本發(fā)明涉及用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療由一個或多個堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀的藥物、用于其的構(gòu)建體和方法。

背景技術(shù)：

1、遺傳性疾病是由基因中發(fā)生了某種異常，其基因表達(dá)降低或消失，或者基因表達(dá)量增加等基因未正常表達(dá)而引起的。另外，在這樣的遺傳性疾病中，無義突變型的遺傳性疾病是由于基因上的點突變而形成早期終止密碼子，阻礙蛋白質(zhì)的表達(dá)而引起的疾病。在mrna上，當(dāng)終止密碼子出現(xiàn)在從原始終止密碼子起的上游側(cè)(5’末端側(cè))時，翻譯得到的蛋白質(zhì)變短，不能得到功能性蛋白質(zhì)，表現(xiàn)出遺傳性疾病。

2、另外，由于移碼突變，也有在本來的位置以外出現(xiàn)終止密碼子的情況，在基因中發(fā)生3的倍數(shù)以外數(shù)量的堿基的缺失、插入等，翻譯時的閱讀框架(reading?frame)偏離，由此可能發(fā)生遺傳性疾病。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、解決問題的方法

2、因此，本發(fā)明提供以下內(nèi)容。

3、(項目1)

4、一種藥物，其特征在于，其用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療由一個或多個堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀，該藥物包含：

5、cas核酸酶和/或包含編碼cas核酸酶的核酸序列的核酸，和

6、包含與具有該插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的核酸序列的核酸，

7、其中，該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

8、(項目2)

9、根據(jù)上述項目所述的藥物，其中，該藥物包含載體，該載體包含構(gòu)建體，所述構(gòu)建體包含：對所述細(xì)胞具有特異性的啟動子、編碼所述cas核酸酶的序列、使導(dǎo)入該載體后的細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動子、以及編碼與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列，

10、該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

11、(項目3)

12、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。

13、(項目4)

14、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，由所述移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網(wǎng)膜色素變性。

15、(項目5)

16、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述載體包含腺相關(guān)病毒(aav)載體。

17、(項目6)

18、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中滿足規(guī)定的得分。

19、(項目6a)

20、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50％以上。

21、(項目6b)

22、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90％以上。

23、(項目6c)

24、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分(mit?specificity?score)值為約30％以上，或者顯示出在其它設(shè)計工具中的其相應(yīng)值以上。

25、(項目a1)

26、一種構(gòu)建體，其用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療由一個或多個堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀，該構(gòu)建體包含在載體中，該構(gòu)建體包含：對細(xì)胞具有特異性的啟動子、編碼cas核酸酶的序列、使導(dǎo)入該載體后的該細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列，

27、該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

28、(項目a2)

29、根據(jù)上述項目中任一項所述的構(gòu)建體，其中，所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。

30、(項目a3)

31、根據(jù)上述項目中任一項所述的構(gòu)建體，其中，由所述移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網(wǎng)膜色素變性。

32、(項目a4)

33、根據(jù)上述項目中任一項所述的構(gòu)建體，其中，所述載體包含腺相關(guān)病毒(aav)載體。

34、(項目a5)

35、根據(jù)上述項目中任一項所述的構(gòu)建體，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中滿足規(guī)定的得分。

36、(項目a5a)

37、根據(jù)上述項目中任一項所述的構(gòu)建體，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50％以上。

38、(項目a5b)

39、根據(jù)上述項目中任一項所述的構(gòu)建體，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90％以上。

40、(項目a5c)

41、根據(jù)上述項目中任一項所述的構(gòu)建體，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30％以上，或者顯示出在其它設(shè)計工具中的其相應(yīng)值以上。

42、(項目b1)

43、一種構(gòu)建體，其用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療由一個或多個堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀，該構(gòu)建體包含：對細(xì)胞具有特異性的啟動子、編碼cas核酸酶的序列、使在該細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列，

44、該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

45、(項目b2)

46、根據(jù)上述項目中任一項所述的構(gòu)建體，其中，所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。

47、(項目b3)

48、根據(jù)上述項目中任一項所述的構(gòu)建體，其中，由所述移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網(wǎng)膜色素變性。

49、(項目b4)

50、根據(jù)上述項目中任一項所述的構(gòu)建體，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中滿足規(guī)定的得分。

51、(項目b4a)

52、根據(jù)上述項目中任一項所述的構(gòu)建體，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50％以上。

53、(項目b4b)

54、根據(jù)上述項目中任一項所述的構(gòu)建體，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90％以上。

55、(項目b4c)

56、根據(jù)上述項目中任一項所述的構(gòu)建體，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30％以上，或者顯示出在其它設(shè)計工具中的其相應(yīng)值以上。

57、(項目cc1)

58、一種藥物，其用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療由一個或多個堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀，該藥物包含：

59、cas核酸酶，

60、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna，和

61、指示書，該指示書指示以該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位的方式進(jìn)行施用。

62、(項目cc2)

63、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述藥物以試劑盒提供，該試劑盒在不同的區(qū)域中包含：

64、所述cas核酸酶，和

65、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna。

66、(項目cc3)

67、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述藥物作為組合提供，所述組合組合地包含：

68、所述cas核酸酶，和

69、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna。

70、(項目cc4)

71、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述藥物以合劑提供，該合劑混合地包含：

72、所述cas核酸酶，和

73、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna。

74、(項目cc5)

75、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中滿足規(guī)定的得分。

76、(項目cc5a)

77、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50％以上。

78、(項目cc5b)

79、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90％以上。

80、(項目cc5c)

81、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30％以上，或者顯示出在其它設(shè)計工具中的其相應(yīng)值以上。

82、(項目cd1)

83、一種藥物，其用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療由一個或多個堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀，該藥物包含：

84、包含編碼cas核酸酶的核酸序列的核酸，

85、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna，和

86、指示書，該指示書指示以該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位的方式進(jìn)行施用。

87、(項目cd2)

88、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述藥物以試劑盒提供，該試劑盒在不同的區(qū)域中包含：

89、包含編碼所述cas核酸酶的核酸序列的核酸，和

90、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna。

91、(項目cd3)

92、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述藥物作為組合提供，該組合組合地包含：

93、包含編碼所述cas核酸酶的核酸序列的核酸，和

94、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna。

95、(項目cd4)

96、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述藥物以合劑提供，該合劑混合地包含：

97、包含編碼所述cas核酸酶的核酸序列的核酸，和

98、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna。

99、(項目cd5)

100、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述藥物包含載體，該載體包含構(gòu)建體，該構(gòu)建體包含：對所述細(xì)胞具有特異性的啟動子、編碼所述cas核酸酶的序列、使在導(dǎo)入該載體后的細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動子、以及編碼與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列，

101、該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

102、(項目cd6)

103、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。

104、(項目cd7)

105、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，由所述移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網(wǎng)膜色素變性。

106、(項目cd8)

107、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中滿足規(guī)定的得分。

108、(項目cd8a)

109、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50％以上。

110、(項目cd8b)

111、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90％以上。

112、(項目cd8c)

113、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30％以上，或者顯示出在其它設(shè)計工具中的其相應(yīng)值以上。

114、(項目ce1)

115、一種藥物，其用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療由一個或多個堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀，該藥物包含：

116、包含編碼cas核酸酶的核酸序列的核酸，

117、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的核酸序列的核酸，和

118、指示書，該指示書指示以該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位的方式進(jìn)行施用。

119、(項目ce2)

120、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述藥物以試劑盒提供，該試劑盒在不同的區(qū)域中包含：

121、包含編碼所述cas核酸酶的核酸序列的核酸，和

122、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的核酸序列的核酸。

123、(項目ce3)

124、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述藥物作為組合提供，該組合組合地包含：

125、包含編碼所述cas核酸酶的核酸序列的核酸，和

126、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的核酸序列的核酸。

127、(項目ce4)

128、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述藥物以合劑提供，該合劑混合地包含：

129、包含編碼所述cas核酸酶的核酸序列的核酸，和

130、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的核酸序列的核酸。

131、(項目ce5)

132、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述藥物包含載體，該載體包含構(gòu)建體，該構(gòu)建體包含：對所述細(xì)胞具有特異性的啟動子、編碼所述cas核酸酶的序列、使在導(dǎo)入該載體后的細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動子、以及編碼與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列，

133、該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

134、(項目ce6)

135、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。

136、(項目ce7)

137、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，由所述移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網(wǎng)膜色素變性。

138、(項目ce8)

139、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中滿足規(guī)定的得分。

140、(項目ce8a)

141、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50％以上。

142、(項目ce8b)

143、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90％以上。

144、(項目ce8c)

145、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30％以上，或者顯示出在其它設(shè)計工具中的其相應(yīng)值以上。

146、(項目cf1)

147、一種藥物，其用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療由一個或多個堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀，該藥物包含：

148、cas核酸酶，

149、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的核酸序列的核酸，和

150、指示書，該指示書指示以該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位的方式進(jìn)行施用。

151、(項目cf2)

152、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述藥物以試劑盒提供，該試劑盒在不同的區(qū)域中包含：

153、所述cas核酸酶，和

154、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的核酸序列的核酸。

155、(項目cf3)

156、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述藥物作為組合提供，該組合組合地包含：

157、所述cas核酸酶，和

158、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的核酸序列的核酸。

159、(項目cf4)

160、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述藥物以合劑提供，該合劑混合地包含：

161、所述cas核酸酶，和

162、包含與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的核酸序列的核酸。

163、(項目cf5)

164、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述藥物包含載體，該載體包含構(gòu)建體，該構(gòu)建體包含：對所述細(xì)胞具有特異性的啟動子、編碼所述cas核酸酶的序列、使在導(dǎo)入該載體后的細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動子、以及編碼與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列，

165、該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

166、(項目cf6)

167、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。

168、(項目cf7)

169、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，由所述移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網(wǎng)膜色素變性。

170、(項目cf8)

171、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中滿足規(guī)定的得分。

172、(項目cf8a)

173、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50％以上。

174、(項目cf8b)

175、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90％以上。

176、(項目cf8c)

177、根據(jù)上述項目中任一項所述的藥物，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30％以上，或者顯示出在其它設(shè)計工具中的其相應(yīng)值以上。

178、(項目c1)

179、一種方法，其用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療由一個或多個堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀，該方法包括：

180、將載體導(dǎo)入該細(xì)胞中的步驟，其中該載體包含構(gòu)建體，該構(gòu)建體包含對該細(xì)胞具有特異性的啟動子、編碼cas核酸酶的序列、使在導(dǎo)入該載體后的細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列；以及

181、將所述細(xì)胞配置在發(fā)生所述切割的條件的步驟；

182、其中，該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

183、(項目c2)

184、根據(jù)上述項目中任一項所述的方法，其中，所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。

185、(項目c3)

186、根據(jù)上述項目中任一項所述的方法，其中，由所述移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀包含由eys?s1653k移碼突變引起的視網(wǎng)膜色素變性。

187、(項目c4)

188、根據(jù)上述項目中任一項所述的方法，其中，所述載體包含腺相關(guān)病毒(aav)載體。

189、(項目c5)

190、根據(jù)上述項目中任一項所述的方法，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中滿足規(guī)定的得分。

191、(項目c5a)

192、根據(jù)上述項目中任一項所述的方法，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50％以上。

193、(項目c5b)

194、根據(jù)上述項目中任一項所述的方法，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90％以上。

195、(項目c5c)

196、根據(jù)上述項目中任一項所述的方法，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30％以上，或者顯示出在其它設(shè)計工具中的其相應(yīng)值以上。

197、(項目d1)

198、一種制造用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀的產(chǎn)品的方法，該方法包括：

199、檢測成為該狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀的原因的一個或多個堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變的步驟，

200、基于該移碼突變，設(shè)計構(gòu)建體的步驟，其中，該構(gòu)建體包含：對細(xì)胞具有特異性的啟動子、編碼cas核酸酶的序列、使在導(dǎo)入該載體后的細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列，

201、制造該構(gòu)建體并插入到載體中的步驟，以及

202、制造包含該載體的產(chǎn)品的步驟；

203、其中，該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

204、(項目d2)

205、根據(jù)上述項目中任一項所述的方法，其中，所述切割部位與所述插入或缺失部位相接。

206、(項目d3)

207、根據(jù)上述項目中任一項所述的方法，其中，所述載體包含腺相關(guān)病毒(aav)載體。

208、(項目d4)

209、根據(jù)上述項目中任一項所述的方法，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中滿足規(guī)定的得分。

210、(項目d4a)

211、根據(jù)上述項目中任一項所述的方法，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中表示編輯效率的得分值顯示為約50％以上。

212、(項目d4b)

213、根據(jù)上述項目中任一項所述的方法，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna在grna的設(shè)計工具中表示對所述靶核酸序列的特異性的得分值顯示為約90％以上。

214、(項目d4c)

215、根據(jù)上述項目中任一項所述的方法，其中，與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的所述grna顯示出crispor的mit特異性得分值為約30％以上，或者顯示出在其它設(shè)計工具中的其相應(yīng)值以上。

216、(項目ea1)

217、一種用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療患者中一個或多個堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀的方法，該方法包括：

218、對來自該患者的核酸中的該靶核酸序列進(jìn)行測序的步驟，

219、基于該測序，選擇適合該患者中的靶核酸序列的grna的步驟，

220、將載體導(dǎo)入該細(xì)胞中的步驟，其中該載體包含構(gòu)建體，該構(gòu)建體包含對該細(xì)胞具有特異性的啟動子、編碼cas核酸酶的序列、使在導(dǎo)入該載體后的細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列，以及

221、將所述細(xì)胞配置在發(fā)生所述切割的條件的步驟；

222、其中，該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

223、(項目ea2)

224、根據(jù)上述項目中所述的方法，其還包括上述項目的任意一個或多個特征。

225、(項目eb1)

226、一種載體的用途，其用于制造用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療患者中一個或多個堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀的藥物，其中，該載體包含構(gòu)建體，該構(gòu)建體包含對該細(xì)胞具有特異性的啟動子、編碼cas核酸酶的序列、使在導(dǎo)入該載體后的細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna的序列，該改變、預(yù)防或治療通過包括下述步驟的方法來實現(xiàn)：

227、對來自該患者的核酸中的該靶核酸序列進(jìn)行測序的步驟，

228、基于該測序，選擇適合該患者中的靶核酸序列的grna的步驟，

229、將該載體導(dǎo)入該細(xì)胞中的步驟，以及

230、將所述細(xì)胞配置在發(fā)生所述切割的條件的步驟；

231、其中，該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

232、(項目eb2)

233、根據(jù)上述項目中所述的用途，其還包括上述項目的任意一個或多個特征。

234、(項目ec1)

235、一種用于通過切割細(xì)胞內(nèi)核酸中的至少一個部位的靶核酸序列來改變、預(yù)防或治療患者中一個或多個堿基的插入或缺失導(dǎo)致的移碼突變引起的狀態(tài)、疾病、障礙或癥狀的藥物，該藥物包含：

236、cas核酸酶，

237、與具有所述插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的grna，和

238、指示書，該指示書指示以該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位的方式進(jìn)行施用，

239、該改變、預(yù)防或治療通過包括下述步驟的方法來實現(xiàn)：

240、對來自該患者的核酸中的靶核酸序列進(jìn)行測序的步驟，

241、基于該測序，選擇適合該患者中的靶核酸序列的grna的步驟，

242、將載體導(dǎo)入該細(xì)胞中的步驟，其中，該載體包含構(gòu)建體，該構(gòu)建體包含對該細(xì)胞具有特異性的啟動子、編碼cas核酸酶的序列、使在導(dǎo)入該載體后的細(xì)胞中的grna能夠表達(dá)的啟動子、以及編碼與具有該插入或缺失的靶核酸序列結(jié)合的該grna的序列，以及

243、將所述細(xì)胞配置在發(fā)生所述切割的條件的步驟；

244、其中，該構(gòu)建體被構(gòu)成為通過該cas核酸酶接近具有該插入或缺失的靶核酸序列且產(chǎn)生切割部位。

245、(項目ec2)

246、根據(jù)上述項目中所述的藥物，其還包括上述項目的任意一個或多個特征。

247、在本發(fā)明中，上述一個或多個特征除了寫明的組合之外，還旨在可以進(jìn)一步組合來提供。需要說明的是，根據(jù)需要，在閱讀并理解以下的詳細(xì)說明后，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠認(rèn)識到本發(fā)明的進(jìn)一步的實施方式及優(yōu)點。

248、需要說明的是，通過參照以下的發(fā)明的實施方式的項及附圖，上述以外的本發(fā)明的特征及顯著的作用、效果，對本領(lǐng)域技術(shù)人員來說將變得明確。

249、發(fā)明的效果

250、根據(jù)本發(fā)明，通過以細(xì)胞內(nèi)基因組中的靶核酸序列為靶，將發(fā)生了移碼突變的基因復(fù)原為正常序列或與其近似的序列，從而可廣泛應(yīng)用于各種遺傳性疾病的治療或許多突變矯正。