本發(fā)明屬于醫(yī)藥與納米材料領(lǐng)域，尤其是涉及一種具有光熱效應(yīng)的納米介孔顆粒藥物載體及其制備方法。

背景技術(shù)：
：

目前，癌癥是威脅人類生命和健康的重大疾病之一，癌癥高發(fā)病率是全世界面臨的重大困擾。臨床上，癌癥的治療方法包括外科手術(shù)、放射治療、藥物化療、熱療等。其中，藥物化療是癌癥治療中的常用手段，但是許多化療藥物存在著在體內(nèi)運(yùn)輸易被降解和清除、藥物選擇性差、難以特異性的到達(dá)癌細(xì)胞；多數(shù)化療藥物都具有很大的毒性，容易對(duì)正常細(xì)胞造成很大毒副作用。因此，利用納米藥物載體輸送抗癌藥物是最有有效的途徑之一。

癌癥發(fā)病機(jī)理極為復(fù)雜，癌細(xì)胞普遍具有多藥耐藥性，單一的藥物化療方法難以得到良好的治療效果。利用納米技術(shù)，將藥物化療和其他的癌癥治療方法同時(shí)應(yīng)用于同一腫瘤部位，實(shí)現(xiàn)兩種或多種治療技術(shù)的協(xié)同作用，有望獲得良好的治療效果。

熱療作為一種有效的癌癥治療方法已經(jīng)被廣泛接受。醫(yī)學(xué)研究表明，由于腫瘤細(xì)胞是滅氧細(xì)胞，對(duì)熱敏感性比正常細(xì)胞或組織強(qiáng)，當(dāng)溫度在43℃以上并持續(xù)一定時(shí)間后，腫瘤細(xì)胞就會(huì)受阻，解體，以至死亡。然而人體正常細(xì)胞或組織在體溫升高的情況下，由于機(jī)體的調(diào)節(jié)作用，保證在體溫升高時(shí)，甚至在達(dá)到43℃以上時(shí)，組織損傷不大，且能夠修復(fù)。相關(guān)的研究結(jié)果也證實(shí)，熱療能夠促進(jìn)阿霉素、順鉑等抗癌藥物的活性而提高藥物化療效果。其中，光熱療就是利用具有較高光熱轉(zhuǎn)換效率的材料（如納米金棒，碳量子點(diǎn)，石墨烯，硫化銅等），將其聚集在腫瘤組織附近，并在外部光源（一般是近紅外光）的照射下將光能轉(zhuǎn)化為熱能來(lái)殺死癌細(xì)胞的一種治療方法。光熱療法治療時(shí)間短，治療效果明顯且副作用小。因此，利用具有光熱效應(yīng)的納米藥物載體可將藥物化療和光熱療相結(jié)合，將有助于提高癌癥的治療效果，是重要的癌癥協(xié)同治療途徑之一。

介孔氧化硅納米顆粒（MSN）是一種新型的納米多孔材料，由于其高的比表面積和孔容、均一可調(diào)的介孔孔道，可以高含量?jī)?chǔ)藏抗癌藥物；MSN具有無(wú)毒性，生物相容性，熱、化學(xué)穩(wěn)定性，能夠被各種細(xì)胞攝取；MSN孔道表面豐富的Si-OH基團(tuán)使得其易于各種功能基團(tuán)修飾，實(shí)現(xiàn)藥物緩控釋、靶向輸送等特性。石墨烯具有近紅外光吸收強(qiáng)、光熱轉(zhuǎn)換效率高、導(dǎo)熱性能好、生物毒性低等優(yōu)點(diǎn)，氧化的石墨烯量子點(diǎn)（graphene quantum dots, GQDs）具有豐富的羧基、羥基、環(huán)氧基團(tuán)，使得GQDs很容易修飾MSN，得到GQDs復(fù)合MSN的納米顆粒（MSN/GQDs）。因此，MSN/GQDs納米復(fù)合顆?？梢詫?shí)現(xiàn)抗癌藥物的高效輸送協(xié)同光熱作用。但是，如何設(shè)計(jì)制備MSN/GQDs納米復(fù)合介孔顆粒載體成為獲得抗癌藥物高效輸送協(xié)同光熱治療的關(guān)鍵。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
：

本發(fā)明的目的是提供一種具有光熱效應(yīng)的納米介孔顆粒藥物載體及其制備方法，同時(shí)滿足藥物化療和光熱治療功能。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：以十六烷基的表面活性劑為結(jié)構(gòu)導(dǎo)向劑和正硅酸乙酯為硅源，通過(guò)溶膠凝膠自組裝過(guò)程制備得到粒徑、孔徑可調(diào)控的MSN納米顆粒；經(jīng)氨基功能基團(tuán)修飾后，抗癌藥物高含量?jī)?chǔ)藏在MSN的介孔孔道；然后，通過(guò)離子間、靜電或氫鍵作用將GQDs吸附在MSN納米顆粒表面，得到兼具可高效輸送抗癌藥物和光熱效應(yīng)的納米介孔顆粒藥物載體。納米藥物載體的顆粒粒徑為20~200納米，包括MSN納米顆粒和吸附在MSN納米顆粒表面的GQDs，MSN納米顆粒的介孔孔徑為2~10納米，介孔孔道為樹(shù)枝狀分布?？蓪?shí)現(xiàn)藥物化療協(xié)同光熱治療的癌癥治療。

可高效輸送抗癌藥物和光熱效應(yīng)的納米介孔顆粒藥物載體的制備方法具體步驟如下：

步驟一，將表面活性劑和助溶劑三乙醇胺完全溶解于80oC的水中，接著緩慢加入硅源并快速攪拌1~4小時(shí)，離心分離得到白色膠體顆粒，用乙醇洗滌多次后干燥，干燥后的產(chǎn)物煅燒除去有機(jī)模板，得到納米介孔氧化硅顆粒，各反應(yīng)物的摩爾比為：1~5表面活性劑:10~50硅源:1~10助溶劑:2000~6000水；

步驟二，將步驟一中得到的納米介孔氧化硅顆粒和氨基硅烷偶聯(lián)劑以1g/0.2ml~1g/2ml的比例加入到無(wú)水甲苯中，在隔絕空氣的條件下120oC攪拌12－48小時(shí)，過(guò)濾、甲苯洗滌、無(wú)水乙醇洗滌、干燥，得到氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒；

步驟三，先將鹽酸阿霉素（DOX）和磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4)配制治療癌癥的化療藥物溶液，接著將步驟二制備得到的氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒加入到上述制備的化療藥物溶液中，然后將上述混合液在避光的振蕩器室溫?fù)u晃24小時(shí)后離心分離，PBS洗滌，得到儲(chǔ)藏鹽酸阿霉素藥物（DOX）的納米介孔氧化硅顆粒；

步驟四，在1毫克/毫升的氧化石墨烯量子點(diǎn)水溶液中加入2.8毫摩爾/升的1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）和N-羥基丁二酰亞胺（NHS）溶液進(jìn)行活化處理1小時(shí)，其中氧化石墨烯量子點(diǎn)、EDC和NHS的體積比為200：65：13；將氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒分散在MES溶液（嗎啉乙磺酸-水合物, pH5.5），然后加入到活化過(guò)的氧化石墨烯量子點(diǎn)溶液中反應(yīng)12~36小時(shí)，氧化石墨烯量子點(diǎn)和氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒的質(zhì)量比為1~20：10；采用高速離心收集膠體顆粒，用去離子水洗滌后冷凍干燥得到納米介孔氧化硅顆粒復(fù)合氧化石墨烯量子點(diǎn)的納米介孔顆粒藥物載體，并在4℃下保存。

上述步驟一中的表面活性劑可為十六烷基三甲基對(duì)甲苯磺酸銨、十六烷基三乙基對(duì)甲苯磺酸銨、十六烷基三甲基鹵化銨、十六烷基三乙基鹵化銨中的任意一種；

步驟二中的氨基硅烷偶聯(lián)劑為γ-氨丙基三甲氧基硅烷、γ-氨丙基三乙氧基硅烷、N-β(氨乙基)-γ-氨丙基三甲氧基硅烷、N-β(氨乙基)-γ-氨丙基三乙氧基硅烷、氨乙基氨乙基氨丙基三甲氧基硅烷、氨乙基氨乙基氨丙基三乙氧基硅烷中的任意一種。

本發(fā)明的有益效果是：

1. 抗癌藥物pH響應(yīng)控制釋放。

本發(fā)明所提供的具有光熱效應(yīng)的納米介孔顆粒藥物載體介孔孔徑為2~10納米，適合化療藥物在介孔孔道中儲(chǔ)藏；并且氧化石墨烯量子點(diǎn)包封介孔孔道，在pH7.4時(shí)包封效果好，儲(chǔ)藏的抗癌藥物不易泄露；而在pH4.5-6.0時(shí)，氧化石墨烯量子點(diǎn)可從納米介孔顆粒脫落，使儲(chǔ)藏的抗癌藥物易于從介孔孔道中釋放出來(lái)。

2. 良好的光熱效應(yīng)

本發(fā)明所提供的具有光熱效應(yīng)的納米介孔顆粒藥物載體具有良好的光熱效應(yīng)。該納米介孔顆粒藥物載體在808nm近紅外光照射下，非常短時(shí)間內(nèi)控制其升溫至熱療溫度范圍43~50℃，還可以通過(guò)控制該納米介孔顆粒藥物載體的氧化石墨烯量子點(diǎn)包封量以及近紅外光強(qiáng)度來(lái)調(diào)控納米介孔顆粒藥物載體的光熱效應(yīng)。

3. 能夠?qū)崿F(xiàn)藥物化療協(xié)同光熱治療的癌癥治療方法

本發(fā)明以十六烷基的表面活性劑為結(jié)構(gòu)導(dǎo)向劑和正硅酸乙酯為硅源，通過(guò)溶膠凝膠自組裝過(guò)程制備得到光熱效應(yīng)可調(diào)控的納米介孔顆粒藥物載體；經(jīng)氨基修飾后，抗癌藥物高含量?jī)?chǔ)藏在介孔孔道；然后，通過(guò)離子間、靜電或氫鍵作用將氧化石墨烯量子點(diǎn)復(fù)合于納米介孔氧化硅顆粒表面，得到兼具可高效輸送抗癌藥物和光熱效應(yīng)的納米介孔顆粒藥物載體，可實(shí)現(xiàn)藥物化療協(xié)同光熱治療的癌癥治療方法。

下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述。

附圖說(shuō)明：

圖1為本發(fā)明的掃描電鏡(SEM) )圖；

圖2為本發(fā)明的透射電鏡(TEM)圖；

圖3為本發(fā)明制備的納米介孔氧化硅顆粒的氮?dú)馕?脫附等溫線及孔徑分布曲線；

圖4為本發(fā)明制備的納米介孔顆粒藥物載體儲(chǔ)藏阿霉素（DOX）藥物在pH7.4和pH4.5、溫度為37℃和50℃條件下的DOX釋放曲線；

圖5為本發(fā)明的細(xì)胞毒性結(jié)果；

圖6為本發(fā)明水溶液近紅外光照射下的光熱效應(yīng)曲線；

圖7為本發(fā)明藥物化療與光熱療協(xié)同效應(yīng)結(jié)果。

具體實(shí)施方式：

具有光熱效應(yīng)的納米介孔顆粒藥物載體是以十六烷基的表面活性劑為結(jié)構(gòu)導(dǎo)向劑和正硅酸乙酯為硅源，通過(guò)溶膠凝膠自組裝過(guò)程制備得到粒徑、孔徑可調(diào)控的MSN納米顆粒；經(jīng)氨基功能基團(tuán)修飾后，抗癌藥物高含量?jī)?chǔ)藏在MSN的介孔孔道；然后，通過(guò)離子間、靜電或氫鍵作用將GQDs吸附在MSN納米顆粒表面，得到兼具可高效輸送抗癌藥物和光熱效應(yīng)的納米介孔顆粒藥物載體。納米藥物載體的顆粒粒徑為20~200納米，包括MSN納米顆粒和吸附在MSN納米顆粒表面的GQDs，MSN納米顆粒的介孔孔徑為2~10納米，介孔孔道為樹(shù)枝狀分布?？蓪?shí)現(xiàn)藥物化療協(xié)同光熱治療的癌癥治療。

可高效輸送抗癌藥物和光熱效應(yīng)的納米介孔顆粒藥物載體的制備方法具體步驟如下：

步驟一，將表面活性劑和助溶劑三乙醇胺完全溶解于80℃的水中，接著緩慢加入硅源并快速攪拌1~4小時(shí)，離心分離得到白色膠體顆粒，用乙醇洗滌多次后干燥，干燥后的產(chǎn)物煅燒除去有機(jī)模板，得到納米介孔氧化硅顆粒，各反應(yīng)物的摩爾比為：1~5表面活性劑：10~50硅源：1~10助溶劑:2000~6000水；

步驟二，將步驟一中得到的納米介孔氧化硅顆粒和氨基硅烷偶聯(lián)劑以1g/0.2ml~1g/2ml的比例加入到無(wú)水甲苯中，在隔絕空氣的條件下120℃攪拌12~48小時(shí)，過(guò)濾、甲苯洗滌、無(wú)水乙醇洗滌、干燥，得到氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒；

步驟三，先將鹽酸阿霉素（DOX）和磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4)配制治療癌癥的化療藥物溶液，接著將步驟二制備得到的氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒加入到上述制備的化療藥物溶液中，然后將上述混合液在避光的振蕩器室溫?fù)u晃24小時(shí)后離心分離，PBS洗滌，得到儲(chǔ)藏鹽酸阿霉素藥物（DOX）的納米介孔氧化硅顆粒；

步驟四，在1毫克/毫升的氧化石墨烯量子點(diǎn)水溶液中加入2.8毫摩爾/升的1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽（EDC）和N-羥基丁二酰亞胺（NHS）溶液進(jìn)行活化處理1小時(shí)，其中氧化石墨烯量子點(diǎn)、EDC和NHS的體積比為200：65：13；將氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒分散在MES溶液（嗎啉乙磺酸-水合物, pH5.5），然后加入到活化過(guò)的氧化石墨烯量子點(diǎn)溶液中反應(yīng)12－36小時(shí)，氧化石墨烯量子點(diǎn)和氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒的質(zhì)量比為1~20：10；采用高速離心收集膠體顆粒，用去離子水洗滌后冷凍干燥得到納米介孔氧化硅顆粒復(fù)合氧化石墨烯量子點(diǎn)的納米介孔顆粒藥物載體，并在4℃下保存。

上述步驟一中的表面活性劑可為十六烷基三甲基對(duì)甲苯磺酸銨、十六烷基三乙基對(duì)甲苯磺酸銨、十六烷基三甲基鹵化銨、十六烷基三乙基鹵化銨中的任意一種；

步驟二中的氨基硅烷偶聯(lián)劑為γ-氨丙基三甲氧基硅烷、γ-氨丙基三乙氧基硅烷、N-β(氨乙基)-γ-氨丙基三甲氧基硅烷、N-β(氨乙基)-γ-氨丙基三乙氧基硅烷、氨乙基氨乙基氨丙基三甲氧基硅烷、氨乙基氨乙基氨丙基三乙氧基硅烷中的任意一種。

實(shí)施例1：

本實(shí)施例所提供的納米介孔顆粒藥物載體包括納米介孔氧化硅顆粒和吸附于納米介孔氧化硅顆粒表面的氧化石墨烯量子點(diǎn)。該納米介孔顆粒藥物載體制備方法包括以下步驟：

步驟一，將0.6836克十六烷基三甲基對(duì)甲苯磺酸銨和0.4克三乙醇胺溶于60毫升去離子水中；接著在80℃的反應(yīng)溫度下緩慢加入 4毫升正硅酸乙酯；繼續(xù)快速攪拌2小時(shí)后，離心分離得到白色膠體顆粒，用乙醇洗滌多次后在60℃下真空干燥，干燥后的白色膠體顆粒在650℃下煅燒6h去除表面活性劑，得到納米介孔氧化硅顆粒；

步驟二，將0.5克步驟一得到的納米介孔氧化硅顆粒分散在80毫升甲苯中并在120℃攪拌1小時(shí)，接著將0.75毫升的γ-氨丙基三乙氧基硅烷快速加入并繼續(xù)在120℃攪拌24小時(shí)；采用高速離心收集白色膠體顆粒，依次用甲苯和無(wú)水乙醇洗滌白色膠體顆粒，60℃下真空干燥，得到氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒；

步驟三，配制10毫升的0.5毫克/毫升的鹽酸阿霉素（DOX）磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4)溶液。接著取20毫克步驟二制備得到的氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒加入到上述制備的10毫升DOX溶液；然后，上述混合液在避光的振蕩器室溫?fù)u晃24小時(shí)后離心分離，PBS洗滌，得到儲(chǔ)藏DOX藥物的納米介孔氧化硅顆粒。

步驟四，20毫升氧化石墨烯量子點(diǎn)水溶液（1毫克/毫升）中分別加入2.8毫摩爾/升的650微升EDC和130微升NHS進(jìn)行活化處理1小時(shí)；接著將20毫克氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒分散于20毫升的MES溶液（pH5.5），然后加入到活化過(guò)的氧化石墨烯量子點(diǎn)溶液中反應(yīng)24小時(shí)；采用高速離心收集膠體顆粒，用去離子水洗滌后冷凍干燥得到復(fù)合氧化石墨烯量子點(diǎn)的納米介孔氧化硅顆粒，并在4℃下保存。

取本實(shí)施例制備的納米介孔顆粒藥物載體置于掃描電鏡(SEM)和透射電鏡(TEM)下觀察，結(jié)果如圖1、圖2所示，本實(shí)施例制備的納米介孔顆粒藥物載體呈球形顆粒，顆粒粒徑為50納米左右，粒徑分布均勻，分散性好，介孔孔道為樹(shù)枝狀分布。

將本實(shí)施例制備的納米介孔顆粒進(jìn)行氮?dú)馕?脫附實(shí)驗(yàn)，結(jié)果如圖3所示，為典型的IV型曲線，表明該納米介孔氧化硅顆粒具有介孔特征。根據(jù)該等溫曲線，計(jì)算本實(shí)施例制備的納米介孔顆粒的BET比表面積為586m²/g，采用BJH方法計(jì)算得到納米介孔氧化硅顆粒的平均介孔孔徑為3.0納米。

測(cè)定得到阿霉素的儲(chǔ)藏量為60微克/1毫克納米介孔顆粒載體。與相同實(shí)驗(yàn)條件下，傳統(tǒng)藥物載體對(duì)阿霉素的儲(chǔ)存量（30微克藥物/1毫克藥物載體）相比，本實(shí)施例提供的納米介孔顆粒藥物載體的抗癌藥物儲(chǔ)藏量顯著增加。

將得到的儲(chǔ)藏DOX藥物的納米介孔顆粒在pH值為7.4和4.5的緩沖液中，分別在37℃和50℃下進(jìn)行阿霉素藥物的釋放實(shí)驗(yàn)。釋放藥物濃度在NanoDrop 2000C超微量分光光度計(jì)上測(cè)定，實(shí)驗(yàn)測(cè)定前先測(cè)定阿霉素藥物在溶液中濃度與吸光度的標(biāo)準(zhǔn)曲線。

結(jié)果如圖4所示，在pH7.4時(shí)及37℃和50℃條件下，24小時(shí)內(nèi)都只有7-14%的DOX釋放出來(lái)；而在pH4.5時(shí)，37℃條件下24小時(shí)的釋放達(dá)到49%，50℃條件下24小時(shí)釋放達(dá)到70%。說(shuō)明儲(chǔ)藏阿霉素藥物且復(fù)合氧化石墨烯量子點(diǎn)的納米介孔氧化硅顆粒在進(jìn)入細(xì)胞前較少釋放抗癌藥物，而進(jìn)入細(xì)胞后可以獲得抗癌藥物的較快釋放。

體外細(xì)胞毒性測(cè)定采用標(biāo)準(zhǔn)的Cell Counting Kit-8方法。乳腺癌細(xì)胞株4T1細(xì)胞株購(gòu)買于上海生化細(xì)胞研究所并按提供的方法進(jìn)行培養(yǎng)。具體實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下：將實(shí)施例一制備的納米介孔顆粒藥物載體分散于DMEM培養(yǎng)液并配制成濃度為1毫克/毫升，當(dāng)4T1細(xì)胞播種在96孔板（細(xì)胞密度5000個(gè)/孔）后，將納米介孔顆粒藥物載體懸浮液立刻加到96孔板，最終的納米介孔顆粒藥物載體濃度分別達(dá)到25，50，75，100和200微克/毫升，溶液體積為100微升。納米介孔顆粒藥物載體懸浮液與細(xì)胞共培養(yǎng)24小時(shí)后，每孔中加入10微升的CCK-8溶液，細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)2小時(shí)后用酶標(biāo)儀（ELX800, BioTek）測(cè)定450納米波長(zhǎng)處的吸光度。納米介孔顆粒藥物載體懸浮液處理過(guò)的4T1細(xì)胞的活細(xì)胞與沒(méi)有納米介孔顆粒藥物載體懸浮液處理的4T1細(xì)胞的活細(xì)胞相比的百分?jǐn)?shù)表示為細(xì)胞毒性。結(jié)果如圖5所示，本發(fā)明制備的納米介孔顆粒藥物載體在濃度達(dá)到200微克/毫升仍然沒(méi)有細(xì)胞毒性。

將本發(fā)明制備的納米介孔藥物載體分散于去離子水中得到顆粒濃度為10毫克/毫升，采用紅外光熱成像儀測(cè)定該納米介孔顆粒藥物載體的光熱效應(yīng)。結(jié)果如圖6所示，當(dāng)設(shè)置光源強(qiáng)度為2.5W/cm²，近紅外光波長(zhǎng)808nm，照射距離1厘米，藥物載體溶液（10毫克/毫升）體積為1毫升時(shí)，808nm近紅外光照射5分鐘使得溶液溫度從28℃升溫至49.4℃。說(shuō)明實(shí)施例一制備的納米介孔顆粒藥物載體有很好的光熱效應(yīng)，能夠在較短時(shí)間內(nèi)達(dá)到光熱療的溫度（熱療溫度一般在43~48℃），有利于實(shí)際應(yīng)用。

將本發(fā)明制備的儲(chǔ)藏阿霉素且復(fù)合氧化石墨烯量子點(diǎn)的納米介孔氧化硅顆粒分散于DMEM培養(yǎng)液并配成濃度100微克/毫升。當(dāng)4T1細(xì)胞播種在96孔板（細(xì)胞密度5000個(gè)/孔）后，將純阿霉素溶液、納米介孔顆粒藥物載體和儲(chǔ)藏阿霉素的納米介孔顆粒的懸浮液加到96孔板，溶液體積為100微升；最終純阿霉素溶液含阿霉素6.0微克，納米介孔顆粒藥物載體懸浮液含100微克載體，儲(chǔ)藏阿霉素的納米介孔顆粒懸浮液中含6.0微克阿霉素和100微克納米介孔顆粒。共同培養(yǎng)8小時(shí)后，細(xì)胞洗滌以除去細(xì)胞外剩余的阿霉素和納米介孔顆粒，并重新加入100微升新鮮DMEM培養(yǎng)液。接著，利用紅外光熱成像儀的808nm近紅外光（光源強(qiáng)度為2.5W/cm²，照射距離1厘米）照射細(xì)胞3分鐘，接著繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞4小時(shí)。然后，每孔中加入10微升的CCK-8溶液，細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)2小時(shí)后用酶標(biāo)儀（ELX800, BioTek）測(cè)定細(xì)胞的細(xì)胞活性。結(jié)果如圖7所示，經(jīng)過(guò)808nm紅外光照射處理后，與儲(chǔ)藏阿霉素的納米介孔顆粒溶液共培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞活性明顯低于與純阿霉素溶液和純納米介孔顆粒藥物載體溶液共培養(yǎng)細(xì)胞的細(xì)胞活性。說(shuō)明實(shí)施例二制備的儲(chǔ)藏阿霉素且復(fù)合氧化石墨烯量子點(diǎn)的納米介孔氧化硅顆粒具有藥物化療和光熱療的協(xié)同作用，提高治療效果。

實(shí)施例二：

本實(shí)施例所提供的納米介孔顆粒藥物載體制備方法包括以下步驟：

步驟一，將0.5466克十六烷基三甲基溴化銨和0.4克三乙醇胺溶于60毫升去離子水中；接著在80 ^oC的反應(yīng)溫度下緩慢加入 5毫升正硅酸乙酯；繼續(xù)快速攪拌2小時(shí)后，離心分離得到白色膠體顆粒，用乙醇洗滌多次后在60^oC下真空干燥，干燥后的白色膠體顆粒在650^oC下煅燒6h去除表面活性劑，得到納米介孔氧化硅顆粒；

步驟二，將0.5克步驟一得到的納米介孔氧化硅顆粒分散在80毫升甲苯中并在120^oC攪拌1小時(shí)，接著將0.75毫升的γ-氨丙基三乙氧基硅烷快速加入并繼續(xù)在120^oC攪拌24小時(shí)；采用高速離心收集白色膠體顆粒，依次用甲苯和無(wú)水乙醇洗滌白色膠體顆粒，60^oC下真空干燥，得到氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒；

步驟三，配制10毫升的0.5毫克/毫升的鹽酸阿霉素（DOX）磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4)溶液。接著取20毫克步驟二制備得到的氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒加入到上述制備的10毫升DOX溶液；然后，上述混合液在避光的振蕩器室溫?fù)u晃24小時(shí)后離心分離，PBS洗滌，得到儲(chǔ)藏DOX藥物的納米介孔氧化硅顆粒。

步驟四，20毫升氧化石墨烯量子點(diǎn)水溶液（1毫克/毫升）中分別加入2.8毫摩爾/升的650微升EDC和130微升NHS進(jìn)行活化處理1小時(shí)；接著將20毫克氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒分散于20毫升的MES溶液（pH5.5），然后加入到活化過(guò)的氧化石墨烯量子點(diǎn)溶液中反應(yīng)24小時(shí)；采用高速離心收集膠體顆粒，用去離子水洗滌后冷凍干燥得到復(fù)合氧化石墨烯量子點(diǎn)的納米介孔氧化硅顆粒，并在4℃下保存。

本實(shí)施例制備的納米介孔顆粒藥物載體呈球形顆粒，顆粒粒徑為100納米左右，粒徑分布均勻，分散性好，介孔孔道為樹(shù)枝狀分布；納米介孔顆粒的BET比表面積為649m²/g，采用BJH方法計(jì)算得到納米介孔氧化硅顆粒的平均介孔孔徑為2.8納米；測(cè)定得到阿霉素的儲(chǔ)藏量為48微克/1毫克納米介孔顆粒載體。

體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示儲(chǔ)藏阿霉素藥物且復(fù)合氧化石墨烯量子點(diǎn)的納米介孔氧化硅顆粒具有pH控釋行為，即在pH7.4時(shí)及37^oC和50^oC條件下，24小時(shí)內(nèi)都只有4-9%的DOX釋放出來(lái)；而在pH4.5時(shí)，37^oC條件下24小時(shí)的釋放達(dá)到44%，50^oC條件下24小時(shí)釋放達(dá)到64%。

光熱效應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：當(dāng)設(shè)置光源強(qiáng)度為2.5W/cm²，近紅外光波長(zhǎng)808nm，照射距離1厘米，藥物載體溶液（10毫克/毫升）體積為1毫升時(shí)，808nm近紅外光照射5分鐘使得溶液溫度從28^oC升溫至48.8^oC。

實(shí)施例三：

本實(shí)施例所提供的納米介孔顆粒藥物載體制備方法包括以下步驟：

步驟一，將0.6836克十六烷基三甲基對(duì)甲苯磺酸銨和0.4克三乙醇胺溶于60毫升去離子水中；接著在80 ^oC的反應(yīng)溫度下緩慢加入 4毫升正硅酸乙酯；繼續(xù)快速攪拌2小時(shí)后，離心分離得到白色膠體顆粒，用乙醇洗滌多次后在60^oC下真空干燥，干燥后的白色膠體顆粒在650^oC下煅燒6h去除表面活性劑，得到納米介孔氧化硅顆粒；

步驟二，將0.5克步驟一得到的納米介孔氧化硅顆粒分散在80毫升甲苯中并在120^oC攪拌1小時(shí)，接著將0.5毫升的N-β(氨乙基)-γ-氨丙基三乙氧基硅烷快速加入并繼續(xù)在120^oC攪拌24小時(shí)；采用高速離心收集白色膠體顆粒，依次用甲苯和無(wú)水乙醇洗滌白色膠體顆粒，60^oC下真空干燥，得到氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒；

步驟三，配制10毫升的0.5毫克/毫升的鹽酸阿霉素（DOX）磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4)溶液。接著取20毫克步驟二制備得到的氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒加入到上述制備的10毫升DOX溶液；然后，上述混合液在避光的振蕩器室溫?fù)u晃24小時(shí)后離心分離，PBS洗滌，得到儲(chǔ)藏DOX藥物的納米介孔氧化硅顆粒。

步驟四，20毫升氧化石墨烯量子點(diǎn)水溶液（1毫克/毫升）中分別加入2.8毫摩爾/升的650微升EDC和130微升NHS進(jìn)行活化處理1小時(shí)；接著將20毫克氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒分散于20毫升的MES溶液（pH5.5），然后加入到活化過(guò)的氧化石墨烯量子點(diǎn)溶液中反應(yīng)24小時(shí)；采用高速離心收集膠體顆粒，用去離子水洗滌后冷凍干燥得到復(fù)合氧化石墨烯量子點(diǎn)的納米介孔氧化硅顆粒，并在4℃下保存。

本實(shí)施例制備的納米介孔顆粒藥物載體呈球形顆粒，顆粒粒徑為50納米左右，粒徑分布均勻，分散性好，介孔孔道為樹(shù)枝狀分布；納米介孔顆粒的BET比表面積為586m²/g，采用BJH方法計(jì)算得到納米介孔氧化硅顆粒的平均介孔孔徑為3.0納米；測(cè)定得到阿霉素的儲(chǔ)藏量為53微克/1毫克納米介孔顆粒載體。

體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示儲(chǔ)藏阿霉素藥物且復(fù)合氧化石墨烯量子點(diǎn)的納米介孔氧化硅顆粒具有pH控釋行為，即在pH7.4時(shí)及37℃和50^oC條件下，24小時(shí)內(nèi)都只有3~10%的DOX釋放出來(lái)；而在pH4.5時(shí)，37℃條件下24小時(shí)的釋放達(dá)到44%，50℃條件下24小時(shí)釋放達(dá)到53%。

光熱效應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：當(dāng)設(shè)置光源強(qiáng)度為2.5W/cm²，近紅外光波長(zhǎng)808nm，照射距離1厘米，藥物載體溶液（10毫克/毫升）體積為1毫升時(shí)，808nm近紅外光照射5分鐘使得溶液溫度從28℃升溫至55.6℃。

實(shí)施例四：

本實(shí)施例所提供的納米介孔顆粒藥物載體制備方法包括以下步驟：

步驟一，將0.6836克十六烷基三甲基對(duì)甲苯磺酸銨和0.4克三乙醇胺溶于60毫升去離子水中；接著在80 ^oC的反應(yīng)溫度下緩慢加入 4毫升正硅酸乙酯；繼續(xù)快速攪拌2小時(shí)后，離心分離得到白色膠體顆粒，用乙醇洗滌多次后在60℃下真空干燥，干燥后的白色膠體顆粒在650℃下煅燒6h去除表面活性劑，得到納米介孔氧化硅顆粒；

步驟二，將0.5克步驟一得到的納米介孔氧化硅顆粒分散在80毫升甲苯中并在120℃攪拌1小時(shí)，接著將1.5毫升的γ-氨丙基三乙氧基硅烷快速加入并繼續(xù)在120℃攪拌24小時(shí)；采用高速離心收集白色膠體顆粒，依次用甲苯和無(wú)水乙醇洗滌白色膠體顆粒，60℃下真空干燥，得到氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒；

步驟三，配制10毫升的0.5毫克/毫升的鹽酸阿霉素（DOX）磷酸鹽緩沖液（PBS，pH7.4)溶液。接著取20毫克步驟二制備得到的氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒加入到上述制備的10毫升DOX溶液；然后，上述混合液在避光的振蕩器室溫?fù)u晃24小時(shí)后離心分離，PBS洗滌，得到儲(chǔ)藏DOX藥物的納米介孔氧化硅顆粒。

步驟四，30毫升氧化石墨烯量子點(diǎn)水溶液（1毫克/毫升）中分別加入4.2毫摩爾/升的650微升EDC和130微升NHS進(jìn)行活化處理1小時(shí)；接著將20毫克氨基修飾的納米介孔氧化硅顆粒分散于20毫升的MES溶液（pH5.5），然后加入到活化過(guò)的氧化石墨烯量子點(diǎn)溶液中反應(yīng)24小時(shí)；采用高速離心收集膠體顆粒，用去離子水洗滌后冷凍干燥得到復(fù)合氧化石墨烯量子點(diǎn)的納米介孔氧化硅顆粒，并在4℃下保存。

本實(shí)施例制備的納米介孔顆粒藥物載體呈球形顆粒，顆粒粒徑為50納米左右，粒徑分布均勻，分散性好，介孔孔道為樹(shù)枝狀分布；納米介孔顆粒的BET比表面積為586m²/g，采用BJH方法計(jì)算得到納米介孔氧化硅顆粒的平均介孔孔徑為3.0納米；測(cè)定得到阿霉素的儲(chǔ)藏量為60微克/1毫克納米介孔顆粒載體。

體外釋放實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示儲(chǔ)藏阿霉素藥物且復(fù)合氧化石墨烯量子點(diǎn)的納米介孔氧化硅顆粒具有pH控釋行為，即在pH7.4時(shí)及37℃和50℃條件下，24小時(shí)內(nèi)都只有4~11%的DOX釋放出來(lái)；而在pH4.5時(shí)，37℃條件下24小時(shí)的釋放達(dá)到38%，50℃條件下24小時(shí)釋放達(dá)到49%。

光熱效應(yīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：當(dāng)設(shè)置光源強(qiáng)度為2.5W/cm²，近紅外光波長(zhǎng)808nm，照射距離1厘米，藥物載體溶液（10毫克/毫升）體積為1毫升時(shí)，808nm近紅外光照射5分鐘使得溶液溫度從28℃升溫至58.8℃。

本發(fā)明所涉及的具有光熱效應(yīng)的納米介孔顆粒藥物載體及其制備方法并不僅僅限定于上述實(shí)施例的內(nèi)容。以上內(nèi)容僅為本發(fā)明構(gòu)思下的基本說(shuō)明，而依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案所作的任何等效變換，均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。