，3-5分鐘即穿越樣品，待溴液完全流出柱子后，加1-2％乙醇氯仿液洗脫，48-12小時)即可分離完畢。
C、層析柱中硅膠的再生處理采用1.2×0.3m規(guī)格層析柱，裝填硅膠40kg，待樣品分離完畢后，不必倒出柱中硅膠，用6％乙醇氯仿液清洗硅膠中的雜質(zhì)，然后用氯洗脫3小時，即可上樣，如此連續(xù)分配柱層析，實踐證明生產(chǎn)50％的半成品一年以上時間，均不需倒出柱中硅膠更換，分離成品的硅膠柱仍可使用10次以上。
本發(fā)明展開劑用濃度比為9∶1∶2的氯仿一乙醇-2％溴仿液。
本發(fā)明按衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)WS-492(X-427)-97號文檢驗，含量大于98％。
本發(fā)明采用瞬間溴穿越柱中硅膠樣品層的技術(shù)方案，具有工藝新穎、簡便、快速、節(jié)約成本、實用、利于大生產(chǎn)的優(yōu)點。
權(quán)利要求
1.一種連續(xù)分配柱層析分離紫杉醇工藝，其特征在于包括粗品柱洗脫液的分類、溴穿越紫杉醇及三尖杉寧堿漲合物樣品層、層析柱中硅膠的再生處理。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種連續(xù)分配柱層析分離紫杉醇工藝，其特征在于其具體工藝實施如下A、粗品柱洗脫液的分類粗品分離柱的洗脫液，用薄層檢識只分成兩類，薄層檢識中點樣是用含1％CMC-Na硅膠G板，氯仿一乙醇(9∶1)，顯色劑用濃度為5％硫酸乙醇液噴霧，電熱風(fēng)顯色，薄層檢識后，紫杉醇斑點為一類，反之為一類，大者經(jīng)結(jié)晶得含量達(dá)50％的半成品，小者重新上柱。B、溴穿越紫杉醇及三尖杉寧堿漲合物樣品層取含量為50％的結(jié)晶混合物，加少量氯仿溶解，上樣于硅膠柱，待樣液滲入硅膠后，加入濃度為2％的溴氯仿液，待溴液滲入硅膠后，加脫脂棉封住，溴液滲入硅膠柱中形成紅棕色帶，在氯仿的洗脫下平行下移，3-5分鐘即穿越樣品，待溴液完全流出柱子后，加1-2％乙醇氯仿液洗脫，48-12小時即可分離完畢，得到含量為98％紫杉醇純品。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種連續(xù)分配柱層析分離紫杉醇工藝，其特征在于層析柱中硅膠的再生處理是在粗品柱洗脫液的分類和溴穿越紫杉醇及三尖杉寧堿漲合物樣品層而樣品分離完畢后，用6％乙醇氯仿液清洗硅膠中的雜質(zhì)，然后用氯洗脫2-3小時，即可上樣，如此連續(xù)分配柱層析。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種連續(xù)分配柱層析分離紫杉醇工藝，其特征在于展開劑用濃度比為9∶1∶2的氯仿一乙醇一2％溴仿液。
全文摘要
本發(fā)明采用不倒出層析柱中硅膠,而采用溶劑清洗雜質(zhì),溶劑恢復(fù)硅膠再生的方法,由1%粗品分離成含量為50%的半成品,再由半成品分離成98%以上成品,均采用連續(xù)上樣的分配柱層析。對粗品柱流出含紫杉醇混合物的洗脫液,改變?nèi)藗兞?xí)慣系統(tǒng)分類的收集方式,而只分兩類。對難分離物質(zhì)三尖杉寧堿采用2%溴氯仿液瞬間穿越柱中混合物樣品層,經(jīng)和柱層原理基本相同的薄層技術(shù)檢識,順利得到紫杉醇純品,含量大于98%。本工藝新穎、簡便、快速、節(jié)約成本,利于大規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號C07D305/00GK1340505SQ0011314
公開日2002年3月20日 申請日期2000年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2000年9月1日
發(fā)明者談增毅 申請人:四川泰港生物科技(集團(tuán))股份有限公司