一種維生素b6衍生物的合成方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于藥品技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種維生素B6衍生物的合成方法。
【背景技術(shù)】
[0002]口服多肽蛋白類藥物主要受兩方面的局限：一是腸胃中的蛋白酶和肽酶極易降解藥物；二是該類藥物一般分子量比較大，并且在小腸上皮細(xì)胞上沒有特定的吸收途徑。針對(duì)上述限制，現(xiàn)階段有處方組成、包囊技術(shù)、大分子復(fù)合以及化學(xué)修飾等方法，用來改善多肽蛋白質(zhì)類藥物口服吸收。這些方法都可以提高口服蛋白藥物的生物利用度，但各有不足。處方組成中的脂肪酸微乳會(huì)改變腸胃黏膜表面的完整性，包囊技術(shù)中的多糖類結(jié)構(gòu)在吸收效率上還有待提高，大分子復(fù)合物以及化學(xué)修飾會(huì)改變多肽蛋白質(zhì)類藥物的分子結(jié)構(gòu)形態(tài)。維生素B6在腸壁內(nèi)有特定的吸收途徑，由于其分子量比較大（135f5Da)，不能通過簡(jiǎn)單的擴(kuò)散作用被腸胃吸收。在腸胃中，維生素B6能與內(nèi)生因子（intrinsic factor, IF)形成復(fù)合物，該復(fù)合物能被在小腸上皮細(xì)胞識(shí)別并吸收。被小腸上皮細(xì)胞吸收后，在血液中，IF會(huì)與維生素B6分離，并釋放維生素B6。因此，可以將維生素B6與多肽類藥物直接或者與納米載體連接，利用其吸收途徑，達(dá)到口服多肽的給藥效果。
[0003]但是與之相應(yīng)的維生素B6衍生物的合成方法還不完善，合成較為困難且合成條件要求較高。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明就是針對(duì)上述問題，提供一種方便合成且合成條件要求低的一種維生素B6衍生物的合成方法。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案。
[0006]一種維生素B6衍生物的合成方法包括下步驟。
[0007](1 )、取0. 6mg維生素B6溶解于5ml DMS0中，在裝有溫度計(jì)、回流冷凝管、干燥管的500mL三頸瓶中加入新制銅粉6. 6g, 0. 103mol，喹啉72mL，N2保護(hù)反應(yīng)加熱至200° C，攪拌3h ;投入4~8倍摩爾當(dāng)量的⑶I ;在30°C下，超聲水浴反應(yīng)半小時(shí)后，加入300ul DIEA及900ul腐胺；在301：下，超聲水浴反應(yīng)2h，加入20ml乙酸乙酯終止反應(yīng)，8000r/min離心5min，去上清；使用氮吹儀吹干沉淀物，得到維生素B6-羰基-腐胺的合成樣品；
(2)、冰浴下將三乙胺1.8mL，12.8mmol緩慢滴入8mL丙酮中，溶液澄清，再加入11. 0g, 3. 2mmol和戊二酸酐1. 37g, 12mmol，使反應(yīng)溫度保持在15oC，攪拌，將樣品溶解在甲醇溶液中，濃度為5mg/ml ;使用娃膠粒徑為5um-10um的玻璃基薄板層析，薄板的娃膠層厚度為3mm ;薄板裁制成5cm*10cm的規(guī)格，置于110°C的烘箱中鼓風(fēng)活化干燥12h ;將45%的正丁醇、30%的異丙醇、25%去離子水按對(duì)應(yīng)的體積比混合均勻，并加入2%的氨水溶液，配制層析液；在30°C下，層析分離lh后，計(jì)算各組分的Rf值；
(3)、將5um-10um的硅膠粉于110°C，高溫活化12h;取45ml正丁醇、30ml異丙醇、25ml60去離子水置于平底燒瓶中混合，洗脫前，加入2%的氨水混合靜置5min，得到硅膠柱層析洗脫液；稱取干燥的合成樣品，溶解于未加入氨水的洗脫液，濃度為10mg/ml ;稱取
3.8g 75um-100um的娃膠粉,加入研缽中，再加入13ml的正丁醇溶液，攪勻并裝入層析柱中，形成lcm*5cm的硅膠層析柱；取1ml樣品上樣，上樣后立即洗脫，因?yàn)榫S生素B6及其衍生物呈現(xiàn)顯著的紅色，所以直接根據(jù)洗脫液的顏色分別收集；洗脫后，收集各分離組分，既得。
[0008]作為一種優(yōu)選方案，取0. 2mg維生素B6溶解于5ml DMS0中，投入6倍摩爾當(dāng)量的CDI ;在301：下，超聲水浴反應(yīng)半小時(shí)后，加入300ul DIEA及900ul腐胺。
[0009]本發(fā)明有益效果：
本發(fā)明建立了維生素B6-羰基-腐胺的合成和檢測(cè)方法，通過羰基唑類化合物活化維生素120 B6的核糖5-0H，再與腐胺反應(yīng)生成維生素B6-羰基-腐胺。通過超聲水浴輔助反應(yīng)進(jìn)行，該反應(yīng)合成所需要的時(shí)間大幅度減少。通過TLC檢測(cè)維生素B6-羰基-腐胺的合成產(chǎn)物，顯示目的產(chǎn)物的灰度值占比超過80%，說明該合成方法可以較好的得到目的產(chǎn)物。最后，通過硅膠柱層析對(duì)合成產(chǎn)物進(jìn)行了分離純化，純化后目的產(chǎn)物在TLC檢測(cè)中的灰度值占比超過95%，說明通過硅膠柱層析成功將維生素B6-羰基-腐胺的合成產(chǎn)物進(jìn)行了分離純化。
【具體實(shí)施方式】
[0010]一種維生素B6衍生物的合成方法包括下步驟。
[0011](1)、取0.6mg維生素B6溶解于5ml DMS0中，在裝有溫度計(jì)、回流冷凝管、干燥管的500mL三頸瓶中加入新制銅粉6. 6g, 0. 103mol，喹啉72mL，N2保護(hù)反應(yīng)加熱至200° C，攪拌3h ;投入4~8倍摩爾當(dāng)量的⑶I ;在30°C下，超聲水浴反應(yīng)半小時(shí)后，加入300ul DIEA及900ul腐胺；在301：下，超聲水浴反應(yīng)2h，加入20ml乙酸乙酯終止反應(yīng)，8000r/min離心5min，去上清；使用氮吹儀吹干沉淀物，得到維生素B6-羰基-腐胺的合成樣品；
(2)、冰浴下將三乙胺1.8mL，12.8mmol緩慢滴入8mL丙酮中，溶液澄清，再加入
11.Og, 3. 2mmol和戊二酸酐1. 37g, 12mmol，使反應(yīng)溫度保持在15oC，攪拌，將樣品溶解在甲醇溶液中，濃度為5mg/ml ;使用娃膠粒徑為5um-10um的玻璃基薄板層析，薄板的娃膠層厚度為3mm ;薄板裁制成5cm*10cm的規(guī)格，置于110°C的烘箱中鼓風(fēng)活化干燥12h ;將45%的正丁醇、30%的異丙醇、25%去離子水按對(duì)應(yīng)的體積比混合均勻，并加入2%的氨水溶液，配制層析液；在30°C下，層析分離lh后，計(jì)算各組分的Rf值；
(3)、將5um-10um的硅膠粉于110°C，高溫活化12h;取45ml正丁醇、30ml異丙醇、25ml60去離子水置于平底燒瓶中混合，洗脫前，加入2%的氨水混合靜置5min，得到硅膠柱層析洗脫液；稱取干燥的合成樣品，溶解于未加入氨水的洗脫液，濃度為10mg/ml ;稱取
3.8g 75um-100um的娃膠粉,加入研缽中，再加入13ml的正丁醇溶液，攪勻并裝入層析柱中，形成lcm*5cm的硅膠層析柱；取1ml樣品上樣，上樣后立即洗脫，因?yàn)榫S生素B6及其衍生物呈現(xiàn)顯著的紅色，所以直接根據(jù)洗脫液的顏色分別收集；洗脫后，收集各分離組分，既得。
[0012]取(λ 2mg維生素B6溶解于5ml DMS0中，投入6倍摩爾當(dāng)量的CDI ;在30°C下，超聲水浴反應(yīng)半小時(shí)后，加入300ul DIEA及900ul腐胺。
[0013]維生素B6分子式為C63H88CoN14014P，對(duì)應(yīng)分子質(zhì)量為135?a ;維生素B6-羰基-腐胺的分子式為C68H98CoN16015P，對(duì)應(yīng)分子質(zhì)量為1469Da。⑶I是咪唑的衍生物，其咪唑結(jié)70構(gòu)中具有一個(gè)閉合的大31鍵，且其中一個(gè)N原子的未成鍵的sp2軌道上有一對(duì)孤對(duì)電子。CDI在與不同官能團(tuán)的反應(yīng)過程中表現(xiàn)出不同的活性，相對(duì)于仲醇，