一種釕配合物及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明具體涉及一種釕配合物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 癌癥是目前威脅人類健康和生命安全的最主要的疾病之一。全球每年約有1270萬 人被確診為癌癥患者，全世界每年死于癌癥的人數(shù)占總死亡人數(shù)的13%。我國(guó)每年約有150 萬人死于癌癥，且呈現(xiàn)逐年上升趨勢(shì)。自從順鉑被發(fā)現(xiàn)有抗癌活性以來，鉑類金屬抗癌藥物 的應(yīng)用和研究得到迅速發(fā)展。其中鉑類藥物抗腫瘤作用機(jī)制主要是以DNA為主要靶標(biāo)，破壞 DNA的復(fù)制及抑制細(xì)胞分裂等作用來抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。但是鉑類藥物長(zhǎng)期使用具有毒副 作用大，耐藥性強(qiáng)及抗癌譜窄等缺點(diǎn)。因此，尋找高效、高選擇和副作用小的抗癌藥物是抗 癌藥物開發(fā)的主要方向。
[0003] 釕配合物與順鉑相比，具有相對(duì)低的毒性，高選擇性，在體內(nèi)易吸收并很快被排泄 及克服鉑類藥物的細(xì)胞耐藥性等特點(diǎn)，被認(rèn)為最有前途的抗腫瘤藥物之一(Coord. Chem. Rev.，2002，232，69)。到目前為止，兩種釕配合物NAMI和KP1019已經(jīng)進(jìn)入二期臨床試驗(yàn) 階段，前者對(duì)鼠類的轉(zhuǎn)移瘤有明顯的抑制作用，后者對(duì)結(jié)腸癌有明顯的治療效果，能夠抑制 一些順鉑不起作用的腫瘤生長(zhǎng)。但是目前釕配合物的抗腫瘤機(jī)制主要是以DNA為靶標(biāo)或者 以線粒體為靶點(diǎn)的誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的抗腫瘤機(jī)制。該類釕配合物存在毒副作用大和低選 擇性等缺點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種釕配合物的制備及其應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是： 一種釕配合物，由陽(yáng)離子和陰離子組成，所述陽(yáng)離子為[Ru(phen)2(HIPMP)]2+，結(jié)構(gòu)式 如下：
[0006] 優(yōu)選的，所述陰離子為無機(jī)鹽離子。
[0007] 優(yōu)選的，所述無機(jī)鹽陰離子為(C104r或C1'
[0008] 所述釕配合物的制備方法，包括下列步驟： 1) 將1，10-鄰菲羅啉-5,6_二酮、乙酸銨和5-甲基水楊醛，在惰性氣體保護(hù)下充分反應(yīng) 得到中間產(chǎn)物HIPMP; 2) 將步驟1)得到的中間產(chǎn)物HIPMP與(?8-[Κιι(ρ1ιθη)2(：?2]·2Η2〇,在惰性氣體保護(hù)下充 分反應(yīng)，冷卻至室溫后慢慢滴加陰離子無機(jī)鹽的飽和溶液產(chǎn)生沉淀，沉淀進(jìn)一步純化干燥 得釕配合物。
[0009] 優(yōu)選的，步驟1)中反應(yīng)所加入的1，10-鄰菲羅啉-5，6_二酮、乙酸銨和5-甲基水楊 醛物質(zhì)的量比為1:20:1。
[0010]優(yōu)選的，步驟1)中反應(yīng)所用的溶劑為冰醋酸。
[0011]優(yōu)選的，步驟1)的反應(yīng)以加熱回流的方法進(jìn)行。
[0012]優(yōu)選的，步驟1)反應(yīng)得到的中間產(chǎn)物HIPMP進(jìn)一步純化，包括下列步驟：用少量的 乙醇溶解，用硅膠裝柱，乙醇作為淋洗劑，收集黃色組分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到HIPMP黃色粉末。 [0013] 優(yōu)選的，步驟2)中反應(yīng)所加入的HIPMP與cis-[Ru(phen)2Cl2].2H 20的物質(zhì)的量比 為 1:1〇
[0014]優(yōu)選的，步驟2)中反應(yīng)所用的溶劑為乙醇或乙二醇。
[0015]優(yōu)選的，步驟2)中反應(yīng)所用的溶劑為乙醇。
[0016] 優(yōu)選的，步驟2)的反應(yīng)以加熱回流的方法進(jìn)行。
[0017] 優(yōu)選的，步驟2)中的無機(jī)鹽陰離子為(C104r或C廠。
[0018] 優(yōu)選的，步驟2)cis-[Ru(phen)2Cl2] · 2H20和HIPMP按照物質(zhì)的量比為1:1加入到 乙醇中，惰性氣體保護(hù)下加熱回流8小時(shí)，得紅色清液，冷卻至室溫后慢慢滴加 NaCKk飽和 溶液或者直接旋蒸，產(chǎn)生棕紅色沉淀。
[0019] 上述任一項(xiàng)所述釕配合物在抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
[0020]優(yōu)選的，所述癌癥包括宮頸癌、肝癌、肺癌或鼻咽癌。
[0021]本發(fā)明的有益效果是： 本專利公開的釕配合物，是一種具有強(qiáng)的抑制腫瘤細(xì)胞毒性的、以內(nèi)質(zhì)網(wǎng)為靶點(diǎn)誘導(dǎo) 腫瘤細(xì)胞凋亡的釕配合物，對(duì)于研究高效的釕抗腫瘤藥物有重要的意義。
[0022]本發(fā)明的釕配合物是一種結(jié)構(gòu)新穎的具有抗癌作用的、含對(duì)甲苯酚結(jié)構(gòu)單核釕 (II)配合物。
[0023] 本發(fā)明的單核釕（II)配合物具有很好的抗癌活性，尤其對(duì)人宮頸癌細(xì)胞、肝癌細(xì) 胞、肺癌細(xì)胞或鼻咽癌細(xì)胞等癌癥治療效果顯著。
[0024] 本發(fā)明的單核釕（II)配合物誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡主要涉及內(nèi)源性的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通路。
[0025] 本發(fā)明的單核釕(II)配合物具有較低的正常細(xì)胞毒性和高選擇性。
【附圖說明】
[0026] 圖1為配合物[Ru(phen)2(HIPMP)](Cl〇4)2的合成路線圖； 圖2為釕配合物對(duì)腫瘤細(xì)胞增殖抑制實(shí)驗(yàn)圖； 圖3為釕配合物誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞凋亡流式檢測(cè)圖； 圖4為HeLa 細(xì)胞與f了配合物培育2h后與ER-Tracker、Mito-Tracker和LYSO-Tracke;r共 染后細(xì)胞成像圖； 圖5為釕配合物對(duì)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)通道蛋白表達(dá)的影響圖。
【具體實(shí)施方式】
[0027]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說明，但并不局限于此。
[0028] 實(shí)施例1單核釕配合物[Ru(phen)2(HIPMP)](Cl〇4)2的合成 (1) 將1，10-鄰菲羅啉-5，6_二酮、乙酸銨和5-甲基水楊醛按照物質(zhì)的量比為1:20:1，溶 于適量冰醋酸中，惰性氣體保護(hù)下混合加熱回流4小時(shí)，混合物冷卻至室溫后加入水，用25% 氨水中和，抽濾，得到黃色沉淀用水和乙醚洗滌，得到相應(yīng)粗產(chǎn)物。粗產(chǎn)物用少量的乙醇溶 解，用硅膠（60-100目）裝柱，乙醇作為淋洗劑，收集黃色組分，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到黃色粉末2_ (lH_imidaz〇-[4，5_f] [ 1，10]phenanthrolin-2_yl )-4_methylphenol (即中間產(chǎn)物 HIPMP) 〇 產(chǎn)率：83%。厶的1· Calcd for C2QH14N4O: C，73.61; Η, 4.32; N，17.17. Found: C， 73.14; H, 4.61; N, 17.32%. FAB-MS: m/z = 327 (M+l)； (2) cis-[Ru(phen)2Cl2] · 2H20和HIPMP按照物質(zhì)的量比為1:1加入到適量乙醇中，惰性 氣體保護(hù)下加熱回流8小時(shí)，得紅色清液，冷卻至室溫后慢慢滴加 NaCl〇4飽和溶液，產(chǎn)生棕 紅色沉淀。抽濾，產(chǎn)物過柱用乙腈與乙醇體積比為10 :1的混合液沖洗，真空干燥得終產(chǎn)物 [Ru(phen)2(HIPMP)](Cl〇4)2。合成路線圖見圖 1。
[0029] 合成產(chǎn)率為70%。Anal. Calcd for C44H3QN8CI2O9RU: C, 53.56; H, 3.06; N， 11.36%; Found: C, 53.87; H, 2.92; N, 11.58%. ES-MS [CH3CN, m/z]: 788.2 ([M-2Cl04-H] + ), 394.1 ([M-2Cl04]2+). 4 MIR (400 MHz, DMS〇-d6) ppm: 9.18 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 9.03 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.78 (d, J = 3.8 Hz, 2H), 8.77 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 8.40 (s, 4H), 8.16 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 8.12 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 8.08 (d, J = 12.0 Hz, 2H), 8.04 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 7.88(d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.78 (m, 2H), 7.78 (dd, J = 8.0 Hz, 2H), 7.39 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.14 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 2.36 (s, 3H).〇
[0030] 實(shí)施例2單核釕（II)配合物對(duì)腫瘤細(xì)胞HeLa、A549、HepG2和CNE-1增殖的抑制作 用 細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn):采用MTT法研究了配合物的體外毒性實(shí)驗(yàn)。首先將實(shí)驗(yàn)細(xì)胞置于37°C， 5.0% C02培養(yǎng)箱中生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期，0.25%胰酶消化收集細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度，使細(xì)胞密 度大約在1 X 104個(gè)/mL，每孔100 mL接種于96孔板，細(xì)胞密度約為3-5 X 103個(gè)/孔，置于37 °C、 5% C02的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。換液，加入不同濃度梯度的藥物，每個(gè)濃度做3個(gè)平行樣，設(shè)置 空白調(diào)零組（培養(yǎng)基、MTT、DMS0)，空白組（培養(yǎng)基、細(xì)胞、相同濃度的藥物溶解介質(zhì)、MTT、 DMS0)，陽(yáng)性對(duì)照組(培養(yǎng)基、細(xì)胞、不同濃度的順鉑、MTT、DMS0)。置于37°C、5% C02的培養(yǎng) 箱中繼續(xù)培養(yǎng)48 h。吸去上清，每孔加入90 μL新鮮培養(yǎng)液，再加入10 μL MTT溶液（5 mg/mL，即0.5% MTT)，繼續(xù)培養(yǎng)4 h。終止培養(yǎng)，棄去孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入150 μL DMS0,置 于搖床上低速振蕩30 min，使結(jié)晶物充分溶解。酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀檢測(cè)490 nm波長(zhǎng)的各孔的 吸光度值0D。
[0031] 相關(guān)的細(xì)胞增殖的抑制率及半數(shù)抑制濃度（IC5Q)用下面的公式進(jìn)行計(jì)算:生長(zhǎng)抑 制率=(〇版《-〇與#)/(ODij^-ODsa)，所有0D值均減去空白調(diào)零組0D值。將抑制率與藥物濃度 作圖，得出劑量反應(yīng)曲線，從中計(jì)算出IC 5Q值。單核釕配合物[Ru(phen)2(HIPMP)](Cl