新穎的鼠李糖乳桿菌菌株及其用于抑制黃嘌呤氧化酶及治療痛風(fēng)的代謝產(chǎn)物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 相關(guān)申請案的交叉引用
[0002] 本申請要求于2014年8月22日所提出的美國臨時申請N062/040616號的權(quán)益。該申 請案的內(nèi)容在此整體引用作為參考。
[0003] 本發(fā)明設(shè)及利用乳酸菌及其發(fā)酵代謝產(chǎn)物抑制黃嚷嶺氧化酶活性技術(shù)領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0004] 尿酸是體內(nèi)嚷嶺代謝作用的最終產(chǎn)物。血中的高尿酸水平導(dǎo)致尿酸結(jié)晶的形成， 其沉積在關(guān)節(jié)、腎臟及其它器官。當(dāng)血中尿酸濃度高于7毫克/分升時，即視為高尿酸血癥。 [000引高尿酸血癥是一種常見的代謝病癥，它與痛風(fēng)、高血壓、屯、血管疾病、糖尿病及腎 臟疾病相關(guān)聯(lián)。據(jù)1993年至2008年在臺灣進(jìn)行的一項流行病學(xué)調(diào)查顯示，患有高尿酸血癥 的男性與女性病患的百分比分別為21.6%與9.57%。
[0006] 黃嚷嶺氧化酶是尿酸合成作用中的關(guān)鍵酶。因此，抑制黃嚷嶺氧化酶活性可減少 尿酸的產(chǎn)生。誠然，黃嚷嶺氧化酶抑制劑亦即尿酸酶可有效降低血中的尿酸濃度。但尿酸酶 并不是存在于人體內(nèi)的一種酶。其通常W重組型哺乳動物蛋白的形式分離出來，通過靜脈 注射的方式給藥。因此，其生產(chǎn)成本可能昂貴，在給藥上也可能困難。
[0007] 異嚷嶺醇也是一種黃嚷嶺氧化酶抑制劑。臨床上用該化合物來降低血清尿酸水 平。然而，異嚷嶺醇具有副作用，如過敏反應(yīng)、胃腸不適、白血球減少癥、血小板減少癥、肝 炎、腎病及6-琉嚷嶺中毒等，在上述的某些情況下甚至可能導(dǎo)致死亡。
[0008] 鑒于目前高尿酸血癥療法的缺點，許多生物制藥公司將重屯、放在開發(fā)新的降尿酸 劑上。例如，Izumida等人(J.Ant化iotics，第50期第916-918頁）指出已從海洋細(xì)菌澄黃農(nóng) 桿菌(Agrobacterium aurantiacum)分離出可降低尿酸水平的化合物，其名稱為徑阿卡酬 (hydroxy曰k曰lone)O
[0009] 其它微生物物種也表現(xiàn)出降尿酸能力，其包含發(fā)酵乳桿菌化actobaci Ilus fermentum)、戊糖乳桿菌化actobaciIlus pentosus)、加氏乳桿菌化actobaciIlus gasseri)、口腔乳桿菌(XactobaciIlus oris)、長雙歧桿菌（Bif idobacterium Iongum)、W 及釀酒酵母菌（Saccharomyces cereviSiae)的之菌株。具體參見美國專利申請案公開號 2010/0316618、2011/0014168及2013/0330299; W及歐洲專利申請案公開號2457576及 1649863。
[0010] 目前研發(fā)容易生產(chǎn)、給藥安全、來自天然來源的新穎黃嚷嶺氧化酶抑制劑仍然有 不少需求。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種由乳酸菌所制備的黃嚷嶺氧化酶抑制劑。
[0012] 本發(fā)明也提供一種用于抑制黃嚷玲氧化酶的方法。該方法包括下列步驟:在培養(yǎng) 基中培養(yǎng)鼠李糖乳桿菌化actobacillus rhamnosus)形成一種組合物，W及將黃嚷嶺氧化 酶與組合物接觸的步驟。
[0013] 本發(fā)明還公開一種用于降低個體的尿酸水平的方法，該方法包括在培養(yǎng)基中培養(yǎng) 鼠李糖乳桿菌W形成一種組合物，W及將該組合物給藥于具有升高的尿酸水平的受試者的 步驟。給藥量能有效降低尿酸水平。
[0014] 在本發(fā)明范圍內(nèi)還公開一種用于降低個體的尿酸水平的組合物的制備方法。該方 法將鼠李糖乳桿菌接種到培養(yǎng)基，并在培養(yǎng)基中培養(yǎng)鼠李糖乳桿菌，從而得到組合物。
[0015] 本發(fā)明進(jìn)一步公開一種用于降低個體的尿酸水平的組合物。該組合物包括鼠李糖 乳桿菌的代謝產(chǎn)物。
[0016] 本發(fā)明的一個或多個實施方案的細(xì)節(jié)闡述于本說明書和W下的實施例中。發(fā)明的 其他特征，目的和有益效果能從幾個實施例的詳細(xì)描述W及權(quán)利要求書中毫無疑問的得 出。本文引用的所有出版物和專利文獻(xiàn)都W整體引用的形式并入，作為參考資料。
【具體實施方式】
[0017] 如上面所述，本發(fā)明公開了一種通過施用含有鼠李糖乳桿菌的組合物來降低個體 的尿酸水平的方法。在一個具體的實施方案中，鼠李糖乳桿菌是鼠李糖乳桿菌121，其保藏 登記號為DSM28876。
[0018] 在一個實施方案中，受試者是高尿酸血癥。在另一個實施方案中，受試者患有痛 風(fēng)。
[0019] 如上文所述的方法包括在培養(yǎng)基中培養(yǎng)鼠李糖乳桿菌形成組合物的步驟。所述培 養(yǎng)基可W是，但不限于MRS肉湯培養(yǎng)基、牛奶及果汁。在具體的實施方案中，所述培養(yǎng)基是葡 萄汁、芒果汁或柳澄汁。在一具體的實施方案中，該方法包括在培養(yǎng)后同時在施用該組合物 前從上述培養(yǎng)基中移除鼠李糖乳桿菌的步驟。
[0020] 上述的組合物可W通過局部或全身給藥，其途徑包括但不限于肌內(nèi)，皮內(nèi)，靜脈 內(nèi)，皮下，腹胺內(nèi)，鼻內(nèi)，口服，粘胺，和外部。
[0021 ]根據(jù)給藥途徑，該組合物可W配制成各種形式，例如，該組合物可W是液體溶液、 懸浮液、乳劑，糖漿，片劑，丸劑，膠囊，緩釋制劑，粉末、顆粒，安飯，注射劑，輸液，試劑盒，軟 膏，洗劑，擦劑，乳膏，或它們的組合。該組合物可W進(jìn)行滅菌或與藥學(xué)上可接受的載體或賦 形劑混合。
[0022] 本文用的術(shù)語"載體"或"賦形劑"指任何物質(zhì)，其本身并不是治療劑，其是作為一 種載體、稀釋劑、佐劑或工具，（i)用于遞送治療劑至一個體，（ii)用于添加至制劑中W改良 其操作或儲存特性，及/或（iii)促進(jìn)單位劑量組合物形成能分立的物質(zhì)，例如適合于供口 服給藥的膠囊或片劑。
[0023] 適合在制備藥學(xué)制劑或食品的領(lǐng)域中的載體或賦形劑是公知的。作為示例而非限 審Ij，載體或賦形劑可包括緩沖劑、稀釋劑、崩解劑、結(jié)合劑（b i n d i n g a g e n t)、粘合劑 (a化esive)、潤濕劑、聚合物、潤滑劑、助流劑(glidant)、添加W隱藏或抵消一不愉快之味 道或氣味的物質(zhì)、香料(flavors)、染料、芳香劑、W及添加W改善該組合物的外觀的物質(zhì)。
[0024] 可接受的載體或賦形劑包括巧樣酸鹽緩沖液、憐酸鹽緩沖液、乙酸鹽緩沖液、碳酸 氨鹽緩沖液、硬脂酸、硬脂酸儀、氧化儀、憐酸和硫酸的鋼鹽及巧鹽、碳酸儀、滑石、明膠、阿 拉伯樹膠、藻酸鋼、果膠、糊精、甘露糖醇、山梨糖醇、乳糖、薦糖、淀粉、纖維素材料(例如燒 酸纖維素醋和纖維素烷基醋）、低烙點蠟可可脂、氨基酸、尿素、醇類、抗壞血酸、憐脂、蛋白 質(zhì)（例如血清白蛋白）、乙二胺四乙酸化DTA)、二甲亞諷(DMSO)、氯化鋼或者其他鹽類、脂質(zhì) 體、甘露糖醇、山梨糖醇、甘油、聚合物（例如聚乙締化咯晚酬、聚乙締醇及聚乙二醇），W及 其它藥學(xué)上可接受的材料。該載體不會破壞治療劑的藥學(xué)活性，且當(dāng)施用足夠遞送一治療 量的藥劑的劑量時是無毒性的。
[0025] 組合物的給藥量是對降低受試對象的尿酸水平有效的用量。本領(lǐng)域擱熟的技術(shù)人 員很容易通過，例如計算受試對象血液中尿酸濃度的變化確定有效用量。
[0026] 上述用于抑制黃嚷嶺氧化酶的方法包括在培養(yǎng)基中培養(yǎng)鼠李糖乳桿菌形成組合 物的步驟。在一個較佳的實施方案中，該鼠李糖乳桿菌是鼠李糖乳桿菌121，其保藏登記號 為DSM 28876。
[0027] 上述培養(yǎng)基可W是，但不限于MRS肉湯培養(yǎng)基、牛奶及果汁。在一個具體的實施方 案中，該培養(yǎng)基是葡萄汁、芒果汁或柳澄汁。在一個具體的實施方案中，上述方法包括將組 合物冷凍干燥形成粉末的步驟。
[0028] 上述用于抑制黃嚷嶺氧化酶的方法還包括將黃嚷嶺氧化酶和上述組合物接觸的 步驟。在一個實施方案中，該接觸步驟可在體外進(jìn)行。例如，將黃嚷嶺氧化酶制劑和組合物 儀器放置在容器中。在一個具體的實施方案中，接觸步驟通過具有黃嚷嶺氧化酶的受試者 口服組合物實現(xiàn)。
[0029] 上面概述的是一種用于降低個體的尿酸水平的組合物的制備方法。組合物通過先 在培養(yǎng)基上接種鼠李糖乳桿菌制備。在一個具體的實施方案中，該鼠李糖乳桿菌是鼠李糖 乳桿菌121，其保藏登記號為DSM 28876。
[0030] 上述用于接種鼠李糖乳桿菌的培養(yǎng)基可W是，但不限于MRS肉湯培養(yǎng)基、牛奶及果 汁。在某些實施方案中，該培養(yǎng)基是葡萄汁、芒果汁或柳澄汁。
[0031] 將鼠李糖乳桿菌接種到培養(yǎng)基后進(jìn)行培養(yǎng)，得到用于降低個體的尿酸水平的組合 物。培養(yǎng)步驟可W在37°C溫度下進(jìn)行。此外，培養(yǎng)步驟可在兼性厭氧條件下進(jìn)行。在一個實 施方案中，培養(yǎng)時間為2天。
[0032] 通過在培養(yǎng)基中培養(yǎng)鼠李糖乳桿菌而獲得的組合物可通過下列方法滅菌，其包括 但不限于己氏滅菌、福射、高壓滅菌或過濾。例如，組合物可通過一個0.2皿的過濾器進(jìn)行過 濾殺菌、在一個具體的優(yōu)選的實施方案中，殺菌的液體培養(yǎng)基首先經(jīng)過濾和離屯、W除去細(xì) 菌，然后再濃縮。
[0033] 用于降低個體的尿酸水平的組合物的制備方法可包括從組合物中去除鼠李糖乳 桿菌的步驟。鼠李糖乳桿菌在被去除之前，具有Ix IO8至Ix IO9個細(xì)胞/ml的細(xì)胞密度。在一 個優(yōu)選的實施方案中，在鼠李糖乳桿菌去除之前，鼠李糖乳桿菌的細(xì)胞密度為1 X IO9個細(xì) 胞/ml。
[0034] 在其他實施方案中，上述方法包括冷凍干燥組合物形成粉末的步驟。
[0035] 如上述用于降低個體的尿酸水平的組合物包括鼠李糖乳桿菌的代謝產(chǎn)物。代謝產(chǎn) 物是一種黃嚷嶺氧化酶活性的抑制劑。在一個具體的實施方案中，該代謝產(chǎn)物可W是保藏 登記號為DSM 28876的鼠李糖乳桿菌121的代謝產(chǎn)物。
[0036] 在一個實施方案中，組合物可W是鼠李糖乳桿菌粉末。在另一個替代實施方案中， 組合物中沒有鼠李糖乳桿菌。
[0037] 在另一個實施方案中，除了鼠李糖乳桿菌的代謝產(chǎn)物之外，組合物可包括益生微 生物，其包括但不限于，乳桿菌屬菌株化a Ctobacillus spp.)、雙歧桿菌屬菌株 (Bifidobacterium spp.) W及酵母屬菌株（Saccharomyces spp.)。例如，發(fā)酵乳桿菌、戊糖 乳桿菌、加氏乳桿菌、口腔乳桿菌、長雙岐桿菌W及釀酒酵母菌中的一種或多種可被包括在 該組合物中。
[0038] 該組合物還可W含有一種或多種食品成分，例如著色劑，酸度調(diào)節(jié)劑，抗結(jié)塊劑， 抗氧化劑，填充劑，載體，乳化劑，增味劑