包含接骨木提取物和鼠李糖乳桿菌菌株的組合的組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及包含接骨木提取物和至少一種鼠李糖乳桿菌（Lactobaci1lus rhamosus)菌株的組合的組合物，旨在刺激免疫力和/或促進抗感染和/或抗炎反應(yīng)。
【背景技術(shù)】
[0002] 接骨木或黑接骨木（SambucusnigraL.)屬于五福花科（Adoxaceae)。接骨木 屬（Sambucus)包含分布在世界溫帶地區(qū)的25個種。黑接骨木（S.nigrassp.nigra)廣 泛生長于歐洲（特別是丹麥、意大利和奧地利）、非洲北部地區(qū)和亞洲西部。加拿大接骨木 (S.nigrassp.Canadensis)盡管是在加拿大進行的選擇（selection)，但其源自北美洲東 北部，并生長于俄勒岡州、賓夕法尼亞州和堪薩斯州。
[0003] 接骨木的不同器官：樹皮、根、莖、花、葉和果實傳統(tǒng)地用于各種領(lǐng)域，如醫(yī)藥、食品 工業(yè)以及工具和玩具的制造。目前最重要的工業(yè)產(chǎn)品涉及接骨木漿果提取物的產(chǎn)品，其用 于營養(yǎng)食品市場和染料工業(yè)。
[0004] 一些出版物報導(dǎo)了接骨木漿果提取物對細(xì)胞因子生成的作用（Barak等 人，EuropeanCytokinenetwork,Vol12 (2)，290-296, 2001)。所述作用已被接骨木提取物 對與由流感病毒（A和/或B和/或C)引起的流感感染相聯(lián)系的癥狀的減輕所特別地證明， 以及被接骨木提取物對1型單純皰疹病毒、呼吸道合胞病毒和流感病毒的抗病毒作用所特 別地證明（Zakay-Rones等人，TheJournalofInternationalMedicalResearch,vol 32, 132-140, 2004)。
[0005] 大量的科學(xué)研究已經(jīng)證明存在于發(fā)酵食品，特別是乳制品中的一些微生物對健康 的有益作用。通常將這些微生物稱為"益生菌"。根據(jù)目前普遍接受的定義，益生菌為：活 的微生物，當(dāng)適量食用它們時，其對宿主的健康具有有益作用（針對食物中，包括含有活乳 酸菌的奶粉中的益生菌的健康和營養(yǎng)特性的評估的世界衛(wèi)生組織報告，科爾多瓦，阿根廷， 2001年十月1-4日）。
[0006]在專利申請W096/20607、EP0794707、EP1283714 和FR292912657 中已經(jīng)顯示，特別 地通過重新平衡腸道菌群，提高對感染的抵抗力，以及調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，食用含有益生菌的食 品能夠?qū)】诞a(chǎn)生有利的作用。
[0007] 用于人類飲食中的益生菌微生物通常是乳酸桿菌，主要屬于乳酸桿菌 屬（Lactobacillus)和雙歧桿菌屬（Bifidobacterium)，特別是副干酪乳桿菌 (Lactobacillusparacasei)種。
[0008] 乳酸桿菌屬是革蘭氏陽性菌的屬，不運動，有多變的形狀和尺寸，任選地厭氧。由 于其大部分成員將乳糖和其他簡單糖轉(zhuǎn)化為乳酸而得名。在人類中，乳酸桿菌作為共生者 是非常普遍的宿主，通常是有益的，或甚至是必要的。它們構(gòu)成腸道菌群的重要組成元素。
[0009] 鼠李糖乳桿菌是一種最初被視為干酪乳桿菌（Lactobacilluscasei)的亞種的細(xì) 菌，但是遺傳研究已經(jīng)證明其是一個單獨的種。通常，在胃和消化道中發(fā)現(xiàn)鼠李糖乳桿菌。 這種細(xì)菌具有對腸道有益的特性，但也具有對免疫系統(tǒng)，特別是在打擊腸道和泌尿道的病 原體中有益的特性。
[0010]益生菌可以對食糜、菌群產(chǎn)生直接的作用，稱為內(nèi)腔作用（d'effetsluminaux)， 或者在腸細(xì)胞或Galt免疫活性細(xì)胞的水平，則稱為表皮作用（d'effetspari6taux)。它們 也可以具有與生態(tài)系統(tǒng)或局部免疫系統(tǒng)的修飾相聯(lián)系的間接的作用。
[0011] -些益生菌具有粘附于消化道上皮的能力。這種特性可以構(gòu)成生態(tài)優(yōu)勢，有助于 與腸上皮細(xì)胞和局部免疫系統(tǒng)的密切相互聯(lián)系的機會。研究表明，鼠李糖乳桿菌的粘附菌 株可以長時間地定殖在一些受試者的空腸和/或直腸黏膜上（Alander等人，Lettersin AppliedMicrobiology, 24(5),vol361-364, 1997)〇
[0012] 越來越多的工作證明多菌株的生物學(xué)作用，重要的是要注意這些作用似乎是菌株 依賴的。
[0013] 專利申請US2006/0233895描述了包含接骨木提取物的組合物，所述提取物 可能與益生菌例如干酪乳桿菌組合。然而，這種組合物必須包含絨毛鉤藤（Uncaria Tomentosa)、保德科（Paud'Arco)、黃零（Scrutellariabaicalensis)和青蒿素的混合物。 此外，這種組合物并非旨在刺激免疫力，而是用于治療萊姆病，所述萊姆病是由細(xì)菌感染引 起的，因此其與流感型病毒引起的感染是非常不同的。
[0014] 專利申請W02010/043696公開了包含黑接骨木提取物和副干酪乳桿菌、干酪 乳桿菌、保加利亞乳桿菌（Lactobacillusbulgaricus)或嗜熱鏈球菌（Streptococcus thermophilus)的菌株的組合的組合物，旨在刺激免疫力。在該申請中，IL-10和干擾素-伽 馬的生成證明了接骨木和副干酪乳桿菌之間的協(xié)同作用。然而，炎癥反應(yīng)的限制是未知的。 其他細(xì)胞因子和CXCL10類型的趨化因子的數(shù)據(jù)將消除在這種炎癥反應(yīng)中過于重要的增加 的風(fēng)險。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0015] 因此，本發(fā)明涉及包含接骨木提取物和至少一種鼠李糖乳桿菌菌株的組合。
[0016] 有利地，這樣的組合是協(xié)同組合。
[0017] 本發(fā)明還涉及包含這樣的組合的組合物，并且有利地涉及包含接骨木提取物和至 少一種鼠李糖乳桿菌菌株的組合物。
[0018] 本發(fā)明還涉及包含接骨木提取物和至少一種鼠李糖乳桿菌菌株以及維生素和/ 或礦物鹽的組合物。
[0019] 在一個特別的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的組合物可以通過包括以下步驟的方法制 備：
[0020] _組合的制備；
[0021] -將組合加入至根據(jù)本發(fā)明的組合物中。
[0022] 在這種情況下，因此，在將組合加入至組合物之前制備組合。然而，也可以通過以 單獨的方式將組合的每個組分加入至組合物制備根據(jù)本發(fā)明的組合物，也就是說不事先制 備組合。
[0023] 優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的組合物旨在用于通過口服途徑施用。
[0024] 有利地，根據(jù)本發(fā)明的組合物為食品、食品補充劑、藥物或0TC(非處方）產(chǎn)品。
[0025] 有利地，根據(jù)本發(fā)明的接骨木提取物是從接骨木漿果和/或花中獲得的，優(yōu)選從 接骨木漿果中獲得。以有利的方式，根據(jù)本發(fā)明的接骨木提取物是水溶性提取物。
[0026] 在本發(fā)明的范圍內(nèi)使用的接骨木提取物一方面可以以其花青素含量為特征，另一 方面可以以大分子例如蛋白質(zhì)（特別是凝集素）為特征?；ㄇ嗨厥侨~、花瓣和果實的天然 色素，位于細(xì)胞的液泡中，可溶于水，在可見光譜中為橙紅色至紫藍色。
[0027] 有利地，所述接骨木提取物包含花青素，以有利的方式包含花葵素 (pelargonidines)和矢車菊素（cyanidines)家族，與提取物的干物質(zhì)相比，其具有以重量 計約0. 5 %至約25 %，以有利的方式約3 %至約25 %，以更加有利的方式約8 %至約16 %的 量。優(yōu)選地，與提取物的干物質(zhì)相比，花青素含量等于以重量計約12%。根據(jù)Wu等人描述 的HPLC方法（J.Agric.FoodChem. 52 (26)，7846-7856, 2004)，這些含量以矢車菊素-3-葡 萄糖苷表示。
[0028] 有利地，接骨木提取物包含以重量計2至10%的量的蛋白質(zhì)，以相比于干物質(zhì) 表不（NX6. 25 根據(jù)Kjeldahl方法：Prot6inesv6g6tales,Coord.B.Godon,Collection Sciencesettechniquesagro-alimentaires，TechniqueetDocumentation Lavoisier,Paris, 1985)〇
[0029] 在本發(fā)明的范圍內(nèi)，所述接骨木提取物是市售可得的，或者可以通過包括以下步 驟的方法獲得：
[0030] 新鮮的或冷凍的接骨木漿果可以經(jīng)歷擠壓以在過濾后獲得果汁。其可以經(jīng)歷酶水 解步驟（果膠酶或果膠甲酯酶和聚半乳糖醛酸酶的混合物）以在過濾前使其澄清（Girard 和Fukumoto,Crit.Rev.FoodSci.Nutr. 40 (2)，91-157, 2000)。也可以對干燥且磨碎的衆(zhòng)果 進行水性提取，然后通過過濾進行固/液分離。由此獲得的提取物可以原樣使用或濃縮、或 干燥為粉末的形式使用。
[0031] 在這個階段，與提取物的干物質(zhì)相比，花青素含量為以重量計0.5%至3%，有利 地等于約1 % (HPLC測定，以矢車菊素-3-葡萄糖苷表示）。
[0032] 所述接骨木提取物可以富集特別是花青素和/或高分子量分子（蛋白質(zhì)、多酚、多 糖）。為