專利名稱：N－?；璶′－芐基－亞烷基二氨基衍生物的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及以下通式I的N-酰基-N’-芐基-亞烷基二氨基衍生物 和其藥學上可接受的鹽，它們具有作為鈉和/或鉀通道調控劑的活性，因此可用于預防、減輕和治愈各種病變，包括但不限于神經(jīng)病學疾病、精神病學疾病、心血管疾病、炎性疾病、眼科疾病、泌尿系疾病、代謝疾病和胃腸疾病，其中上述機理已被描述為發(fā)揮病理學作用。
背景技術：
化學背景Malawska等描述了新的抗心律失常和抗高血壓的吡咯烷-2-酮衍生物的合成(Eur.J.Med.Chem.37，2002，183-195)。
生物學背景眾所周知，鈉通道在神經(jīng)元網(wǎng)絡中發(fā)揮重要作用，它們在細胞和細胞網(wǎng)絡各處迅速傳遞電脈沖，從而協(xié)調從運動到認知的高級過程。這些通道是大的跨膜蛋白質，它們能夠在不同狀態(tài)之間切換，使鈉離子能夠選擇性地滲透。對于該過程而言，需要動作電位使膜去極化，因此這些通道是電壓-門控的。在過去幾年中，已經(jīng)對鈉通道有了更深入的了解，并且開發(fā)了與它們作用相互的藥物。
已經(jīng)清楚的是，許多作用機理未知的藥物實際上通過調控鈉通道電導來發(fā)揮作用，包括局部麻醉劑、I類抗心律失常劑和抗驚厥劑。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)神經(jīng)元鈉通道阻滯劑可用于治療癲癇(苯妥英和卡馬西平)、雙相性精神障礙(拉莫三嗪)、預防神經(jīng)變性和減輕神經(jīng)性疼痛。各種使神經(jīng)元興奮性穩(wěn)定的抗癲癇藥對神經(jīng)性疼痛是有效的(加巴噴丁)。
另外，在多種炎性疼痛模型中也已經(jīng)觀察到鈉通道表達或活性的增加，提示了鈉通道在炎性疼痛中的作用。
鈣通道是跨膜多亞基蛋白質，其控制鈣離子從細胞外液進入細胞。一般，鈣通道是電壓依賴性的，被稱為電壓敏感性鈣通道(VSCC)。VSCC見于哺乳動物神經(jīng)系統(tǒng)各處，它們調節(jié)諸如細胞興奮性、遞質釋放、細胞內代謝、神經(jīng)分泌活動和基因表達等各種活動。動物中所有“可興奮的”細胞例如中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)的神經(jīng)元、外周神經(jīng)細胞和包括骨骼肌、心肌和靜脈與動脈平滑肌的細胞在內的肌肉細胞均具有電壓依賴性鈣通道。鈣通道在調節(jié)細胞內鈣離子水平上具有核心作用，而細胞內鈣離子水平對細胞活力和功能而言是很重要的。細胞內鈣離子濃度與動物的許多生命過程有關，例如神經(jīng)遞質釋放、肌肉收縮、起博點活性和激素分泌。據(jù)信，鈣通道與某些疾病狀態(tài)有關。許多可用于治療包括人在內的哺乳動物的各種心血管疾病的化合物被認為通過調控存在于心臟和/或血管平滑肌中的電壓依賴性鈣通道的功能來發(fā)揮它們的有益作用。對鈣通道具有活性的化合物也已用于治療疼痛。具體而言，負責神經(jīng)遞質調節(jié)的N-型鈣通道(Cav2.2)被認為在傷害感受傳遞中發(fā)揮重要作用，這不僅是由于它們的組織分布，而且來自多種藥理學研究的結果。這種假設已經(jīng)在臨床上被Zinocotide證實，Zinocotide是一種從海洋蝸?！塾舐?Conus Magus)的毒液中得到的肽。這種肽的治療用途的局限在于它在人中必須進行鞘內施用(BowersoxS.S.和Luther R.Toxicon，1998，36，11，1651-1658)。
所有這些發(fā)現(xiàn)共同表明，具有鈉和/或鈣通道阻滯作用的化合物在預防、減輕和治愈各種病變中具有高的治療潛能，包括神經(jīng)病學疾病、精神病學疾病、心血管疾病、泌尿系疾病、代謝疾病和胃腸疾病，其中上述機理已被描述為發(fā)揮病理學作用。
有很多文章和專利描述了治療或調控多種障礙的鈉通道和/或鈣通道調控劑或拮抗劑，例如它們用作局部麻醉劑、抗心律失常劑、止吐劑、抗躁狂抑郁劑、治療單相性抑郁、心血管疾病、尿失禁、腹瀉、炎癥、癲癇、神經(jīng)變性病癥、神經(jīng)細胞死亡的藥物、抗驚厥劑、治療神經(jīng)性疼痛、偏頭痛、急性痛覺過敏與炎癥、腎病、變態(tài)反應、哮喘、支氣管痙攣、痛經(jīng)、食道痙攣、青光眼、泌尿道障礙、胃腸蠕動障礙、早產(chǎn)(premature labour)、肥胖的藥物。以下給出了非常不完全的列表。
在WO 03/057219(和其中的參考文獻)中報道了廣泛和充分的現(xiàn)有技術綜述；在以下參考文獻中報道了現(xiàn)有技術的其它選擇Alzheimer，C.Adv.Exp.Med.Biol.2002，513，161-181；Vanegas，H.；Schaible，H.Pain2000，85，9-18；美國專利5,051,403；美國專利5,587,454；美國專利5,863,952；美國專利6,011,035；美國專利6,117,841；美國專利6,362,174；美國專利6,380,198；美國專利6，420,383；美國專利6,458,781；美國專利6,472,530；美國專利6,518,288；美國專利6,521,647；WO 97/10210；WO03/018561。

發(fā)明內容
本發(fā)明涉及式I化合物， 其中A是直鏈或支鏈的C2-C8烷基鏈；X是亞甲基、氧、硫或NR7基團；R1是直鏈或支鏈的C1-C8烷基或C3-C8亞鏈烯基或C3-C8亞炔基鏈，其任選地被CF3、苯基、苯氧基或萘基取代，芳族環(huán)任選地被一個或多個C1-C4烷基、鹵素、三氟甲基、羥基或C1-C4烷氧基取代；
R2、R3獨立地是氫、C1-C3烷基鏈、鹵素、三氟甲基、羥基或C1-C4烷氧基；R4、R5獨立地是氫或C1-C6烷基；R6是氫或者直鏈或支鏈的C1-C8烷基，或者與R5連接可以構成五至七元內酰胺；R7是氫或C1-C6烷基；和其藥學上可接受的鹽，條件是如果A是-CH2CH2-，R1是-X鄰-芐硫基，R2、R3和R5是氫，R6是甲基，則R4不是氫或甲基(Nation，D.A.等，J.Chem.Soc.，DaltonTransactionsInorganic Chemistry 1996，14，3001-3009)；如果A是-CH2CH2-，R1-X是4-甲氧基，R2是2-甲氧基，R3和R5是氫，R6是甲基，則R4不是氫(Saikawa，I.等，Yakugaku Zasshi 1979，99，929-935)；并且如果A是-CH2CH2-，R1-X是3-甲氧基，R2是5-甲氧基，R3和R5是氫，R6是甲基，則R4不是氫(Menage，S.等，J.Am.Chem.Soc.1998，120，13370-13382)。
本發(fā)明也涉及其中A、X、R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7如上文所定義的通式I化合物在制備具有鈉和/或鈣通道調控活性的藥物中的用途。
苯基環(huán)中任選的取代基R1-X、R2和R3可以位于任何位置。
式I化合物的藥學上可接受的鹽包括與無機酸或有機酸的酸加成鹽，無機酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸和磷酸，有機酸例如乙酸、丙酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、水楊酸、乙醇酸、乳酸、草酸、蘋果酸、馬來酸、丙二酸、富馬酸、酒石酸、檸檬酸等。
本發(fā)明優(yōu)選的化合物是這樣的式I化合物，其中A是亞乙基或亞丙基，X是氧、亞甲基、NH或NCH3，R1是C1-C8烷基鏈，其任選地被CF3、苯基或苯氧基取代，其中R1中的芳族環(huán)任選地被一個或兩個甲氧基、氟或氯或者三氟甲基取代，R2和R3是氫、甲基、甲氧基、氟、氯或溴，R4和R5是氫或甲基，R6是甲基或乙基，或者與R5連接可以構成五或六元內酰胺。
本發(fā)明的具體化合物的實例有N-2-(4-丁氧基-芐基氨基)-乙基-乙酰胺；N-2-[4-(4-三氟丁氧基)-芐基氨基]-乙基-乙酰胺；N-2-(4-戊氧基-芐基氨基)-乙基-乙酰胺；N-2-[4-(5-三氟戊氧基)-芐基氨基]-乙基-乙酰胺；N-2-(2-芐氧基-芐基氨基)-乙基-乙酰胺；N-2-(3-芐氧基-芐基氨基)-乙基-乙酰胺；N-2-(4-芐氧基-芐基氨基)-乙基-乙酰胺；N-2-[4-(5-苯基-戊氧基)-芐基氨基]-乙基-乙酰胺；N-2-[4-(2-苯乙基)-芐基氨基]-乙基-乙酰胺；N-{2-[2-(2-氟-芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[3-(2-氟-芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-2-甲氧基-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-2-甲基-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-氟-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-氯-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-甲氧基-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-甲基-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲氧基-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲基-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-溴-5-甲氧基-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-3-(4-戊氧基-芐基氨基)-丙基-乙酰胺；N-2-[4-(5-三氟戊氧基)-芐基氨基]-丙基-乙酰胺；N-3-(4-芐氧基-芐基氨基)-丙基-乙酰胺；N-3-[4-(2-苯乙基)-芐基氨基]-丙基-乙酰胺；N-3-[4-(5-苯基-戊氧基)-芐基氨基]-丙基-乙酰胺；N-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-2-甲氧基-芐基氨基]-丙基}-乙酰胺；
N-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-2-甲基-芐基氨基]-丙基}-乙酰胺；N-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-氟-芐基氨基]-丙基}-乙酰胺；N-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-氯-芐基氨基]-丙基}-乙酰胺；N-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-甲氧基-芐基氨基]-丙基}-乙酰胺；N-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-甲基-芐基氨基]-丙基}-乙酰胺；N-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲氧基-芐基氨基]-丙基}-乙酰胺；N-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲基-芐基氨基]-丙基}-乙酰胺；N-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-溴-5-甲氧基-芐基氨基]-丙基}-乙酰胺；1-[2-(4-丁氧基-芐基氨基)-乙基]-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(4-三氟丁氧基-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-[2-(4-戊氧基-芐基氨基)-乙基]-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(5-三氟戊氧基-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-[2-(2-芐氧基-芐基氨基)-乙基]-吡咯烷-2-酮；1-[2-(3-芐氧基-芐基氨基)-乙基]-吡咯烷-2-酮；1-[2-(4-芐氧基-芐基氨基)-乙基]-吡咯烷-2-酮；1-[2-(4-芐硫基-芐基氨基)-乙基]-吡咯烷-2-酮；1-[2-(4-芐氨基-芐基氨基)-乙基]-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(5-苯基-戊氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-苯氧基-乙氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(萘-1-基甲氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[2-(3-氟芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[3-(3-氟芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(3-氟芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(4-叔丁基-芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(4-三氟甲基-芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2，6-二氯-芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(3，5-二甲氧基-芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-2-甲氧基-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；
1-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-2-甲基-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-氟-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-甲氧基-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-甲基-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-氯-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲氧基-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲基-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-溴-5-甲氧基-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-[3-(4-戊氧基-芐基氨基)-丙基]-吡咯烷-2-酮；1-[3-(2-芐氧基-芐基氨基)-丙基]-吡咯烷-2-酮；1-[3-(3-芐氧基-芐基氨基)-丙基]-吡咯烷-2-酮；1-[3-(4-芐氧基-芐基氨基)-丙基]-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(5-苯基-戊氧基)-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-苯氧基-乙氧基)-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(萘-1-基甲氧基)-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(4-叔丁基-芐基氧基)-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(4-三氟甲基-芐基氧基)-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2，6-二氯-芐基氧基)-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(3，5-二甲氧基-芐基氧基)-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-2-甲氧基-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-2-甲基-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-氟-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-甲氧基-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-甲基-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-氯-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲氧基-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲基-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-溴-5-甲氧基-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮。
本發(fā)明的化合物和其鹽可以通過包括以下步驟的方法得到a)在還原劑的存在下，使式II化合物與式III化合物反應，所述的式II化合物是 其中R1、R2、R3和X如上文所定義，所述的式III化合物是 其中R4、R5、R6和A如上文所定義，由此得到式I化合物；或者b)使式IV化合物與式III化合物反應，所述的式IV化合物是 其中R1、R2、R3和X如上文所定義，Y是鹵素原子或O-EWG基團，其中EWG表示能夠將它們所連接的氧轉化為良好離去基團的吸電子基團，例如甲磺?；?、甲苯磺酰基或三氟乙?；?，由此得到式I化合物；或者
c)使式Ia化合物與式V或VI化合物反應，所述的式Ia化合物是 其中R1、R2、R3、R5、R6、X和A如上文所定義，所述的式V或VI化合物是R4Y R8CHOV VI其中Y和R4如上文所定義；R8是氫或C1-C5烷基，由此得到其中R4是C1-C6烷基的本發(fā)明的化合物；和如果需要的話，將一種本發(fā)明的化合物轉化為另一種本發(fā)明的化合物，和/或如果需要的話，將本發(fā)明的化合物轉化為藥學上可接受的鹽，和/或如果需要的話，將鹽轉化為游離化合物，和/或如果需要的話，將本發(fā)明的化合物的異構體混合物分離為單個的異構體。
化合物II、III、IV、V和VI是可商購獲得的化合物或者是利用已知方法以可商購獲得的化合物為原料制備的。
生成式I化合物的式II化合物與式III化合物的反應和式Ia化合物與式VI化合物的反應是還原性氨基化反應，其可以按照已知方法進行。根據(jù)本發(fā)明的一個優(yōu)選實施方案，它可以如下進行在氮氣氛下，在適合的有機溶劑中，例如醇，例如低級鏈烷醇，特別是甲醇，或者乙腈，或者四氫呋喃，在約0℃至約70℃的溫度下，在還原劑的存在下，最適當?shù)氖桥饸浠c或氰基硼氫化鈉。有時可以向反應混合物中加入異丙醇鈦IV和分子篩以促進反應。
在式IV和V化合物中，鹵素優(yōu)選地是溴或碘。式IV化合物與式III化合物的烷基化反應和式Ia化合物與式V化合物的烷基化反應可以如下進行在適合的有機溶劑中，例如醇，例如甲醇、乙醇或異丙醇，特別是乙醇，在約0℃至約50℃的溫度下。
當本發(fā)明的化合物和其中間產(chǎn)物中存在需要在進行上述反應之前加以保護的基團時，可以按照已知的方法在反應之前對它們進行保護、然后去保護。
藥理學在體外結合研究中使用選擇性放射性配體證明了本發(fā)明的化合物對鈣和/或鈉通道結合位點顯示出親和性。
本發(fā)明的化合物是電壓依賴性鈉通道和/或鈣通道的阻滯劑。因此這些化合物以高親和性從鈉通道的結合位點上置換3H-箭毒蛙堿(BTX)，IC50在低μM或亞μM范圍內。類似地，這些化合物從鈣通道的結合位點上置換3H-尼群地平，IC50在低μM或最通常在亞μM范圍內，以及抑制經(jīng)由細胞去極化通過鈣通道所誘導的鈣內流。
當鈉通道被阻滯時這類物質表現(xiàn)出“使用-依賴性”，即，僅在反復刺激鈉通道之后才達到鈉通道的最大阻滯。所以，這些物質優(yōu)選地與被多次活化的鈉通道結合。結果，這些物質能夠優(yōu)先在被病理性過度刺激的那些機體區(qū)域中發(fā)揮活性，正如膜片鉗實驗所示的那樣(W.A.Catteral，TrendsPharmacol.Sci.，8，57-65；1987)，該實驗表明本發(fā)明的化合物以“使用-依賴性”方式阻滯電刺激的鈉通道。
熒光鈣內流測定法和電生理學研究已經(jīng)證明了本發(fā)明化合物的鈣和/或鈉通道的電壓依賴性阻滯作用。
通過基于熒光的鈣內流測定法測定了通式I的N-?；?N-芐基-亞烷基二氨基衍生物的N-型鈣通道調控活性。
在表達Na通道Nav1.3的離體非洲爪蟾卵母細胞(xenopus oocyte)中，利用雙電極電壓鉗(TEVC)技術通過電生理學測定法測定了通式I的N-酰基-N-芐基-亞烷基二氨基衍生物的鈉通道調控活性。
作為這些機理的結果，當在各種動物模型中以0.1至100mg/kg口服施用時，本發(fā)明的化合物具有體內活性，特別是MES電驚厥試驗、持續(xù)性疼痛福爾馬林模型和角叉菜膠炎癥模型。
鑒于上述作用機理，本發(fā)明的化合物可用于治療或預防神經(jīng)性疼痛。神經(jīng)性疼痛綜合征包括但不限于糖尿病性神經(jīng)??；坐骨神經(jīng)痛；非特異性下背部疼痛；多發(fā)性硬化疼痛；纖維肌痛；HIV-相關性神經(jīng)??；神經(jīng)痛，例如帶狀皰疹后神經(jīng)痛和三叉神經(jīng)痛；和由身體創(chuàng)傷、切斷術、癌癥、毒素或慢性炎性病癥導致的疼痛。
本發(fā)明的化合物也可用于治療慢性疼痛。慢性疼痛包括但不限于由炎癥或炎性相關性病癥、骨關節(jié)炎、類風濕性關節(jié)炎所導致的慢性疼痛或者作為疾病、急性損傷或創(chuàng)傷的后遺癥的慢性疼痛，包括上背部疼痛或下背部疼痛(由全身、局部或原發(fā)性脊柱疾病(例如神經(jīng)根病)所引起)、骨痛(由骨關節(jié)炎、骨質疏松、骨轉移或未知原因引起)、骨盆痛、與脊髓損傷有關的疼痛、心臟性胸痛、非心臟性胸痛、中風后中樞性痛、肌筋膜痛、癌癥疼痛、AIDS疼痛、鐮狀細胞性疼痛、老年病性疼痛或者由頭痛、顳下頜關節(jié)綜合征、痛風、纖維化或胸腔出口綜合征所導致的疼痛。
本發(fā)明的化合物也可用于治療急性疼痛(由急性損傷、疾患、運動醫(yī)學損傷、腕管綜合征、灼傷、肌肉骨骼扭傷與拉傷、肌腱拉傷、頸臂痛綜合征、消化不良(dyspepsis)、胃潰瘍、十二指腸潰瘍、痛經(jīng)、子宮內膜異位癥或手術(例如心臟直視手術或旁路手術)所導致)、術后疼痛、腎結石疼痛、膽囊疼痛、膽結石疼痛、分娩疼痛或牙痛。
本發(fā)明的化合物也可用于治療偏頭痛例如緊張性頭痛、變形偏頭痛(transformed migraine)或進行性頭痛(evolutive headache)、叢集性頭痛，以及繼發(fā)性頭痛障礙例如由感染、代謝障礙或其它全身性疾患衍生的頭痛障礙，和由上述原發(fā)性和繼發(fā)性頭痛的惡化所導致的其它急性頭痛、發(fā)作性偏頭痛等。
本發(fā)明的化合物也可用于治療神經(jīng)病學病癥和認知障礙。神經(jīng)病學病癥包括但不限于諸如以下病癥癲癇(包括單純性部分癲癇發(fā)作、復雜性部分癲癇發(fā)作、繼發(fā)性泛化性癲癇發(fā)作，進一步包括癲癇小發(fā)作、肌陣攣性癲癇發(fā)作、陣攣性癲癇發(fā)作、強直性癲癇發(fā)作、強直性陣攣性癲癇發(fā)作和無張力性癲癇發(fā)作)，退行性癡呆(包括老年性癡呆、阿爾茨海默病、皮-尼病、帕金森病)和血管性癡呆(包括多發(fā)性腦梗塞癡呆、中風和腦缺血)，以及與顱內占位性病變、創(chuàng)傷、感染及相關病癥(包括HIV感染)、代謝、毒素、缺氧和維生素缺乏有關的癡呆；和與衰老有關的輕微認知功能減退，特別是與年齡有關的記憶功能減退，運動障礙(腦炎后帕金森綜合征、進行性核上麻痹、皮質基底節(jié)變性)，發(fā)作性睡眠，注意缺陷多動癥(ADHD)，肌萎縮性側索硬化，唐氏綜合征。
本發(fā)明的化合物也可用于治療精神病學障礙。精神病學障礙包括但不限于又稱為雙相性精神障礙的躁狂抑郁(例如I型雙相性精神障礙、II型雙相性精神障礙)、循環(huán)性情感障礙、快速循環(huán)、極快速循環(huán)(ultradiancycling)、雙相性抑郁、急性躁狂、躁狂、混合躁狂、輕躁狂或單相性抑郁、精神分裂癥、精神分裂樣障礙、分裂情感性障礙、妄想性障礙、短時精神障礙、分享性精神障礙、由一般醫(yī)學病癥引起的精神病性精神障礙、精神作用物質-誘發(fā)的精神病性精神障礙或未另外指定的精神病性精神障礙、焦慮癥以及吸煙和藥物成癮。
本發(fā)明的化合物也可用于治療外周疾病，例如耳鳴、肌肉痙攣、肌肉硬化和其它障礙，包括但不限于心血管疾病(例如心律失常、心肌梗塞或心絞痛、高血壓、缺氧、心肌缺血)、內分泌障礙(例如肢端肥大癥或尿崩癥)、其中其病理生理學涉及內源性物質(例如兒茶酚胺、激素或生長因子)的過量或過多分泌或其它不適當?shù)募毎置诘募膊　?br> 本發(fā)明的化合物也可用于治療肝病，例如炎性肝病，例如慢性病毒性乙型肝炎、慢性病毒性丙型肝炎、酒精性肝損傷、原發(fā)性膽汁性肝硬化、自身免疫性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎和肝移植物排斥。
本發(fā)明的化合物抑制影響所有機體系統(tǒng)的炎性過程。因此可用于治療肌肉骨骼系統(tǒng)的炎性過程，下面是實例列表，但不是所有目標障礙的全部關節(jié)炎性病癥，例如強直性脊柱炎、頸椎關節(jié)炎、纖維肌痛、痛風、幼年型類風濕關節(jié)炎、腰骶關節(jié)炎、骨關節(jié)炎、骨質疏松、銀屑病性關節(jié)炎、風濕性疾??；影響皮膚和相關組織的障礙濕疹、銀屑病、皮炎和炎性病癥如曬傷；呼吸系統(tǒng)障礙哮喘、變應性鼻炎和呼吸窘迫綜合征、其中涉及炎癥的肺障礙如哮喘和支氣管炎；慢性阻塞性肺??；免疫與內分泌系統(tǒng)障礙結節(jié)性動脈外膜炎、甲狀腺炎、再生障礙性貧血、硬皮病、重癥肌無力、多發(fā)性硬化、結節(jié)病、腎炎綜合征、貝赫切特綜合征、多肌炎、齦炎。
本發(fā)明的化合物也可用于治療胃腸(GI)道障礙，例如炎性腸病，包括但不限于潰瘍性結腸炎、克隆病、回腸炎、直腸炎、乳糜瀉、腸病、顯微鏡性結腸炎或膠原性結腸炎、嗜酸細胞性胃腸炎或者直腸結腸切除術后和回腸肛門吻合術(ileonatal anastomosis)后導致的隱窩炎，和腸易激惹綜合征，包括任何與腹部疼痛和/或腹部不適有關的障礙，例如幽門痙攣、神經(jīng)性消化不良、痙攣性結腸、痙攣性結腸炎、痙攣性腸、腸神經(jīng)官能癥(intestinal neurosis)、功能性結腸炎、粘液性結腸炎、輕瀉性結腸炎和功能性消化不良；也用于治療萎縮性胃炎、變形性胃炎(gastritis varialoforme)、潰瘍性結腸炎、消化性潰瘍、胃灼熱(pyresis)和其它胃腸道損傷，例如幽門螺旋桿菌(Helicobacter pylori)引起的胃腸道損傷、胃食管反流病、胃輕癱，例如糖尿病胃輕癱；和其它功能性腸病，例如非潰瘍性消化不良(NUD)；嘔吐、腹瀉和內臟炎癥。
本發(fā)明的化合物也可用于治療泌尿-生殖道障礙，例如膀胱過度活動癥、前列腺炎(慢性細菌性和慢性非細菌性前列腺炎)、前列腺痛、間質性膀胱炎、尿失禁和良性前列腺增生、子宮附件炎、盆腔炎、前庭大腺炎和陰道炎。
本發(fā)明的化合物也可用于治療眼科疾病，例如視網(wǎng)膜炎、視網(wǎng)膜病變、眼色素層炎和急性眼組織損傷、黃斑變性或青光眼、結膜炎。
本發(fā)明的化合物也可用于治療肥胖。
本發(fā)明的化合物也可用于治療所有其它由對電壓門控鈉通道和/或電壓門控鈣通道的抑制作用所介導的病癥。
應當領會的是，本發(fā)明的化合物可以有利地與一種或多種其它治療劑聯(lián)合使用。適合用于輔助治療的藥物的實例包括5HT1B/1D激動劑，例如曲坦類(例如舒馬普坦或那拉曲坦)；腺苷A1激動劑；EP配體；NMDA調控劑，例如甘氨酸拮抗劑；P物質拮抗劑(例如NK1拮抗劑)；大麻素；對乙酰氨基酚或非那西??；5-脂氧化酶抑制劑；白三烯受體拮抗劑；DMARD(例如甲氨蝶呤)；加巴噴丁和相關化合物；三環(huán)抗抑郁劑(例如阿米替林)；神經(jīng)元穩(wěn)定性抗癲癇藥；單胺能攝取抑制劑(例如文拉法辛)；基質金屬蛋白酶抑制劑；氧化氮合酶(NOS)抑制劑，例如iNOS或nNOS抑制劑；腫瘤壞死因子α釋放或作用的抑制劑；抗體療法，例如單克隆抗體療法；抗病毒劑，例如核苷抑制劑(例如拉米夫定)或免疫系統(tǒng)調控劑(例如干擾素)；鎮(zhèn)痛劑，例如環(huán)加氧酶-2抑制劑；局部麻醉劑；興奮劑，包括咖啡因；H2-拮抗劑(例如雷尼替丁)；質子泵抑制劑(例如奧美拉唑)；抗酸劑(例如氫氧化鋁或氫氧化鎂)；抗胃腸氣脹藥(例如semethicone)；減充血劑(例如去氧腎上腺素、苯丙醇胺、偽麻黃堿、羥甲唑啉、腎上腺素、萘甲唑林、賽洛唑啉、丙己君或左旋去氧麻黃堿、萘甲唑林、賽洛唑啉、丙己君或左旋去氧麻黃堿)；鎮(zhèn)咳劑(例如可待因、氫可酮、carmiphen、噴托維林或右旋甲嗎喃)；利尿劑；或者鎮(zhèn)靜性或非鎮(zhèn)靜性抗組胺劑。應當理解的是，本發(fā)明包括式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽與一種或多種治療劑組合的用途。
本發(fā)明的化合物可用于人和獸醫(yī)學。應當理解的是，對治療的稱謂包括已有癥狀的治療和預防性治療，另有明確規(guī)定除外。
上文所定義的通式I的N-?；?N’-芐基-亞烷基二氨基衍生物可以作為藥學上可接受的組合物的“活性成分”被施用，所述組合物可以通過常規(guī)工藝制備，例如通過將活性成分與藥學上可接受的、治療上惰性的有機和/或無機載體物質相混合來制備。
包含上文所定義的N-?；?N’-芐基-亞烷基二氨基衍生物的組合物可以以多種形式施用，例如以片劑、錠劑(troch)、膠囊劑、糖衣片或薄膜衣片、液體溶液劑、乳劑或混懸劑的形式口服施用；以栓劑形式直腸施用；胃腸外施用，例如通過肌內或靜脈內注射或輸注進行胃腸外施用；和透皮施用。
可用于制備這類組合物的適合的藥學上可接受的、治療上惰性的有機和/或無機載體物質包括例如水、明膠、阿拉伯膠、乳糖、淀粉、纖維素、硬脂酸鎂、滑石粉、植物油、聚亞烷基二醇等。包含上文所定義的式I的N-?；?N’-芐基-亞烷基二氨基衍生物的組合物可以被滅菌，并且可以含有其它已知的組分，例如防腐劑、穩(wěn)定劑、濕潤劑或乳化劑，例如石蠟油、二縮甘露醇單油酸酯、調節(jié)滲透壓的鹽、緩沖劑等。
例如，除了活性成分以外，固體口服劑型還可以含有稀釋劑，例如乳糖、葡萄糖、蔗糖、纖維素、玉米淀粉或馬鈴薯淀粉；潤滑劑，例如二氧化硅、滑石粉、硬脂酸、硬脂酸鎂或硬脂酸鈣，和/或聚乙二醇；粘合劑，例如淀粉、阿拉伯膠、明膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；崩解劑，例如淀粉、海藻酸、藻酸鹽或淀粉羥乙酸鈉；泡騰混合物；染料；甜味劑；濕潤劑，例如卵磷脂、聚山梨醇酯、十二烷基硫酸鹽；和一般而言，用在藥物制劑中的無毒的與無藥理活性的物質。所述藥物制劑可以用已知方法制備，例如通過混合、造粒、壓片、包糖衣或包薄膜衣方法制備。
口服制劑包含緩釋制劑，其可以按常規(guī)方式制備，例如通過給片劑和顆粒涂敷腸溶衣來制備。
口服施用的液體分散物可以是例如糖漿劑、乳劑和混懸劑。
糖漿劑可以含有作為載體的例如蔗糖或蔗糖與甘油和/或甘露醇和/或山梨醇。
混懸劑和乳劑可以含有作為載體的例如天然樹膠、瓊脂、藻酸鈉、果膠、甲基纖維素、羧甲基纖維素或聚乙烯醇。除了活性化合物以外，肌內注射的混懸劑或溶液劑還可以含有藥學上可接受的載體，例如無菌水、橄欖油、油酸乙酯、二醇類，例如丙二醇，和如果需要的話，適量鹽酸利多卡因。靜脈內注射或輸注的溶液劑可以含有作為載體的例如無菌水，或者優(yōu)選地它們可以是無菌、水性、等張鹽水溶液的形式。
除了活性成分以外，栓劑還可以含有藥學上可接受的載體，例如可可脂、聚乙二醇、聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯表面活性劑或卵磷脂。
適合的治療每天給予1、2或3次，這取決于清除率。因此，所需劑量可以以單劑量形式或者作為以適當時間間隔施用的多劑量形式給予，例如每天二至四個或更多個分劑量。
包含上文所定義的式I的N-酰基-N’-芐基-亞烷基二氨基衍生物的藥物組合物每個劑量單元中將含有約0.1至約500mg活性成分，最優(yōu)選含有1至10mg活性成分，所述的劑量單元例如膠囊劑、片劑、粉針劑、茶匙(teaspoonful)、栓劑等。
待施用的最佳治療有效劑量可以由本領域技術人員容易地確定，并且基本上將因制劑的強度、施用方式和所治療的病癥或障礙的進展程度而異。另外，包括個體的年齡、體重、飲食和施用時間在內的與所治療的特定個體有關的因素也將導致需要調整劑量至適當?shù)闹委熡行健?br> 以下實施例進一步闡述了發(fā)明。
實施例1N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲基-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺將2M的N-(2-氨基乙基)-乙酰胺(664mg，6.5mmol)在干燥THF中的溶液加入到1M的如實施例4所述制備的4-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲基-苯甲醛(1.84g，7.15mmol)在干燥THF中的溶液中。向該混合物中滴加2M的Ti(O-iPr)4(2.77g，9.75mmol)在干燥THF中的溶液，將反應混合物在室溫、氮氣下攪拌12小時。
加入0.75M的硼氫化鈉(690mg，18.2mmol)在無水乙醇中的溶液，將所得混合物在70℃下加熱6小時。冷卻后，加入水(8ml)猝滅反應，濾出所得白色沉淀。將粗化合物用SCX柱(強陽離子交換樹脂)純化。用3％氨的甲醇溶液洗脫回收純產(chǎn)物。在真空下蒸發(fā)溶劑后，得到標題化合物(1.93g)，收率86.0％。
MS(ESI Pos Spray 3.5kV；Skimmer 20V；Probe 250℃)345[MH+]1H-NMR(DMSO-d6)7.75(t br，1H)；7.60(dd，1H)；7.45(m，1H)；7.25(m，2H)；6.99(s，2H)；4.81(s，2H)；3.57(s，2H)；3.48-3.28(m，3H)；3.15(dt，2H)；2.21(s，6H)；1.79(s，3H).
實施例21-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-氯-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮將2M的1-(3-氨基-丙基)-吡咯烷-2-酮(920mg，6.5mmol)在干燥THF中的溶液加入到1M的如實施例5所述制備的3-氯-4-(2-氟-芐基氧基)-苯甲醛(1.87g，7.1mmol)在干燥THF中的溶液中。向該混合物中滴加2M的Ti(O-iPr)4(2.77g，9.75mmol)在干燥THF中的溶液，將反應混合物在室溫、氮氣下攪拌12小時。
加入0.75M的硼氫化鈉(690mg，18.2mmol)在無水乙醇中的溶液，將所得混合物在70℃下加熱6小時。冷卻后，加入水(8ml)猝滅反應，濾出所得白色沉淀。將粗化合物用SCX柱(強陽離子交換樹脂)純化。用3％氨的甲醇溶液洗脫回收純產(chǎn)物。在真空下蒸發(fā)溶劑后，得到標題化合物(2.27g)，收率89.3％。
MS(ESI Pos Spray 3.5kV；Skimmer 20V；Probe 250℃)391[MH+]1H-NMR(DMSO-d6)δ7.55(dd，1H)，7.4(m，2H)，7.22(m，4H)，5.2(s，2H)，3.6(s，2H)，3.2(t，4H)，2.4(m，2H)，2.18(m，2H)，1.87(m，2H)，1.55(m，2H).
實施例31-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-甲氧基-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮將2M的1-(3-氨基-丙基)-吡咯烷-2-酮(924mg，6.5mmol)在干燥THF中的溶液加入到1M的如實施例6所述制備的4-(2-氟-芐基氧基)-3-甲氧基-苯甲醛(1.86g，7.15mmol)在干燥THF中的溶液中。向該混合物中滴加2M的Ti(O-iPr)4(2.77g，9.75mmol)在干燥THF中的溶液，將反應混合物在室溫、氮氣下攪拌12小時。
加入0.75M的硼氫化鈉(689mg，18.2mmol)在無水乙醇中的溶液，將所得混合物在70℃下加熱6小時。冷卻后，加入水(8ml)猝滅反應，濾出所得白色沉淀。將粗化合物用SCX柱(強陽離子交換樹脂)純化。用3％氨的甲醇溶液洗脫回收純產(chǎn)物。在真空下蒸發(fā)溶劑后，得到標題化合物(2.30g)，收率91.6％。
MS(ESI Pos Spray 3.5kV；Skimmer 20V；Probe 250℃)387.1[MH+]1H-NMR(DMSO-d6)δ7.55(dd，1H)，7.4(m，1H)，7.22(m，2H)，6.95(m，2H)，6.8(dd，1H)，5.1(s，2H)，3.75(s，3H)，3.6(s，2H)，3.2(t，4H)，2.4(m，2H)，2.18(m，2H)，1.87(m，2H)，1.55(m，2H)實施例44-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲基-苯甲醛將0.5M的1-溴甲基-2-氟-苯(1.51g，8.0mmol)在DMF中的溶液滴加到1.1g 4-羥基-3，5-二甲基-苯甲醛(7.3mmol)、1.51g K2CO3(11mmol)與120mgKI(0.73mmol)在100ml DMF中的混懸液中。反應按照與實施例3所述相同的工藝進行。將殘余物在硅膠上進行純化，得到定量收率的標題化合物(1.88g)。
實施例54-(2-氟-芐基氧基)-3-氯-苯甲醛將0.5M的1-溴甲基-2-氟-苯(1.5g，8mmol)在DMF中的溶液滴加到3-氯-4-羥基-苯甲醛(1.14g，7.3mmol)、K2CO3(1.51g，11mmol)與KI(120mg，0.73mmol)在DMF(100ml)中的混懸液中。將反應混合物在90℃下攪拌過夜。冷卻后，濾出固體殘余物，在真空下蒸發(fā)溶劑。將殘余物溶于乙酸乙酯，將有機層用NaOH 1M洗滌兩次，用Na2SO4干燥，蒸發(fā)至干。將殘余物在硅膠上純化，得到1.91g標題化合物，收率100％。
實施例64-(2-氟-芐基氧基)-3-甲氧基-苯甲醛將0.5M的1-溴甲基-2-氟-苯(1.5g，8mmol)在DMF中的溶液滴加到3-甲氧基-4-羥基-苯甲醛(1.1g，7.3mmol)、K2CO3(1.51g，11mmol)與KI(120mg，0.73mmol)在DMF(100ml)中的混懸液中。如實施例4所述處理反應混合物。將殘余物在硅膠上進行純化，得到1.89g(定量收率)標題化合物，收率100％。
實施例7大鼠腦膜中3H-箭毒蛙堿的體外結合膜制備物(P2級分)在輕微麻醉下處死雄性Wistar大鼠(Harlan，意大利，175-200g)，迅速取出腦，切下皮質，在10體積冰冷的0.25M蔗糖緩沖液(50mM Tris-HCl，pH 7.4)中勻化。將粗勻漿在3250rpm下離心10分鐘，回收上清液。將沉淀再次勻化和離心，合并兩份上清液，在+4℃、14750rpm下離心10分鐘。將所得沉淀貯存在-20℃下備用。
結合測定利用Polytron PT10將沉淀重新混懸在50mM pH 7.4的Hepes緩沖液中，其含有0.8mM MgSO4、5.4mM KCl、5.5mM葡萄糖和130mM膽堿。結合測定是在0.25ml終體積中進行的，其中含有50μl膜制備物(約200μg蛋白質)、50μl3H-箭毒蛙堿配體(10nM)、50μl TTX(1μM)、50μl蝎毒素(37.5μg/ml)和50μl供試化合物或緩沖液或300μM藜蘆定，以測定非特異性結合。在37℃下進行結合測定達30分鐘，在真空下迅速通過Whatman GF/B玻璃纖維濾器過濾來終止測定。將濾器(預先用聚乙烯亞胺0.1％浸泡)用3×5ml冰冷的緩沖液洗滌，置于含有閃爍合劑(FilterCount，Packard)的微型瓶中。以45％的效率用液體閃爍譜測量法測量所結合的放射性。
數(shù)據(jù)分析通過計算機程序LIGAND由置換曲線計算IC50(McPherson，J.Pharmacol.Methods，14，213.1985)。使用至少9種濃度得到置換曲線，各濃度均一式兩份，覆蓋100000倍范圍。
實施例8大鼠腦膜中3H-尼群地平的體外結合膜制備物在輕微麻醉下處死雄性Wistar大鼠(Harlan，意大利，175-200g)，迅速取出腦，切下皮質，利用Polytron PT10在10體積冰冷的50mM pH 7.7的Tris·HCl中勻化。將粗勻漿在50000×g下離心10分鐘。將沉淀在+4℃、50000×g下在新鮮緩沖液中勻化并離心10分鐘，該操作進行兩次。將所得沉淀貯存在-20℃下備用。
結合測定利用Polytron PT10將沉淀重新混懸在50mM pH 7.7的Tris·HCl中。結合測定是在1ml終體積中進行的，其中含有900μl膜制備物(約700μg蛋白質)、50μl3H-尼群地平(0.15nM)和50μl供試化合物或緩沖液或1μM尼群地平，以測定非特異性結合。在25℃下進行結合測定達45分鐘，在真空下迅速通過Whatman GF/B玻璃纖維濾器過濾來終止測定。將濾器用3×5ml冰冷的緩沖液洗滌，置于含有閃爍合劑(Filter Count，Packard)的微型瓶中。以45％的效率用液體閃爍譜測量法測量所結合的放射性。
數(shù)據(jù)分析通過計算機程序LIGAND由置換曲線計算IC50(McPherson，J.Pharmacol.Methods，14，213.1985)。使用至少9種濃度得到置換曲線，各濃度均一式兩份，覆蓋100000倍范圍。
實施例9鈣內流測定IMR32人神經(jīng)母細胞瘤細胞在組成上具有L和N型通道。在分化條件下，IMR32優(yōu)先在膜表面上表達N-型通道。利用選擇性L型阻滯劑硝苯地平阻滯其余L-型鈣通道。在這些實驗條件下，僅能檢測N-型通道。
在225cm2燒瓶中，使用1mM dibutyrril-cAMP和2.5μM溴脫氧尿苷使IMR32細胞分化8天(4次)，然后分離，以200,00個細胞/孔接種在聚賴氨酸包被的96孔板上，在分化緩沖液的存在下進一步溫育18-24小時，備用。
基于熒光鈣指示劑485-535nm波長，使用Ca2+Kit Assay(MolecularDevices)。
將分化的細胞與染劑加載物一起在37℃下溫育30分鐘，然后單獨加入硝苯地平(1μM)或者在存在ω-芋螺毒素或供試化合物的情況下加入，進一步溫育15分鐘。
在自動注入100mM KCl去極化溶液之前和之后(30-40秒)，利用Victor讀板器(Perkin Elmer)測量熒光(485-535nm)。
由5種濃度計算抑制曲線，各濃度均一式三份，利用線性回歸分析確定IC50。
通式I的優(yōu)選化合物抑制N-型鈣通道，IC50值小于10μM。
實施例10電生理學測定用表達Na通道Nav1.3的離體非洲爪蟾卵母細胞進行測定強直性阻滯的實驗。利用雙電極電壓鉗(TEVC)技術記錄電流。
卵母細胞制備將青蛙(非洲爪蟾(Xenopus laevis))用含3-氨基苯甲酸乙酯的溶液(1g/l)麻醉，25分鐘后將其背朝下置于“冰床”上。切開皮膚和其它組織，拉出卵巢葉(ovarian lobe)，保持在ND96Ca2+(NaCl 96mM，KCl2mM，MgCl21mM，Hepes 10mM，用NaOH調至pH 7.85)中。
取出卵母細胞后，分別縫合肌肉和皮膚。
將卵巢葉縮減至10/20卵母細胞群，置于含膠原酶溶液(1mg/ml)的試管中，在溫育器中保持運動約1小時。
此步驟結束時，卵母細胞彼此完全分開，用ND96Ca2+沖洗三次，用NDE(ND96Ca2++CaCl0.9mM，MgCl2 0.9mM，丙酮酸鹽2.5mM，慶大霉素50mg/l)沖洗三次。
所得卵母細胞處于不同的發(fā)育階段。僅選擇處于V或VI階段的細胞用于RNA注入后的實驗。
制備后的那天，用20ng Nav1.3cRNA注入卵母細胞(DrummondNanoject)，供養(yǎng)在NDE中。
從mRNA注入后48小時開始，利用雙微電極電壓鉗自動化工作站記錄全細胞電流。
典型的微電極具有0.5至1MΩ電阻，填充有KCl3M。
對照浴溶液含有(mM)NaCl98，MgCl21，CaCl2，1.8，HEPES 5(pH7.6)。
制備化合物貯備液(20mM)，溶于外部浴液至終濃度。
電流記錄首先研究卵母細胞中表現(xiàn)的Nav1.3電流的電流/電壓(I/V)關系，目的是測定激發(fā)最大活化的膜電位。在0mV下Nav1.3顯示最大活化，我們將其用作強直性阻滯研究的測試電位(Vtest)。
然后研究Nav1.3電流的穩(wěn)態(tài)失活性質，目的是分別測定通道可用性為最大(Imax)的靜息態(tài)膜電位(Vrest)和產(chǎn)生半數(shù)最大電流可用性(I)的半數(shù)最大失活膜電位(V)。然后利用這兩種電壓條件評價強直性阻滯的電壓依賴性。
最后利用一個兩步方案測定Nav1.3阻滯的電壓依賴性使卵母細胞在-80mV下與膜片接觸，通過100ms步進脈沖將電流分別從在-80mV(靜息，Imax條件)和-40mV(去極化，I條件)下的3000ms的預調節(jié)電位(preconditioning potential)活化至0mV(Vtest)。
在不存在和存在不同濃度化合物的情況下記錄兩種條件下的電流振幅(在兩次之間進行洗脫)，目的是測定濃度-抑制作用曲線和去極化(半數(shù)最大電流可用性)條件下強直性阻滯的IC50值。
優(yōu)選的通式I化合物抑制Nav1.3鈉通道，IC50值低于參比鈉通道阻滯劑ralfinamide。
實施例11大鼠和小鼠最大電擊試驗通過耳內夾電極使Wistar大鼠接受電擊(160mA 0.2s，脈沖列60Hz，脈沖持續(xù)時間0.4ms；ECT單元模式7801，Ugo Basile，Comerio，意大利)，在至少97％對照動物中足以產(chǎn)生后肢強直性伸肌反應。
小鼠接受28mA電擊0.7s，脈沖列80Hz，脈沖持續(xù)時間0.4ms。在MES誘導之前對小鼠或大鼠施用多個劑量的供試化合物和標準AED，每個劑量組10至20只，施用體積5ml/kg，對于口服施用而言在MES誘導之前60分鐘進行或者對于腹膜內施用而言在MES誘導之前30分鐘進行，計算ED50值。癲癇發(fā)作的后肢強直性伸肌組分的完全抑制被視為抗驚厥活性的證據(jù)。
實施例12小鼠福爾馬林試驗按照Rosland等，(1990)的改進方案，向小鼠皮下(s.c.)注射20μl 2.7％福爾馬林溶液至左后足足底表面內，立即置于透明的PVC觀察室(23×12×13cm)內。通過對注射足的累積舔舐時間(秒)進行計數(shù)來量化疼痛行為。在福爾馬林注射后早期(0-5min)和后期(30-40min)進行測量(Tjolsen等1992)。
在福爾馬林注射前15分鐘口服施用供試化合物，施用體積為10ml/kg體重，每個劑量組10只小鼠。對照組用載體處理。
實施例13角叉菜膠炎癥模型使用175-200克的雄性Wistar大鼠。
向左后足注射100μl角叉菜膠(2％w/v在鹽水中)。在角叉菜膠注射前1小時口服施用本發(fā)明化合物(30mg/kg)、吲哚美辛(5mg/kg)或對照載體(例如蒸餾水)。在角叉菜膠注射前即刻(基礎值)和之后1、2、3、4和5小時，利用器官充滿度測量器(Ugo Basile)測量足體積。
權利要求
1.通式I化合物 其中A是直鏈或支鏈的C2-C8烷基鏈；X是亞甲基、氧、硫或NR7基團；R1是直鏈或支鏈的C1-C8烷基或C3-C8亞鏈烯基或C3-C8亞炔基鏈，其任選地被CF3、苯基、苯氧基或萘基取代，芳族環(huán)任選地被一個或多個C1-C4烷基、鹵素、三氟甲基、羥基或C1-C4烷氧基取代；R2、R3獨立地是氫、C1-C3烷基鏈、鹵素、三氟甲基、羥基或C1-C4烷氧基；R4、R5獨立地是氫或C1-C6烷基；R6是氫或者直鏈或支鏈的C1-C8烷基，或者與R5連接可以構成五至七元內酰胺；R7是氫或C1-C6烷基；和其藥學上可接受的鹽，條件是如果A是-CH2CH2-，R1-X是鄰-芐硫基，R2、R3和R5是氫，R6是甲基，則R4不是氫或甲基；如果A是-CH2CH2-，R1-X是4-甲氧基，R2是2-甲氧基，R3和R5是氫，R6是甲基，則R4不是氫；和如果A是-CH2CH2-，R1-X是3-甲氧基，R2是5-甲氧基，R3和R5是氫，R6是甲基，則R4不是氫。
2.權利要求1所定義的通式I化合物，其中A是亞乙基或亞丙基，X是氧、亞甲基、NH或NCH3，R1是C1-C8烷基鏈，其任選地被CF3、苯基或苯氧基取代，其中R1中的芳族環(huán)任選地被一個或兩個甲氧基、氟、氯或三氟甲基取代，R2和R3是氫、甲基、甲氧基、氟、氯或溴，R4和R5是氫或甲基，R6是甲基或乙基，或者與R5連接構成五或六元內酰胺。
3.選自下組的化合物N-2-(4-丁氧基-芐基氨基)-乙基-乙酰胺；N-2-[4-(4-三氟丁氧基)-芐基氨基]-乙基-乙酰胺；N-2-(4-戊氧基-芐基氨基)-乙基-乙酰胺；N-2-[4-(5-三氟戊氧基)-芐基氨基]-乙基-乙酰胺；N-2-(2-芐氧基-芐基氨基)-乙基-乙酰胺；N-2-(3-芐氧基-芐基氨基)-乙基-乙酰胺；N-2-(4-芐氧基-芐基氨基)-乙基-乙酰胺；N-2-[4-(5-苯基-戊氧基)-芐基氨基]-乙基-乙酰胺；N-2-[4-(2-苯乙基)-芐基氨基]-乙基-乙酰胺；N-{2-[2-(2-氟-芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[3-(2-氟-芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-2-甲氧基-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-2-甲基-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-氟-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-氯-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-甲氧基-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-甲基-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲氧基-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲基-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-溴-5-甲氧基-芐基氨基]-乙基}-乙酰胺；N-3-(4-戊氧基-芐基氨基)-丙基-乙酰胺；N-2-[4-(5-三氟戊氧基)-芐基氨基]-丙基-乙酰胺；N-3-(4-芐氧基-芐基氨基)-丙基-乙酰胺；N-3-[4-(2-苯乙基)-芐基氨基]-丙基-乙酰胺；N-3-[4-(5-苯基-戊氧基)-芐基氨基]-丙基-乙酰胺；N-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-2-甲氧基-芐基氨基]-丙基}-乙酰胺；N-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-2-甲基-芐基氨基]-丙基}-乙酰胺；N-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-氟-芐基氨基]-丙基}-乙酰胺；N-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-氯-芐基氨基]-丙基}-乙酰胺；N-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-甲氧基-芐基氨基]-丙基}-乙酰胺；N-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-甲基-芐基氨基]-丙基}-乙酰胺；N-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲氧基-芐基氨基]-丙基}-乙酰胺；N-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲基-芐基氨基]-丙基}-乙酰胺；N-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-溴-5-甲氧基-芐基氨基]-丙基}-乙酰胺；1-[2-(4-丁氧基-芐基氨基)-乙基]-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(4-三氟丁氧基-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-[2-(4-戊氧基-芐基氨基)-乙基]-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(5-三氟戊氧基-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-[2-(2-芐氧基-芐基氨基)-乙基]-吡咯烷-2-酮；1-[2-(3-芐氧基-芐基氨基)-乙基]-吡咯烷-2-酮；1-[2-(4-芐氧基-芐基氨基)-乙基]-吡咯烷-2-酮；1-[2-(4-芐硫基-芐基氨基)-乙基]-吡咯烷-2-酮；1-[2-(4-芐氨基-芐基氨基)-乙基]-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(5-苯基-戊氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-苯氧基-乙氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(萘-1-基甲氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[2-(3-氟芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[3-(3-氟芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(3-氟芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(4-叔丁基-芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(4-三氟甲基-芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2，6-二氯-芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(3，5-二甲氧基-芐基氧基)-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-2-甲氧基-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-2-甲基-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-氟-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-甲氧基-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-甲基-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-氯-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲氧基-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲基-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-{2-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-溴-5-甲氧基-芐基氨基]-乙基}-吡咯烷-2-酮；1-[3-(4-戊氧基-芐基氨基)-丙基]-吡咯烷-2-酮；1-[3-(2-芐氧基-芐基氨基)-丙基]-吡咯烷-2-酮；1-[3-(3-芐氧基-芐基氨基)-丙基]-吡咯烷-2-酮；1-[3-(4-芐氧基-芐基氨基)-丙基]-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(5-苯基-戊氧基)-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-苯氧基-乙氧基)-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(萘-1-基甲氧基)-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(4-叔丁基-芐基氧基)-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(4-三氟甲基-芐基氧基)-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2，6-二氯-芐基氧基)-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(3，5-二甲氧基-芐基氧基)-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-2-甲氧基-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-2-甲基-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-氟-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-甲氧基-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-甲基-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-氯-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲氧基-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3，5-二甲基-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；1-{3-[4-(2-氟-芐基氧基)-3-溴-5-甲氧基-芐基氨基]-丙基}-吡咯烷-2-酮；或其藥學上可接受的鹽。
4.制備權利要求1所定義的式I化合物或其藥學上可接受的鹽的方法，該方法包括a)在還原劑的存在下，使式II化合物與式III化合物反應，所述的式II化合物是 其中R1、R2、R3和X如上文所定義，所述的式III化合物是 其中R4、R5、R6和A如上文所定義，由此得到式I化合物；或者b)使式IV化合物與式III化合物反應，所述的式IV化合物是 其中R1、R2、R3和X如上文所定義，Y是鹵素原子或O-EWG基團，其中EWG表示能夠將它們所連接的氧轉化為良好離去基團的吸電子基團，例如甲磺?；⒓妆交酋；蛉阴；?，由此得到式I化合物；或者c)使式Ia化合物與式V或VI化合物反應，所述的式Ia化合物是 其中R1、R2、R3、R5、R6、X和A如上文所定義，所述的式V或VI化合物是R4Y R8CHOV VI其中Y如上文所定義；R4是C1-C6烷基，R8是氫或C1-C5烷基，由此得到其中R4是C1-C6烷基的本發(fā)明的化合物；和如果需要的話，將一種本發(fā)明的化合物轉化為另一種本發(fā)明的化合物，和/或如果需要的話，將本發(fā)明的化合物轉化為藥學上可接受的鹽，和/或如果需要的話，將鹽轉化為游離化合物，和/或如果需要的話，將本發(fā)明的化合物的異構體混合物分離為單個的異構體。
5.藥物組合物，其含有權利要求1所定義的式I化合物或其藥學上可接受的鹽以及與之混合的適合的載體和/或稀釋劑和任選的其它治療劑。
6.用作活性治療物質的權利要求1所定義的式I化合物或其藥學上可接受的鹽。
7.權利要求1所定義的式I化合物或其藥學上可接受的鹽在制備具有鈉和/或鈣通道調控活性的藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及以下通式(I)的新的N－?；璑′－芐基－亞烷基二氨基衍生物，其中A是直鏈或支鏈的C
文檔編號A61K31/4015GK1886370SQ200480034601
公開日2006年12月27日 申請日期2004年11月12日 優(yōu)先權日2003年11月24日
發(fā)明者F·塔勒爾, C·M·薩比多戴維, L·法拉韋利, S·加利亞爾迪, E·科隆伯, P·薩爾瓦蒂 申請人:紐朗制藥公司