活性級分的分級接著是標(biāo)準(zhǔn)方案。開始，將粗提物懸浮在水中，順 序用己燒、CH 2Cl2、和EtOAc提取，以產(chǎn)生四個不同急性的亞級分。在來自該初始部分的活性 級分上進(jìn)行的第一次色譜分離是Sephadex LH20色譜法，使用純甲醇或混合溶劑系統(tǒng)作為 洗脫劑。當(dāng)情況允許時，通過開管柱快速硅膠或快速反相色譜法、HPLC (正相和/或反相）、 或離心逆流色譜法（在Ito Coil裝置上）等進(jìn)行隨后的分級。通過光譜分析，使用ID和 2D NMR技術(shù)和質(zhì)譜法，包括裝備有冷凍探針的Bruker AV600NMR光譜儀和NANUC Varian 800MHz NMR光譜儀（埃得蒙頓，亞伯達(dá)省，加拿大），完成了新代謝物的結(jié)構(gòu)闡明。使用 以上在實(shí)施例1中描述的篩選（ARE-螢光素酶活性和NTD反式激活）測試純化的化合物的 活性，然后用于在實(shí)施例3中描述的二次篩選。
[0224] 實(shí)施例3
[0225] 通過應(yīng)用二次篩選確認(rèn)化合物。測試純化的化合物它們抑制以下的能力：雄激素 受體N-末端結(jié)構(gòu)域（AR NTD)的反式激活；其它類固醇受體（特異性）；PSA mRNA的內(nèi)源性 表達(dá)；AR在ARE上的相互作用；N/C相互作用；和前列腺癌細(xì)胞響應(yīng)于雄激素的增殖。
[0226] AR NTD的反式激活
[0227] 在缺乏血清和雄激素的情況下，刺激PKA活性的毛喉素（FSK)和IL-6兩者都通 過涉及AR NTD反式激活的機(jī)制來增加前列腺癌細(xì)胞中的PSA基因表達(dá)（Sadar，M. D.，J. Biol. Chem.(生物化學(xué)雜志）274,7777-7783(1999);1^(1&，1'.，8^1。11〇￥81^，1，5&(^『，]\1 D.，J. Biol. Chem.(生物化學(xué)雜志）277,7076-7085(2002);1^(^，1'.，]\&?^1州· R.，Bruchovsky, N.，Sadar, M. D.，J. Biol. Chem.(生物化學(xué)雜志）277, 38087-38094 (2002B); Quayle SN，Mawji NR，Wang J，Sadar M.D·，Proc Natl Acad Sci U S A.(美國國家科學(xué) 院院報(bào)）2007年1月23日；104 (4) :1331-6.)。通過將人AR NTD的氨基酸1-558克隆到 Gal4DBD的C末端中，測試185-9-2抑制AR NTD的反式激活的能力。將這些嵌合蛋白的表達(dá) 載體與報(bào)道基因共轉(zhuǎn)染到LNCaP細(xì)胞中，所述報(bào)道基因含有Gal4-結(jié)合位點(diǎn)作為順式作用 元件（ P5xGal4UAS-TATA-螢光素酶）。將細(xì)胞用比卡魯胺（BIC，ΙΟμΜ)或185-9-2(5ug/ml =12 μ M))預(yù)處理，之后加入FSK或IL-6。對照包括比卡魯胺，其不影響該測定，因?yàn)樗c AR的LBD結(jié)合，而在GaWDBD-AR 1 558嵌合體中不存在AR的LBD。觀察到185-9-2將FSK-誘 導(dǎo)的AR NTD的反式激活和IL-6-誘導(dǎo)的AR NTD的反式激活兩者降低至基線水平（圖5)。 觀察到185-9-2對于AR NTD反式激活的抑制具有~6. 6 μ M的IC5。。
[0228] 類固醇受體特異性
[0229] AR中的氨基酸與相關(guān)人類固醇受體PR和糖皮質(zhì)激素報(bào)道基因（GR)的序列相似性 在一些結(jié)構(gòu)域如DBD中是顯著的。AR NTD與PR和GR共有小于15%的同源性，但是這些受 體與這些蛋白中的一些（例如SRC-I和CBP)相互作用。因此，使用報(bào)道基因測定來確定阻 斷AR活性的候選化合物是否對于GR和PR轉(zhuǎn)錄活性具有任何影響。將細(xì)胞用全長hGR，PR β 和相關(guān)報(bào)道分子（即，PGR-Luc或PRE-Elb-Luc報(bào)道分子）的表達(dá)質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染。然后用乙醇 載體、地塞米松（GR)、4_孕烯-3, 20二酮（孕酮）（PR)處理細(xì)胞，接著測量螢光素酶活性。 185-9-2抑制AR轉(zhuǎn)錄活性，但是不抑制響應(yīng)于配體的PRE-螢光素酶或GRE-螢光素酶活性 (圖6)。與此對比，比卡魯胺（10 μ M)抑制PR的轉(zhuǎn)錄活性。當(dāng)前在臨床上使用的一些抗雄 激素藥具有孕酮和糖皮質(zhì)激素活性。在成年男性中，PR活性的作用是不清楚的。185-9-2 不抑制其它類固醇受體的反式激活。這些研究還提供了證據(jù)表明185-9-2對轉(zhuǎn)錄或翻譯不 具有非特異性和一般的作用，因?yàn)樗灰种七@些螢光素酶報(bào)道分子響應(yīng)于它們關(guān)聯(lián)配體的 誘導(dǎo)。由于185-9-2阻斷可由雄激素和FSK誘導(dǎo)的含有數(shù)個ARE的PSA-螢光素酶報(bào)道基 因的活性，所以支持它的抑制作用是在轉(zhuǎn)錄水平上。這些研究提示，185-9-2是AR特異性 的，暗示與如果使用其它類固醇受體相對比，系統(tǒng)遞送應(yīng)當(dāng)副作用較小。
[0230] 內(nèi)源性基因表達(dá)
[0231] 在LNCaP細(xì)胞中R1881 (配體依賴性）和FSK(非配體依賴性）兩者對PSA mRNA 的誘導(dǎo)是依賴于 AR 的（Sadar, M.D.，J. Biol. Chem.(藥物化學(xué)雜志）274,7777-7783 (1999); Wang G, Jones SJ, Marra MA, Sadar MD, Oncogene (癌基因）2〇〇6;25:7311_23·)。為了測 試化合物是否對于內(nèi)源性基因表達(dá)具有影響，測量在暴露于R1881的LNCaP細(xì)胞中PSA mRNA水平。將LNCaP細(xì)胞（在無血清和無酚紅培養(yǎng)基中）與化合物溫育1小時，之后加入 R1881(lnM)另外16小時，之后收獲和分離總RNA。使用QPCR測量mRNA水平。將PSA mRNA 水平針對GAPDH mRNA水平正規(guī)化。觀察到185-9-2將R1881對內(nèi)源性PSA mRNA的誘導(dǎo)阻 斷至幾乎基線水平（圖7)。
[0232] AR與DNA上ARE的相互作用
[0233] 使用染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP)來評估185-9-2是否防止AR結(jié)合至在染色質(zhì)結(jié)構(gòu) 的生理?xiàng)l件下PSA基因增強(qiáng)子區(qū)域中的內(nèi)源性ARE。AR顯示在PSA啟動子ARE上的組成 型占據(jù)，而增強(qiáng)子ARE具有響應(yīng)于雄激素的可誘導(dǎo)的占據(jù)（Jia L，Coetzee GA. ,Cancer Res.(癌癥研究）2005年9月1;65 (17) :8003-8)。AR在這些調(diào)節(jié)區(qū)域上的占據(jù)在雄激素 治療 16 小時時達(dá)到頂峰（Jia L，Choong CS，Ricciardelli C，Kim J, Tilley WD, Coetzee GA.,Cancer Res.(癌癥研究）2004Apr l;64(7):2619-26;Louie MC,Yang HQ,Ma AH,Xu W, Zou JX, Kung HJ, Chen Hff., Proc Natl Acad Sci U S A.(美國國家科學(xué)院院刊）2003年 3月4日；100(5):2226-30;此即0，〇&^〇11幾，8『〇￥11]\1，]\1〇10611.(分子細(xì)胞）20055印 2 ; 19 (5) : 631-42.)。將LNCaP細(xì)胞用DHT加上或減去185-9-2處理短時間（3h)或最佳時 間（16h)，之后與1 %甲醛交聯(lián)和收獲細(xì)胞。將細(xì)胞裂解，超聲處理，并將提取物用于使用 抗-AR抗體的免疫沉淀。185-9-2抑制LNCaP細(xì)胞中AR響應(yīng)于雌激素與PSA增強(qiáng)子上的 ARE相互作用（圖8A)。AR與ARE的相互作用的減少不是由于AR蛋白水平降低。來自全裂 解物的AR蛋白的蛋白質(zhì)印跡分析揭示185-9-2不降低AR蛋白水平（圖8B)，所述全裂解物 制備自在這些相同時間點(diǎn)收獲的LNCaP細(xì)胞。將LNCaP細(xì)胞與185-9-2長期溫育也不降低 AR蛋白水平（圖9)。因此，認(rèn)為185-9-2不是通過降低AR蛋白水平來抑制AR轉(zhuǎn)錄活性。 這提示185-9-2的作用機(jī)制相比于其它化合物是獨(dú)特的，所述其它化合物如AR mRNA錘頭 型核酶，AR siRNA，吡喃香豆素，需|丐蛋白酶，異硫氰酸苯乙酯，氟維司群（fulvestrant),前 胡素，LAQ824，和黃芩黃素，它們降低AR蛋白水平并且正在其它實(shí)驗(yàn)室中研究。
[0234] 185-9-2不抑制AR的核易位
[0235] 這些抑制劑中任一種可以減少AR反式激活的另一種可能機(jī)制可以包括阻止AR蛋 白的核易位。在缺乏雄激素或通過備選途徑刺激的情況下，AR主要是在細(xì)胞質(zhì)中。細(xì)胞分 級和熒光顯微鏡檢查法（圖1〇Α，Β)揭示185-9-2不導(dǎo)致在缺乏雄激素情況下AR它自身的 核易位，也不阻止AR蛋白響應(yīng)于雄激素（二氫睪酮，DHT)的核易位。
[0236] N/C相互作用
[0237] AR的配體依賴性活性要求氨基（N)和羧基（C)末端之間相互作用以形成逆平 行二聚體（He B，Kemppainen JA，Voegel JJ，Gronemeyer H，Wilson EM.，J Biol Chem. (生物化學(xué)雜志）1999, 274 (52) : 37219-25.)?？剐奂に厮幦绫瓤敯贰⒎泛痛姿?環(huán)丙孕酮不刺激它們自身的這種相互作用，并且每個抑制由雄激素誘導(dǎo)的N/C相互 作用（Wong, C.I·，Zhou, Z.X·，Sar, M·，和 Wilson, E.M. (1993) J. Biol. Chem.(生物化 學(xué)雜志）268,19004-19012 ;Langley，E·，Zhou, Z.X·，和 Wilson, E.M. (1995) J. Biol. Chem.(生物化學(xué)雜志）270,29983-29990;Kemppainen，J.A.，Langley，E.，Wong，C. I.，Bobseine, K·，Kelce, W.R·，和 Wilson, E.M. (1999) Mol. Endocrinol.(分子內(nèi)分泌 學(xué)）13,440-454 ;Masiello D，Cheng S，Bubley GJ，Lu ML，Balk SP. (2002) J. Biol. Chem. (生物化學(xué)雜志），277, 29, 26321-26326)。使用哺乳動物雙雜交系統(tǒng)來測量該相互作用。 用關(guān)于AR NTD的氨基酸1-565在N-末端與VP16融合的融合蛋白（VP16-ARTAD，N末端） 的表達(dá)載體、關(guān)于與AR的LBD融合的Gal4的DBD(氨基酸628-919 ;Gal4-ARLBD ;C末端） 的表達(dá)載體 AR 和 Gal4-螢光素酶報(bào)道分子（Masiello D，Cheng S，Bubley GJ，Lu ML, Balk SP. (2002) J. Biol. Chem.(生物化學(xué)雜志），277, 29, 26321-26326)共轉(zhuǎn)染 CVl 細(xì)胞。在缺 乏雄激素的情況下沒有檢測到VP16-ARTAD和Gal4-ARLBD之間的相互作用（圖11)。如 通過增加的螢光素酶活性所測量，雄激素刺激該相互作用，其被比卡魯胺阻斷（還參見，例 如 Masiello D，Cheng S，Bubley GJ，Lu ML，Balk SP. (2002) J.Biol. Chem.(生物化學(xué)雜 志），277, 29, 26321-26326)。重要的是，觀察到185-9-2抑制雄激素刺激的N/C相互作用 (比較柱形圖6和2)。因此，認(rèn)為185-9-2通過阻礙N/C相互作用來抑制AR的轉(zhuǎn)錄活性。
[0238] 增殖測定
[0239] 前列腺是雄激素依賴性器官，在這雄激素是主要的促有絲分裂刺激（Isaacs JT, Scott ffff，Coffey DS. ,Prog Clin Biol Res.(臨床生物學(xué)研究進(jìn)展）1979 ; 33:133-44)。這種對于雄激素的依賴提供了用化學(xué)或外科手術(shù)去勢治療前列腺癌的理論基 礎(chǔ)。雄激素（0.1 nM)刺激LNCaP細(xì)胞的增殖。為了測試185-9-2干擾AR AF-I功能是否減 少LNCaP細(xì)胞的雄激素依賴性增殖（類似于關(guān)于臨床使用的抗雄激素藥所觀察到的），將 LNCaP細(xì)胞用比卡魯胺（10 μ M，陽性對照）或185-9-2 (5 μ g/ml)預(yù)處理1小時，之后加入 0.1 nM R1881。4天后測量BrdU摻入，以指示響應(yīng)于雄激素的在增殖方面的變化（圖12)。 相對于對照（用于R1881和小分子的載體），R1881 (0.1 nM)增加增殖。觀察到185-9-2與 比卡魯胺在抑制雄激素-誘導(dǎo)的增殖方面同樣有效。觀察到185-9-2不阻止PC3人前列 腺癌細(xì)胞的增殖（圖13, p>0. 05)，所述PC3人前列腺癌細(xì)胞不表達(dá)功能性AR并因此不依 賴于AR來生長和存活（Kaighn等1978Natl. Cancer Inst. Monogr.(國家癌癥研究所專 論）49, 17-21)〇
[0240] 實(shí)施例4
[0241] 使用皮下異種移植物模型來測試體外抑制雄激素受體激活的小分子是否 對于這些腫瘤具有任何作用。使用LNCaP和PC3皮下異種移植物模型體內(nèi)測試 PNG01-185-017-9-2。進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)來提供與以下相關(guān)的信息：毒性，AR內(nèi)源性表達(dá)的要 求，和PNG01-185-017-9-2是否對于腫瘤生長和發(fā)展為非雄激素依賴性具有效果。在兩種 異種移植物模型中監(jiān)視腫瘤體積。
[0242] PNG01-185-017-9-2減小LNCaP異種移植物的腫瘤體積
[0243] LNCaP人前列腺癌細(xì)胞表達(dá)內(nèi)源性雄激素受體（AR)和前列腺特異性抗原（PSA)， 并且在去勢宿主中發(fā)展為非雄激素依賴性。將LNCaP細(xì)胞（IOfVml)皮下植入至少8周 齡的NOD-SCID雄性小鼠。將細(xì)胞和75 μ 1基質(zhì)膠（Matrigel)懸浮在75 μ I RPMI培養(yǎng) 基1640(5%FBS)中，并在麻醉下注射到宿主腰窩區(qū)域。當(dāng)腫瘤約為100mm3(平均值= 131. 1±24. 9mm3;n = 19)時將動物去勢并隨機(jī)分為兩組。在去勢后一周，每5天用20mg/kg 體重的腫瘤內(nèi)（i. t.)劑量的185-9-2或匹配體積的載體（對照，DMS0)處理動物。在25天 期間用185-9-2注射動物，并在最后一次注射后5天收獲動物。對動物提供總共5次劑量。 每5天測量腫瘤體積和體重。觀察到185-9-2顯著減小腫瘤，即使在第一次注射后也是如 此（圖14)。在實(shí)驗(yàn)期間，185-9-2-處理的腫瘤是35. 4±15. 7mm3,而載體處理的腫瘤繼續(xù) 生長并且是435. 6 ±334. 9mm3。因此，觀察到185-9-2減小腫瘤體積，并且不僅僅是減緩生 長。這提示185-9-2對于非雄激素依賴性前列腺癌可以是有療效的。I. T遞送相關(guān)化合物， 外消旋BADGE. 2HC1 (B3)，也觀察到將腫瘤體積從109. 6 ± 17. 4mm3減小至79. O ±63. 6mm3,與 此相比，根據(jù)關(guān)于185-9-2的相同治療方案，I. T.遞送DMSO持續(xù)生長（從105. 2± 15. Imm3 開始，直至256. 6±73. 4mm3)(圖15A)。血清PSA測量值與腫瘤體積數(shù)據(jù)相互關(guān)聯(lián)（血清 PSA數(shù)據(jù)未顯示）。
[0244] 重要的是，每隔一天通過尾靜脈注射靜脈內(nèi)遞送（50mg/kg體重）顯示了相似的腫 瘤減瘤率（rate of cytoreduction)(圖15A)。在僅2周內(nèi)，觀察到靜脈內(nèi)注射185-9-2將 腫瘤從105. 6± 12. Omm3減小到64. 3±29. 6mm3,而在接受靜脈內(nèi)注射DMSO的動物中腫瘤為 187. 9±42. 8mm3。這些有希望的數(shù)據(jù)強(qiáng)調(diào)了系統(tǒng)遞送在減輕非雄激素依賴性前列腺癌中是 有效的。使用細(xì)胞凋亡（TUNEL)和增殖（Ki67)的標(biāo)記的免疫組織化學(xué)（IHC)顯示靜脈內(nèi) 遞送185-9-2增加了細(xì)胞凋亡和減少了增殖（圖15B)，這與腫瘤減瘤一致。通過不知曉治 療的商業(yè)實(shí)驗(yàn)室制備IHC數(shù)據(jù)。觀察到185-9-2不導(dǎo)致對于動物的一般毒性，如通過動物 行為或體重沒有變化所指示（圖14C和15C)。從通過i. V.遞送接受185-9-2或DMSO的小 鼠中收獲的肺、心、肝、脾和腎的病理學(xué)檢查顯示沒有毒性跡象（圖16)。
[0245] 在收獲的異種移植物中AR蛋白的水平
[0246] IHC(圖17A)和蛋白質(zhì)印跡分析（圖17B)提供了證據(jù)證明：與在載體處理的異種 移植物中的AR蛋白水平相比，I. V.或I. T遞送185-9-2沒有降低異種移植物中AR蛋白水 平。測量細(xì)胞角蛋白18水平作為在異種移植物樣品中上皮細(xì)胞的量的指示。
[0247] 對血管生成的影響
[0248] 在前列腺癌中的血管生成主要依賴于血管內(nèi)皮生長因子（VEGF)。睪酮是前列腺 中VEGF的強(qiáng)力誘導(dǎo)劑（HiggSbrdm等1999J Urol.(泌尿?qū)W雜志）161，1620-1625)，并且 在非雄激素依賴性腫瘤中VEGF的再表達(dá)與雄激素調(diào)節(jié)的基因的再表達(dá)一致（Gregory等 1998Cancer Res.(癌癥研究）58,5718-5724)。VEGF的表達(dá)與非雄激素依賴性（Mitsiades 等2001Expert Opin Investig Drugs.(研究藥物專家評論）10,1099-1115)和侵略性轉(zhuǎn)移 疾?。℉arper 等 1998J Pathol.(病理學(xué)雜志）186, 169-177 ;Balbay 等 1999Clin Cancer Res.(臨床癌癥研究）5, 783-789 ;Melnyk 等 1999J Urol.(泌尿?qū)W雜志）161，960-963)相 關(guān)。收獲的腫瘤關(guān)于VEGF染色，揭示PNG01-185-017-9-2抑制VEGF的表達(dá)（圖18)。
[0249] 在非去勢宿主中皮下PC3異種移植物模型
[0250] 使用PC3異種移植物模型來提供以下指示，即對于化合物減輕腫瘤負(fù)荷而言，內(nèi) 源性AR是否必須表達(dá)。PC3是不表達(dá)功能性AR的人前列腺癌細(xì)胞，并因此不響應(yīng)于使 用這些小分子的治療，所述小分子已經(jīng)針對它們阻斷AR-NTD反式激活的特異性進(jìn)行了選 擇。將PC3細(xì)胞皮下植入NOD-SCID雄性小鼠。當(dāng)腫瘤約為IOOmm 3 (η = 9和10 ;平均腫瘤 體積=112. 1± 19. 7mm3)時，將動物隨機(jī)分成兩組。每5天用皮下劑量為20mg/kg體重的 PNG01-185-017-9-2或匹配體積的載體（對照，DMS0)處理動物。每5天測量腫瘤體積和體 重。與LNCaP異種移植物相比，PNG01-185-017-9-2不減小腫瘤，而是稍微減慢PC3異種移 植物的生長（圖19A，B)。與本文所示的先前實(shí)驗(yàn)一致，沒有觀察到毒性，如通過動物行為所 指示和在治療期間體重所測量（圖19C)。
[0251] 實(shí)施例5
[0252] 為了改善185-9-2的遞送，制備BADGE. HCL. H20的甘氨酸酯衍生物（圖20A)。它 是容易水可溶的。將該化合物進(jìn)行基于細(xì)胞的測試，并且觀察到抑制由白介素-6(IL-6)誘 導(dǎo)的AR NTD的反式激活（圖20B，比較泳道2和泳道4)。
[0253] 以下表5包括與所示化合物相關(guān)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
[0254] 表 5
[0255]
[0256]
[0257] 實(shí)施例6
[0258] (R) -BAGE(I)
[0259]
[0260] 將作為在礦物油中的60%分散體的NaH(96mg，2. 40mmol，2. 2當(dāng)量）在氬氣氣氛下 懸浮在無水二甲基甲酰胺（5mL)中。將混合物冷卻至0°C，并加入雙酸A(250mg, I. 09mmol, 1 當(dāng)量）。在15分鐘后，通過注射器加入（R)-表氯醇（214 μ L, 2. 73mmol，2. 5當(dāng)量，99 % ee)， 并使得混合物在室溫反應(yīng)7小時。然后，將溶液用去離子水（~3mL)猝滅，將混合物用乙 酸乙酯（3x 3mL)萃取。將有機(jī)層用去離子水（2mL)洗滌，通過無水硫酸鎂干燥，過濾并減 壓濃縮。將獲得的殘余物通過快速柱色譜法在硅膠上純化（洗脫劑：二氯甲烷和在二氯甲 烷中的2 %甲醇）以提供作為白色泡沫殘余物的（R) -BAGE (67mg，22 % )。
[0261] 1H NMR (400MHz，DMS0-d6) : δ 9. 13 (s，1H)，7. 09 (d，J = 8. 8, 2H)，6. 97 (d，J =8. 4, 2H) , 6. 83 (d, J = 8. 8, 2H) , 6. 63 (d, J = 8. 8, 2H) , 4. 25 (dd, J = 11.2,2.8, 1H), 3. 78 (dd, J= 11. 2, 6. 4, 1H), 3. 29 (m, 1H), 2. 82 (t, J = 4. 8, 1H), 2. 68 (dd, J =4.8,2.4，lH)，1.54(s，6H)。13C 匪R(100MHz，DMS0-d6):Sl56.5，155.6，143.8，141.3 ，128. 0, 127. 9, 115. 2, 114. 4, 69. 5, 50. 4, 44. 4, 41. 7, 31. 4. TLC (在二氯甲烷中的 5 % 甲 醇），Rf:0.45(UV，對甲氧基苯甲醛）。
[0262] (R)-BADGE x H2O (5)
[0263]
[0264] 向（R)_BAGE(13mg，0· 045mmol，1當(dāng)量）在無水二甲基甲酰胺（0· 3mL)中的攪拌溶 液在室溫下加入K2C03(6mg，0· 045mmol，1當(dāng)量）和外消旋縮水甘油（9 μ L，0· 135mmol，3當(dāng) 量）。在60°C攪拌6小時后，將去離子水（0.2mL)加入獲得的橙棕色溶液。將混合物用乙 酸乙酯（3x ImL)萃取。將有機(jī)層用去離子水（2mL)洗滌，通過無水硫酸鎂干燥，過濾，并減 壓濃縮。將獲得的殘余物通過快速柱色譜法在硅膠S印pak 2g上純化（洗脫劑：二氯甲烷 和在二氯甲烷中的5%甲醇）以提供（R)-BADGE X H2O(K). 3mg，63% )，為無色油。
[0265] 1H NMR(400MHz, DMS〇-d6) : δ 7. 08 (dd, J = 8. 0, 5. 2, 4H) , 6. 83 (dd, J =10. 8, 8, 4H) , 4. 89 (d, J = 5. 2, 1H) , 4. 62 (t, J = 5. 6, 1H) , 4. 26 (dd, J =11. 6, 2. 8, 1H) , 3. 93 (dd, J = 9. 6, 4. 0, 1H) , 3. 78 (m, 3H) , 3. 42 (t, J = 5. 6, 2H) , 3. 29 (m, 1H) , 2. 82 (t, J = 4. 8, 1H) , 2. 68 (dd, J = 4.8,2.4J = 11. 6, 2. 8, 1H)，I. 57 (s, 6H)。TLC (在二氯甲烷中的 5 % 甲醇），Rf: 0. 36 (UV,對甲氧基苯甲 醛）。
[0266] (R)-BADGE X HI X H2O (6)
[0267]
[0268] 向（R)-BADGE x H20(10mg, 0· 029mmol, 1 當(dāng)量）在乙腈（0· 5mL)中的溶液加入 CeCl3 · 7H20(21mg, (λ 057mmol, 2 當(dāng)量）和 NaI (9mg, (λ 057mmol, 2 當(dāng)量）。在室溫?cái)嚢?6 小 時后，將獲得的黃色懸浮液減壓濃縮。將反應(yīng)混合物用二氯甲烷（2mL)溶解并用氏0(31 〇.5mL)洗滌，將有機(jī)層通過無水MgSO 4干燥，減壓去除溶劑。獲得的殘余物通過快速柱色 譜法在硅膠S印pak 2g上純化（洗脫劑：二氯甲烷和在二氯甲烷中的10%甲醇）以提供 (R)-BADGE X HI X H2O(9mg, 67% )，為無色泡沫。
[0269] 1H NMR (400MHz, DMS〇-d6) : δ 7. 09 (m, 4H) , 6. 8 I (m, 4H) , 5. 5 2 (d, J = 4. 8, 1H), 4. 86 (d, J = 4. 8, 1H), 4. 59 (t, J = 5. 6, 1H), 3. 88 (m, 3H), 3. 75 (m, 3H), 3. 40 (m, 3H ),3. 31 (m, 1H), 1. 57 (s, 6H) 〇13C NMR(100MHz, DMS〇-d6) : δ 157. I, 156. 7, 143. 4, 143. 0, 128. O ，127. 9, 114. 5, 114. 4, 71. 4, 70. 6, 70.1 , 68. 6, 63. 4, 41. 8, 31. 3, 12. 7· TLC(在二氯甲烷中的 5%甲醇），Rf :0. 30 (UV,對甲氧基苯甲醛）。
[0270] 實(shí)施例7
[0271] 外消旋 BADGE (9)
[0272]
[0273] 將圓底燒瓶順序用 NaH(200mg, 4. 80mmol, 2. 2 當(dāng)量）和雙酚 A(500mg, 2. 18mmol, 1 當(dāng)量）填充，將內(nèi)容物置于氬氣氣氛下。通過注射器導(dǎo)入無水二甲基甲酰胺（5mL)，并將獲 得的混合物室溫?cái)嚢琛Ｔ?5分鐘后，通過注射器加入外消旋表氯醇（700 μ L, 8. 96mmol, 4. 1 當(dāng)量），使得混合物在室溫反應(yīng)18小時。然后，將溶液用去離子水（~ImL)猝滅，并將混合 物用乙酸乙酯（3x 4mL)萃取。將有機(jī)層用去離子水（2mL)洗滌，通過無水硫酸鎂干燥，過 濾，并減壓濃縮。將獲得的殘余物通過硅膠快速柱色譜法純化（洗脫劑：二氯甲烷），以提 供外消旋BADGE (536mg，72 % )，為白色泡沫殘余物。
[0274] 1H NMR (400MHz，DMS0-d6) : δ 7. 10 (d，J = 8. 8, 4H)，6. 84 (d，J = 8. 8, 4H), 4. 25 (dd, J =