益生菌多克隆發(fā)酵的培養(yǎng)基及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種益生菌多克隆發(fā)酵的培養(yǎng)基及其制備方法。按質(zhì)量分別包括以下成分：5g蛋白胨、3g葡萄糖、3g酵母粉、1g菊糖、1g果糖、1～8g瓊脂、0.1g磷酸氫二鉀、0.1g葡萄糖酸鈣、0.05g葡萄糖酸鋅、0.1檸檬酸鐵、1000mL水。本發(fā)明還公開(kāi)了一種益生菌多克隆發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法。本發(fā)明具有獲得細(xì)菌培養(yǎng)物的數(shù)量多、適用于益生菌的多克隆發(fā)酵、設(shè)備條件要求低、益生菌產(chǎn)量高及生產(chǎn)流程和產(chǎn)品質(zhì)量容易控制的優(yōu)點(diǎn)。
【專利說(shuō)明】
益生菌多克隆發(fā)酵的培養(yǎng)基及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體是一種益生菌多克隆發(fā)酵的培養(yǎng)基及其制備 方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 微生物發(fā)酵技術(shù)或稱為微生物發(fā)酵工程，是使用培養(yǎng)基和發(fā)酵技術(shù)，對(duì)微生物進(jìn) 行工業(yè)化的人工培養(yǎng)，從而獲得大量的微生物細(xì)胞或/和微生物活性代謝產(chǎn)物的技術(shù)方法。 因此，微生物發(fā)酵工程主要包括微生物菌種、培養(yǎng)基、發(fā)酵技術(shù)、代謝產(chǎn)物分離提取等環(huán)節(jié)。 培養(yǎng)基是用于培養(yǎng)微生物的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)，其質(zhì)量的好壞直接影響到微生物菌種的生長(zhǎng)繁殖與 代謝活動(dòng)以及代謝產(chǎn)物的性質(zhì)與數(shù)量。發(fā)酵技術(shù)是提供適宜微生物生長(zhǎng)繁殖的外界條件， 使培養(yǎng)基內(nèi)的微生物菌種能夠進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖、代謝和產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的技術(shù)方法。優(yōu)良的發(fā) 酵技術(shù)對(duì)微生物菌種的生長(zhǎng)繁殖及代謝活動(dòng)，具有重要的或關(guān)鍵的影響。
[0003] 益生菌是一類對(duì)人體健康有益的人體正常菌群微生物。益生菌作為人體重要的保 健食品或醫(yī)藥制劑，已在當(dāng)今世界進(jìn)行了廣泛的炎及和工業(yè)化生產(chǎn)與市場(chǎng)應(yīng)用。
[0004] 目前國(guó)內(nèi)外對(duì)于益生菌的微生物發(fā)酵，都是采用傳統(tǒng)的細(xì)菌學(xué)培養(yǎng)基和發(fā)酵技術(shù) 或工藝。傳統(tǒng)的益生菌培養(yǎng)基及其發(fā)酵技術(shù)或工藝，存在有以下缺點(diǎn)：1、培養(yǎng)基的化學(xué)組成 復(fù)雜、物理性狀渾濁、培養(yǎng)物的細(xì)菌數(shù)量少、只能用于單克隆發(fā)酵。2、傳統(tǒng)的發(fā)酵技術(shù)的設(shè) 備條件要求高、生產(chǎn)工藝復(fù)雜、生產(chǎn)流程和產(chǎn)品的質(zhì)量難以控制。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 針對(duì)上述現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處，本發(fā)明旨在提供一種細(xì)菌數(shù)量多、適用于多克 隆發(fā)酵、設(shè)備條件要求低、益生菌產(chǎn)量高及生產(chǎn)流程和產(chǎn)品質(zhì)量容易控制的益生菌多克隆 發(fā)酵的培養(yǎng)基及其制備方法。
[0006] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明益生菌多克隆發(fā)酵的培養(yǎng)基，按質(zhì)量分別包括以下 成分:5g蛋白胨、3g葡萄糖、3g酵母粉、lg菊糖、lg果糖、1~8g瓊脂、0. lg磷酸氫二鉀、0. lg葡 萄糖酸鈣、〇. 〇5g葡萄糖酸鋅、0.1檸檬酸鐵、1000mL水。
[0007] 優(yōu)選的，按質(zhì)量分別包括以下成分，5g蛋白胨、3g葡萄糖、3g酵母粉、lg菊糖、lg果 糖、lg瓊脂、O.lg磷酸氫二鉀、O.lg葡萄糖酸鈣、〇.〇5g葡萄糖酸鋅、0.1檸檬酸鐵、1000mL水。
[0008] 優(yōu)選的，按質(zhì)量分別包括以下成分:5g蛋白胨、3g葡萄糖、3g酵母粉、lg菊糖、lg果 糖、8g瓊脂、O.lg磷酸氫二鉀、O.lg葡萄糖酸鈣、0.05g葡萄糖酸鋅、0.1檸檬酸鐵、1000mL水。
[0009] -種益生菌多克隆發(fā)酵的培養(yǎng)基的制備方法，包括以下步驟：
[0010] 1)按量稱取上述各成分，置于容器內(nèi)，加入l〇〇〇mL水，制得溶液備用；
[0011] 2)向步驟1)的溶液中加入適量的碳酸氫鈉，調(diào)節(jié)溶液PH值，直到溶液PH值為7.6~ 7.8；
[0012] 3)將步驟2)中的溶液分裝，然后進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，控制溫度在121.3°C，時(shí)間為 15~30min，得到液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基。
[0013] 本發(fā)明的益生菌多克隆發(fā)酵的培養(yǎng)基及其制備方法具有以下優(yōu)點(diǎn)：1、化學(xué)組成簡(jiǎn) 單明確，含有細(xì)菌和人體代謝活動(dòng)都必需的基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、有機(jī)礦物質(zhì)及多種微量元素，因 此更加適宜益生菌的生長(zhǎng)繁殖和代謝，有利于益生菌生長(zhǎng)現(xiàn)象的觀察，也有利于人體服用 后的吸收與利用。2、具有堿性(pH 7.6-7.8)的酸堿度，因此有利于雙歧桿菌、乳酸桿菌、嗜 熱鏈球菌等常見(jiàn)益生菌的生長(zhǎng)繁殖和代謝活動(dòng)。3、適用于多克隆發(fā)酵，液體的培養(yǎng)基中所 具有的化學(xué)與物理性狀，使其有利于益生菌形成多克隆生長(zhǎng)，因此在益生菌的微生物發(fā)酵 生產(chǎn)中，能夠用于進(jìn)行多菌種和菌株的共同或混合培養(yǎng)，形成多克隆生長(zhǎng)繁殖和代謝活動(dòng)， 降低了生產(chǎn)的時(shí)間和原料成本。4、采用多克隆發(fā)酵技術(shù)，設(shè)備條件要求低
【具體實(shí)施方式】
[0014] 實(shí)施例1
[00? 5 ]按量稱取以下成分，5g蛋白胨、3g葡萄糖、3g酵母粉、1 g菊糖、1 g果糖、1 g瓊脂、0.1 g 磷酸氫二鉀、O.lg葡萄糖酸鈣、〇.〇5g葡萄糖酸鋅、0.1檸檬酸鐵、1000mL水。置于容器內(nèi)，制 得溶液備用；向溶液中加入適量的碳酸氫鈉，調(diào)節(jié)溶液PH值，直到溶液PH值為7.6~7.8;然 后將溶液進(jìn)行分裝，然后進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，控制溫度在121.3°C，時(shí)間為15~30min，制得 液體培養(yǎng)基。
[0016] 實(shí)施例2
[00?7]按量稱取以下成分，5g蛋白胨、3g葡萄糖、3g酵母粉、1 g菊糖、1 g果糖、8g瓊脂、0.1 g 磷酸氫二鉀、O.lg葡萄糖酸鈣、〇.〇5g葡萄糖酸鋅、0.1檸檬酸鐵、1000mL水。置于容器內(nèi)，制 得溶液備用；向溶液中加入適量的碳酸氫鈉，調(diào)節(jié)溶液PH值，直到溶液PH值為7.6~7.8;然 后將溶液進(jìn)行分裝，然后進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，控制溫度在121.3°C，時(shí)間為15~30min，制得 固體培養(yǎng)基。
[0018] 表1為使用本培養(yǎng)基傳統(tǒng)發(fā)酵方法與多克隆發(fā)酵方法的基本特征比較：
[0019]
[0020]
[0021] 由上表可知:使用上述步驟制得的培養(yǎng)基，含有細(xì)菌和人體生理活動(dòng)必需的、性質(zhì) 明確和安全的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、化學(xué)物質(zhì)和有機(jī)礦物質(zhì)或微量元素，具有堿性(pH 7.6-7.8)的酸 堿度，因此有利于雙歧桿菌、乳酸桿菌、嗜熱鏈球菌等常見(jiàn)益生菌的生長(zhǎng)繁殖和代謝活動(dòng)。 也可作為營(yíng)養(yǎng)液用于人體服用，有利于人體的吸收與利用。其物理性狀澄清透明，培養(yǎng)基的 化學(xué)組成簡(jiǎn)單和含有低濃度瓊脂（固體培養(yǎng)基的瓊脂濃度為8.Og/L，液體培養(yǎng)基的瓊脂濃 度為1.0-2. Og/L)，不同于傳統(tǒng)固體培養(yǎng)基的瓊脂濃度（固體培養(yǎng)基的瓊脂濃度為15-20g/ L，液體培養(yǎng)基不含瓊脂）。因此具有軟瓊脂性質(zhì)的固體培養(yǎng)基，更有利于各種益生菌的生長(zhǎng) 繁殖、分離培養(yǎng)及其生長(zhǎng)現(xiàn)象的觀察。液體培養(yǎng)基中含有少量瓊脂，有利于不同的益生菌分 散和形成多克隆分散和懸浮生長(zhǎng)，因此能夠用于益生菌的多個(gè)菌種和菌株的發(fā)酵生產(chǎn)。
[0022] 由于細(xì)菌在培養(yǎng)基內(nèi)形成了多克隆生長(zhǎng)與發(fā)酵，因此可獲得極大數(shù)量的菌細(xì)胞， 使培養(yǎng)物的細(xì)菌數(shù)量達(dá)到十萬(wàn)兆億個(gè)菌落形成單位(CFU)，從而有利于顯著提高益生菌的 菌細(xì)胞數(shù)量及其代謝產(chǎn)物的含量。
[0023]液體的培養(yǎng)基所具有的化學(xué)與物理性狀，使其有利于益生菌形成多克隆生長(zhǎng)。因 此在益生菌的微生物發(fā)酵生產(chǎn)中，能夠用于進(jìn)行多菌種和菌株的共同或混合培養(yǎng)，形成多 克隆生長(zhǎng)繁殖和代謝活動(dòng)，降低了生產(chǎn)的時(shí)間和原料成本。細(xì)菌在液體培養(yǎng)基內(nèi)形成分散 的多個(gè)克隆分布，降低了各菌種和菌株間的相互影響與拮抗作用，從而有利于細(xì)菌的長(zhǎng)期 存活，有助于提高益生菌產(chǎn)品的保質(zhì)期和使用效果。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種益生菌多克隆發(fā)酵的培養(yǎng)基，其特征在于：按質(zhì)量分別包括以下成分：5g蛋白 胨、3g葡萄糖、3g酵母粉、lg菊糖、lg果糖、1~8g瓊脂、0 . lg磷酸氫二鉀、0. lg葡萄糖酸鈣、 0.05g葡萄糖酸鋅、0.1檸檬酸鐵、lOOOmL水。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌多克隆發(fā)酵的培養(yǎng)基，其特征在于:按質(zhì)量分別包括以 下成分:5g蛋白胨、3g葡萄糖、3g酵母粉、lg菊糖、lg果糖、lg瓊脂、0. lg磷酸氫二鉀、0. lg葡 萄糖酸鈣、〇. 〇5g葡萄糖酸鋅、0.1檸檬酸鐵、lOOOmL水。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌多克隆發(fā)酵的培養(yǎng)基，其特征在于:按質(zhì)量分別包括以 下成分:5g蛋白胨、3g葡萄糖、3g酵母粉、lg菊糖、lg果糖、8g瓊脂、0. lg磷酸氫二鉀、0. lg葡 萄糖酸鈣、〇. 〇5g葡萄糖酸鋅、0.1檸檬酸鐵、lOOOmL水。4. 一種益生菌多克隆發(fā)酵的培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于:包括以下步驟； 1) 按量稱取上述各成分，置于容器內(nèi)，加入lOOOmL水，制得溶液備用； 2) 向步驟1)在溶液中加入適量的碳酸氫鈉，調(diào)節(jié)溶液PH值，直到溶液PH值為7.6~7.8; 3) 將步驟2)中的溶液分裝，然后進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，控制溫度在121.3 °C，時(shí)間為15~ 30min，得到益生菌的液體培養(yǎng)基或固體培養(yǎng)基。
【文檔編號(hào)】C12R1/46GK106085908SQ201610436705
【公開(kāi)日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年6月17日
【發(fā)明人】王和, 王丹霓
【申請(qǐng)人】王和