Virosaine A的哌嗪基和咪唑基衍生物的組合物在抗紅細(xì)胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開一種Virosaine A的哌嗪基和咪唑基衍生物的組合物在抗紅細(xì)胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用,本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其在制備抗紅細(xì)胞低下性貧血藥物上的用途。本發(fā)明公開了一種組合物及其制備方法。藥理學(xué)實驗表明，本發(fā)明的組合物具有抗紅細(xì)胞低下性貧血的作用，具有開發(fā)抗紅細(xì)胞低下性貧血藥物的價值。
【專利說明】
Vi rosa i ne A的哌嗪基和咪唑基衍生物的組合物在抗紅細(xì)胞 低下性貧血藥物中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及有機(jī)合成和藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 基于不同的臨床特點，貧血有不同的分類。如:按貧血進(jìn)展速度分急、慢性貧血;按 骨髓紅系增生情況分增生性貧血(如溶血性貧血、缺鐵性貧血、巨幼細(xì)胞貧血等）和增生低 下性貧血(如再生障礙性貧血）。
[0003] 臨床上常從貧血發(fā)病機(jī)制和病因的分類：
[0004] 1.紅細(xì)胞生成減少性貧血
[0005] 造血細(xì)胞、骨髓造血微環(huán)境和造血原料的異常影響紅細(xì)胞生成，可形成紅細(xì)胞生 成減少性貧血。
[0006] (1)造血干祖細(xì)胞異常所致貧血
[0007] 1)再生障礙性貧血(AA)AA是一種骨髓造血功能衰竭癥，與原發(fā)和繼發(fā)的造血干祖 細(xì)胞損害有關(guān)。部分全血細(xì)胞減少癥的發(fā)病機(jī)制與B細(xì)胞產(chǎn)生抗骨髓細(xì)胞自身抗體，進(jìn)而破 壞或抑制骨髓造血細(xì)胞有關(guān)。
[0008] 2)純紅細(xì)胞再生障礙貧血(PRCA)PRCA是指骨髓紅系造血干祖細(xì)胞受到損害，進(jìn)而 引起貧血。依據(jù)病因，該病可分為先天性和后天性兩類。先天性PRCA即Diamond-Blackfan綜 合征，系遺傳所致;后天性PRCA包括原發(fā)、繼發(fā)兩類。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)部分原發(fā)性PRCA患者血清 中有自身EP0或幼紅細(xì)胞抗體。繼發(fā)性PRCA主要有藥物相關(guān)型、感染相關(guān)型(細(xì)菌和病毒，如 微小病毒出 9、肝炎病毒等）、自身免疫病相關(guān)型、淋巴細(xì)胞增殖性疾病相關(guān)型（如胸腺瘤、淋 巴瘤、漿細(xì)胞病和淋巴細(xì)胞白血病等）以及急性再生障礙危象等。
[0009] 3)先天性紅細(xì)胞生成異常性貧血(CDA)CDA是一類遺傳性紅系干祖細(xì)胞良性克隆 異常所致的、以紅系無效造血和形態(tài)異常為特征的難治性貧血。根據(jù)遺傳方式，該病可分為 常染色體隱陛遺傳型和顯性遺傳型。
[0010] 4)造血系統(tǒng)惡性克隆性疾病這些疾病造血干祖細(xì)胞發(fā)生了質(zhì)的異常，包括骨髓增 生異常綜合征及各類造血系統(tǒng)腫瘤性疾病如白血病等。前者因為病態(tài)造血，高增生，高凋 亡，出現(xiàn)原位溶血;后者腫瘤性增生、低凋亡和低分化，造血調(diào)節(jié)也受到影響，從而使正常成 熟紅細(xì)胞減少而發(fā)生貧血。
[0011] (2)造血微環(huán)境異常所致貧血
[0012] 造血微環(huán)境包括骨髓基質(zhì)，基質(zhì)細(xì)胞和細(xì)胞因子。
[0013] 1)骨髓基質(zhì)和基質(zhì)細(xì)胞受損所致貧血骨髓壞死、骨髓纖維化、骨髓硬化癥、大理石 病、各種髓外腫瘤性疾病的骨髓轉(zhuǎn)移以及各種感染或非感染性骨髓炎，均可因損傷骨髓基 質(zhì)和基質(zhì)細(xì)胞，造血微環(huán)境發(fā)生異常而影響血細(xì)胞生成。
[0014] 2)造血調(diào)節(jié)因子水平異常所致貧血干細(xì)胞因子(SCF)、白細(xì)胞介素（IL)、粒-單系 集落刺激因子(GM-CSF)、粒系集落刺激因子(G-CSF)、紅細(xì)胞生成素(EP0)、血小板生成素 (TPO)、血小板生長因子(TGF)、腫瘤壞死因子(TNF)和干擾素（IFN)等均具有正負(fù)調(diào)控造血 作用。腎功能不全、肝病和垂體或甲狀腺功能低下等時產(chǎn)生EP0不足;腫瘤性疾病或某些病 毒感染會誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生較多的造血負(fù)調(diào)控因子如TNF、IFN、炎癥因子等，均可導(dǎo)致慢性病性 貧血(ACD)。
[0015] (3)造血原料不足或利用障礙所致貧血
[0016] 造血原料是指造血細(xì)胞增殖、分化、代謝所必需的物質(zhì)，如蛋白質(zhì)、脂類、維生素 (葉酸、維生素B12等）、微量元素(鐵、銅、鋅等)等。任一種造血原料不足或利用障礙都可能 導(dǎo)致紅細(xì)胞生成減少。
[0017] 1)葉酸或維生素B12缺乏或利用障礙所致貧血由于各種生理或病理因素導(dǎo)致機(jī)體 葉酸或維生素B12絕對或相對缺乏或利用障礙可引起的巨幼細(xì)胞貧血。
[0018] 2)缺鐵和鐵利用障礙性貧血這是臨床上最常見的貧血。缺鐵和鐵利用障礙影響血 紅素合成，有稱該類貧血為血紅素合成異常性貧血。該類貧血的紅細(xì)胞形態(tài)變小，中央淡染 區(qū)擴(kuò)大，屬于小細(xì)胞低色素性貧血。
[0019] 2 ?溶血性貧血(HA)
[0020] 即紅細(xì)胞破壞過多性貧血。
[0021] 3 ?失血性貧血
[0022] 根據(jù)失血速度分急性和慢性，慢性失血性貧血往往合并缺鐵性貧血?？煞譃槌瞿?血性疾病（如特發(fā)性血小板減少性紫癜、血友病和嚴(yán)重肝病等)所致和非出凝血性疾病(如 外傷、腫瘤、結(jié)核、支氣管擴(kuò)張、消化性潰瘍、痔和婦科疾病等)所致兩類。
[0023] 從天然產(chǎn)物中尋找化合物或先導(dǎo)化合物并進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到 高效低毒的潛在藥物最有重要價值。
[0024] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個2012年發(fā)表（Bing-Xin Zhao et al .， 2012.Virosaines A and B,Two New Birdcage-Shaped Securinega Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Flueggea virosa.Organic Letters 14(2012)3096-3099)的化合物，我們對化合物I進(jìn)行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化 合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗紅細(xì)胞低下性貧血活性 進(jìn)行了評價，其具有抗紅細(xì)胞低下性貧血活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0025] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物 中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為35%和65%。
[0028] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學(xué)上可接受的鹽或藥學(xué)上可接受的載體。
[0029] 本發(fā)明的目的在于提供本發(fā)明組合物在制藥領(lǐng)域中的新的應(yīng)用。
[0030] 本發(fā)明涉及組合物作為制備治療紅細(xì)胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用。
[0031]以下通過實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實施方式】
[0032] 實施例1化合物Virosaine A的制備
[0033] 化合物Virosaine A(I)的制備方法參照Bing-Xin Zhao等人發(fā)表的文獻(xiàn)(Bing-Xin Zhao et al.,2012.Virosaines A and B,Two New Birdcage-Shaped Securinega Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Flueggea virosa.Organic Letters 14(2012)3096-3099)的方法 D
[0035] 實施例2Virosaine A的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0036] 將化合物I (235mg，1. OOmmo 1)溶于20mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0.088)，1，2-二溴乙烷(3.76(^，20.00臟〇1)和51^的50%氫氧化鈉溶液?；旌衔镌?5攝氏 度攪拌Shdh之后將反應(yīng)液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機(jī)相溶液。然后 對有機(jī)相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶 劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮=100:1. 〇，v/V)，收 集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(26lmg，78% )。
[0037] 4 MMR(500MHz，DMS0-d6)S5.91(s，lH)，4.07(s，lH)，3.81(s，2H)，3.59(s，lH)， 3.43(s，2H)，3.33(s，lH)，2.26(s，lH)，1.58(d，J=9.8Hz，3H)，1.41(s，2H).
[0038] 13C 匪R(125MHz，DMS0-d6)Sl71.81(s),106.71(s)，79.95(s)，74.33(s),69.81 (s),66.68(s),44.21(s),35.56(s),33.28(s),25.85(s),21.88(s).
[0039] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for Ci4Hi7BrN〇4:342.0341 ；found 342.0343.
[0041 ] 實施例3Virosaine A的0_(哌嗪基）乙基衍生物（III)的合成
[0042] 將化合物II(17lmg，0.5mmo 1)溶于20mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg， 5.0mmol)，碘化鉀（168mg，1 .Ommol)和無水哌嗪（3446mg，40mmol)，混合物加熱回流3h。反應(yīng) 結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽 水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗 品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100: l.〇，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮 去溶劑即得到化合物III的淡棕色固體(123.2mg，71 % )。
[0043] MMR(500MHz，DMS0-d6)S5.90(s，lH)，4.04(s，lH)，3.59(s，lH)，3.50(s，2H)， 3.40(d，J=65.9Hz，lH)，2.64(s，4H)，2.54(s，2H)，2.31(s，4H)，2.22(s，lH)，1.62(s，2H)， 1.56(s，lH)，1.43(s，2H)，0.97(s，lH).
[0044] 13C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl71.84(s)，106.72(s)，79.94(s)，74.33(s)，66.72(d， J=9.2Hz),54.45(s),54.16(s),45.25(s),44.20(s),35.56(s),25.86(s),21.87(s).
[0045] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for Ci8H26N3〇4:348.1923;found:348.1927。
L〇〇47J 實施例4 Virosaine A的0_(咪唑基）乙基衍生物（IV)的合成
[0048] 將化合物II(17lmg，0.5mmo 1)溶于25mL乙腈當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg， 5 ? Ommo 1)，碘化鉀（2 5 2mg，1 ? 5mmo 1)和咪唑（8 7 Omg，1 Ommo 1)，混合物加熱回流2h。反應(yīng)結(jié)束 后將反應(yīng)液倒入25mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機(jī)相。依次用水和飽和食鹽 水洗滌合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗 品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:0.3，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮 去溶劑即得到化合物IV的淡棕色固體(144. lmg，71 % )。
[0049] XH NMR(500MHz,DMS0-d6)87.86(s,lH),7.12(s,lH),6.71(s,lH),5.99(s,lH), 4.09(s,lH),3.89(d,J=16.4Hz,2H),3.80(s,2H),3.58(s,lH),3.35(s,lH),2.31(s,lH), 1.68(s,lH),1.58(s,2H),1.44(s,2H).
[0050] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)13C 匪R(125MHz，Common 匪R Solvents)Sl71.82(s), 139.64(s),128.67(s),119.31(s),106.70(s),79.92(s),74.31(s),67.61(s),66.66(s), 44.20(s),43.75(s),35.52(s),25.85(s),21.86(s).
[0051] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for Ci7H2〇N3〇4:330.1454;found:330.1458。
[0053] 實施例5組合物抗紅細(xì)胞低下性貧血實驗
[0054] -、組合物對失血小鼠的治療作用
[0055] ICR小鼠30只，早d各半，均分成5組(n = 10)。除生理鹽水組外，其它組每只小鼠從 眼眶靜脈放血0.5ml，24h后再取血測全部各組指標(biāo)，然后連續(xù)灌胃給藥1周且給藥之后每天 放血0.5ml，末次給藥lh后，從眼眶靜脈叢取血用F-800全血小板分析儀進(jìn)行紅細(xì)胞計數(shù) (10 12/L)。
[0056] 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的35mg化合物III的粉末和研磨之后過200 目網(wǎng)的65mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物， 使用時用水溶解這l〇〇mg的組合物即得到組合物的溶液。
[0057]表1組合物對因失血所致紅細(xì)胞減少的治療作用
[0059] 與模型組比較:*p〈0.05
[0060] 結(jié)果表明，放血小鼠經(jīng)服用組合物治療7天后，與模型組比較，其紅細(xì)胞顯著高于 模型組，接近生理鹽水組。而化合物III和化合物IV無此作用。
[0061 ]二、組合物對環(huán)磷酰胺致紅細(xì)胞減少的治療作用
[0062] 對小鼠骨髓造血功能損傷的防治作用ICR小鼠50只，罕cSI用，均分成5組(n=10)， 即生理鹽水組、造模組、組合物1.2mg/kg組、化合物III 1.2mg/kg組和化合物IV 1.2mg/kg 組，口服給藥，每天1次。第0、5、10日除生理鹽水組外，其它各組小鼠分別腹腔注射環(huán)磷酸胺 80mg/kg，然后繼續(xù)給藥3天。于末次給藥后lh，從眼眶靜脈叢取血，測紅細(xì)胞數(shù)(10 12/L)。
[0063] 表2組合物對環(huán)磷酰胺所致紅細(xì)胞的影響
[0065] 與模型組比較:林p〈0.01
[0066]結(jié)果表明，與生理鹽水組比較，環(huán)磷酸胺能使小鼠骨髓損傷，造成外周血細(xì)胞下 降，組合物組與模型組比較，可明顯對抗環(huán)磷酸胺所致小鼠紅細(xì)胞下降。而化合物III和化 合物IV無此作用。
[0067]三、組合物對苯所致紅細(xì)胞減少的治療作用
[0068] 對再生障礙性貧血小鼠的影響：昆明種小鼠50只，罕痛用，均分成5組(n = 10)，除 生理鹽水組外，其它組小鼠皮下注射苯0.5ml/kg，連續(xù)12天，造模的當(dāng)日，同時口服給藥，每 天1次，共18天，末次給藥后lh，眼眶靜脈叢取血，測紅細(xì)胞。
[0069]表3組合物對苯所致紅細(xì)胞減少的治療作用
[0072] 與模型組比較:林p〈0.01
[0073]結(jié)果表明，組合物組與模型組比較，可明顯對抗苯所致再生障礙性貧血小鼠紅細(xì) 胞的下降。而化合物III和化合物IV無此作用。
[0074] 結(jié)論:組合物能夠顯著升高紅細(xì)胞，可以用來制備治療貧血的藥物。而化合物III 和化合物IV不能夠顯著升高紅細(xì)胞，不能用來制備治療貧血的藥物。
[0075] 實施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0076] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機(jī)制成100片。
[0077] 實施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0078] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權(quán)項】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為35%和65%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質(zhì)量百分?jǐn)?shù)分別為35 %和65 %充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在治療紅細(xì)胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療紅細(xì)胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述 紅細(xì)胞低下性貧血是由失血所引起的。5. 如權(quán)利要求3所述的組合物在治療紅細(xì)胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述 紅細(xì)胞低下性貧血是由化學(xué)物質(zhì)所引起的紅細(xì)胞低下。6. 如權(quán)利要求5所述的組合物在治療紅細(xì)胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述 化學(xué)物質(zhì)為苯，所述紅細(xì)胞低下性貧血是由苯所致的再生障礙性貧血。7. 如權(quán)利要求5所述的組合物在治療紅細(xì)胞低下性貧血藥物中的應(yīng)用，其特征為:所述 化學(xué)物質(zhì)為環(huán)磷酸胺，所述紅細(xì)胞低下性貧血是由環(huán)磷酸胺所致紅細(xì)胞下降。
【文檔編號】A61K31/496GK105853430SQ201610278690
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月28日
【發(fā)明人】王卓婷
【申請人】南京賦海澳賽醫(yī)藥科技有限公司