專利名稱：感染vsv的動(dòng)物體內(nèi)m蛋白抗體的elisa檢測試劑盒及其檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種抗體檢測試劑盒及其檢測方法，具體地，涉及ー種感染VSV的動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體的ELISA檢測試劑盒及其檢測方法。
背景技術(shù)：
水泡性ロ炎(Vesicular stomatitis, VS)是由水泡性口炎病毒(Vesicularstomatitis virus, VSV)引起的ー種急性高度接觸性傳染病，馬、牛、豬等動(dòng)物較易感。臨床上以舌、唇、口腔黏膜、乳頭和蹄冠等處上皮發(fā)生水泡病變?yōu)橹饕卣?。VS在臨床癥狀上很難與ロ蹄疫(FMD)、豬水皰病(SV)、豬水皰性疹(VES)區(qū)別開來。據(jù)國際獸醫(yī)局(OIE)報(bào)道，南美、中美幾乎所有的國家和地區(qū)以及北美的美國等國家在1996-2002年暴發(fā)了大面積的VS流行，造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。VS常呈季節(jié)性暴發(fā)，多在夏秋季(7 8月)發(fā)生，秋末趨于平息。節(jié)肢動(dòng)物可能在病毒的傳播中起到一定的作用，許多病例還表現(xiàn)為地方流行性及易感動(dòng)物間的直接傳播，水泡性ロ炎被OIE列為A類疾病，在我國其為外來動(dòng)物傳染病，還未有大規(guī)模爆發(fā)的報(bào)道，國家進(jìn)出境動(dòng)物檢疫對(duì)象中將VSV列為ニ類疫病。VSV分為兩個(gè)血清型，一是印地安那型(VSVind)，另ー是新澤西型(VSVw)。VSV基因組為線狀單股負(fù)鏈RNA，全長約11Kb，從RNA的3’到5’端依次排列著5個(gè)相互不重疊的基因，分別編碼病毒的核衣殼蛋白(N)、磷酸化蛋白(P)、基質(zhì)蛋白(M)、囊膜蛋白(G)和病毒RNA復(fù)制酶(L)。VSV M蛋白是ー個(gè)分子量約26kDa的非糖基化的蛋白，是導(dǎo)致VSV致病性的重要毒力因子，M蛋白在細(xì)胞內(nèi)具有多重功能，包括穩(wěn)定病毒囊膜上的G蛋白三聚體；參與病毒體裝配；抑制病毒RNA合成等，更重要的是，它可以阻遏宿主細(xì)胞mRNAs由胞核向胞外的轉(zhuǎn)運(yùn)，并以此有效地干擾宿主細(xì)胞表達(dá)抗病毒I型干擾素，使得病毒得以在宿主內(nèi)有效復(fù)制。目前，監(jiān)測VSV感染動(dòng)物抗體主要采用中和實(shí)驗(yàn)，而對(duì)重要毒力因子M蛋白的抗體還無有效的監(jiān)測方法，因此，開發(fā)出一種能夠快速診斷VSV感染的試劑盒成為當(dāng)務(wù)之急。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供ー種感染VSV的動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體的ELISA檢測試劑盒及其檢測方法，本發(fā)明提供的試劑盒能夠快速檢測感染VSV的動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體，耗時(shí)少，使用方便，而且結(jié)果特異性強(qiáng)、敏感性高，有利于及時(shí)監(jiān)測入境動(dòng)物的VSV感染情況。本發(fā)明的第一個(gè)目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)，ー種感染VSV的動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體的ELISA檢測試劑盒，包括重組M蛋白抗原、多孔酶聯(lián)板、包被緩沖液、封閉緩沖液、洗滌緩沖液、樣品稀釋液、HRP標(biāo)記的羊抗鼠IgG、終止液、TMB底物溶液、陰性對(duì)照血清和陽性對(duì)照血清。優(yōu)選的，所述重組M蛋白抗原為TrxA-M重組蛋白抗原或含GST標(biāo)簽的重組M蛋白抗原。優(yōu)選的，所述TrxA-M重組蛋白抗原通過以下步驟制備:步驟一，根據(jù)VSV基因組序列設(shè)計(jì)引物對(duì)VSV M基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增；步驟ニ，將質(zhì)粒pET32a(+)和PCR擴(kuò)增得到的所述M基因分別用BamHI與HindIII雙酶切并分別回收，用T4連接酶連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5 a感受態(tài)菌株，37°C培養(yǎng)過夜后，挑取菌落進(jìn)行培養(yǎng)后抽提質(zhì)粒DNA，進(jìn)行BamHI與HindIII雙酶切鑒定和DNA測序鑒定，獲得pET32a-M質(zhì)粒；步驟三，將所述pET32a-M質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21表達(dá)宿主菌，以終濃度為ImM的IPTG誘導(dǎo)TrxA-M重組蛋白的表達(dá)；步驟四，超聲破碎所述宿主菌，12000rpm離心30min,對(duì)破碎菌體上清及沉淀分別采用12%的SDS-PAGE檢測目的蛋白；步驟五，采用N1-NTA Resin純化所述重組蛋白，采用12%的SDS-PAGE膠鑒定純化產(chǎn)物，并用VSV小鼠康復(fù)血清及His單克隆抗體進(jìn)行Western-blotting鑒定M蛋白。優(yōu)選的，所述包被緩沖液為pH9.6的0.05M碳酸鹽緩沖液。優(yōu)選的，所述封閉緩沖液由含3%的脫脂奶粉的PBS和0.05% Tween20組成，所述百分比為重量體積百分比。優(yōu)選的，所述洗滌緩沖液為pH7.4的0.15M PBS0優(yōu)選的，所述樣品稀釋液由0.1gBSA加所述洗滌緩沖液至IOOmL而獲得。優(yōu)選的，所述多孔酶聯(lián)板為40孔或96孔的聚苯こ烯塑料板。優(yōu)選的，所述終止液為2M硫酸。本發(fā)明的第二個(gè)目的通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)，一種應(yīng)用上述試劑盒檢測感染VSV的動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體的方法，包括以下步驟:步驟一，重組M蛋白抗原用0.05M pH9.6的碳酸緩沖液稀釋，4°C包被過夜，洗滌緩沖液洗滌；步驟ニ，用封閉緩沖液37°C封閉2h，用洗滌緩沖液洗滌3次；步驟三，將待測血清用樣品稀釋液倍比稀釋后，37°C孵育2h，用洗滌緩沖液洗滌3次；步驟四，加入用封閉緩沖液稀釋為1: 5000的HRP標(biāo)記的羊抗鼠IgG，37°C孵育
1.5h，用洗滌緩沖液洗滌；步驟五，于各反應(yīng)孔中加入TMB底物溶液0.1mL, 37°C保溫10 30分鐘；步驟六,于各反應(yīng)孔中加入0.05mL終止液；步驟七，在ELISA檢測儀上，于450nm處以空白對(duì)照孔調(diào)零后測各孔OD值，以待測血清OD值/陰性對(duì)照OD值(P/N) > 2.1作為陽性標(biāo)準(zhǔn)，以出現(xiàn)陽性反應(yīng)的最高稀釋度作為該血清樣品的抗體滴度。優(yōu)選的，所述重組M蛋白抗原的包被濃度為12.5 ii g/mL。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下的有益效果:本發(fā)明提供的試劑盒，可對(duì)大量樣品同時(shí)進(jìn)行檢測，操作簡單方便，結(jié)果特異性強(qiáng)、敏感性高，能夠快速穩(wěn)定檢測感染VSV的動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體，適用于各種感染VSV動(dòng)物的快速診斷，有利于及時(shí)監(jiān)測入境動(dòng)物的VSV感染情況。


通過閱讀參照以下附圖對(duì)非限制性實(shí)施例所作的詳細(xì)描述，本發(fā)明的其它特征、目的和優(yōu)點(diǎn)將會(huì)變得更明顯:圖1是VSV M基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的瓊脂糖電泳結(jié)果圖，其中泳道I為DNA Marker,泳道2為擴(kuò)增的VSV M基因；圖2是重組VSV M基因在大腸桿菌中表達(dá)產(chǎn)物的SDS-PAGE結(jié)果圖，其中泳道I為蛋白Marker，泳道2為pET32a誘導(dǎo)表達(dá)，泳道3為pET32a_M未誘導(dǎo)，泳道4為pET32a_M誘導(dǎo)；圖3是TrxA-M重組蛋白純化產(chǎn)物的SDS-PAGE結(jié)果圖，其中泳道I為蛋白Marker，泳道2為pET32a-M表達(dá)產(chǎn)物純化；圖4是重組蛋白采用抗His的Western-Blotting鑒定結(jié)果圖，其中泳道I為pET32a空質(zhì)粒表達(dá)產(chǎn)物，泳道2為pET32a_M未誘導(dǎo)表達(dá)，泳道3為pET32a_M誘導(dǎo)表達(dá)，泳道4為pET32a-M表達(dá)產(chǎn)物純化；圖5是重組蛋白采用VSV康復(fù)血清的Western-blotting鑒定結(jié)果圖,其中泳道I為pET32a空質(zhì)粒表達(dá)產(chǎn)物，泳道2為pET32a_M未誘導(dǎo)表達(dá)，泳道3為pET32a_M誘導(dǎo)表達(dá)，泳道4為pET32a-M表達(dá)產(chǎn)物純化；圖6是不同M蛋白包被稀釋度的P/N值變化規(guī)律圖；圖1是不同劑量VSV感染的BALB/c小鼠體重變化圖；圖8是不同劑量VSV感染的BALB/c小鼠體內(nèi)的M蛋白抗體消長規(guī)律圖。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)ー步闡述本發(fā)明。這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如 Sambrook 等分子克隆:實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)' (New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。DNA分子量marker、pfu DNA聚合酶、DNA T4連接酶購自Fermentas公司(美國)；限制性內(nèi)切酶BamH 1-HF、HindIII購自NEB公司(美國)；DNA膠回收試劑盒、PCR產(chǎn)物回收試劑盒與質(zhì)粒DNA提取試劑盒購自Axygen公司；His單克隆抗體購自康為世紀(jì)公司；His標(biāo)簽蛋白純化樹脂(N1-NTA Resin)購自北京鼎國昌盛生物技術(shù)公司。實(shí)施例1、M重組蛋白的原核表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定根據(jù)GenBank中收錄的VSVind的M蛋白基因序列(690bp，登錄號(hào)為NC_001560.1)設(shè)計(jì)上游引物(如SEQ ID N0.1所示)和下游引物(如SEQ ID N0.2所示)，上游和下游引物的的BamH I與HindIII酶切位點(diǎn)如下所示(下劃線為上、下游引物的BamH I與HindIII酶切位點(diǎn)):上游引物:5'-ggccggatccatgagttccttaaagaagattc-31 , (SEQ ID N0.1)下游引物:5'-ggccaagctttcatttgaagtggctgatag-31 , (SEQ ID N0.2)并以克隆VSVind全長基因組的質(zhì)粒pVSV-GFP為模板，用高保真PCR試劑盒擴(kuò)增得到了目的大小的M基因片段，如圖1所示；
將pET32a及PCR擴(kuò)增得到的純化M基因產(chǎn)物分別用BamHI與HindIII雙酶切并分別回收，用T4連接酶連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5a感受態(tài)細(xì)菌，37°C培養(yǎng)過夜后，挑取菌落進(jìn)行培養(yǎng)后抽提質(zhì)粒DNA后，進(jìn)行BamHI與HindIII雙酶切鑒定正確，并由上海杰李公司DNA測序，獲得質(zhì)粒pET32a-M。實(shí)施例2、VSV M重組蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)、純化及鑒定將pET32a-M質(zhì)粒轉(zhuǎn)化BL21 (DE3)表達(dá)宿主菌，以終濃度為ImM的IPTG誘導(dǎo)重組M蛋白的表達(dá)，超聲破碎表達(dá)蛋白的宿主菌，12000rpm下離心30min，對(duì)破碎菌體上清及沉淀分別采用12%的SDS-PAGE檢測目的蛋白是否表達(dá)以及是否以包涵體形式存在；采用N1-NTA Resin純化該重組蛋白，純化流程按照北京鼎國公司的純化說明書進(jìn)行，采用12%的SDS-PAGE膠鑒定純化產(chǎn)物，并用VSVind小鼠康復(fù)血清及His單克隆抗體進(jìn)行Western-blotting鑒定M蛋白是否表達(dá)正確；質(zhì)粒pET32a(+)表達(dá)的蛋白N末端可偶聯(lián)分子量約17KDa的硫氧還蛋白(TrxA),所以將VSV M蛋白基因克隆至表達(dá)質(zhì)粒pET32a(+)后，可得到理論分子量為46KDa左右的TrxA-M重組蛋白，在ImM IPTG誘導(dǎo)后，相比pET32a質(zhì)粒，pET32a_M轉(zhuǎn)化的菌體中在46KDa左右相應(yīng)的位置有目的大小的新蛋白得到表達(dá)，電泳結(jié)果如圖2所示；為了進(jìn)一步驗(yàn)證IPTG誘導(dǎo)后新表達(dá)的蛋白為目的蛋白，用Ni2+親和層析純化對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了純化，純化后的TrxA-M重組蛋白的SDS-PAGE結(jié)果如圖3所示；純化的TrxA-M蛋白用感染VSV小鼠康復(fù)血清及抗His標(biāo)簽的單克隆抗體分別進(jìn)行了 Western-blotting鑒定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該蛋白是正確表達(dá)的重組M蛋白，VSV小鼠康復(fù)血清檢測到M蛋白呈陽性，而健康小鼠則反應(yīng)呈陰性，如圖5所示；抗把8 tag的單克隆抗體檢測到的TrxA-M重組蛋白，而TrxA則為17KDa左右有條帶顯示，如圖4所示。以上結(jié)果表明，利用原核表達(dá)質(zhì)粒pET32a(+)，VSV M蛋白得到了正確表達(dá)。實(shí)施例3、M蛋白抗體的ELISA檢測將純化的TrxA-M 重組蛋白倍比稀釋為:1/10、1/20、1/40、1/80、1/160、1/320、1/640、1/1280、1/2560、1/5120，進(jìn)行包被抗原，不同M蛋白稀釋度的P/N值變化規(guī)律如圖6所示，以1: 200的VSV康復(fù)血清作為ー抗，I: 5000的HRP標(biāo)記IgG作為ニ抗，確定蛋白稀釋度為1/320 ;后用1/100和1/200的一抗稀釋度以確定最佳的ー抗的工作濃度，結(jié)果表明為1/100為最佳的ー抗工作濃度；通過方陣滴定確定重組蛋白最佳包被濃度為12.5 ii g/mL,純化重組的蛋白用
0.05MpH9.6碳酸緩沖液稀釋，4°C包被過夜；用含3%的脫脂奶粉的PBS-0.05% Tween20封閉緩沖液在37°C條件下封閉2h ;待測血清經(jīng)倍比稀釋后，37°C孵育2h ;加入用封閉緩沖液稀釋為1: 5000的HRP標(biāo)記的羊抗鼠IgG，37°C孵育1.5h ;之后用洗滌緩沖液洗滌；于各反應(yīng)孔中加入TMB底物溶液0.lmL，37°C保溫10 30分鐘；于各反應(yīng)孔中加入0.05mL終止液；在ELI SA檢測儀上，于450nm處以空白對(duì)照孔調(diào)零后測各孔OD值，以未免疫的血清做陰性對(duì)照，以待測血清OD值/陰性對(duì)照OD值> 2.1作為陽性標(biāo)準(zhǔn)，以出現(xiàn)陽性反應(yīng)的最高稀釋度作為該血清樣品的抗體滴度。實(shí)驗(yàn)采用健康的BALB/c雄性小鼠(購自上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司)，體重約為18 24g，采用滴鼻攻毒VSVxn2,接種的小鼠分3組，每組3只，分別為對(duì)照組(用PBS50 u L)、高劑量組(106PFU/ 只)、低劑量組(103PFU/ 只)(plaque forming unit，PFU)，分別在攻毒前，攻毒后姆周取血一次，連續(xù)4周；姆只小鼠取血20 ii L,稀釋至180ii LPBS中，采用前述方法檢測抗體滴度；如圖7所示，106PFU劑量組的動(dòng)物的體重在攻毒后第一周下降顯著，可達(dá)20%，與之對(duì)應(yīng)的是，感染該劑量病毒動(dòng)物體內(nèi)M抗體滴度在VSV攻毒第一周后變化不明顯，但從第ニ周至第四周抗體滴度穩(wěn)步上升，如圖8所示，而103PFU組動(dòng)物在病毒攻擊后未顯現(xiàn)出顯著下降，而M抗體水平直至接種后第四周亦變化不顯著。PBS組動(dòng)物的體重則穩(wěn)步上升，體內(nèi)檢測不到特異的M抗體。綜上所述，本發(fā)明提供的試劑盒，可對(duì)大量樣品同時(shí)進(jìn)行檢測，操作簡單方便，結(jié)果特異性強(qiáng)、敏感性高，能夠快速穩(wěn)定檢測感染VSV的動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體，適用于各種感染VSV動(dòng)物的快速診斷，有利于及時(shí)監(jiān)測入境動(dòng)物的VSV感染情況。以上對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施例進(jìn)行了描述。需要理解的是，本發(fā)明并不局限于上述特定實(shí)施方式，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在權(quán)利要求的范圍內(nèi)做出各種變形或修改，這并不影響本發(fā)明的實(shí)質(zhì)內(nèi)容。
權(quán)利要求
1.一種感染VSV的動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體的ELISA檢測試劑盒，其特征在于，包括重組M蛋白抗原、多孔酶聯(lián)板、包被緩沖液、封閉緩沖液、洗滌緩沖液、樣品稀釋液、HRP標(biāo)記的羊抗鼠IgG、終止液、TMB底物溶液、陰性對(duì)照血清和陽性對(duì)照血清。
2.按權(quán)利要求1所述的感染VSV的動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體的檢測試劑盒，其特征在于，所述重組M蛋白抗原為TrxA-M重組蛋白抗原或含GST標(biāo)簽的重組M蛋白抗原。
3.按權(quán)利要求2所述的感染VSV的動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體的檢測試劑盒，其特征在于，所述TrxA-M重組蛋白抗原通過包括以下步驟的方法制備而得: 步驟一，根據(jù)VSV基因組序列設(shè)計(jì)引物對(duì)VSV M基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增； 步驟ニ，將質(zhì)粒pET32a(+)和PCR擴(kuò)增得到的所述M基因分別用BamHI與HindIII雙酶切并分別回收，用T4連接酶連接，連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5 a感受態(tài)大腸桿菌菌株，37°C培養(yǎng)過夜后，挑取菌落進(jìn)行培養(yǎng)后抽提質(zhì)粒DNA，進(jìn)行BamHI與HindIII雙酶切鑒定和DNA測序鑒定，獲得pET32a-M質(zhì)粒； 步驟三，將所述pET32a-M質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21表達(dá)宿主菌，以終濃度為ImM的IPTG誘導(dǎo)TrxA-M重組蛋白的表達(dá)； 步驟四，超聲破碎所述宿主菌，12000rpm離心30min,對(duì)破碎菌體上清及沉淀分別采用12%的SDS-PAGE檢測目的蛋白； 步驟五，采用N1-NTA Resin純化所述重組蛋白，采用12%的SDS-PAGE膠鑒定純化產(chǎn)物，并用VSV小鼠康復(fù)血清及His單克隆抗體進(jìn)行Western-blotting鑒定M蛋白。
4.按權(quán)利要求1所述的感染VSV的動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體的檢測試劑盒，其特征在于，所述包被緩沖液為PH9.6的0.05M碳酸鹽緩沖液。
5.按權(quán)利要求1所述的感染VSV的動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體的檢測試劑盒，其特征在于，所述封閉緩沖液由含3%的脫脂奶粉的PBS和0.05% Tween20組成，所述百分比為重量體積百分比。
6.按權(quán)利要求1所述的感染VSV的動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體的檢測試劑盒，其特征在于，所述洗滌緩沖液為PH7.4的0.15M PBS0
7.按權(quán)利要求1所述的感染VSV的動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體的檢測試劑盒，其特征在于，所述樣品稀釋液由0.1gBSA加所述洗滌緩沖液至IOOmL的比例配制而得。
8.按權(quán)利要求1所述的感染VSV的動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體的檢測試劑盒，其特征在于，所述終止液為2M硫酸。
9.一種應(yīng)用權(quán)利要求1所述的試劑盒檢測感染VSV的動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體的方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟一，重組M蛋白抗原用0.05M pH9.6的碳酸緩沖液稀釋，4°C包被過夜，洗滌緩沖液洗漆; 步驟ニ，用封閉緩沖液37°C封閉2h，用洗滌緩沖液洗滌3次； 步驟三，將待測血清用樣品稀釋液倍比稀釋后，37°C孵育2h，用洗滌緩沖液洗滌3次；步驟四，加入用封閉緩沖液稀釋為1: 5000的HRP標(biāo)記的羊抗鼠IgG，37°C孵育1.5h，用洗滌緩沖液洗滌； 步驟五，于各反應(yīng)孔中加入TMB底物溶液0.1mL, 37°C保溫10 30分鐘； 步驟六，于各反應(yīng)孔中加入0.05mL終止液；步驟七，在ELISA檢測儀上，于450nm處以空白對(duì)照孔調(diào)零后測各孔OD值，以待測血清OD值/陰性對(duì)照( 值> 2.1作為陽性標(biāo)準(zhǔn)，以出現(xiàn)陽性反應(yīng)的最高稀釋度作為該血清樣品的抗體滴度。
10.按權(quán)利要求9所述的檢 測感染VSV的動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體的方法，其特征在于，所述重組M蛋白抗原的包被濃度為12.5 u g/mL。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種感染VSV動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體的ELISA檢測試劑盒及其檢測方法，所述試劑盒包括重組蛋白抗原、多孔酶聯(lián)板、包被緩沖液、封閉緩沖液、洗滌緩沖液、樣品稀釋液、酶標(biāo)二抗、終止液、TMB底物溶液、陰性對(duì)照血清和陽性對(duì)照血清；所述檢測方法包括以下步驟包被重組蛋白；將待測血清倍比稀釋后孵育；加入酶標(biāo)二抗；顯色；加入終止液終止反應(yīng)；檢測OD值，以P/N值＞2.1作為陽性標(biāo)準(zhǔn)，以出現(xiàn)陽性反應(yīng)的最高稀釋度作為樣品的抗體滴度。本發(fā)明可對(duì)大量樣品同時(shí)進(jìn)行檢測，操作方便，能夠快速穩(wěn)定檢測感染VSV的動(dòng)物體內(nèi)M蛋白抗體，適用于感染VSV動(dòng)物的快速診斷，有利于及時(shí)監(jiān)測入境動(dòng)物的VSV感染情況。
文檔編號(hào)G01N33/569GK103091489SQ20131000936
公開日2013年5月8日 申請(qǐng)日期2013年1月10日 優(yōu)先權(quán)日2013年1月10日
發(fā)明者孫濤, 方心葵, 張世寬 申請(qǐng)人:上海交通大學(xué)