天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)一種天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶檢測(cè)試劑盒，組成為：試劑1：緩沖液pH6.5～8.00.02～0.5mol/L，L-天冬氨酸鉀0.15～0.3mol/L，蘋(píng)果酸脫氫酶0.3～5KU/L，乳酸脫氫酶0.3～5KU/L，人源cAST抗體5～20mL/L，抗體穩(wěn)定劑0.01～3％，酶穩(wěn)定劑0.01～10％，防腐劑0.01～1％；試劑2：緩沖液pH7.0～9.00.02～0.5mol/L，α-酮戊二酸0.005～0.02mol/L，還原型輔酶Ⅰ0.1～0.5mmol/L，防腐劑0.01～1％，還原型輔酶Ⅰ穩(wěn)定劑0.01～10％。具有穩(wěn)定性好的優(yōu)點(diǎn)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶檢測(cè)試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶 (m-AST或mAST線粒體型天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶）檢測(cè)試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002] 天冬氛酸氛基轉(zhuǎn)移酶（Aspartateaminotransferase,AST)廣泛存在于人體各種 組織細(xì)胞中，尤以肝、心組織細(xì)胞含量最為豐富，而正常人血清中AST活性很低。人體中AST 存在兩種同工酶，一種是cAST，主要來(lái)源于細(xì)胞漿，另一種是mAST，存在于線粒體內(nèi)。這兩 種同工酶在基因組成上有差異，在氨基酸組成、免疫學(xué)特性以及在體內(nèi)的半衰期等均不同。
[0003] 在機(jī)體輕度病變時(shí)，組織細(xì)胞的細(xì)胞膜通透性增高，CAST透過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入血液系 統(tǒng)中，但mAST有兩層線粒體膜的保護(hù)，不易釋放入血；而當(dāng)機(jī)體嚴(yán)重疾病時(shí)，出現(xiàn)細(xì)胞壞 死、線粒體崩解，附著在線粒體上的mAST可迅速釋放進(jìn)入血中。因此，血清mAST活性可反映 組織細(xì)胞的壞死程度，若血清中檢測(cè)出高水平mAST，則表明心肌、肝臟嚴(yán)重受損；另外mAST 在血中的半衰期比cAST短，當(dāng)細(xì)胞不再破壞或修復(fù)時(shí)，血清中mAST很快降至正常水平，因 此mAST又是心肌、肝臟損害預(yù)后的評(píng)價(jià)指標(biāo)，對(duì)疾病的診斷、治療具有重要的價(jià)值。
[0004] 目前，血清中mAST測(cè)定主要有電泳法、層析法以及免疫抑制法等，尤以免疫抑制 法具備特異、準(zhǔn)確、快速簡(jiǎn)便、可用于自動(dòng)化檢測(cè)的優(yōu)點(diǎn)，適合于臨床大規(guī)模標(biāo)本的應(yīng)用。其 檢測(cè)原理是：人源cAST抗體與血清樣本中cAST作用形成免疫復(fù)合物，使cAST活性被抑 制，而mAST活性不受影響，mAST可與蘋(píng)果酸脫氫酶（MDH)催化的反應(yīng)偶聯(lián)，使還原型輔酶 I(NADH)氧化成NAD+，通過(guò)檢測(cè)特定波長(zhǎng)處NADH吸光度下降的速率，計(jì)算可得mAST的活 性。反應(yīng)式如下：

【權(quán)利要求】
1. 一種天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶檢測(cè)試劑盒，其特征在于：該試劑盒由試劑 1和試劑2兩種液體試劑構(gòu)成，其中： 試劑1 :
試劑2 :
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶檢測(cè)試劑盒，其特征在 于：所述的試劑1或2中的緩沖液為三羥甲基氨基甲烷緩沖液、哌嗪-N，N-雙（2-羥基乙烷 磺酸）緩沖液、N-2-羥乙基哌嗪-Ν' -乙磺酸緩沖液、N-三（羥甲基）甲氨基-2-羥基丙 磺酸緩沖液、4-(2-羥乙基）-1-哌嗪丙磺酸緩沖液、3-嗎啉-2-羥基丙磺酸鈉緩沖液中的 一種或幾種。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶檢測(cè)試劑盒，其特征在 于：所述的抗體穩(wěn)定劑為甘氨酸和檸檬酸、甘氨酸和肝素、檸檬酸和組氨酸、肝素和組氨酸 組合中的一種。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶檢測(cè)試劑盒，其特征在 于：所述的抗體穩(wěn)定劑為組氨酸和檸檬酸的組合。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶檢測(cè)試劑盒，其特征在 于：所述的酶穩(wěn)定劑為海藻糖、蔗糖、牛血清白蛋白、甘油、吐溫80中的一種或者幾種。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶檢測(cè)試劑盒，其特征在 于：所述的防腐劑為似隊(duì)或proclin300中的一種。
7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶線粒體同工酶檢測(cè)試劑盒，其特征在 于：所述的還原型輔酶I穩(wěn)定劑為海藻糖、牛血清白蛋白、甘油、吐溫80中的一種或幾種。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK104459158SQ201410805113
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月22日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月22日
【發(fā)明者】鄒炳德, 鄒繼華, 陸慧賢, 黃辛雷 申請(qǐng)人:寧波美康生物科技股份有限公司