專利名稱：一種亥茅酚苷的分離純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥有效成分的分離純化技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種亥茅酚苷的分離純化方法。
背景技術(shù)：
防風(fēng)為傘形科植物防風(fēng) Saposhnikovia divaricata(Turcz.) Schischk.的干燥根。是我國(guó)常用大宗藥材之一，具有解表祛風(fēng)、勝濕、止痙功能，用于感冒頭疼、風(fēng)濕痹痛、風(fēng)疹瘙癢、破傷風(fēng)等治療。防風(fēng)主要的活性成分為升麻素苷、升麻素、5-0-甲基維斯阿米醇苷和亥茅酚苷等色原酮類以及多糖、香豆素類等，現(xiàn)代藥理研究表明防風(fēng)色原酮具有解熱、鎮(zhèn)痛、抗炎、抗腫瘤、抗血小板聚集等多種功效，用于治療腦震蕩、小兒呼吸道感染、過(guò)敏性皮炎、面神經(jīng)炎、牙痛等。迄今為止，防風(fēng)色原酮的藥理活性、應(yīng)用及其制備方法研究較少。專利200710001127. 5提供了一種防風(fēng)總色原酮提取物及其制備方法，該發(fā)明通過(guò)溶劑萃取、 大孔吸附樹脂法等多種防風(fēng)制備獲得總色原酮含量5-100%的總色原酮提取物，但并未對(duì)各個(gè)單體成分進(jìn)行分離純化，只是混合物。本發(fā)明通過(guò)對(duì)亥茅酚苷的提取純化為亥茅酚苷的含量測(cè)定提供有效的對(duì)照品來(lái)源，從而為防風(fēng)及其制劑的指標(biāo)物的測(cè)定、更全面反應(yīng)其內(nèi)在質(zhì)量奠定了基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種亥茅酚苷的分離純化方法。本發(fā)明通過(guò)對(duì)亥茅酚苷的提純工藝進(jìn)行全面的考察，確定了最佳的純化工藝，成功對(duì)亥茅酚苷進(jìn)行了分離提純。本發(fā)明的目的是通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的一種亥茅酚苷的分離純化方法，其特征在于包含以下步驟將防風(fēng)色原酮提取物加入甲醇、乙醇、丙酮或它們的混合溶劑，加熱回流溶解，回收試劑至總體積的1/10-6/10， 加入大孔樹脂柱吸附，水洗柱至糖反應(yīng)為陰性，再以50-80%乙醇洗脫，收集洗脫液濃縮成浸膏，依次以石油醚、乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯萃取液，濃縮至浸膏狀，將浸膏通過(guò)凝膠柱層析分離純化，甲醇、丙酮或乙醇水溶液洗脫，收集下注液，薄層檢測(cè)，合并相同流分，低溫干燥，丙酮重結(jié)晶，減壓抽濾、冷凍干燥或冷噴霧得亥茅酚苷。所述防風(fēng)色原酮提取物為總色原酮含量5-20%的提取物。所述加熱回流溶解時(shí)間為1-4小時(shí)，溫度為60_85°C。所述大孔樹脂型號(hào)可選D140、HPD100、HPD600、HPD700中的一種，洗脫劑用量為 3-8BV，柱層析次數(shù)為1-3次。所述萃取步驟中石油醚的用量為浸膏體積的2-4倍，乙酸乙酯的用量為浸膏體積的3-6倍。所述凝膠柱層析柱填料包括kphadex LH-20, Sephadex G, Toyopearl 冊(cè)_40。所述凝膠柱層析洗脫條件為甲醇、丙酮或乙醇水溶液洗脫，體積百分比為 50-100%。
本方法利用大孔樹脂和凝膠層析柱分離等方法，從低純度的防風(fēng)總色原酮提取物中分離得到含量大于95%的亥茅酚苷。該方法工藝簡(jiǎn)單、收率高、適合小規(guī)模生產(chǎn)，在分離純化過(guò)程可分離得到其他色原酮單體成分，達(dá)到聯(lián)產(chǎn)、提高經(jīng)濟(jì)效益的目的。
具體實(shí)施例方式以下將結(jié)合實(shí)施例對(duì)發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明，但并不限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例1 取500g防風(fēng)色原酮提取物，用2. 5L90%乙醇加熱回流提取，溫度控制在70°C左右，提取2次，合并提取液，減壓回收試劑至500ml，加入柱體積為IL的D140大孔樹脂柱吸附，上柱流速0. 6BV/h,吸附飽和后用水洗脫至糖反應(yīng)為陰性，再以60 %乙醇洗脫，流速1. OL/h,收集富含亥茅酚苷的洗脫液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 15，加IOOml石油醚萃取，萃取2次，棄去萃取液，再用150ml乙酸乙酯萃取2次，減壓濃縮，加入預(yù)處理好的 Toyopearl HW-40 (200g)柱層析，用80%甲醇水溶液洗脫，薄層監(jiān)測(cè)，收集目標(biāo)成分流出液， 合并相同流分，低溫干燥，得粗晶，丙酮重結(jié)晶得產(chǎn)品，含量95. 74%。實(shí)施例2:取500g防風(fēng)色原酮提取物，用2.0L70%丙酮加熱回流提取，溫度控制在65°C左右，提取3次，合并提取液，減壓回收試劑至500ml，加入柱體積為IL的HPD600大孔樹脂柱吸附，上柱流速0. 7BV/h，吸附飽和后用水洗脫至糖反應(yīng)為陰性，再以80%乙醇洗脫，流速 1. OL/h,收集富含亥茅酚苷的洗脫液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 18，加120ml石油醚萃取， 萃取2次，棄去萃取液，再用180ml乙酸乙酯萃取2次，減壓濃縮，加入預(yù)處理好的kphadex G(200g)柱層析，用60%乙醇水溶液洗脫，薄層監(jiān)測(cè)，收集目標(biāo)成分流出液，合并相同流分， 低溫干燥，得粗晶，丙酮重結(jié)晶得產(chǎn)品，含量96. 。實(shí)施例3:取IOOOg防風(fēng)色原酮提取物，用5L90%甲醇加熱回流提取，溫度控制在80°C，提取2次，合并提取液，減壓回收試劑至500ml，加入柱體積為IL的D140大孔樹脂柱吸附， 上柱流速0. 5BV/h，吸附飽和后用水洗脫至糖反應(yīng)為陰性，再以75%乙醇洗脫，流速1.0L/ h，收集富含亥茅酚苷的洗脫液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.20，加170ml石油醚萃取，萃取 2次，棄去萃取液，再用200ml乙酸乙酯萃取2次，減壓濃縮，加入預(yù)處理好的Toyopearl HW-40(400g)柱層析，用70%丙酮水溶液洗脫，薄層監(jiān)測(cè)，收集目標(biāo)成分流出液，合并相同流分，低溫干燥，得粗晶，丙酮重結(jié)晶得產(chǎn)品，含量95. 87%。實(shí)施例4 取1500g防風(fēng)色原酮提取物，用6L80%丙酮加熱回流提取，溫度控制在75°C左右， 提取3次，每次2小時(shí)，合并提取液，減壓回收試劑至500ml，加入柱體積為2L的HPD100大孔樹脂柱吸附，上柱流速0. 7BV/h,吸附飽和后用水洗脫至糖反應(yīng)為陰性，再以60%乙醇洗脫，流速1. OL/h，收集富含亥茅酚苷的洗脫液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 17，加150ml石油醚萃取，萃取2次，棄去萃取液，再用300ml乙酸乙酯萃取2次，減壓濃縮，加入預(yù)處理好的 SephadexLH-20(700g)柱層析，用60%甲醇水溶液洗脫，薄層監(jiān)測(cè)，收集目標(biāo)成分流出液， 合并相同流分，低溫干燥，得粗晶，丙酮重結(jié)晶得產(chǎn)品，含量96. 13%。實(shí)施例5
取2500g防風(fēng)色原酮提取物，用7. 5L75 %乙醇加熱回流提取，溫度控制在60°C 左右，提取2次，每次2. 5小時(shí)，合并提取液，減壓回收試劑至500ml，加入柱體積為2L的 HPD600大孔樹脂柱吸附，上柱流速0. 6BV/h,吸附飽和后用水洗脫至糖反應(yīng)為陰性，再以 70%乙醇洗脫，流速1.0L/h，收集富含亥茅酚苷的洗脫液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 12，加 500ml石油醚萃取，萃取2次，棄去萃取液，再用400ml乙酸乙酯萃取2次，減壓濃縮，加入預(yù)處理好Wkphadex G(Ikg)柱層析，用50%乙醇水溶液洗脫，薄層監(jiān)測(cè)，收集目標(biāo)成分流出液，合并相同流分，低溫干燥，得粗晶，丙酮重結(jié)晶得產(chǎn)品，含量96. 22%。實(shí)施例6 取5000g防風(fēng)色原酮提取物，用25L85%甲醇加熱回流提取，溫度控制在85°C 左右，提取3次，每次1. 5小時(shí)，合并提取液，減壓回收試劑至500ml，加入柱體積為3L的 HPD700大孔樹脂柱吸附，上柱流速0. 8BV/h,吸附飽和后用水洗脫至糖反應(yīng)為陰性，再以 80%乙醇洗脫，流速1.0L/h，收集富含亥茅酚苷的洗脫液，減壓濃縮至相對(duì)密度為1. 13，加 800ml石油醚萃取，萃取2次，棄去萃取液，再用IL乙酸乙酯萃取2次，減壓濃縮，加入預(yù)處理好的kphadex LH-20(2kg)柱層析，用80%丙酮水溶液洗脫，薄層監(jiān)測(cè)，收集目標(biāo)成分流出液，合并相同流分，低溫干燥，得粗晶，丙酮重結(jié)晶得產(chǎn)品，含量95. 79%。
權(quán)利要求
1.一種亥茅酚苷的分離純化方法，其特征在于包含以下步驟將防風(fēng)色原酮提取物加入甲醇、乙醇、丙酮或它們的混合溶劑，加熱回流溶解，回收試劑至總體積的1/10-6/10，加入大孔樹脂柱吸附，水洗柱至糖反應(yīng)為陰性，再以50-80%乙醇洗脫，收集洗脫液濃縮成浸膏，依次以石油醚、乙酸乙酯萃取2次，收集乙酸乙酯萃取液，濃縮至浸膏狀，將浸膏通過(guò)凝膠柱層析分離純化，甲醇、丙酮或乙醇水溶液洗脫，收集下注液，薄層檢測(cè)，合并相同流分， 低溫干燥，丙酮重結(jié)晶，減壓抽濾、冷凍干燥或冷噴霧得亥茅酚苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述亥茅酚苷的分離純化方法，其特征在于所述防風(fēng)色原酮提取物為總色原酮含量5-20%的提取物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述亥茅酚苷的分離純化方法，其特征在于所述加熱回流溶解時(shí)間為1-4小時(shí)，溫度為60-85°C。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述亥茅酚苷的分離純化方法，其特征在于所述大孔樹脂型號(hào)可選 D140、HPD100、HPD600、HPD700中的一種，洗脫劑用量為3-8BV，柱層析次數(shù)為1_3次。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述亥茅酚苷的分離純化方法，其特征在于所述萃取步驟中石油醚的用量為浸膏體積的2-4倍，乙酸乙酯的用量為浸膏體積的3-6倍。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述亥茅酚苷的分離純化方法，其特征在于所述凝膠柱層析柱填料包括 S印hadex LH-20、S印hadex G、Toyopearl HW_40o
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述亥茅酚苷的分離純化方法，其特征在于所述凝膠柱層析洗脫條件為甲醇、丙酮或乙醇水溶液洗脫，體積百分比為50-100%。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種亥茅酚苷的分離純化方法，其特征是通過(guò)大孔樹脂吸附和凝膠柱層析法從防風(fēng)色原酮提取物中分離純化亥茅酚苷的方法。所述方法以市售防風(fēng)色原酮提取物為原料，包括溶劑回流溶解，樹脂吸附、有機(jī)溶劑萃取、凝膠柱層析分離純化、重結(jié)晶等步驟，其特征在于以甲醇、乙醇、丙酮或它們的混合溶劑為溶解溶媒，加熱回流1-3小時(shí)，經(jīng)樹脂吸附分離得到富集亥茅酚苷的部位，再經(jīng)凝膠柱層析分離純化亥茅酚苷。本發(fā)明所述的亥茅酚苷的提取方法簡(jiǎn)單，重現(xiàn)性高，干燥溫度低，產(chǎn)品質(zhì)量好，純度高。
文檔編號(hào)C07H17/07GK102532220SQ201010603919
公開日2012年7月4日 申請(qǐng)日期2010年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月24日
發(fā)明者劉東鋒, 李法慶 申請(qǐng)人:蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司