一種根皮苷衍生物合成方法
【專利說明】-種根皮昔衍生物合成方法 -、技術(shù)領(lǐng)域：
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種生物催化制備根皮巧衍生物的方法，具體設(shè)及一種根皮巧衍生物 合成方法。 二、【背景技術(shù)】：
[0002] 根皮巧是由根皮素和葡萄糖巧結(jié)合而成的一種天然產(chǎn)物，屬于自然界很少存在的 "少數(shù)黃酬"一二氨查爾酬類，其被證實具有多種生物活性，如降血糖、抗氧化、延緩衰老、治 療高尿酸血癥、抑制黑色素和抑菌作用等。
[0003] 黃酬類物質(zhì)對生物體的有效性與其達到生物體活性部位的有效劑量密切相關(guān)。在 生物體內(nèi)，根皮巧會被乳糖-根皮巧水解酶（LPH)水解成為根皮素，降低或者失去其生物 活性，因此，改善或者修飾黃酬類物質(zhì)的結(jié)構(gòu)，是提高其生物利用率的有效途徑。目前黃酬 類物質(zhì)結(jié)構(gòu)修飾的方法有化學(xué)法、微生物法和酶法，化學(xué)催化成本較低，但反應(yīng)位點不易 控制，反應(yīng)副產(chǎn)物較多；微生物法生成的產(chǎn)物不易分離；酶法反應(yīng)條件溫和，且位點選擇性 高，是結(jié)構(gòu)復(fù)雜的黃酬巧類結(jié)構(gòu)修飾的普遍方法。 Ξ、
【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供一種反應(yīng)條件溫和，溫度低，生產(chǎn)能耗小，環(huán)境污染少的根皮巧衍生物 的合成方法。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種根皮巧衍生物合成方法，其特征 在于：所述的合成方法為：根皮巧與酷基供體在脂肪酶Novozym? 435的存在下反應(yīng)得到 根皮巧衍生物；
[0006] 所述的根皮巧衍生物的反應(yīng)式為：
[0007]
陽00引 a為反應(yīng)條件：溶劑丙酬，脂肪酶Novo巧m'K435,47°C真空恒溫攬拌3化~4她；
[0009] R為酷基供體，酷基供體為C17H35COOH，。品iCOOH或C13H27COOH。
[0010] 所述的一種根皮巧衍生物合成方法，其特征在于：所述的具體合成方法為：
[0011] (1)根皮巧、酷基供體、分子篩3A、催化劑和丙酬在反應(yīng)器內(nèi)混合均勻，在45~ 48°C惰性氣體條件下保溫，同時不斷攬拌，反應(yīng)36~4化后終止反應(yīng)；
[0012] (2)然后采用丙酬作為洗脫劑將反應(yīng)物洗脫入離屯、管中離屯、，將所有的反應(yīng)產(chǎn)物 洗脫干凈，收集上清液，將收集的上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，并稱量旋干后的粗產(chǎn)物，采用硅膠 柱層析，合并含根皮巧衍生物的流份；
[001引做將合并的含根皮巧衍生物的流份真空濃縮，干燥，得產(chǎn)品。
[0014] 步驟1)中催化劑是脂肪酶Novo巧mK' 435,濃度0. 17~0. 26g/mL;
[0015] 根皮巧純度> 98 %，反應(yīng)體系中根皮巧的濃度0. 071~0.Ig/mL;
[0016] 攬拌W100~12化/min的速度進行。
[0017] 步驟似中硅膠柱層析方法為：采用干法上樣，W丙酬-甲苯為洗脫劑進行4次梯 度洗脫，4次洗脫劑體積比比例為1:6、30:75、1:1、2:3，全程TLC板檢測。
[0018] 步驟（3)中真空濃縮溫度為55~60°C，真空度為-0. 09MPa;
[0019] 干燥方法為：將濃縮物放在真空干燥箱中，在溫度55~60°C下真空干燥到產(chǎn)品恒 重。
[0020] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點和效果： W21] 本發(fā)明采用酶法合成6" -0-豆違酸根皮巧醋、6" -0-硬脂酸根皮巧醋、6" -0-軟脂酸根皮巧醋，確定了酶法合成的工藝路線和條件，產(chǎn)品質(zhì)量符合產(chǎn)品質(zhì)量控制 標(biāo)準(zhǔn)。
[0022] 本發(fā)明采用硅膠柱層析對反應(yīng)產(chǎn)物中6" -0-豆違酸根皮巧醋、6" -0-硬脂酸根 皮巧醋、6" -0-軟脂酸根皮巧醋進行分離純化，確定了洗脫劑組成等條件對分離效果的影 響，分離出純度高的根皮巧衍生物。 四、【具體實施方式】：
[0023] 一種根皮巧衍生物合成方法為：根皮巧與酷基供體在脂肪酶Novozym'w435的 存在下反應(yīng)得到根皮巧衍生物；
[0024] 所述的根皮巧衍生物的反應(yīng)式為： 陽0巧]
[0026] a為反應(yīng)條件：溶劑丙酬，脂肪酶Novo巧nr"· 435,47°C真空恒溫攬拌3化~4她；
[0027] R為酷基供體，酷基供體為C17H35COOH，。品iCOOH或C13H27COOH。
[0028] 所述的具體合成方法為：
[0029] (1)根皮巧、酷基供體、分子篩3A(3A分子篩）、催化劑和丙酬在反應(yīng)器內(nèi)混合均 勻，在45~48°C惰性氣體條件下保溫，同時不斷攬拌，反應(yīng)36~4化后終止反應(yīng)；
[0030] 似然后采用丙酬作為洗脫劑將反應(yīng)物洗脫入離屯、管中離心將所有的反應(yīng)產(chǎn)物 洗脫干凈，收集上清液，將收集的上清液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干，并稱量旋干后的粗產(chǎn)物，采用硅膠 柱層析，合并含根皮巧衍生物的流份；
[0031] (3)將合并的含根皮巧衍生物的流份真空濃縮，干燥，得產(chǎn)品。 陽0巧步驟1)中催化劑是脂肪酶Novozym'K435,濃度0. 17~0. 26g/mL;
[0033] 根皮巧純度> 98 %，反應(yīng)體系中根皮巧的濃度0. 071~0.Ig/mL;
[0034] 攬拌W100~120;r/min的速度進行。
[0035] 步驟（2)中硅膠柱層析方法為：采用干法上樣，W丙酬-甲苯為洗脫劑進行4次梯 度洗脫，4次洗脫劑體積比比例為1:6、30:75、1:1、2:3，全程TLC板檢測。
[0036] 步驟（3)中真空濃縮溫度為55~60°C，真空度為-0. 09MPa;
[0037] 干燥方法為：將濃縮物放在真空干燥箱中，在溫度55~60°C下真空干燥到產(chǎn)品恒 重。
[003引為了便于理解本發(fā)明，特列舉W下實施例。 陽0例 實施例1
[0040] 取純度為98 %的根皮巧0. 5g，脂肪酶Novozym*· 435 1. 2g，硬脂酸2.llg，分 子篩200mg溶于5血丙酬中，混合均勻后置于恒溫振蕩器內(nèi)（47°C，lOOr/min)，36h后用 薄層層析法判斷反應(yīng)終點，經(jīng)硅膠柱層析得到硬脂酸根皮巧醋化642g產(chǎn)率為82% )。 古醒R(DMS0-de;500MHz) :5 10.62 (s，lH，Ar0H)，9.10 化rS，lH，Ar0H)，7.02 (d，2H，J =8. 0Hz，H-2，H-6)，6. 65(d，2H，J=8. 0Hz，H-3，H-5)，6. 02(s，lH，H-3 ' )，5. 83(s， )，5. 4Ubrs，lH，0H)，5. ：M化rs，2H，20H)，4. 96(d，lH，J=6. 9Hz，H-l")， 4. 28 化rd，lH，J= 11.OHz，H-6a" )，4. 14(dd，lH，J= 10. 4Hz，6. 7Hz，H-6b" )，3. 58 化r t，J= 7.9Hz，H-4")，3.31-3.21(m，細，2XH。，H-2"，H-3"，H-5"，0H)，2.75化rt， 2H，J=6.細z，2XHp)，2. 25(t，2H，J=6. 9Hz，2XH-2" ' )，1.44(m，2H，2XH-3"')， 1.22-1. 14(m，2 細，2(邸2))，0.88(brt，3H，J=6. 9Hz，邸3) ;1化NMR(DMS0-d6;125MHz): δ205. 09 (CO),173. 26 (OCO),165. 85 (C-4 ' ),164. 93 (C-6' ),161. 10 (C-2 ')， 155. 76(C-4)，131. 93(C-1)，129. 55(C-2,C-6)，115. 41 (C-3,C-5)，105. 64(C-1 ')， 101.09(C-1 " )，97.40(C-3 ' ),95.01 (C-5 ' )，76.90(C-3 " )，74.39(C-5 ")， 73. 58(C-2" )，70. 28(C-4" )，63. 52(C-6" )，45. 43(CJ，33. 87(C-2" ' )，31.77(Cp)， 29. 42,29. 35,29. 13 (C-4" '，C-5" '，C-6" '，C-7" '，C-8" '，C-9" '，C-10"'， C-n" '，C-12" '，C-13" '，C-14" '，C-15" '，C-16" ' )，24.85(C-3"')， 22. 55 (C-17" ' ),14.38 (C-18"')