一種生物堿組合物及其應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種生物堿組合物，其特征在于，包括以下重量比的組成：高阿莫靈堿，23～27％；小檗胺，4～6％；異粉防己堿，50～52％；輪環(huán)藤寧堿，3～5％；頭花千金藤堿，12～15％。以及所述的生物堿組合物在制備治療斑禿、脂溢性脫發(fā)、秕糠性脫發(fā)藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的生物堿組合物對毛囊生長有明顯的促進(jìn)作用，且對體外培養(yǎng)的毛乳頭細(xì)胞有明顯的促增殖作用。
【專利說明】
一種生物堿組合物及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及天然藥物化學(xué)領(lǐng)域，特別涉及一種生物堿組合物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 早在2000年，世界衛(wèi)生組織就在發(fā)表的一份報(bào)告中稱，脫(禿）發(fā)正成為一個全球 性問題。而據(jù)國家權(quán)威衛(wèi)生機(jī)構(gòu)統(tǒng)計(jì)表明：在我國成年人群中，頭發(fā)細(xì)軟、枯黃、分叉、脫發(fā) 的人數(shù)已超過3億多，其中脫發(fā)人群約有1.625億。最新頭發(fā)健康人群調(diào)查數(shù)據(jù)顯示，60%的 男性在25歲之前就出現(xiàn)脫發(fā)現(xiàn)象，而在30歲以前出現(xiàn)脫發(fā)現(xiàn)象的男性比例竟超過八成 (83.9%)，脫發(fā)人群呈現(xiàn)出年輕化的趨勢。
[0003] 目前國內(nèi)的脫發(fā)患者普遍還沒有建立起"脫發(fā)是疾病"的意識。事實(shí)上，發(fā)現(xiàn)有脫 發(fā)癥狀，應(yīng)立即進(jìn)行針對性診治，以免延誤治療最佳時機(jī)，脫發(fā)的病理級別越高，治療難度 也越大。發(fā)現(xiàn)癥狀后首先應(yīng)該弄清楚脫發(fā)原因，引起脫發(fā)的原因有多種因素，如遺傳、疾病 (內(nèi)分泌失調(diào)）、藥物、精神狀況、心理、年齡及環(huán)境等。毛囊、毛球新陳代謝功能的低下是引 發(fā)脫發(fā)的一個重要原因，頭發(fā)是因毛根部的毛母細(xì)胞的分裂、增殖、分化而不斷生長的，而 毛母細(xì)胞則由毛乳頭中的毛細(xì)血管供給必要的各種營養(yǎng)物質(zhì)，如毛囊、毛乳頭部位的供血 不足，會引起脫發(fā);頭皮部位受到細(xì)菌或真菌感染是另一個引發(fā)脫發(fā)的因素，由于皮脂的過 度分泌，加上頭肩的大量堆積，經(jīng)細(xì)菌或真菌的繁殖分解，分解產(chǎn)物毒素刺激頭皮產(chǎn)生炎癥 (所謂秕糠癥），而引起秕糠性脫發(fā);此外，雄性激素分泌旺盛也會導(dǎo)致脫發(fā)，因?yàn)樾坌约に?分泌旺盛會導(dǎo)致皮脂分泌過度，使毛囊口角質(zhì)化過度（另外精神刺激也可使毛囊口收縮）， 這些都會阻塞毛囊口，致使毛囊萎縮而引起脫發(fā)，這也是脫發(fā)癥男性多于女性的原因。
[0004] 在全球0TC市場上，生發(fā)治療用藥占皮膚外用藥總體市場份額的7%，已達(dá)4.8億美 元。其年均增長率達(dá)17%，高于世界0TC藥物市場8%的年均增長率，潛在的生發(fā)治療用藥市 場價值高達(dá)180億元，可見生發(fā)治療用藥具有很大的市場需求，而國內(nèi)治療脫發(fā)的藥品很 少，國家"準(zhǔn)"字號的藥品僅有兩種，一個是口服藥非那雄胺片，另一個外用藥米諾地爾溶 液。但是非那雄胺片副作用較大:不適用于婦女和兒童，男性患者不良事件如下:射精異常、 乳房觸痛和腫大、過敏反應(yīng)(包括皮疹、瘙癢、蕁麻疹和口唇腫脹)和睪丸疼痛，甚至發(fā)生陽 痿和性欲減退。米諾地爾雖然可以對雄激素性脫發(fā)、斑禿有較好的療效，但也有諸多不良反 應(yīng)，不良反應(yīng)為多毛癥，還會引起刺激性或變應(yīng)性接觸性過敏反應(yīng)，部分患者可出現(xiàn)疹癢和 頭皮脫肩的癥狀。
[0005] 目前，現(xiàn)有技術(shù)中尚沒有可以有效的治療斑禿、脂溢性脫發(fā)、秕糠性脫發(fā)，但又無 任何副作用的藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種高效安全的治療脫發(fā)的生物堿組合物及其 制備的藥物在治療脫發(fā)方面的應(yīng)用。
[0007] 為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：
[0008] 本發(fā)明提供了一種生物堿組合物，包括以下重量含量的組分： 高阿莫靈堿 ：23~27% 小楽胺 4~6%
[0009] 異粉防己堿 50 ~ 52% 輪環(huán)藤寧堿 3 ~ 5% 頭花千金藤堿 12~15%。
[0010] 優(yōu)選的，包括以下重量含量的組份： 高阿莫靈堿 26% 小檗胺 5%
[0011] 棄粉防己減 51% 輪環(huán)藤〒減 4% 頭花千金藤減 14%0
[0012]優(yōu)選的，所述的生物堿組合物由防己科植物頭花千斤藤的塊根提取得到。
[0013] 本發(fā)明還提供了上述技術(shù)方案所述的生物堿組合物在制備預(yù)防和/或治療斑禿、 脂溢性脫發(fā)、秕糠性脫發(fā)藥物中的應(yīng)用。
[0014] 本發(fā)明還提供了一種治療斑禿、脂溢性脫發(fā)、秕糠性脫發(fā)的藥物組合物，包括上述 技術(shù)方案所述的生物堿組合物和藥學(xué)上可接受的輔料。
[0015] 優(yōu)選的，所述藥物組合物中生物堿組合物的質(zhì)量含量為0.1~20%。
[0016] 優(yōu)選的，所述藥物組合物中生物堿組合物的質(zhì)量含量為3~15%。
[0017] 優(yōu)選的，所述輔料為淀粉、糖粉、糊精、山梨酸鉀、鹽酸、芐醇、氯化鈉和甘露醇中的 一種或幾種。
[0018] 優(yōu)選的，所述藥物組合物的劑型為片劑、膠囊劑、顆粒劑、粉劑、口服液和水針劑中 的一種。
[0019] 本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明提供了一種生物堿組合物，包括以下重量含量的組分： 高阿莫靈堿23~27% ;小檗胺4~6% ;異粉防己堿50~52% ;輪環(huán)藤寧堿3~5% ;頭花千金 藤堿12~15%。本發(fā)明提供的生物堿組合物對毛囊生長有明顯的促進(jìn)作用，且對體外培養(yǎng) 的毛乳頭細(xì)胞有明顯的促增殖作用，能夠治療斑禿、脂溢性脫發(fā)和秕糠性脫發(fā)。進(jìn)一步的， 所述的生物堿組合物是來自于頭花千斤藤的塊根，純中草藥提取成分，使得該生物堿組合 物對于斑禿、脂溢性脫發(fā)和秕糠性脫發(fā)的治療無任何副作用。
【附圖說明】
[0020] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例1中生物堿組合物的樣品分析色譜圖；
[0021] 圖2為本發(fā)明實(shí)施例2中生物堿組合物的樣品分析色譜圖；
[0022] 圖3為本發(fā)明實(shí)施例3中生物堿組合物的樣品分析色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0023]本發(fā)明提供了一種生物堿組合物，包括以下重量含量的組分： 高阿莫靈堿 23 ~ 27% 小檗胺 4~6%
[0024] 異粉防己堿 5:0~52% 輪環(huán)藤寧堿 3~5% 頭花千金藤堿 12~15 %。
[0025]本發(fā)明中，所述的高阿莫靈堿重量含量為23~27%，優(yōu)選的為26 %;
[0026]所述的小檗胺的重量含量為4~6%，優(yōu)選的為5% ;
[0027]所述的異粉防己堿的重量含量為50~52%，優(yōu)選的為51 % ;
[0028]所述的輪環(huán)藤寧堿的重量含量為3~5%，優(yōu)選的為4% ;
[0029]所述的頭花千金藤堿的重量含量為12~15%，優(yōu)選的為14%。
[0030] 本發(fā)明提供的生物堿組合物優(yōu)選為防己科植物頭花千斤藤的塊根的提取物。在本 發(fā)明中，所述的塊根優(yōu)選為干燥的塊根。本發(fā)明對所述的提取的具體方法沒有特殊的限制， 采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的天然產(chǎn)物中生物堿的提取方法即可，本發(fā)明實(shí)施例具體采用公 開號為CN102872015、發(fā)明名稱為一種白藥子總生物堿提取物及其制備方法及應(yīng)用中公開 的生物堿提取的技術(shù)方案。
[0031] 本
【申請人】研究發(fā)現(xiàn)，上述生物堿組合物能夠明顯促進(jìn)毛乳頭細(xì)胞增殖和毛囊生長 速度，基于此，本發(fā)明還提供了上述技術(shù)方案所述的生物堿組合物在制備治療斑禿、脂溢性 脫發(fā)、秕糠性脫發(fā)藥物中的應(yīng)用。
[0032] 具體的，本發(fā)明還提供了一種用于治療斑禿、脂溢性脫發(fā)、秕糠性脫發(fā)的藥物組合 物，包括上述技術(shù)方案所述的生物堿組合物和藥學(xué)上可接受的輔料。
[0033] 在本發(fā)明中，所述生物堿組合物在所述藥物組合物中的質(zhì)量含量優(yōu)選的為0.1~ 20%，更優(yōu)選的為3~15%，最優(yōu)選的為5~10% ;余量的輔料。
[0034] 本發(fā)明對所述輔料的種類和來源沒有特殊限定，本領(lǐng)域技術(shù)人員可根據(jù)劑型的需 要，選擇合適的輔料。在發(fā)明中，所述的藥學(xué)上可接受的輔料優(yōu)選的為糖粉，糊精，山梨酸 鉀，鹽酸，芐醇，氯化鈉和甘露醇中的一種或幾種。在本發(fā)明中，所述的輔料在所述的藥物組 合物中的質(zhì)量含量優(yōu)選的為80~99.99%，更優(yōu)選的為90~97%。
[0035] 在本發(fā)明中，所述藥物組合物的劑型優(yōu)選為片劑，膠囊劑，顆粒劑，粉劑，口服液和 水針劑中的一種。
[0036] 當(dāng)所述藥物組合物為片劑時，所述輔料優(yōu)選為淀粉或糊精。在本發(fā)明中，所述輔料 在藥物組合物中的質(zhì)量含量優(yōu)選的為98~99.9%，更優(yōu)選的為99~99.9% ;余量的上述技 術(shù)方案所述生物堿組合物。
[0037] 當(dāng)藥物組合物為膠囊劑時，所述的輔料優(yōu)選的為淀粉或糊精，輔料的質(zhì)量含量優(yōu) 選的為98~99.9%，更優(yōu)選的為99~99.9% ;藥物組合物優(yōu)選為顆粒劑，所述的輔料優(yōu)選的 為糖粉和糊精，輔料的質(zhì)量含量優(yōu)選的為98~99.9%，更優(yōu)選的為99~99.9%，其中糖粉和 糊精的質(zhì)量比例優(yōu)選的為1:1;
[0038] 藥物組合物優(yōu)選為口服液，所述的輔料優(yōu)選的為山梨酸鉀和鹽酸，所述輔料的體 積含量優(yōu)選的為99.9~99.99%，更優(yōu)選的為99.98~99.99% ;
[0039] 藥物組合物優(yōu)選為水針劑，所述的輔料優(yōu)選的為芐醇，氯化鈉和鹽酸，所述輔料的 體積含量優(yōu)選的為98~99.5%，更優(yōu)選的為99~99.5% ;
[0040] 藥物組合物優(yōu)選為粉劑，所述的輔料優(yōu)選的為芐醇，氯化鈉、鹽酸和甘露醇，所述 輔料的體積含量優(yōu)選的為98~99%，更優(yōu)選的為98.5~98.9%。
[0041 ]下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明提供的生物堿組合物進(jìn)行詳細(xì)的說明，但是不能把它們 理解為對本發(fā)明保護(hù)范圍的限定。
[0042] 實(shí)施例1
[0043]取防己科植物頭花千斤藤的塊根粉碎，加6倍量乙醇進(jìn)行逆流動態(tài)加熱萃取，每次 3小時，收集提取液，濾過，濾液減壓濃縮至(溫度70°C，真空數(shù)-O.OSNpa)每lml相當(dāng)于塊根 5g，用熱水溶解，加鹽酸酸化，攪拌，靜置，濾過得濾液，冷藏靜置48小時，濾過，加堿堿化，攪 拌，靜置，濾過得藥液；
[0044]將所得藥液經(jīng)陶瓷膜過濾器進(jìn)行分子截留濾過，陶瓷膜濾器孔徑為0.2wii，所得濾 液即為精濾液；
[0045]將精濾液通過離子型樹脂柱，水洗除去雜質(zhì)，再用85%乙醇洗脫，收集洗脫液，減 壓濃縮;再噴霧干燥得干粉提取物；
[0046]將得到的干粉提取物加乙醇超聲提取二次，合并提取液，提取液通過葡聚糖凝膠 柱，收集生物堿部位，低溫冷凍，析出生物堿晶體粗品；
[0047]將生物堿晶體粗品加乙醇溶解，靜置，冷凍，干燥，粉碎后得到生物堿組合物。
[0048] 對得到的生物堿組合物進(jìn)行高效液相色譜檢測，具體的操作如下：
[0049] 供試品溶液的制備:取總生物堿藥物組合物適量，加甲醇制成每lml含lmg的溶液 作為供試品溶液。
[0050] 對照品溶液的制備：取高阿莫靈堿對照品、小檗胺對照品、異粉防己堿對照品、輪 環(huán)藤寧堿對照品和頭花千金藤堿對照品〇. 5mg，加甲醇制成每lml含各對照品0.2mg的溶液 作為對照溶液。
[0051 ]測定法:分別精密吸取上述溶液各10ul，注入液相色譜儀，進(jìn)行測定，測定條件為： 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-〇. 05 %三乙胺溶液(75:25)為流動相;282nm為 檢測波長，理論塔板數(shù)按頭花千金藤堿峰計(jì)算不低于3000。
[0052]本發(fā)明將得到的生物堿組合物進(jìn)行高效液相色譜分析，結(jié)果如圖1所示，圖1為本 發(fā)明實(shí)施例1得中生物堿組合物的樣品分析色譜圖，圖1記載了生物堿組合物中各個組份的 出峰時間和峰面積，其中峰1是高阿莫靈堿，峰2是小檗胺，峰3為異粉防己堿，峰4為輪環(huán)藤 寧堿，峰5為頭花千金藤堿；
[0053]通過峰面積計(jì)算得到，本實(shí)施例制備的生物堿組合物包括24.50wt%的高阿莫靈 堿、5.6 lwt %的小檗胺、51.6 lwt %的異粉防己堿、4.24wt %的輪環(huán)藤寧堿和14.04wt %的頭 花千金藤堿。
[0054] 實(shí)施例2
[0055]提取方法:取防己科植物頭花千斤藤的塊根粉碎加乙醇8倍量進(jìn)行逆流動態(tài)加熱 萃取，每次2小時，收集提取液，濾過，濾液減壓濃縮至(溫度70°C，真空數(shù)-O.OSNpa)每lml相 當(dāng)于原生藥材4g，用熱水溶解，加鹽酸酸化，攪拌，靜置，濾過得濾液，冷藏靜置48小時，濾 過，加堿堿化，攪拌，靜置，濾過得藥液；
[0056]將所得藥液經(jīng)陶瓷膜過濾器進(jìn)行分子截留濾過，陶瓷膜濾器孔徑為0. lwn，所得濾 液即為精濾液；
[0057]將精濾液通過離子型樹脂柱，水洗除去雜質(zhì)，再用90%乙醇洗脫，收集洗脫液，減 壓濃縮;再噴霧干燥得干粉提取物；
[0058]干粉提取物加乙醇超聲提取二次，合并提取液，提取液通過葡聚糖凝膠柱，收集生 物堿部位，低溫冷凍，析出生物堿晶體粗品；生物堿晶體粗品加乙醇溶解，靜置，冷凍，干燥， 粉碎后得到生物堿組合物。
[0059] 對得到的生物堿組合物進(jìn)行高效液相色譜檢測，具體的操作如下：
[0060] 供試品溶液的制備：取總生物堿藥物組合物適量，加甲醇制成每lml含lmg的溶液 作為供試品溶液。
[0061 ] 對照品溶液的制備：取高阿莫靈堿對照品、小檗胺對照品、異粉防己堿對照品、輪 環(huán)藤寧堿對照品和頭花千金藤堿對照品〇. 5mg，加甲醇制成每lml含各對照品0.2mg的溶液 作為對照溶液。
[0062] 測定法:分別精密吸取上述溶液各10ul，注入液相色譜儀，進(jìn)行測定，測定條件為： 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-〇. 05 %三乙胺溶液(75:25)為流動相;282nm為 檢測波長，理論塔板數(shù)按頭花千金藤堿峰計(jì)算不低于3000。
[0063] 本實(shí)施例中所得到的生物堿組合物的樣品分析色譜圖見圖2,圖2記載了生物堿組 合物中各個組份的出峰時間和峰面積，其中峰1是高阿莫靈堿，峰2是小檗胺，峰3為異粉防 己堿，峰4為輪環(huán)藤寧堿，峰5為頭花千金藤堿;通過峰面積計(jì)算得到，本實(shí)施例制備的生物 堿組合物包括26.57wt%的高阿莫靈堿、5.71wt %的小檗胺、51.04wt%的異粉防己堿、 4.4*1:%的輪環(huán)藤寧堿和12.25￥1:%的頭花千金藤堿。
[0064] 實(shí)施例3
[0065]提取方法:取防己科植物頭花千斤藤的塊根粉碎加乙醇5倍量進(jìn)行逆流動態(tài)加熱 萃取，每次4小時，收集提取液，濾過，濾液減壓濃縮至(溫度70°C，真空數(shù)-O.OSNpa)每lml相 當(dāng)于塊根5g，用熱水溶解，加硫酸酸化，攪拌，靜置，濾過得濾液，冷藏靜置48小時，濾過，加 堿堿化，攪拌，靜置，濾過得藥液；
[0066]將所得藥液經(jīng)陶瓷膜過濾器進(jìn)行分子截留濾過，陶瓷膜濾器孔徑為0.3wii，所得濾 液即為精濾液；
[0067]將精濾液通過離子型樹脂柱，水洗除去雜質(zhì)，再用乙醇洗脫，收集洗脫
[0068]液，減壓濃縮;再噴霧干燥得干粉提取物；
[0069]干粉提取物加乙醇超聲提取二次，合并提取液，提取液通過葡聚糖凝膠柱，收集生 物堿部位，低溫冷凍，析出生物堿晶體粗品；生物堿晶體粗品加乙醇溶解，靜置，冷凍，干燥， 粉碎，得到生物堿組合物。
[0070]對得到的生物堿組合物進(jìn)行高效液相色譜檢測，具體的操作如下：
[0071 ]供試品溶液的制備:取總生物堿藥物組合物適量，加甲醇制成每lml含lmg的溶液 作為供試品溶液。
[0072] 對照品溶液的制備：取高阿莫靈堿對照品、小檗胺對照品、異粉防己堿對照品、輪 環(huán)藤寧堿對照品和頭花千金藤堿對照品〇. 5mg，加甲醇制成每lml含各對照品0.2mg的溶液 作為對照溶液。
[0073] 測定法:分別精密吸取上述溶液各lOul，注入液相色譜儀，進(jìn)行測定，測定條件為： 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-〇. 05 %三乙胺溶液(75:25)為流動相;282nm為 檢測波長，理論塔板數(shù)按頭花千金藤堿峰計(jì)算不低于3000。
[0074] 本實(shí)施例中所得到的生物堿組合物的樣品分析色譜圖見圖3,圖3記載了生物堿組 合物中各個組份的出峰時間和峰面積，其中峰1是高阿莫靈堿，峰2是小檗胺，峰3為異粉防 己堿，峰4為輪環(huán)藤寧堿，峰5為頭花千金藤堿;通過峰面積計(jì)算得到，本實(shí)施例制備的生物 堿組合物包括26.54wt%的高阿莫靈堿、5.46wt%的小檗胺、51.41wt%的異粉防己堿、 4.26*1:%的輪環(huán)藤寧堿和12.33￥1:%的頭花千金藤堿。
[0075] 實(shí)施例4
[0076]生物堿組合物片劑制備方法
[0077]將2g實(shí)施例1制備得到的生物堿組合物和298g糖粉混合均勻，濕法制成顆粒，整粒 后壓成片，包裝，檢驗(yàn)，入庫。
[0078] 實(shí)施例5
[0079]生物堿組合物膠囊劑制備方法
[0080]將lg實(shí)施例2制備得到的生物堿組合物和399g糊精混合均勻，濕法制成顆粒，整粒 后裝入空膠囊殼中，包裝，檢驗(yàn)，入庫。
[0081 ] 實(shí)施例6
[0082]生物堿組合物顆粒劑制備方法
[0083]將2g實(shí)施例3中制備得到的生物堿組合物，加149g糖粉和149g糊精混合均勻，用水 制成顆粒，干燥，整粒后分裝成袋，包裝，檢驗(yàn)，入庫。
[0084] 實(shí)施例7
[0085]生物堿組合物口服液制備方法
[0086]將0.2g實(shí)施例1中制備得到的生物堿組合物加純化水至800ml，用鹽酸溶液調(diào)PH值 至6.5，加山梨酸鉀，使溶解，濾過，加水至1000ml，混勻，分裝成瓶，包裝，檢驗(yàn)，入庫。
[0087] 實(shí)施例8
[0088]生物堿組合物小水針制備方法
[0089]將10g實(shí)施例1中制備得到的生物堿組合物、芐醇、氯化鈉，加注射用水至500-800ml，用鹽酸溶液調(diào)PH值至7.0，加0.1 % -0.2 %的活性炭，攪拌30分鐘，濾過，加注射用水 至1000ml，超濾，灌封，滅菌，檢驗(yàn)，即得。
[0090] 實(shí)施例9
[0091 ]凍干粉制備方法
[0092]將20g實(shí)施例1中制備得到的生物堿組合物、氯化鈉、甘露醇，加800ml注射用水，攪 拌均勻，再加〇. lmol/L的鹽酸溶液調(diào)至pH值在5.0-8.0，加注射用水至全量，加0.05%的針 用活性炭，攪拌10分鐘，微孔鈦過濾器減壓粗濾，脫炭，檢查含量、pH合格后，再經(jīng)0.22wii微 孔濾膜終端過濾后，分裝于l〇ml西林瓶中，低溫冷凍干燥，在無菌條件下加蓋膠塞，乳蓋，包 裝，檢驗(yàn)，入庫。
[0093] 實(shí)施例10
[0094] 生物堿組合物對毛囊生長及毛乳頭細(xì)胞增殖藥效試驗(yàn)：
[0095]試驗(yàn)方法：
[0096] 1)毛囊的分離
[0097]取頭皮標(biāo)本剃除毛發(fā)后，無菌生理鹽水反復(fù)沖洗，用碘伏溶液侵泡5min，移至超凈 臺內(nèi)，75 %乙醇浸泡5min，無菌roS沖洗3遍后置于Wi 11 iams E培養(yǎng)基中。手術(shù)刀沿毛囊方向 切下5mm厚的頭皮，解剖顯微鏡下，于真皮-皮下組織交界處切開，棄表真皮部分，從皮下組 織拔取毛囊置于Williams E培養(yǎng)基。
[0098] 2)毛囊的體外培養(yǎng)及對其生長的觀察與記錄
[0099] 顯微鏡下選擇完整的生長期毛囊，通過目鏡測微器測量長度后，移入24孔板中，每 孔2根，分別加入生物堿組合物的濃度為0.5mg/ml的Williams E培養(yǎng)基(含2mmol/L L-谷氨 酰胺，100U/mL青霉素和鏈霉素)0.5ml，每個組別4個孔，置于37.5%C02孵箱中培養(yǎng)。每三天 換液一次，培養(yǎng)第10天再次測量毛囊長度，并記錄。
[0100] 3)毛乳頭細(xì)胞的培養(yǎng)
[0101] 毛乳頭細(xì)胞采用兩步酶消化分離法，分離得到純化得人毛乳頭細(xì)胞加含15%胎牛 血清的DMEM培養(yǎng)基混勻后，以每培養(yǎng)瓶30~50個毛乳頭的密度接種。待毛乳頭貼壁后換液， 去除未貼壁的單個細(xì)胞及雜質(zhì)。分離出的毛乳頭，3天后90%貼壁，貼壁1天后可觀察到細(xì)胞 迀出呈放射狀生長，2~3周細(xì)胞大部分生長融合。
[0102] 4)MTT法檢測細(xì)胞增殖
[0103] 取對數(shù)生長期的第4代人毛乳頭細(xì)胞，0.25%胰蛋白酶消化后，以100000/1111的密 度接種于96孔板中，每孔100ul，待細(xì)胞貼壁后吸去培養(yǎng)基，加入生物堿組合物的濃度為 0.5mg/ml，含10 %胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，每孔組別6個復(fù)孔，每孔100ul，空白對照只加 10 %胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)48小時后，每孔加入5g/L的MTT15ul，置于C02孵箱中 培養(yǎng)4小時，然后吸去培養(yǎng)基，每孔加入200ulDMS0，充分震蕩培養(yǎng)板，酶標(biāo)儀于490nm波長處 測定每孔的吸光度值(A 490)。
[0104] 5)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0105]試驗(yàn)數(shù)據(jù)以SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，采用兩樣本均數(shù)比較的t檢驗(yàn)，當(dāng) P<0.05時認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0106]試驗(yàn)結(jié)果：
[0107] (1)生物堿組合物對毛囊生長的影響
[0108] 與對照組相比濃度為0.5mg/ml的生物堿組合物對毛囊生長有明顯的促進(jìn)作用（P <0.05)，與對照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
[0109] 表1生物堿組合物對毛囊生長的影響
[0111] 由表2可以看出，實(shí)驗(yàn)組1~2中的生物堿組合物可以有效的促進(jìn)毛囊的生長速度。
[0112] (2)生物堿組合物對毛乳頭細(xì)胞增殖的影響
[0113] 處于對數(shù)生長的第4代毛乳頭細(xì)胞加入生物堿組合物培養(yǎng)48小時后，普通光學(xué)顯 微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)，未見明顯差異。MTT結(jié)果顯示培養(yǎng)生物堿組合物的4組有明顯促進(jìn)毛 乳頭細(xì)胞增殖的作用(P<〇. 05)。
[0114] 由以上實(shí)施例可知，本發(fā)明所述的生物堿組合物作用于體外培養(yǎng)的毛囊，觀察到 生物堿組合物對毛囊生長有明顯的促進(jìn)作用;且對體外培養(yǎng)的毛乳頭細(xì)胞有明顯的促增殖 作用。
[0115] 以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng) 視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種生物堿組合物，其特征在于，包括以下重量含量的組分： 高阿莫靈堿 23 ~ 27% 小檗胺 4~6% 異粉防己堿 50 ~ 52% 輪環(huán)藤寧堿 3-5% 頭花千金藤堿 12~15%,2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的生物堿組合物，其特征在于，包括以下重量含量的組分： 高阿莫靈堿 26% 小檗胺 5% 異粉防己堿 51% 輪環(huán)藤寧堿 4% 頭花千金藤堿 14%。3. 根據(jù)權(quán)利要求1~2任意一項(xiàng)所述的生物堿組合物，其特征在于，所述的生物堿組合 物為防己科植物頭花千斤藤的塊根的提取物。4. 權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng)所述的生物堿組合物在制備預(yù)防和/或治療斑禿、脂溢性脫 發(fā)、秕糠性脫發(fā)藥物中的應(yīng)用。5. -種治療斑禿、脂溢性脫發(fā)、秕糠性脫發(fā)的藥物組合物，包括權(quán)利要求1~3任意一項(xiàng) 所述的生物堿組合物和藥學(xué)上可接受的輔料。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物中生物堿組合物的 質(zhì)量含量為0.1~20%。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物中生物堿組合物的 質(zhì)量含量為3~15%。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，所述輔料為淀粉、糖粉、糊精、山梨 酸鉀、鹽酸、芐醇、氯化鈉和甘露醇中的一種或幾種。9. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物的劑型為片劑、膠 囊劑、顆粒劑、粉劑、口服液和水針劑中的一種。
【文檔編號】A61P17/14GK105853424SQ201610196166
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年3月30日
【發(fā)明人】牛海軍, 邵旭, 李曉亮, 許亮, 李光輝
【申請人】安徽九方藥物研究院有限公司