專利名稱：一種輪環(huán)藤寧的制備方法
技術領域：
本發(fā)明屬于中藥有效成分提取技術領域，涉及一種輪環(huán)藤寧的制備方法，具體 的說，是一種從頭花千金藤中提取純化輪環(huán)藤寧的方法。
背景技術：
頭花千金藤為防己科植物頭花千金藤(金錢吊烏龜)(Stephania cepharantha Hayata)的根，又名白藥子，是較常用的中藥，已被《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品 標準》中藥材(第一冊)所收載，具有散瘀消腫、止痛、清熱解毒的功效。專利號 200810115666.6公開了一種白藥子提取物在制備抗腫瘤藥物中的應用，采用有機溶劑回 流提取，該方法所得白藥子提取物通過實驗結果表明其在濃度50μ g/ml時對人肝癌細胞 HepG-2抑制活性較低，對肝癌細胞BEL-7402有較好的抑制活性，對結腸癌細胞HCT-8 抑制活性最高，對肺癌細胞A-549也有一定程度的抑制作用，因此白藥子提取物可用于 制備抗癌藥物，但抗癌活性成分不明。李興等建立RP-HPLC法測定地不容藥材中千金藤素及輪環(huán)藤寧堿的含量，平均 值分別為 3.57 (mg/g)和 2.42 (mg/g)。輪環(huán)藤寧又稱輪環(huán)藤寧堿，分子式C38H42N2O6，分子量622.75。為無色柱狀 結晶，熔點268.5 269.5°C。旋光度-6.2° (c = 1.45，氯仿)。輪環(huán)藤堿衍生物為肌 松劑，并具有降血壓等作用。對HeLa人體癌(HE)細胞有細胞毒活性。對治療大鼠實 驗性矽肺有一定的效果。含有輪環(huán)藤堿的皮脂分泌促進劑能促進皮脂分泌，使皮膚保持 自然持久的油性，同時對皮膚、毛發(fā)具有潤澤保濕作用。能治療干性濕疹，如特異反應 性皮炎。在國家知識產(chǎn)權局相關檢索和中國期刊網(wǎng)的檢索中，未發(fā)現(xiàn)提取、分離純化頭 花千金藤中的輪環(huán)藤寧的工藝研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種輪環(huán)藤寧的制備方法。本發(fā)明的目的通過下述方案實現(xiàn)一種輪環(huán)藤寧的制備方法，其特征在于工藝步驟為取頭花千金藤塊根，加入 其8-18倍質(zhì)量的30-95%乙醇水溶液室溫浸泡24-48小時，紗布過濾，濃縮，加酸調(diào)節(jié) PH3-6,過濾，濾液再加堿調(diào)pHll-14，加入等體積的氯仿進行萃取，萃取2_5次，合并 氯仿層，回收溶劑，加入氧化鋁拌樣烘干過層析柱，再依次以氯仿-甲醇(49 1-1 1) 混合溶液梯度洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮干燥，得到輪環(huán)藤寧粗晶，再用甲醇或丙酮 水溶液重結晶，得到純度大于98%的輪環(huán)藤寧。所述的酸可選鹽酸、硫酸、醋酸、磷酸水溶液中的一種。所述的堿可選氨水、氫氧化鈉水溶液、碳酸鈉水溶液。所述的氧化鋁層析柱是中性氧化鋁短粗柱。
所述的氧化鋁柱層析的洗脫液為氯仿-甲醇混合溶液，洗脫梯度為4個流分后洗 脫液增加20ml甲醇，每500ml為1流分。所述的重結晶溶劑為甲醇或丙酮水溶液。本發(fā)明具有如下的優(yōu)點和有益效果1)本發(fā)明可得到高濃度的輪環(huán)藤寧，可為 白藥子等含有輪環(huán)藤寧藥材的質(zhì)量評價提供基礎，對該藥材資源的開發(fā)及其制劑的質(zhì)量 控制具有重要的意義；2)本發(fā)明方法簡單、設備投入小，可適用于規(guī)模化生產(chǎn)。
具體實施例方式下面是本發(fā)明的實施例，但本發(fā)明不僅限于所述實施例。實施例1 取新鮮頭花千金藤塊根5kg，加入其重量10倍質(zhì)量的45%乙醇水溶液室溫浸泡 36小時，200目紗布過濾，取濾液，濃縮，鹽酸調(diào)節(jié)pH至4，過濾，濾液再加15%氨水 溶液調(diào)pH至11，加入等體積的氯仿進行萃取，萃取3次，合并氯仿層，回收溶劑至總 體積的500mL，濾出結晶物，將結晶物用少量氯仿溶解，加入500g中性氧化鋁拌勻，烘 干，再上短粗柱(徑高比1 3)，用氯仿-甲醇(49 1-1 1)混合溶液梯度洗脫，洗 脫梯度為4個流分后洗脫液增加20ml甲醇，每500ml為1流分，收集含有輪環(huán)藤寧的流 分，減壓濃縮干燥，得到輪環(huán)藤寧粗晶，將粗晶用無水甲醇重結晶3次，干燥即得純度 為98.4%的輪環(huán)藤寧。實施例2:取新鮮頭花千金藤塊根10kg，加入其重量8倍質(zhì)量的70%乙醇水溶液室溫浸泡 48小時，200目紗布過濾，取濾液，濃縮，硫酸調(diào)節(jié)pH至5，過濾，濾液再加10%氫氧 化鈉水溶液調(diào)pH至12，加入等體積的氯仿進行萃取，萃取4次，合并氯仿層，回收溶劑 至總體積的1L，濾出結晶物，將結晶物用少量氯仿溶解，加入Ikg中性氧化鋁拌勻，烘 干，再上短粗柱(徑高比1 4)，用氯仿-甲醇(49 1-1 1)混合溶液梯度洗脫，洗 脫梯度為4個流分后洗脫液增加20ml甲醇，每500ml為1流分，收集含有輪環(huán)藤寧的流 分，減壓濃縮干燥，得到輪環(huán)藤寧粗晶，將粗晶用80%丙酮重結晶4次，干燥即得純度 為98.6%的輪環(huán)藤寧。實施例3 取新鮮頭花千金藤塊根10kg，加入其重量9倍質(zhì)量的95%乙醇水溶液室溫浸泡 24小時，200目紗布過濾，取濾液，濃縮，硫酸調(diào)節(jié)pH至4，過濾，濾液再加10%碳酸 鈉水溶液調(diào)pH至13，加入等體積的氯仿進行萃取，萃取4次，合并氯仿層，回收溶劑 至總體積的1L，濾出結晶物，將結晶物用少量氯仿溶解，加入Ikg中性氧化鋁拌勻，烘 干，再上短粗柱(徑高比1 5)，用氯仿-甲醇(49 1-1 1)混合溶液梯度洗脫，洗 脫梯度為4個流分后洗脫液增加20ml甲醇，每500ml為1流分，收集含有輪環(huán)藤寧的流 分，減壓濃縮干燥，得到輪環(huán)藤寧粗晶，將粗晶用90%甲醇重結晶3次，干燥即得純度 為98.3%的輪環(huán)藤寧。實施例4 取新鮮頭花千金藤塊根10kg，加入其重量12倍質(zhì)量的80%乙醇水溶液室溫浸泡 36小時，200目紗布過濾，取濾液，濃縮，醋酸調(diào)節(jié)pH至5，過濾，濾液再加15%氨水溶液調(diào)pH至12，加入等體積的氯仿進行萃取，萃取5次，合并氯仿層，回收溶劑至總體 積的1L，濾出結晶物，將結晶物用少量氯仿溶解，加入Ikg中性氧化鋁拌勻，烘干，再 上短粗柱(徑高比1 3)，用氯仿-甲醇(49 1-1 1)混合溶液梯度洗脫，洗脫梯度 為4個流分后洗脫液增加20ml甲醇，每500ml為1流分，收集含有輪環(huán)藤寧的流分，減壓 濃縮干燥，得到輪環(huán)藤寧粗晶，將粗晶用90%丙酮重結晶5次，干燥即得純度為99.1% 的輪環(huán)藤寧。實施例5 取新鮮頭花千金藤塊根20kg，加入其重量15倍質(zhì)量的60%乙醇水溶液室溫浸泡 48小時，200目紗布過濾，取濾液，濃縮，硫酸調(diào)節(jié)pH至5，過濾，濾液再加15%氫氧 化鈉水溶液調(diào)pH至11，加入等體積的氯仿進行萃取，萃取3次，合并氯仿層，回收溶劑 至總體積的2L，濾出結晶物，將結晶物用少量氯仿溶解，加入2kg中性氧化鋁拌勻，烘 干，再上短粗柱(徑高比1 5)，用氯仿-甲醇(49 1-1 1)混合溶液梯度洗脫，洗 脫梯度為4個流分后洗脫液增加20ml甲醇，每500ml為1流分，收集含有輪環(huán)藤寧的流 分，減壓濃縮干燥，得到輪環(huán)藤寧粗晶，將粗晶用80%甲醇重結晶2次，干燥即得純度 為98.2%的輪環(huán)藤寧。
權利要求
1.一種輪環(huán)藤寧的制備方法，其特征在于工藝步驟為取頭花千金藤塊根，加入 其8-18倍質(zhì)量的30-95%乙醇水溶液室溫浸泡24-48小時，紗布過濾，濃縮，加酸調(diào)節(jié) PH3-6,過濾，濾液再加堿調(diào)pHll-14，加入等體積的氯仿進行萃取，萃取2_5次，合并 氯仿層，回收溶劑，加入氧化鋁拌樣烘干過層析柱，再依次以氯仿-甲醇(49 1-1 1) 混合溶液梯度洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮干燥，得到輪環(huán)藤寧粗晶，再用甲醇或丙酮 水溶液重結晶，得到純度大于98%的輪環(huán)藤寧。
2.如權利要求1所述的輪環(huán)藤寧的制備方法，其特征在于所述的酸可選鹽酸、硫酸、 醋酸、磷酸水溶液中的一種。
3.如權利要求1所述的輪環(huán)藤寧的制備方法，其特征在于所述的堿可選氨水、氫氧化 鈉水溶液、碳酸鈉水溶液。
4.如權利要求1所述的輪環(huán)藤寧的制備方法，其特征在于所述的氧化鋁層析柱是中性 氧化鋁短粗柱。
5.如權利要求1所述的輪環(huán)藤寧的制備方法，其特征在于所述的氧化鋁柱層析的洗脫 液為氯仿-甲醇混合溶液，洗脫梯度為4個流分后洗脫液增加20ml甲醇，每500ml為1 流分。
6.如權利要求1所述的輪環(huán)藤寧的制備方法，其特征在于所述的重結晶溶劑為甲醇或 丙酮水溶液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種輪環(huán)藤寧的制備方法，工藝步驟為取頭花千金藤塊根，加入30-95％乙醇水溶液室溫浸泡24-48小時，紗布過濾，濃縮，加酸調(diào)節(jié)pH3-6，過濾，濾液再加堿調(diào)pH11-14，加入等體積的氯仿進行萃取，合并氯仿層，回收溶劑，加入氧化鋁拌樣烘干過層析柱，再依次以氯仿-甲醇混合溶液梯度洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮干燥，得到輪環(huán)藤寧粗晶，再進一步重結晶得到純度大于98％的輪環(huán)藤寧。該方法所得輪環(huán)藤寧純度高、品質(zhì)好，制備過程簡單可行，成本低，易于批量制備。
文檔編號C07D491/18GK102020652SQ20101060397
公開日2011年4月20日 申請日期2010年12月24日 優(yōu)先權日2010年12月24日
發(fā)明者劉東鋒, 楊成東, 郭琴 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司