本發(fā)明涉及藥物化學(xué)
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體地說(shuō)，是苯并吲唑類衍生物及其制備方法、應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：腫瘤，特別是惡性腫瘤，已嚴(yán)重威脅人類的健康。世界衛(wèi)生組織(WHO)的發(fā)布的《全球癌癥報(bào)告2014》顯示，非洲、亞洲和中南美洲的發(fā)展中國(guó)家癌癥發(fā)病形勢(shì)最為嚴(yán)峻。2012年全世界共新增1400萬(wàn)癌癥病例并有820萬(wàn)人死亡。其中，中國(guó)新增307萬(wàn)癌癥患者并造成約220萬(wàn)人死亡，分別占全球總量的21.9％和26.8％。該報(bào)告預(yù)測(cè)全球癌癥病例將呈現(xiàn)迅猛增長(zhǎng)態(tài)勢(shì)，由2012年的1400萬(wàn)人，逐年遞增至2025年的1900萬(wàn)人，到2035年將達(dá)到2400萬(wàn)人。盡管抗腫瘤藥物為延長(zhǎng)患者的生存時(shí)間以及改善其生命質(zhì)量做出了很大貢獻(xiàn)，但大多數(shù)藥物均為細(xì)胞毒藥物，其缺乏選擇性會(huì)傷害大量的正常細(xì)胞，并且容易出現(xiàn)耐藥性，所以，腫瘤血管靶向藥物成為了研究熱點(diǎn)。微管由微管蛋白和微管結(jié)合蛋白構(gòu)成，是構(gòu)成細(xì)胞骨架的主要成分。微管有聚合和解聚的動(dòng)力學(xué)特性，在保持細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞的分裂增殖、細(xì)胞器的組成與運(yùn)輸及信號(hào)物質(zhì)的傳導(dǎo)方面發(fā)揮重要作用。以微管為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物就是利用其動(dòng)力學(xué)特性，或促進(jìn)其解聚或抑制其聚合，從而達(dá)到直接影響細(xì)胞的有絲分裂，影響細(xì)胞的諸多正常生理功能，使細(xì)胞分裂停止于M期。研究表明微管存在3個(gè)不同的藥物結(jié)合位點(diǎn)：紫杉醇位點(diǎn)、長(zhǎng)春新堿位點(diǎn)和秋水仙堿位點(diǎn)。由于秋水仙堿位點(diǎn)空腔體積較小且相應(yīng)抑制劑的結(jié)構(gòu)較為簡(jiǎn)單，因而近年來(lái)關(guān)于其抑制劑的研究也備受關(guān)注。該位點(diǎn)最初發(fā)現(xiàn)的抑制劑秋水仙堿治療窗較窄，限制了其臨床應(yīng)用。而二苯乙烯類天然產(chǎn)物抑制劑combretastatins的發(fā)現(xiàn)引起了研究者的極大關(guān)注，代表化合物CombretastatinA-4(CA-4)，表現(xiàn)出很高的微管聚合抑制作用和抗腫瘤活性，還表現(xiàn)出腫瘤血管阻斷作用。研究者對(duì)CA-4進(jìn)行了大量的結(jié)構(gòu)改造，目前有多個(gè)類似物進(jìn)入臨床研究，顯示出良好的發(fā)展前景。其中CA-4P在2013年7月歐洲藥品管理局授予其治療卵巢癌的孤兒藥地位，目前CA-4P在未分化甲狀腺癌、神經(jīng)內(nèi)分泌瘤和卵巢癌上開展了臨床研究。中國(guó)專利文獻(xiàn)CN201510064131.0公開了一種取代苯亞甲基四氫萘酮類衍 生物，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：其中，X表示CHOH或C＝O，R表示H、OH、F、Cl、CN、CONH2、NO2、CH3、OCH3、NH2中的任一種。但是關(guān)于本發(fā)明的苯并吲唑類衍生物及其制備方法、應(yīng)用目前還未見報(bào)道。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種苯并吲唑類衍生物。本發(fā)明的再一的目的是，提供一種苯并吲唑類衍生物的應(yīng)用。本發(fā)明的另一的目的是，提供一種苯并吲唑類衍生物的制備方法。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：式(I)所示的苯并吲唑類衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽，其中，R1選自氫、烷氧基、鹵素、硝基、氨基、氧取代物，取代基相同或不同，為單取代或多取代；R2選自氫、烷氧基，為單取代或多取代；R3選自氫、直鏈烷基、取代烷基、芳香基、羧酸、羧酸酯。優(yōu)選地，R1選自氫、甲氧基、鹵素、硝基、氨基、羥基。優(yōu)選地，R2為甲氧基。優(yōu)選地，R3選自氫、直鏈烷基、取代烷基、芳香基、羧酸、羧酸酯。優(yōu)選地，R1、R2、R3表示的基團(tuán)如下所示：序號(hào)R1R2R3SC-13,4,5-三甲氧基7-甲氧基-HSC-23,4,5-三甲氧基7-甲氧基-CH3SC-33,4,5-三甲氧基7-甲氧基-CH2CH2OHSC-43,4,5-三甲氧基7-甲氧基-PhSC-53,4,5-三甲氧基7-甲氧基-CH2COOC2H5TCa-14-甲氧基6,7,8-三甲氧基-HTCa-24-甲氧基6,7,8-三甲氧基-CH3TCb-13-氟-4-甲氧基6,7,8-三甲氧基-HTCb-33-氟-4-甲氧基6,7,8-三甲氧基-CH2CH2OHTCb-43-氟-4-甲氧基6,7,8-三甲氧基-PhTCc-13-硝基-4-甲氧基6,7,8-三甲氧基-PhTCd-13-氨基-4-甲氧基6,7,8-三甲氧基-Ph優(yōu)選地，所述的苯并吲唑類衍生物為7-甲氧基-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑。為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：所述的苯并吲唑類衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽在制備微管蛋白聚合抑制劑中的應(yīng)用。所述的苯并吲唑類衍生物及其藥學(xué)上可接受的鹽在制備治療腫瘤疾病藥物中的應(yīng)用。所述的腫瘤疾病為白血病、非小細(xì)胞肺癌、結(jié)腸癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、黑色素瘤、卵巢癌、腎癌、前列腺癌或乳腺癌。為實(shí)現(xiàn)上述第三個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：所述的苯并吲唑類衍生物的制備方法的合成路線為：其中，R1選自氫、直鏈烷基、取代烷基、芳香基、羧酸、羧酸酯。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：1、本發(fā)明中的苯并吲唑類結(jié)構(gòu)徹底解決了之前專利中化合物具有雙鍵結(jié)構(gòu)，存在順反異構(gòu)化而導(dǎo)致的化合物不穩(wěn)定的問(wèn)題。2、本發(fā)明中的化合物具有更廣的抗瘤譜，其中SC1在美國(guó)國(guó)家癌癥研究所測(cè)試的60個(gè)細(xì)胞株篩選中都有非常高的活性，平均IC50值達(dá)到10nM級(jí)別。3、本發(fā)明中化合物TCd-1在初步的篩選中表現(xiàn)出比SC1更高的活性，達(dá)到pM級(jí)別。其取代基R2為氨基時(shí)，可以做成鹽酸鹽等，具有更好的水溶性和口服生物利用度。并可以進(jìn)一步做成前藥形式，具備更好的成藥性。具備進(jìn)一步開發(fā)的價(jià)值。附圖說(shuō)明附圖1是化合物SC1在美國(guó)國(guó)家癌癥研究所測(cè)試的60個(gè)細(xì)胞株篩選結(jié)果。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的具體實(shí)施方式作詳細(xì)說(shuō)明。本發(fā)明的化合物的合成通式如下：本發(fā)明的化合物的具體合成路線如下：試劑和條件：(a)LDA，3位取代的對(duì)甲氧基苯甲酰氯,無(wú)水四氫呋喃,-15℃；(b)R1-NH-NH2,乙醇，室溫；(c)NaOH,甲醇，室溫；(d)鐵粉，醋酸,70％乙醇,回流。相關(guān)化合物的合成方法如下：原料6-甲氧基-3,4-二氫萘-2(1H)-酮(1)的合成參見文獻(xiàn)JMedChem2012,55,5720-5733.。原料5,6,7-三甲氧基-3,4-二氫萘-2-酮(2)的合成參見專利《取代苯亞甲基四氫萘酮類衍生物及制備方法、應(yīng)用》(申請(qǐng)?zhí)枺?01510064131.0)。實(shí)施例1：6-甲氧基-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-3,4-二氫萘-2(1H)-酮(S-dk)將原料6-甲氧基-3,4-二氫萘-2(1H)-酮(1)(5.68mmol，1.0equiv)溶入20mL無(wú)水THF中，氮?dú)獗Ｗo(hù)，加冰鹽浴，緩慢滴加LDA(6.24mmol，1.1equiv)，攪拌4小時(shí)后加入3,4,5-三甲氧基苯甲酰氯的THF溶液(6.24mmol，1.1equiv)，緩慢升至室溫?cái)嚢?，TLC監(jiān)測(cè)。反應(yīng)完畢后冰浴下加入飽和氯化銨水溶液淬滅。反應(yīng)液用乙酸乙酯萃取(2×100mL)，合并有機(jī)相，用飽和食鹽水洗滌，無(wú)水硫酸鈉干燥，減壓濃縮后用硅膠柱層析純化(乙酸乙酯/石油醚洗脫)得產(chǎn)物為黃色固體，產(chǎn)率61％。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ6.77(s,2H),6.72(d,J＝2.3Hz,1H),6.66(d,J＝8.6Hz,1H),6.47(dd,J＝8.6,2.5Hz,1H),3.92(d,J＝6.2Hz,1H),3.88(s,3H),3.75(s,3H),3.69(s,6H),2.93(t,J＝6.8Hz,2H),2.68–2.52(m,2H).HRMS(ES+)m/zfound371.1486(M+H+)；C21H23O6(M+H+)requires371.1489.實(shí)施例2：7-甲氧基-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(SC1)在100mL燒瓶中依次加入乙醇、中間體S-dk和等當(dāng)量的水合肼，攪拌過(guò)夜，濃縮后分離純化得SC1為白色固體。熔點(diǎn)172–173℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.35(d,J＝8.5Hz,1H),6.84(s,2H),6.82(d,J＝2.5Hz,1H),6.64(dd,J＝8.5,2.7Hz,1H),3.92(s,3H),3.83(s,6H),3.79(s,3H),2.99(t,J＝7.2Hz,2H),2.83(t,J＝7.2Hz,2H)，13CNMR(150MHz,CDCl3)δ157.92,153.57,148.74,140.29,138.47,136.92,126.69,124.28,123.15,114.38,113.61,111.66,105.49,61.01,56.28,55.28,30.46,21.81.HRMS(ES+)m/zfound367.1653(M+H+)；C21H23N2O4(M+H+)requires367.1652.實(shí)施例3：7-甲氧基-2-甲基-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(SC2)參照實(shí)施例2，將中間體S-dk和甲基肼反應(yīng)得SC2為白色固體。熔點(diǎn)157 –158℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.33(d,J＝8.5Hz,1H),6.89(s,2H),6.81(d,J＝2.4Hz,1H),6.55(dd,J＝8.5,2.6Hz,1H),3.95(s,3H),3.90(s,3H),3.84(s,6H),3.78(s,3H),3.03(t,J＝7.5Hz,2H),2.89(t,J＝7.3Hz,2H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ157.84,153.78,138.74,136.76,125.73,123.66,114.42,111.74,106.95,61.05,56.37,55.26,36.66,30.34,21.92.HRMS(ES+)m/zfound381.1821(M+H+)；C22H25N2O4(M+H+)requires381.1809.實(shí)施例4：7-甲氧基-2-羥基乙基-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(SC3)參照實(shí)施例2，將中間體S-dk和羥基乙基肼反應(yīng)得SC3為白色固體。熔點(diǎn)143–144℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ6.86(d,J＝8.5Hz,1H),6.78(d,J＝2.6Hz,1H),6.63(s,2H),6.55(dd,J＝8.5,2.7Hz,1H),4.07–4.04(m,2H),3.97(d,J＝5.1Hz,2H),3.95(s,3H),3.84(s,6H),3.77(s,3H),3.01(t,J＝7.2Hz,2H),2.89(t,J＝7.2Hz,2H).13CNMR(150MHz,CDCl3)δ157.72,153.73,149.38,138.61,138.08,136.80,125.94,123.71,123.16,114.81,114.39,111.69,107.20,62.17,61.03,56.34,55.24,50.31,30.46,22.19.HRMS(ES+)m/zfound411.1910(M+H+)；C23H27N2O5(M+H+)requires411.1914.實(shí)施例5：7-甲氧基-2-苯基-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(SC4)參照實(shí)施例2，將中間體S-dk和苯基肼反應(yīng)得SC4為灰色固體。熔點(diǎn)142–143℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.30–7.20(m,5H),7.08(d,J＝8.5Hz,1H),6.83(d,J＝2.6Hz,1H),6.60(dd,J＝8.6,2.7Hz,1H),6.52(s,2H),3.92(s,3H),3.79(s,3H),3.66(s,6H),3.06(t,J＝7.1Hz,2H),3.00–2.94(m,2H).HRMS(ES+)m/zfound443.1969(M+H+)；C27H27N2O4(M+H+)requires443.1965.實(shí)施例6：2-(7-甲氧基-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑-2-)乙酸乙酯(SC5)參照實(shí)施例2，將中間體S-dk和2-肼基乙酸乙酯反應(yīng)得SC4為灰色固體。熔點(diǎn)118–119℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ6.90(d,J＝8.5Hz,1H),6.79(d,J＝2.6Hz,1H),6.66(s,2H),6.56(dd,J＝8.5,2.7Hz,1H),4.70(s,2H),4.20(q,J＝7.1Hz,2H),3.95(s,3H),3.81(s,6H),3.77(s,3H),3.02(t,J＝7.2Hz,2H),2.91(t,J＝7.2Hz,2H),1.26(t,J＝7.1Hz,3H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ168.71,157.77,153.67,150.06,138.62,138.38,136.94,125.80,123.78,123.19,115.21, 114.33,111.72,106.98,102.71,61.68,61.01,56.25,55.24,50.62,42.65,30.44,25.62,23.07,22.21,14.16,14.02.HRMS(ES+)m/zfound453.2023(M+H+)；C25H29N2O6(M+H+)requires453.2020.實(shí)施例7：2-(7-甲氧基-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑-2-)乙酸(SC6)將2-(7-甲氧基-1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑-2-)乙酸乙酯(SC5)溶于乙醇中，加入5倍當(dāng)量的NaOH水溶液，攪拌過(guò)夜，稀鹽酸中和至pH<7后用二氯甲烷萃取，有機(jī)層濃縮后薄層色譜制備得SC6為白色固體。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ6.90(d,J＝8.5Hz,1H),6.78(d,J＝2.6Hz,1H),6.63(s,2H),6.57(dd,J＝8.5,2.7Hz,1H),4.74(s,2H),3.95(s,3H),3.82(s,6H),3.77(s,3H),3.12(m,2H),2.96(m,2H).HRMS(ES+)m/zfound425.1699(M+H+)；C23H25N2O6(M+H+)requires425.1707.實(shí)施例8：5,6,7-三甲氧基-1-(4-甲氧基苯基)-3,4-二氫萘-2(1H)-酮(T-dk-a)參照實(shí)施例1，以原料5,6,7-三甲氧基-3,4-二氫萘-2-酮(2)和4-甲氧基苯甲酰氯反應(yīng)制備得T-dk-a為黃色固體。熔點(diǎn)86–87℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.51(d,J＝8.8Hz,2H),6.85(d,J＝8.8Hz,2H),6.06(s,1H),3.88(s,3H),3.88(s,1H),3.85(s,3H),3.83(s,3H),3.29(s,3H),2.92(t,J＝6.9Hz,2H),2.61–2.53(m,2H).HRMS(ES+)m/zfound371.1481(M+H+)；C21H23O6(M+H+)requires371.1489.實(shí)施例9：5,6,7-三甲氧基-1-(3-氟-4-甲氧基苯基)-3,4-二氫萘-2(1H)-酮(T-dk-b)參照實(shí)施例1，以原料5,6,7-三甲氧基-3,4-二氫萘-2-酮(2)和3-氟-4-甲氧基苯甲酰氯反應(yīng)制備得T-dk-b為黃色固體。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.32(dd,J＝11.7,1.9Hz,1H),7.30(d,J＝9.2Hz,1H),6.89(t,J＝8.4Hz,1H),6.05(s,1H),3.91(s,3H),3.89(s,3H),3.85(s,3H),3.33(s,3H),2.93(t,J＝6.9Hz,2H),2.61–2.52(m,2H).13CNMR(150MHz,CDCl3)δ197.21,180.59,152.02,150.51,150.38,149.72,149.65,139.64,128.69,128.66,127.86,125.91,120.28,116.75,116.62,111.92,108.89,107.78,60.72,60.52,55.86,55.09,33.81,19.47.實(shí)施例10：5,6,7-三甲氧基-1-(3-硝基-4-甲氧基苯基)-3,4-二氫萘-2(1H)-酮(T-dk-c)參照實(shí)施例1，以原料5,6,7-三甲氧基-3,4-二氫萘-2-酮(2)和3-硝基-4- 甲氧基苯甲酰氯反應(yīng)制備得T-dk-c為黃色固體。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ8.10(d,J＝2.2Hz,1H),7.71(dd,J＝8.8,2.2Hz,1H),7.02(d,J＝8.8Hz,1H),6.04(s,1H),3.99(s,3H),3.90(s,3H),3.86(s,3H),3.36(s,3H),3.00–2.89(m,2H),2.64–2.54(m,2H).實(shí)施例11：6,7,8-三甲氧基-1-(4-甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(TCa-1)參照實(shí)施例2，將中間體T-dk-a和水合肼反應(yīng)得TCa-1為棕色固體。熔點(diǎn)105–106℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.55(d,J＝8.5Hz,2H),6.99(d,J＝8.5Hz,2H),6.70(s,1H),3.88(s,3H),3.86(s,6H),3.54(s,3H),3.00(t,J＝7.2Hz,2H),2.82(t,J＝7.2Hz,2H)；13CNMR(150MHz,CDCl3)δ160.13,151.63,151.43,140.45,129.88,126.55,123.49,121.13,114.20,113.39,103.08,60.98,60.95,55.75,55.41,22.10,21.73.HRMS(ES+)m/zfound367.1652(M+H+)；C21H23O6(M+H+)requires367.1662.實(shí)施例12：6,7,8-三甲氧基-1-(4-甲氧基苯基)-2-甲基-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(TCa-2)參照實(shí)施例2，將中間體T-dk-a和甲基肼反應(yīng)得TCa-2為棕色固體。熔點(diǎn)126–127℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.37(d,J＝8.5Hz,2H),7.05(d,J＝8.5Hz,2H),6.30(s,1H),3.88(s,3H),3.86(s,4H),3.83(s,3H),3.70(s,3H),3.42(s,3H),3.00(t,J＝7.4Hz,2H),2.85(t,J＝7.4Hz,2H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ160.18,151.51,151.39,149.28,140.16,138.11,131.43,130.14,126.65,123.03,120.90,114.81,114.37,113.71,102.43,60.94,60.88,55.43,36.47,29.70,22.14,21.74.HRMS(ES+)m/zfound381.1805(M+H+)；C21H23O6(M+H+)requires381.1809.實(shí)施例13：6,7,8-三甲氧基-1-(3-氟-4-甲氧基苯基)-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(TCb-1)參照實(shí)施例2，將中間體T-dk-b和水合肼反應(yīng)得TCb-1為紫色固體。熔點(diǎn)147–148℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.38(dd,J＝11.8,2.0Hz,1H),7.35–7.30(m,1H),6.97(t,J＝8.5Hz,1H),6.70(s,1H),3.93(s,3H),3.88(s,3H),3.87(s,3H),3.57(s,3H),3.01–2.92(m,2H),2.79–2.70(m,2H)；13CNMR(150MHz,CDCl3)δ152.93,151.67,151.44,151.30,147.98,147.91,140.48,126.34,124.70,120.92,116.47,116.34,113.56,113.28,103.11,61.00,60.98,56.28,55.77, 21.98,21.28.HRMS(ES+)m/zfound385.1564(M+H+)；C21H23O6(M+H+)requires385.1558.實(shí)施例14：6,7,8-三甲氧基-1-(3-氟-4-甲氧基苯基)-2-羥基乙基-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(TCb-3)參照實(shí)施例2，將中間體T-dk-b和羥基乙基肼反應(yīng)得TCb-3為棕色固體。熔點(diǎn)150–151℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.22(dd,J＝11.4,2.0Hz,1H),7.20–7.16(m,1H),7.11(t,J＝8.4Hz,1H),6.25(s,1H),4.06–4.01(m,2H),3.97(s,3H),3.95(dd,J＝9.1,4.5Hz,2H),3.86(s,3H),3.84(s,3H),3.45(s,3H),2.99(t,J＝7.4Hz,2H),2.84(t,J＝7.4Hz,2H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ153.17,151.69,151.49,149.42,148.73,148.66,140.75,137.58,126.76,125.39,122.39,122.34,121.07,118.20,118.08,115.35,113.79,102.68,61.77,60.95,60.90,56.42,55.50,50.35,21.77,21.45.HRMS(ES+)m/zfound429.1830(M+H+)；C21H23O6(M+H+)requires429.1820.實(shí)施例15：6,7,8-三甲氧基-1-(3-氟-4-甲氧基苯基)-2-苯基-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(TCb-4)參照實(shí)施例2，將中間體T-dk-b和苯肼反應(yīng)得TCb-4為棕色固體。熔點(diǎn)159–160℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ7.32–7.28(m,2H),7.26–7.22(m,3H),7.13(dd,J＝11.6,2.0Hz,1H),7.09–7.05(m,1H),6.98(t,J＝8.5Hz,1H),6.40(s,1H),3.92(s,3H),3.89(s,3H),3.87(s,3H),3.48(s,3H),3.05(t,J＝7.3Hz,2H),2.93(t,J＝7.2Hz,2H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ153.04,151.72,151.51,151.39,151.05,148.34,148.27,140.96,138.93,136.30,128.97,127.48,126.88,125.36,125.10,122.98,121.68,120.65,118.21,118.09,116.67,115.32,113.48,103.06,60.98,56.29,55.57,21.84,21.63.HRMS(ES+)m/zfound461.1870(M+H+)；C21H23O6(M+H+)requires461.1871.實(shí)施例16：6,7,8-三甲氧基-1-(3-硝基-4-甲氧基苯基)-2-苯基-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(TCc-1)參照實(shí)施例2，將中間體T-dk-c和水合肼反應(yīng)得TCc-1為棕色固體。熔點(diǎn)108–109℃，1HNMR(600MHz,CDCl3)δ8.16(d,J＝2.2Hz,1H),7.84(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),7.16(d,J＝8.7Hz,1H),6.65(s,1H),4.02(s,3H),3.89(s,3H),3.88(s,3H),3.60(s,3H),3.01(t,J＝7.4Hz,2H),2.87–2.80(m,2H).13CNMR(151MHz,CDCl3)δ152.68,151.90,151.59,140.81,139.68,134.04,125.87, 125.43,124.97,120.86,114.05,113.62,102.98,61.00,56.70,55.89,21.89,21.04.實(shí)施例17：6,7,8-三甲氧基-1-(3-氨基-4-甲氧基苯基)-2-苯基-4,5-二氫-2H-苯并[e]吲唑(TCd-1)在10mL75％乙醇中加入醋酸，調(diào)至PH＝3～4，攪拌下加入鐵粉(90mg,1.6mmol)，加熱至90℃攪拌一小時(shí)。再加入化合物TCc-1(66mg,0.16mmol)，繼續(xù)攪拌30分鐘，反應(yīng)完畢。反應(yīng)液用無(wú)水碳酸鉀中和至PH≈8，硅藻土過(guò)濾，用乙酸乙酯洗滌。濾液用乙酸乙酯萃取，食鹽水洗滌，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鈉干燥，濃縮并硅膠柱層析得黃色粉末TCd-1(41mg,67％yield)。1HNMR(600MHz,CDCl3)δ6.95(t,J＝5.4Hz,2H),6.84(s,1H),6.83(d,J＝8.1Hz,1H),4.19(s,2H),3.89(s,3H),3.87(s,3H),3.86(s,3H),3.58(s,3H),3.48(s,1H),3.02–2.92(m,2H),2.83–2.73(m,2H).13CNMR(150MHz,CDCl3)δ151.56,151.33,150.26,147.71,140.29,140.10,136.49,126.72,123.68,121.09,118.61,114.63,113.04,110.30,103.27,60.99,60.95,55.79,55.61,22.10,21.72.實(shí)施例18：目標(biāo)物SC1-SC6對(duì)K562、HCT116細(xì)胞株的細(xì)胞毒作用.一、實(shí)驗(yàn)材料和方法：1、實(shí)驗(yàn)材料(一)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株本實(shí)驗(yàn)采用了人白血病細(xì)胞、人結(jié)腸癌細(xì)胞的細(xì)胞株作為篩選對(duì)象，該癌細(xì)胞株均由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院藥理研究室提供。1)K562(人白血病細(xì)胞)2)HT116(人腸癌細(xì)胞)(二)培養(yǎng)液為DMEM+10％FBS+雙抗，所用全自動(dòng)酶標(biāo)儀型號(hào)為：VarioskanFlash，生產(chǎn)廠商：Thermoscientific。進(jìn)口96孔培養(yǎng)板等。2、試驗(yàn)方法體外抗腫瘤活性采用MTT法。樣品配制：用DMSO(Merck)溶解成10mM后，加入PBS(-)配成1000μM的溶液或均勻的混懸液，然后用含DMSO的PBS(-)稀釋。實(shí)驗(yàn)步驟如下：96孔板每孔加入濃度為4-5×104個(gè)/ml的細(xì)胞懸液100μl，置37℃，5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)。二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：表1化合物SC1—SC6的腫瘤細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)注：該化合物為專利CN103130632A中的化合物1實(shí)施例19：目標(biāo)物對(duì)Colo205細(xì)胞株的細(xì)胞毒作用.一、實(shí)驗(yàn)材料和方法：1、實(shí)驗(yàn)材料(一)實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株本實(shí)驗(yàn)采用了人結(jié)腸癌細(xì)胞Colo205作為篩選對(duì)象，該癌細(xì)胞株均由上海醫(yī)藥工業(yè)研究院藥理研究室提供。(二)培養(yǎng)液為DMEM+10％FBS+雙抗，所用全自動(dòng)酶標(biāo)儀型號(hào)為：VarioskanFlash，生產(chǎn)廠商：Thermoscientific。進(jìn)口96孔培養(yǎng)板等。2、試驗(yàn)方法體外抗腫瘤活性采用MTT法。MTT法。96孔板每孔加入濃度為5×104個(gè)/ml的細(xì)胞懸液100μl，置37℃，5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)。24h后，加入樣品液，10μl/孔，設(shè)三復(fù)孔，37℃，5％CO2作用72h。每孔加入5mg/ml的MTT溶液20μl，作用4h后加入溶解液，100μl/孔，置培養(yǎng)箱內(nèi)，溶解后用全波長(zhǎng)多功能酶標(biāo)儀測(cè)570nmOD值。二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果：表2目標(biāo)化合物對(duì)人結(jié)腸癌細(xì)胞Colo205的體外增殖抑制作用注：該化合物為專利CN103130632A中的化合物1實(shí)驗(yàn)例20：化合物SC1在美國(guó)國(guó)家癌癥研究所測(cè)試的60個(gè)細(xì)胞株篩選測(cè)試結(jié)果表明化合物SC1對(duì)白血病、非小細(xì)胞肺癌、結(jié)腸癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤、黑色素瘤、卵巢癌、腎癌、前列腺癌以及乳腺癌都有非常好的效果，對(duì)所測(cè)的60個(gè)細(xì)胞株平均IC50值達(dá)到12.88nM。實(shí)驗(yàn)例21：抑制微管蛋白聚合實(shí)驗(yàn)一、實(shí)驗(yàn)材料和方法：1、實(shí)驗(yàn)材料(一)微管蛋白本實(shí)驗(yàn)采用了牛微管蛋白作為篩選對(duì)象，生產(chǎn)廠家：Cytoskeleton。(二)緩沖液GeneralTubulinBuffer:80mMPIPESpH＝6.9,2mMMgCl2,0.5mMEGTA,生產(chǎn)廠家:Cytoskeleton。TubulinGlycerolBuffer:60％glycerol,生產(chǎn)廠家:Cytoskeleton。GTP：100mM,生產(chǎn)廠家:Cytoskeleton所用全自動(dòng)酶標(biāo)儀型號(hào)為：Synergy4，生產(chǎn)廠商：BioTek。進(jìn)口96孔半面積培養(yǎng)板等。2、試驗(yàn)方法采用文獻(xiàn)方法(CellBiochemistryandBiophysics,2003,38:1-21)，及微管蛋白試劑盒方法(CytoDYNAMIXScreen03)。樣品配制：用DMSO(Merck)溶解后，加入緩沖液配成相應(yīng)濃度的溶液或均勻的混懸液，然后用緩沖液稀釋。實(shí)驗(yàn)步驟如下：在96孔培養(yǎng)板中每孔加入相應(yīng)濃度為待測(cè)化合物10μl，置37℃酶標(biāo)儀中，2min后，加入3mg/ml的微管蛋白液，100μl/孔，設(shè)雙復(fù)孔，37℃，作用1h，每分鐘測(cè)340nmOD值。二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果表3部分化合物抑制微管蛋白聚合的作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，上述化合物均具有優(yōu)異的抑制微管蛋白聚合的作用，其中化合物SC1、SC2、Tca-1、Tcb-1和Tcd-1的活性與陽(yáng)性對(duì)照藥CA-4相當(dāng)，SC1、Tcd-1的微管蛋白抑制聚合活性甚至好于CA-4，值得作為抗腫瘤藥物進(jìn)行深入研究。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員，在不脫離本發(fā)明方法的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和補(bǔ)充，這些改進(jìn)和補(bǔ)充也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3