本發(fā)明涉及藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種多功能藥物載體及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

目前研究表明，單一藥物用于腫瘤治療已不能徹底治療腫瘤，這主要是由于腫瘤細(xì)胞具有一定的調(diào)節(jié)性，臨床長(zhǎng)期給予單一的藥物，致使腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐受性，導(dǎo)致藥物失去腫瘤治療作用，特別是單純的化學(xué)療法中，普遍存在多藥耐藥的確定。聯(lián)合用藥可以有效防止腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)耐藥性，提高藥物的治療作用。

聯(lián)合用藥的關(guān)鍵手段就是設(shè)計(jì)藥物聯(lián)合遞釋系統(tǒng)，目前藥物載體的功能性比較單一，雖然許多載體同時(shí)具備觸發(fā)釋藥和促進(jìn)細(xì)胞攝取的雙重功能，但是只能單載藥物，不能滿足高效性的協(xié)同藥物的裝載需求。而目前少數(shù)能夠雙載藥物的載體或缺乏觸發(fā)釋藥的功能，或無(wú)法實(shí)現(xiàn)促進(jìn)細(xì)胞攝取。這限制了協(xié)同藥物的有效使用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

基于此，本發(fā)明的目的是提供一種可雙載藥物、促進(jìn)細(xì)胞攝取和觸發(fā)藥物釋放的多功能藥物載體。

具體的技術(shù)方案如下：

一種多功能藥物載體，包括質(zhì)量比為1:1.5-2.5的介孔二氧化硅納米粒和脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體包括卵磷脂、膽固醇和1,5-十八烷基-L-谷氨酸-2-組氨酸-六氫苯酐。

在其中一些實(shí)施例中，所述脂質(zhì)體包括質(zhì)量比為1-1.5:3.5-4:1的1,5-十八烷基-L-谷氨酸-2-組氨酸-六氫苯酐：卵磷脂：膽固醇。

在其中一些實(shí)施例中，所述脂質(zhì)體為質(zhì)量比為1.25:3.75:1的1,5-十八烷基-L-谷氨酸-2-組氨酸-六氫苯酐：卵磷脂：膽固醇。

在其中一些實(shí)施例中，所述介孔二氧化硅納米粒為氨基功能化的介孔二氧化硅納米粒，粒徑為80-100nm。

本發(fā)明的另一目的是提供上述多功能藥物載體的制備方法。

具體的技術(shù)方案如下：

上述多功能藥物載體的制備方法，包括如下步驟：

將卵磷脂、膽固醇和1,5-十八烷基-L-谷氨酸-2-組氨酸-六氫苯酐溶于有機(jī)溶劑，于35-45℃真空旋轉(zhuǎn)成膜，干燥得脂質(zhì)膜；

將所述介孔二氧化硅納米粒分散于水中，于35-40℃與所述脂質(zhì)膜水合反應(yīng)15-30min；

離心收集產(chǎn)物，洗滌即得所述多功能藥物載體。

本發(fā)明的另一目的是提供一種雙載藥物。

具體的技術(shù)方案如下：

一種雙載藥物，包括上述多功能藥物載體、疏水藥物以及親水藥物。

在其中一些實(shí)施例中，所述疏水藥物與所述多功能藥物載體的質(zhì)量比為1:80-120；所述親水藥物與所述多功能藥物載體的質(zhì)量比為1-1.5:80-120。

在其中一些實(shí)施例中，所述疏水藥物選自生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)(BCS)中II類和生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)(BCS)中Ⅳ類中的一種或幾種；所述親水藥物選自：生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)(BCS)中Ⅰ類和生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)(BCS)中Ⅲ類中的一種或幾種。

分類系統(tǒng)BCS中Ⅰ類和生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)BCS中Ⅲ類中的一種或幾種。

本發(fā)明的另一目的是提供上述雙載藥物的制備方法。

具體的技術(shù)方案如下：

上述雙載藥物的制備方法，包括如下步驟：

將疏水藥物、卵磷脂、膽固醇和1.5-十八烷基-L-谷氨酸-組氨酸-六氫苯酐溶于有機(jī)溶劑，于35-40℃真空旋轉(zhuǎn)成膜，干燥得裝載疏水藥物的脂質(zhì)膜；

將介孔二氧化硅納米粒分散于親水藥物的水溶液中，共孵育22-26h,離心收集產(chǎn)物，洗滌即得裝載親水藥物的介孔二氧化硅納米粒；

將所述裝載親水藥物的介孔二氧化硅納米粒分散于水中，于35-40℃與所述裝載疏水藥物的脂質(zhì)膜水合反應(yīng)15-30min；

離心收集產(chǎn)物，洗滌即得雙載藥物。

上述多功能藥物載體采用正電的氨基功能化的介孔二氧化硅納米粒為內(nèi)核，采用具有pH敏感電荷翻轉(zhuǎn)的脂質(zhì)體作為外殼。在中性條件下，通過(guò)靜電吸附方式將脂質(zhì)體包覆至氨基功能化的介孔二氧化硅納米球表面，構(gòu)建多功能藥物載體。在中性條件下，由于表層脂質(zhì)雙層緊密包覆在氨基功能化的介孔二氧化硅納米球表面，該載體呈穩(wěn)定“核殼”結(jié)構(gòu)的負(fù)電納米球，其中脂質(zhì)雙層和介孔均可載藥；而在腫瘤組織的弱酸性條件下，載體外層的脂質(zhì)雙層發(fā)生電荷翻轉(zhuǎn)，由負(fù)電變正電，增加與負(fù)電細(xì)胞膜的吸附，達(dá)到促進(jìn)細(xì)胞攝取的目的；在細(xì)胞內(nèi)的強(qiáng)酸性條件下，外層脂質(zhì)雙層正電化加強(qiáng)，與內(nèi)核氨基功能化的介孔二氧化硅納米球產(chǎn)生強(qiáng)的靜電排斥，破壞脂質(zhì)雙層和載體的穩(wěn)定結(jié)構(gòu)，從而觸發(fā)藥物的釋放。

上述多功能藥物載體集雙載、促進(jìn)細(xì)胞攝取和觸發(fā)釋藥三重功能于一體，且不受細(xì)胞異質(zhì)性限制，具有廣泛適用性，為協(xié)同藥物的有效應(yīng)用提供一個(gè)高效的載體平臺(tái)。

附圖說(shuō)明

圖1為實(shí)施例多功能藥物載體的TEM照片和Cryo-TEM照片；

圖2為多功能藥物載體在不同pH緩沖鹽中電荷翻轉(zhuǎn)；

圖3為在不同pH環(huán)境中細(xì)胞對(duì)載體中Si元素的攝??；

圖4為多功能藥物載體在不同pH環(huán)境中能量共振轉(zhuǎn)移；

圖5為在不同pH下，細(xì)胞對(duì)載體中erlotinib(左)和DOX(右)的攝?。?/p>

圖6為在不同pH條件下，載體中erlotinib(左)和DOX(右)的釋放。

具體實(shí)施方式

為了便于理解本發(fā)明，下面將參照相關(guān)附圖對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更全面的描述。但是，本發(fā)明可以以許多不同的形式來(lái)實(shí)現(xiàn)，并不限于本文所描述的實(shí)施例。相反地，提供這些實(shí)施例的目的是使對(duì)本發(fā)明的公開(kāi)內(nèi)容的理解更加透徹全面。

除非另有定義，本文所使用的所有的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)與屬于本發(fā)明的技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員通常理解的含義相同。本文中在本發(fā)明的說(shuō)明書中所使用的術(shù)語(yǔ)只是為了描述具體的實(shí)施例的目的，不是旨在于限制本發(fā)明。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“和/或”包括一個(gè)或多個(gè)相關(guān)的所列項(xiàng)目的任意的和所有的組合。

實(shí)施例1

本實(shí)施例一種多功能藥物載體，包括質(zhì)量比為1:2的介孔二氧化硅納米粒(Amino functionalized mesoporous silica nanoparticle,MSN-NH₂，80-100nm)和脂質(zhì)體，所述脂質(zhì)體為質(zhì)量比為1.25:3.75:1的1,5-十八烷基-L-谷氨酸-2-組氨酸-六氫苯酐(1,5-dioctadecyl-L-glutamyl-2-histidyl-hexahydrobenzoic acid，HHG₂C₁₈)：大豆卵磷脂(Soy Phosphatidylcholine,SPC)：膽固醇(Cholesterol，Chol)。

所述介孔二氧化硅納米粒為氨基功能化的介孔二氧化硅納米粒，粒徑為80-100nm。

上述多功能藥物載體的制備方法，包括如下步驟：

將120mg質(zhì)量比為3.75:1:1.25的卵磷脂、膽固醇和1,5-十八烷基-L-谷氨酸-2-組氨酸-六氫苯酐溶于5ml氯仿中，移入茄型瓶，于40℃真空旋轉(zhuǎn)成膜，真空干燥4h，得脂質(zhì)膜(pH敏感電荷翻轉(zhuǎn)脂質(zhì)膜)；

將60mg所述介孔二氧化硅納米粒分散于5ml純凈水中，于37℃與所述脂質(zhì)膜水合反應(yīng)15-30min；

離心收集產(chǎn)物，純凈水洗滌多次，收集沉淀即得所述多功能藥物載體。

上述多功能藥物載體性能實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：

(1)藥物雙載性能

多功能藥物載體電鏡圖1所示，載體呈“核殼”結(jié)構(gòu)納米球，內(nèi)核為MSN-NH₂，作為一種藥物負(fù)載點(diǎn)；外殼為脂質(zhì)雙層，為另一個(gè)藥物負(fù)載點(diǎn)，用于裝載疏水性藥物。

(2)電荷翻轉(zhuǎn)，促進(jìn)細(xì)胞攝取性能

載體pH敏感電荷翻轉(zhuǎn)功能如圖2所示。pH 7.4時(shí)，表面電位呈負(fù)電，約-38mV；pH 6.5時(shí)，表面電位翻轉(zhuǎn)成正電，約4.5mv；在更強(qiáng)酸性條件下(pH 4.5/5.5),表面電位正電化增強(qiáng)(22mv)。發(fā)生電荷翻轉(zhuǎn)的原因是載體中的HHG₂C₁₈發(fā)生水解，在中性環(huán)境中，HHG₂C₁₈呈負(fù)電，在pH 6.5酸性環(huán)境中，由于HHG₂C₁₈中組氨酸和羧基的質(zhì)子化，使得載體呈正電，當(dāng)在pH 5.5酸性更強(qiáng)的環(huán)境中時(shí)，除了氨基質(zhì)子化之外，六氫苯酐基團(tuán)的脫落使得載體正電性更強(qiáng)，當(dāng)pH繼續(xù)降至4.5時(shí)，電位與pH 5.5時(shí)基本一樣，這可能因?yàn)镠HG₂C₁₈中氨基質(zhì)子化和六氫苯酐基團(tuán)的脫落達(dá)到飽和狀態(tài)。

圖3表明電荷翻轉(zhuǎn)促進(jìn)細(xì)胞攝取，以細(xì)胞對(duì)載體的成分Si元素的攝取量進(jìn)行評(píng)估。在pH 6.5酸性條件下，由于載體發(fā)生電荷翻轉(zhuǎn)，由負(fù)電變正電，因此更容易與負(fù)電細(xì)胞膜吸附，從而促進(jìn)細(xì)胞攝取，圖中結(jié)果表明，在pH 6.5條件下細(xì)胞攝取量比pH 7.4中性條件下顯著增多。

(3)靜電排斥促進(jìn)釋藥性能

圖4表在明pH 5.5和pH 4.5時(shí)，載體正電化脂質(zhì)雙層與內(nèi)核MSN-NH2之間的靜電排斥擾動(dòng)載體穩(wěn)定“核殼”結(jié)構(gòu)，有利于促進(jìn)包封藥物釋放。

實(shí)施例2

一種雙載藥物，包括實(shí)施例1制備得到的多功能藥物載體、疏水藥物(埃羅替尼erlotinib)以及親水藥物(鹽酸阿霉素DOX)。

上述雙載藥物的制備方法，包括如下步驟：

將120mg質(zhì)量比為3.75:1:1.25的卵磷脂、膽固醇、1.5-十八烷基-L-谷氨酸-2-組氨酸-六氫苯酐和1mg erlotinib溶于5mL氯仿中，移入茄形瓶，于40℃真空旋轉(zhuǎn)成膜，真空干燥4h，得裝載erlotinib的脂質(zhì)膜(pH敏感電荷翻轉(zhuǎn)脂質(zhì)膜)；

將60mg介孔二氧化硅納米粒分散于DOX的水溶液中，共孵育24h，離心收集產(chǎn)物，洗滌即得裝載DOX的介孔二氧化硅納米粒；

將所述裝載DOX的介孔二氧化硅納米粒分散于水中，與37℃與所述裝載erlotinib的脂質(zhì)膜水合反應(yīng)15-30min；

離心收集產(chǎn)物，純凈水洗滌數(shù)次，收集沉淀即得雙載erlotinib和DOX的多功能藥物遞送系統(tǒng)。

上述雙載藥物的性能數(shù)據(jù)：

(1)雙載性能

以疏水藥物埃羅替尼(erlotinib)和親水藥物鹽酸阿霉素(DOX)為藥物，分別包封至載體外層脂質(zhì)雙層和內(nèi)核MSN-NH2中，達(dá)到雙載藥物目的。

(2)電荷翻轉(zhuǎn)促進(jìn)細(xì)胞攝取性能

載體在pH 6.5弱酸性條件下產(chǎn)生電荷翻轉(zhuǎn)促進(jìn)細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖5所示。在pH 6.5弱酸性條件在，由于載體表面電荷翻轉(zhuǎn)，促進(jìn)細(xì)胞攝取，所以細(xì)胞對(duì)藥物的攝取量比pH 7.4中性條件的攝取量大。

(3)靜電排斥促進(jìn)包載藥物釋放性能

載體外層脂質(zhì)雙層和內(nèi)核MSN-NH2之間靜電排斥促進(jìn)釋藥的實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖6所示。從圖中可知在pH 5.5和pH 4.5強(qiáng)酸性條件下，由于脂質(zhì)雙層與MSN-NH2之間強(qiáng)的排斥力破壞載體穩(wěn)定結(jié)果，從而增加藥物的釋放量。在pH 7.4中性條件下，由于載體呈穩(wěn)固的核殼結(jié)果，因此有限減少藥物的釋放。

以上所述實(shí)施例的各技術(shù)特征可以進(jìn)行任意的組合，為使描述簡(jiǎn)潔，未對(duì)上述實(shí)施例中的各個(gè)技術(shù)特征所有可能的組合都進(jìn)行描述，然而，只要這些技術(shù)特征的組合不存在矛盾，都應(yīng)當(dāng)認(rèn)為是本說(shuō)明書記載的范圍。

以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。