乳桿菌屬菌的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及乳桿菌屬菌。更詳細(xì)而言，涉及一種新型戊糖乳桿菌（Lactobacillus pentosus)〇
【背景技術(shù)】
[0002] 乳酸菌和雙歧桿菌中存在具有調(diào)整腸胃效果及免疫賦活效果等優(yōu)異生理活性的 物質(zhì)，根據(jù)菌種的特性被用于各種用途。其中，近年來關(guān)于通過將這些菌種攝入體內(nèi)來發(fā)揮 其減肥效果的研究日益進(jìn)步，可列舉諸多報告。
[0003] 例如，專利文獻(xiàn)1報道如下：鼠李糖乳桿菌ATCC53103株分解成為肥胖原因的脂 質(zhì)（三酰基甘油），進(jìn)而抑制其在體內(nèi)的吸收。并且，作為植物性乳酸菌之一的L.brevis KB290活菌到達(dá)腸道內(nèi)后，腸內(nèi)存活率及腸管到達(dá)性優(yōu)異（但排泄菌數(shù)比攝取菌數(shù)少）已為 人所知（參照非專利文獻(xiàn)1)。另外，非專利文獻(xiàn)2關(guān)于LactobacillusacidophilusL-92 報道如下：根據(jù)攝取菌數(shù)的93%從糞便回收，可得出該菌株的腸管到達(dá)性優(yōu)異；非專利文 獻(xiàn)3研究了L.gasseriSBT2055的腸管存活性，并報道當(dāng)給藥100g含1X106~5X10 6cfu/ g的發(fā)酵乳時，最多可從奠便中檢測出lX105cfu/g左右的L.gasseriSBT2055。
[0004] 另一方面，關(guān)于雙歧桿菌報道如下：動物雙歧桿菌乳亞種（Bifidobacterium animalissubsp.lactis)GCL2505株，具備經(jīng)口攝取后活菌到達(dá)腸道的腸管到達(dá)性，同 時顯示顯著的腸管內(nèi)增殖性（參照專利文獻(xiàn)2)。非專利文獻(xiàn)4報道如下：針對成人進(jìn) 行B.animalisssp.lactisDN-173010給藥時，從奠便中檢測出與攝取菌數(shù)20%左右的 DN-173010。
[0005] 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0006] 專利文獻(xiàn)
[0007] 專利文獻(xiàn)1日本國特開2011-206057號公報
[0008] 專利文獻(xiàn)2日本國特開2011-172506號公報
[0009] 非專利文獻(xiàn)
[0010] 非專利文獻(xiàn)1《乳酸菌的保健功能與應(yīng)用》（日文原名《乳酸菌①保健機(jī)能t応 用》）2007年8月31日CMC出版160-162頁
[0011] 非專利文獻(xiàn)2日本乳酸菌學(xué)會雜志（日文原名：日本乳酸菌學(xué)會誌）2001年12 號"在人腸管內(nèi)持留性優(yōu)異的LactobacillusacidophilusL-92株的分離及其性質(zhì)"（日 文原名：匕卜腸管內(nèi)"?、生殘性?良〇Lactobacillusacidophilus1^_92株?単離<!；子?性 質(zhì)）28-35頁
[0012] 非專利文獻(xiàn) 3Microbiol.Immunol. 2006 年 50 號"Monitoringandsurvivalof LactobacillusgasseriSBT2055inthehumanintestinaltract. '，867-870 頁
[0013] 非專利文獻(xiàn) 4J.Mol.Microbiol.Biotechnol. 2008 年 14 號"Survivalof BifidobacteriumanimalisDN-173010inthefaecalmicrobiotaafteradministration inlyophilizedformorinfermentedproduct-arandomizedstudyinhealthy adults. '，128-136 頁

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 以往，像這樣在各種益生菌中研究了其腸管到達(dá)性，但關(guān)于乳酸菌，或者都停留在 報道為與攝取的菌數(shù)相等或在其以下的菌數(shù)到達(dá)了腸管，或者未測定到達(dá)腸管的菌數(shù)。
[0015] 另外，由于脂肪的吸收主要是在小腸內(nèi)進(jìn)行，所以通常在大腸內(nèi)增殖的雙歧桿菌 即使顯示了腸管內(nèi)增殖性，其對脂肪吸收的抑制也不充分。并且，雖然已知乳酸菌在大腸的 更上端發(fā)揮作用，但在腸管內(nèi)顯示增殖性的菌種尚未見報道。
[0016] 本發(fā)明的課題在于提供一種顯示腸管內(nèi)增殖性的乳酸菌。
[0017] 本發(fā)明涉及保藏號為NITEBP-1479的戊糖乳桿菌TUA4337L株，其特征在于，具有 在腸管內(nèi)的增殖能力。
[0018] 本發(fā)明的乳酸菌取得了在腸管內(nèi)增殖這樣的優(yōu)異效果。此外，當(dāng)攝取本發(fā)明的乳 酸菌時，該乳酸菌通過到達(dá)腸管內(nèi)并增殖，來持續(xù)脂肪吸收抑制效果等，菌體的生理活性得 到增強(qiáng)，進(jìn)而，取得了可獲得高減肥效果這樣的優(yōu)異效果。
【附圖說明】
[0019] 圖1是表示人工腸液中的篩選結(jié)果的圖。
[0020] 圖2是表示體重增加進(jìn)程的圖。圖中的標(biāo)記表示相對于高脂肪食物組具有顯 著性差異（P〈〇. 05)。
[0021] 圖3是表示血清中的甘油三酯量的圖。圖中的標(biāo)記表示相對于高脂肪食物組 具有顯著性差異（P〈〇. 05)。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 本發(fā)明的乳酸菌為戊糖乳桿菌TUA4337L株，其特征在于，具有在腸管內(nèi)的增殖能 力。此外，在本說明書中"具有在腸管內(nèi)的增殖能力"或"在腸管內(nèi)增殖"，是指到達(dá)腸管內(nèi) 后，在小腸和/或大腸內(nèi)、優(yōu)選在小腸內(nèi)進(jìn)行增殖，增殖能力的程度在如下情況下可評價為 "有增殖能力":即在人工腸液中于37°C下培養(yǎng)6hr時，相對于接種時的0D66。顯示10倍以上 的數(shù)值。
[0023] 本發(fā)明者針對本發(fā)明者所保有的約480種乳酸菌，進(jìn)行了在人工腸液中的增殖 能力研究，將從中選擇的屬于戊糖乳桿菌的菌懸液針對動物進(jìn)行給藥時，發(fā)現(xiàn)戊糖乳桿菌 TUA4337L株的排出菌數(shù)與給藥菌數(shù)相比顯著增多，至此完成了本發(fā)明。
[0024] 戊糖乳桿菌TUA4337L株，以識別表示NRIC0883、保藏號NITEBP-1479,于國際保 藏日2012年12月10日保藏于獨(dú)立行政法人制品評價技術(shù)基盤機(jī)構(gòu)（NITE)專利微生物保 藏中心（日本國千葉縣木更津市Kazusa鐮足2-5-8)。以下將戊糖乳桿菌TUA4337L株簡記 為TUA4337L株。
[0025] TUA4337L株的菌學(xué)性質(zhì)示于表1及表2。表2的糖的可同化性是用細(xì)菌鑒定試劑 盒API50CH(BI0METRIEUX)進(jìn)行測定的結(jié)果。此外，表2中的" + "是指可同化的糖，是 指不可同化的糖。
[0026] [表 1]
[0027]
[0028] [表 2]
[0029]
[0030] TUA4337L株將在后述實(shí)施例中進(jìn)行詳述，其具有排出菌數(shù)相對于攝取菌數(shù)增多的 特征，即具有腸管內(nèi)增殖性。另外，作為腸管內(nèi)增殖性，例如在人工腸液中于37°C下培養(yǎng)6 小時后，以培養(yǎng)開始時的菌數(shù)為基準(zhǔn)時，顯示優(yōu)選10倍以上、更優(yōu)選15倍以上、進(jìn)一步優(yōu)選 20倍以上、更進(jìn)一步優(yōu)選25倍以上的菌數(shù)。
[0031] 另外，由提取自TUA4337L株的DNA編碼的recA基因序列（序列號1)與 LactobacilluspentosusIG1株的recA基因序列有99 %的同一性。此外，在本說明書 中，同一性例如通過使用檢索程序BLAST，以得分表示相似度，檢索程序BLAST使用的是 Altschul等（TheJournalofMolecularBiology，215,403-410 (1990))開發(fā)的算法。
[0032] 作為用于培養(yǎng)TUA4337L株的培養(yǎng)基，沒有特別限制，可列舉通常的含有碳源、氮 源、無機(jī)鹽類、有機(jī)營養(yǎng)素等的培養(yǎng)基。另外，也可用瓊脂培養(yǎng)基、液體培養(yǎng)基培養(yǎng)。培養(yǎng)溫 度優(yōu)選為10~45°C、更優(yōu)選為15~42°C、進(jìn)一步優(yōu)選為28~38°C、進(jìn)一步優(yōu)選為35~ 37°C，可增殖的pH優(yōu)選為pH3. 0~12. 5、更優(yōu)選為pH3. 5~12. 0。
[0033] 作為本發(fā)明的菌株，可列舉乳酸菌（活菌及死菌）本身、乳酸菌含有物、乳酸菌處 理物等各種形式。活菌可從該乳酸菌培養(yǎng)液等的乳酸菌含有物中獲得。死菌例如可通過對 活菌進(jìn)行加熱、紫外線照射、福爾馬林處理、酸處理等獲得。得到的活菌、死菌可通過進(jìn)一步 磨碎、破碎而成為處理物。另外，從充分發(fā)揮在腸管內(nèi)的增殖效果的觀點(diǎn)出發(fā)，雖然上述各 形式中的乳酸菌優(yōu)選活菌，但也可混合有死菌。
[0034] 作為前述乳酸菌，例如，可列舉活菌體、濕菌、干菌等。作為前述乳酸菌含有物，例 如，可列舉乳酸菌懸浮液、乳酸菌培養(yǎng)物（包括菌體、培養(yǎng)上清、培養(yǎng)基成分）、乳酸菌培養(yǎng) 液（從菌體培養(yǎng)物中除去固體成分的物質(zhì)）。另外，作為前述乳酸菌處理物，例如，可列舉磨 碎物、破碎物、液狀物（提取液等）、濃縮物、漿化物、干燥物（噴霧干燥物、冷凍干燥物、真空 干燥物、離心干燥物等）、稀釋物等。
[0035] 實(shí)施例
[0036] 以下示出實(shí)施例具體說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受下述實(shí)施例的限制。
[0037] 實(shí)施例1〈將人工腸液中的增殖能力作為指標(biāo)的篩選〉
[0038] 本發(fā)明者針對保有的乳酸菌中主要為植物性乳酸菌的約480株（包括JCM株），進(jìn) 行在人工腸液中的增殖能力評價。
[0039] 具體而言，首先，將各乳酸菌的甘油保存菌分別以lv/v%接種于MRS培養(yǎng) 基（DifcoLaboratories)(10mL)中，在35°C下培養(yǎng)16~17hr。接著，用分光光度計 UV-1600 (島津制作所）測定各培養(yǎng)液的0D_ (660nm處的吸光度），將100yL用MRS培養(yǎng) 基以各培養(yǎng)液的〇D66。為10制備的培養(yǎng)液接種于下述所示組成的人工腸液（10mL)中。其 后，在37°C下緩慢震蕩培養(yǎng)6hr，然后測定0D66。，并求出增殖倍率（6hr后的0D66。/接種時的 0D66。）。代表性的篩選結(jié)果不于表3及圖1。
[0040] 〈人工腸液（pH6. 45) >
[0041] MRS培養(yǎng)基 9mL
[0042] 10w/v%膽汁（和光純藥工業(yè)株式會社）溶液lmL
[0043] lw/v%膜酶（from