Virosaine A的哌嗪基和咪唑基衍生物的組合物在抗骨質(zhì)疏松藥物中的應用
【專利摘要】本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領域。本發(fā)明公開并提供了一種由Virosaine A的哌嗪基衍生物和咪唑基衍生物按照質(zhì)量比為30：70組成的組合物以及將上述化合物按照30：70的質(zhì)量比進行混合從而制備本發(fā)明組合物的方法。藥理學實驗表明，本發(fā)明提供的這種組合物能夠抑制去卵巢引起的骨轉(zhuǎn)化率增強和骨質(zhì)破壞，同時可以提高血鈣濃度，有利于骨的沉積。對于由于雌激素缺乏導致的骨質(zhì)疏松具有防治作用，并且無雌激素樣副作用。因此本發(fā)明還提供了Virosaine A的哌嗪基和咪唑基衍生物按照質(zhì)量比為30：70組成的組合物在制備抗骨質(zhì)疏松藥物中的用途。
【專利說明】
Vi rosa i ne A的哌嗪基和咪唑基衍生物的組合物在抗骨質(zhì)疏 松藥物中的應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明涉及有機合成和藥物化學領域，具體涉及組合物、制備方法及其用途。
【背景技術】
[0002] 骨質(zhì)疏松是一種全身性的、代謝性的骨疾病，其特征是骨量減少和丟失，骨脆性和 骨折危險性增加。隨著人口的老齡化，骨質(zhì)疏松的發(fā)病率也隨著迅速增加，已經(jīng)成為危害人 類健康的重要疾病，并給全球帶來了巨大的社會和經(jīng)濟負擔。盡管國內(nèi)外相關專家學者對 此病的防治十分重視，但該病尚缺乏有效的治療藥物。
[0003] 目前臨床上常用的防治骨質(zhì)疏松的藥物包括雌激素替代藥物，雙膦酸鹽類，選擇 性雌激素受體調(diào)節(jié)劑，維生素D，甲狀旁腺素和人重組甲狀旁腺激素（1-34)等。雙磷酸鹽類 藥物雖然效果不錯，但可導致頌骨壞死、肌肉骨骼痛和腎功能衰竭等嚴重不良反應;激素替 代療法雖然是防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的重要方法，但長期使用有導致乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌的 潛在危險且發(fā)生血栓的風險也增加;而選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑可以使血栓性事件明顯增 加。其他藥物或價格昂貴，或遠期療效不確切，均不夠理想。由于骨質(zhì)疏松是一種慢性病，需 要長期服藥，因此價格便宜，毒副作用小的中草藥已成為研究治療骨質(zhì)疏松的熱點之一。
[0004] 骨質(zhì)疏松的治療目前已有的藥物存在毒性大、安全性低的問題，從天然產(chǎn)物中尋 找化合物或先導化合物并進行結(jié)構(gòu)修飾獲得其衍生物，從而得到高效低毒的潛在藥物有重 要價值。
[0005] 本發(fā)明涉及的化合物I是一個2012年發(fā)表（Bing-Xin Zhao et al .， 2012.Virosaines A and B,Two New Birdcage-Shaped Securinega Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Flueggea virosa.Organic Letters 14(2012)3096-3099)的化合物，我們對化合物I進行了結(jié)構(gòu)修飾，獲得了兩個新的衍生物即化合物III和化 合物IV，并用化合物III和化合物IV制備了組合物并對該組合物抗骨質(zhì)疏松活性進行了評 價，其具有抗骨質(zhì)疏松活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明公開了一個新的組合物，該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合 物中化合物III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為30%和70%。
[0008] 本發(fā)明公開的組合物可以制成藥學上可接受的鹽或藥學上可接受的載體。
[0009] 本發(fā)明提供組合物的抗骨質(zhì)疏松新用途。
[0010] 本發(fā)明通過體內(nèi)實驗發(fā)現(xiàn)組合物在制備抗骨質(zhì)疏松藥物中的應用。
[0011] 進一步，所述的骨質(zhì)疏松是由于雌激素缺乏導致。
[0012] 本發(fā)明通過體內(nèi)試驗發(fā)現(xiàn)組合物有顯著的預防骨質(zhì)疏松的作用。組合物能夠抑制 去卵巢引起的骨轉(zhuǎn)化率增強和骨質(zhì)破壞，同時可以提高血鈣濃度，有利于骨的沉積。是一種 理想的防治骨質(zhì)疏松的藥物。
[0013] 以下通過實施例對本發(fā)明作進一步詳細的說明，但本發(fā)明的保護范圍不受具體實 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加以限定。
【具體實施方式】
[0014] 實施例1化合物Virosaine A的制備
[0015] 化合物Virosaine A(I)的制備方法參照Bing-Xin Zhao等人發(fā)表的文獻(Bing-Xin Zhao et al.,2012.Virosaines A and B,Two New Birdcage-Shaped Securinega Alkaloids with an Unprecedented Skeleton from Flueggea virosa.Organic Letters 14(2012)3096-3099)的方法。
[0017] 實施例2 Virosaine A的0-溴乙基衍生物（II)的合成
[0018] 將化合物I (235mg，1. OOmmo 1)溶于20mL苯，向溶液中加入四丁基溴化銨（TBAB) (0.088)，1，2-二溴乙烷(3.76(^，20.00臟〇1)和51^的50%氫氧化鈉溶液。混合物在35攝氏 度攪拌Shdh之后將反應液倒入冰水中，立即用二氯甲烷萃取兩次，合并有機相溶液。然后 對有機相溶液依次用水和飽和食鹽水洗滌3次，再用無水硫酸鈉干燥，最后減壓濃縮去除溶 劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮=100:1. 〇，v/V)，收 集棕色集中洗脫帶并揮去溶劑即得到化合物II的棕色粉末(26lmg，78% )。
[0019] 4 MMR(500MHz，DMS0-d6)S5.91(s，lH)，4.07(s，lH)，3.81(s，2H)，3.59(s，lH)， 3.43(s，2H)，3.33(s，lH)，2.26(s，lH)，1.58(d，J=9.8Hz，3H)，1.41(s，2H).
[0020] 13C 匪R(125MHz，DMS0-d6)Sl71.81(s),106.71(s)，79.95(s)，74.33(s),69.81 (s),66.68(s),44.21(s),35.56(s),33.28(s),25.85(s),21.88(s).
[0021] HRMS(ESI)m/z[M+H]+calcd for Ci4Hi7BrN〇4:342.0341 ；found 342.0343.
[0023] 實施例3 Virosaine A的0_(哌嗪基）乙基衍生物（III)的合成 [0024] 將化合物II(17lmg，0.5mmo 1)溶于20mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg， 5.0mmol)，碘化鉀（168mg，1 .Ommol)和無水哌嗪（3446mg，40mmol)，混合物加熱回流3h。反應 結(jié)束后將反應液倒入冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽 水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗 品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:1.0，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮 去溶劑即得到化合物III的淡棕色固體(123.2mg，71 %)。
[0025] MMR(500MHz，DMS0-d6)S5.90(s，lH)，4.04(s，lH)，3.59(s，lH)，3.50(s，2H)， 3.40(d，J=65.9Hz，lH)，2.64(s，4H)，2.54(s，2H)，2.31(s，4H)，2.22(s，lH)，1.62(s，2H)， 1.56(s，lH)，1.43(s，2H)，0.97(s，lH).
[0026] 13C NMR(125MHz，DMS0-d6)Sl71.84(s)，106.72(s)，79.94(s)，74.33(s)，66.72(d， J=9.2Hz),54.45(s),54.16(s),45.25(s),44.20(s),35.56(s),25.86(s),21.87(s).
[0027] HRMS(ESI):m/z[M+H].calcd for Ci8H26N3〇4:348.1923;found:348.1927。
[0030] 實施例4 Virosaine A的0-(咪唑基）乙基衍生物（IV)的合成
[0031 ] 將化合物II(17lmg，0.5mmo 1)溶于25mL乙腈當中，向其中加入無水碳酸鉀(690mg， 5 ? Ommo 1)，碘化鉀（2 5 2mg，1 ? 5mmo 1)和咪唑（8 7 Omg，1 Ommo 1)，混合物加熱回流2h。反應結(jié)束 后將反應液倒入25mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取3次，合并有機相。依次用水和飽和食鹽 水洗滌合并之后的有機相，再用無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn)物粗品。產(chǎn)物粗 品用硅膠柱層析純化(流動相為:石油醚/丙酮= 100:0.3，v/v)，收集棕色集中洗脫帶并揮 去溶劑即得到化合物IV的淡棕色固體(144. lmg，71 % )。
[0032] XH NMR(500MHz,DMS0-d6)87.86(s,lH),7.12(s,lH),6.71(s,lH),5.99(s,lH), 4.09(s,lH),3.89(d,J=16.4Hz,2H),3.80(s,2H),3.58(s,lH),3.35(s,lH),2.31(s,lH), 1.68(s,lH),1.58(s,2H),1.44(s,2H).
[0033] 13C NMR(125MHz,DMS0-d6)13C 匪R(125MHz，Common 匪R Solvents)Sl71.82(s), 139.64(s),128.67(s),119.31(s),106.70(s),79.92(s),74.31(s),67.61(s),66.66(s), 44.20(s),43.75(s),35.52(s),25.85(s),21.86(s).
[0034] HRMS(ESI):m/z[M+H]+calcd for Ci7H2〇N3〇4:330.1454;found:330.1458。
[0036]實施例5組合物抗骨質(zhì)疏松作用的檢測 [0037] 1、材料與方法
[0038] 組合物的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的30mg化合物III的粉末和研磨之后過200 目網(wǎng)的70mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用渦輪攪拌儀混合即得到100mg組合物， 使用時用水溶解這l〇〇mg的組合物即得到組合物的溶液。
[0039]將十周齡健康SD雌鼠（30只，江蘇省動物中心）隨機分成5組，每組6只：假手術組 (Sham)、卵巢切除模型組(0VX)、組合物組、化合物III組和化合物IV組。飼養(yǎng)條件:溫度為 (23±2)°C，光照：黑暗為12:12。讓各組大鼠適應環(huán)境2周后開始骨質(zhì)疏松造模手術:各組大 鼠均經(jīng)腹腔注射20 %烏拉坦麻醉(6ml/kg體重），Sham組開腹后關腹，其余兩組行雙側(cè)卵巢 切除術。術后第4周起，Sham組和0VX組每天進食標準飼料和去離子水，組合物組、化合物III 組和化合物IV組每天進食標準飼料和去離子水，同時分別灌胃給與組合物、化合物III和化 合物IV 10mg/kg，連續(xù)3個月，每周稱一次體重。實驗結(jié)束后，用烏拉坦麻醉，摘取眼球采血， 2000r/min離心，吸取上清（即血清）。摘除大鼠子宮，迅速稱重。取出大鼠雙側(cè)股骨和雙側(cè)脛 骨，剔除軟組織。兩脛骨經(jīng)800°C高溫爐（由南京大學化學化工學院提供）中灰化8h，冷卻后 稱灰重。用研缽碾碎成灰狀，取0. lg骨灰溶于lml，6mol/l鹽酸中，測骨|丐和骨磷時取0.2ml 用超純水稀釋至lml，用全自動生化分析儀檢測骨鈣和骨磷含量。左股骨用骨密度儀測量骨 密度(BMD)。血清生化指標測定：取血清0.5ml，用全自動生化分析儀檢測血清堿性磷酸酶 (ALP)、鈣(Ca)和磷(P)。
[0040] 2、結(jié)果
[0041 ] (1)組合物對雙側(cè)卵巢切除大鼠血清ALP，血清Ca和血清P的的影響
[0042] 表1可以看出去卵巢后，模型組大鼠血清堿性磷酸酶活性增加。去卵巢后，體內(nèi)雌 激素缺乏，導致骨轉(zhuǎn)化率增加，與絕經(jīng)后婦女的高轉(zhuǎn)化型骨質(zhì)疏松癥一致。給予組合物3個 月后，堿性磷酸酶活性顯著下降，可見組合物可以抑制去卵巢引起的骨轉(zhuǎn)化率的增加，減少 骨質(zhì)的破壞。表中還顯示與假手術組相比，模型組大鼠血清鈣明顯下降，而組合物可顯著提 升血清鈣濃度。血清鈣是骨形成的重要標記物，說明組合物可以有效逆轉(zhuǎn)由于卵巢切除導 致的血清鈣的降低，有利于骨的形成。而化合物III和化合物IV沒有組合物的作用。
[0043] 表1組合物對雙側(cè)卵巢切除大鼠血清ALP，血清Ca和血清P的影響
[0045] *P〈0.05vs 0VX組
[0046] (2)組合物對雙側(cè)卵巢切除大鼠左股骨BMD的的影響
[0047]表2可以看出去卵巢后模型組大鼠左股骨骨密度較假手術組顯著下降，給予組合 物3個月后，骨密度顯著增加。而化合物III和化合物IV沒有此作用。
[0048]表2組合物對雙側(cè)卵巢切除大鼠左股骨BMD的的影響
[0050] *P〈0.05vs 0VX組
[0051 ] (3)組合物對雙側(cè)卵巢切除大鼠雙側(cè)脛骨參數(shù)的影響
[0052]表3可以看出與假手術組相比，模型組大鼠雙脛骨灰重顯著降低，而組合物組較模 型組顯著升高。組合物也能顯著升高骨鈣和骨磷含量。而化合物III和化合物IV沒有此作 用。
[0053]表3組合物對雙側(cè)卵巢切除大鼠雙側(cè)脛骨參數(shù)的影響
[0055] *P〈0.05vs 0VX組
[0056] 結(jié)論:組合物能夠抑制去卵巢引起的骨轉(zhuǎn)化率增強和骨質(zhì)破壞，同時可以提高血 鈣濃度，有利于骨的沉積。對于由于雌激素缺乏導致的骨質(zhì)疏松具有防治作用，并且無雌激 素樣副作用。組合物可以用于骨質(zhì)疏松的防治。化合物III和化合物IV不能夠抑制去卵巢引 起的骨轉(zhuǎn)化率增強和骨質(zhì)破壞，不可以提高血鈣濃度，不利于骨的沉積，對于由于雌激素缺 乏導致的骨質(zhì)疏松不具有防治作用，不可以用于骨質(zhì)疏松的防治。
[0057] 實施例6本發(fā)明所涉及組合物片劑的制備
[0058] 取2克組合物，加入制備片劑的常規(guī)輔料18克，混勻，常規(guī)壓片機制成100片。
[0059] 實施例7本發(fā)明所涉及組合物膠囊的制備
[0060] 取2克組合物，加入制備膠囊劑的常規(guī)輔料如淀粉18克，混勻，裝膠囊制成100粒。
【主權(quán)項】
1. 一種組合物，其特征為該組合物由化合物III和化合物IV組成，該組合物中化合物 III和化合物IV的質(zhì)量百分數(shù)分別為30%和70%，2. 如權(quán)利要求1所述的組合物的制備方法，其特征為:將化合物III的粉末和化合物IV 的粉末按照質(zhì)量百分數(shù)分別為30%和70%充分混合。3. -種如權(quán)利要求1所述的組合物在抗骨質(zhì)疏松藥物中的應用。4. 如權(quán)利要求3所述的組合物在抗骨質(zhì)疏松藥物中的應用，其特征為:所述骨質(zhì)疏松為 雌激素缺乏引起的骨質(zhì)疏松。5. 如權(quán)利要求4所述的組合物在抗骨質(zhì)疏松藥物中的應用，其特征為:所述雌激素缺乏 是由卵巢功能缺失引起的。6. 如權(quán)利要求5所述的組合物在抗骨質(zhì)疏松藥物中的應用，其特征為:所述組合物抑制 雌激素缺乏引起的骨轉(zhuǎn)化率增強和骨質(zhì)破壞。7. 如權(quán)利要求5所述的組合物在抗骨質(zhì)疏松藥物中的應用，其特征為:所述組合物提高 血清ALP、血清Ca和血清P的濃度。8. 如權(quán)利要求5所述的組合物在抗骨質(zhì)疏松藥物中的應用，其特征為:所述組合物提高 股骨骨密度。9.如權(quán)利要求5所述的組合物在抗骨質(zhì)疏松藥物中的應用，其特征為:所述組合物提高 雙脛骨骨鈣和雙脛骨骨磷。
【文檔編號】A61P19/10GK105853429SQ201610278689
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月28日
【發(fā)明人】王卓婷
【申請人】南京賦海澳賽醫(yī)藥科技有限公司