膦（33mg，2當量）的無水四氫呋喃（3mL)溶液。將反應在氮下 在室溫攪拌。在1小時后，使用1 : 1乙酸乙酯/甲醇作為洗脫劑在二氧化硅上的TLC分 析顯示Rf~0. 2的極性產(chǎn)物的徹底形成。使用Phenomenex，Cls4. 6mmX25cm柱和以1. OmL/ 分鐘流速的10 - 70% B(A =具有0. 05% TFA的水，B =具有0. 05% TFA的MeCN)的30分 鐘梯度和在260nm的UV檢測，執(zhí)行小部分的反應混合物的HPLC分析。觀察到在Rt = 25. 2 分鐘洗脫的產(chǎn)物并且是主要組分。將反應用乙酸乙酯（25mL)和IN HCl(25mL)稀釋。分離 具有產(chǎn)物的HC1層，并且用乙酸乙酯洗滌2次（2X25mL)。隨后將HC1層在冰中冷卻，并且 用5% K0H水溶液處理直至形成懸液。將這種懸液用乙酸乙酯萃?。?X25mL)。將合并的 乙酸乙酯萃取物用水（25mL)洗滌。隨后將它在無水硫酸鎂上干燥，過濾且在減壓下濃縮， 以提供化合物5a。產(chǎn)量=24. 5mg(82% );觀察到MALDI-TOF MS 487. 5。
[0275]b)化合物5c
[0276] 將化合物5a (24. 5mg，51. 3微摩爾）、1，3-丙烷磺內酯（125mg，20當量）和2,6-二 叔丁基吡啶（79uL，7當量）在離子液體[BM頂][PF6] (0. 5mL)中的混合物在150°C加熱24 小時。隨后將反應冷卻至室溫，并且抽取小部分（l-2uL)，用甲醇稀釋并且如節(jié)段（a)中所 述通過HPLC分析。觀察到在Rt = 18分鐘洗脫的吖啶鶴|酯產(chǎn)物5b (> 80%轉化；觀察到 MALDI-TOF MS 731.04)。將反應在乙酸乙酯（25mL)和水（25mL)之間分配。將含有產(chǎn)物的 水層分離，并且用乙酸乙酯（50mL)洗滌1次。隨后將它在減壓下濃縮。將殘渣在10mL 1N HC1中在氮下回流2小時，并且冷卻至室溫。反應混合物的HPLC分析指出在Rt = 15分鐘洗 脫的產(chǎn)物5c的徹底形成。使用YMC，Cls30X300mm柱和以20mL/分鐘溶劑流速的10 - 70% B (A =具有0. 05 % TFA的水，B =具有0. 05 % TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV 檢測，通過制備型HPLC純化產(chǎn)物。合并含有產(chǎn)物的HPLC級分，并且在減壓下濃縮，以給出 化合物 5c。產(chǎn)量=32mg(總共89% );觀察到 MAIDI-TOF MS 717. 1。
[0277] c)化合物5d
[0278] 用二異丙基乙胺（39uL，5當量）和TSTU(67mg，5當量）處理化合物5c(32mg， 44. 6微摩爾）的DMF(3. 4mL)和水（0. 6mL)溶液。將反應在室溫攪拌。在15分鐘后，使用 Phenomenex，C1S4. 6mmX25cm 柱和以 1. OmL/ 分鐘流速的 10 - 70% B(A =具有 0? 05% TFA 的水，B =具有0. 05% TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV檢測，執(zhí)行小部分的 反應混合物的HPLC分析。觀察到在Rt = 17分鐘洗脫的產(chǎn)物并且是主要組分。使用YMC， Cls30X300mm柱和以20mL/分鐘溶劑流速的10 - 70% B(A =具有0? 05% TFA的水，B =具 有0. 05% TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV檢測，通過制備型HPLC純化產(chǎn)物。 合并含有產(chǎn)物5d的HPLC級分，在-80°C冷凍，并且凍干至干燥。產(chǎn)量=25mg(69% );觀察 到 MALDI-TOF MS 814.1。
[0279] 下述反應描述了ZC3M-AE-NHS，化合物5d的合成。
[0280]
[0281] 實施例6
[0282] ZC6M-AE-NHS,化合物 6d 的合成
[0283]a)化合物 6a
[0284] 用偶氮二甲酸二異丙酯（25uL，2當量）處理2-羥基吖啶甲酯（25mg，62.3微摩 爾）、6_二甲氨基-1-己醇（18mg，2當量）和三苯基膦（33mg，2當量）的無水四氫呋喃 (3mL)溶液。將反應在氮下在室溫攪拌1小時，并且隨后如節(jié)段（a)、實施例5中所述操作。 使用 Phenomenex，Cls4. 6mmX25cm柱和以 1. OmL/分鐘流速的 10 - 100%B(A=具有 0? 05% TFA的水，B =具有0. 05% TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV檢測，執(zhí)行小部分 的反應混合物的HPLC分析。觀察到在Rt = 22分鐘洗脫的產(chǎn)物并且是主要組分。產(chǎn)量= 33. 5mg (定量）；觀察到 MALDI-TOF MS 529. 5。
[0285] b)化合物6c
[0286] 將化合物6a (33. 5mg，63. 3微摩爾）、1，3-丙烷磺內酯（155mg，20當量）和2,6-二 叔丁基吡啶（97uL，7當量）在離子液體[BM頂][PF6] (0. 5mL)中的混合物在150°C加熱24 小時。隨后將反應冷卻至室溫，并且抽取小部分（l-2uL)，用甲醇稀釋并且如節(jié)段（a)中所 述通過HPLC分析。觀察到在Rt = 16分鐘洗脫的吖啶働酯產(chǎn)物6b (> 80%轉化；觀察到 MALDI-TOF MS 773. 5)。將反應混合物如節(jié)段（b)、實施例5中所述操作。將吖啶酯6b在 10mL IN HC1中在氮下回流2小時，并且冷卻至室溫。反應混合物的HPLC分析指出在Rt = 14分鐘洗脫的產(chǎn)物6c的徹底形成。使用YMC，C1S30 X 300mm柱和以20mL/分鐘溶劑流速的 10 - 100% B(A =具有0? 05% TFA的水，B =具有0? 05% TFA的MeCN)的30分鐘梯度和 在260nm的UV檢測，通過制備型HPLC純化產(chǎn)物。合并含有產(chǎn)物的HPLC級分，并且在減壓 下濃縮，以給出化合物6c。產(chǎn)量=26. 8mg(總共56% )。
[0287] c)化合物 6d
[0288] 用二異丙基乙胺（31uL，5當量）和TSTU(53mg，5當量）處理化合物6c(26.9mg， 35. 3微摩爾）的DMF(3. 4mL)和水（0.6mL)溶液。將反應在室溫攪拌。在15分鐘后，使用 Phenomenex，Cls4. 6mmX25cm柱和以1. OmL/分鐘流速的10 - 100% B(A=具有 0?05% TFA 的水，B=具有0.05% TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV檢測，執(zhí)行小部分的反 應混合物的HPLC分析。觀察到在Rt = 15. 4分鐘洗脫的產(chǎn)物并且是主要組分。使用YMC， C1S30 X 300mm柱和以20mL/分鐘溶劑流速的10-100%B (A=具有0.05%TFA的水，B=具 有0.05% TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV檢測，通過制備型HPLC純化產(chǎn)物。 合并含有產(chǎn)物6d的HPLC級分，在-80°C冷凍，并且凍干至干燥。產(chǎn)量=19. 3mg(63%);觀 察到MALDI-TOF MS 856. 2。
[0289] 下述反應描述了ZC6M-AE-NHS，化合物6d的合成。
[0292] ZC8M-AE-NHS,化合物 7d 的合成
[0293] a)化合物 7a
[0294] 用偶氮二甲酸二異丙酯（30uL，2當量）處理2-羥基吖啶甲酯（30mg，75微摩爾）、 8_二甲氨基-1-辛醇（26mg，2當量）和三苯基膦（40mg，2當量）的無水四氫呋喃（5mL) 溶液。將反應在氮下在室溫攪拌1小時，并且隨后如節(jié)段（a)、實施例5中所述操作。使 用 Phenomenex，C1S4. 6mmX25cm 柱和以 1. OmL/ 分鐘流速的 10 - 100% B(A =具有 0? 05% TFA的水，B =具有0. 05% TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV檢測，執(zhí)行小部 分的反應混合物的HPLC分析。觀察到在Rt = 24分鐘洗脫的產(chǎn)物并且是主要組分。產(chǎn)量 13mg(31% );觀察到 MALDI-TOF MS 557. 1。
[0295] b)化合物 7c
[0296] 將化合物7a(13mg，23.3微摩爾）、1，3_丙烷磺內酯（57mg，20當量）和2,6_二 叔丁基吡啶（36uL，7當量）在離子液體[BM頂][PF6] (0. 2mL)中的混合物在150°C加熱24 小時。隨后將反應冷卻至室溫，并且抽取小部分（l-2uL)，用甲醇稀釋并且如節(jié)段（a)中所 述通過HPLC分析。觀察到在Rt = 17. 4分鐘洗脫的吖啶酯產(chǎn)物7b (> 80%轉化；觀察到 MALDI-TOF MS 800. 8)。將反應混合物如節(jié)段（b)、實施例5中所述操作。將吖啶酯7b在 5mL IN HC1中在氮下回流2小時，并且冷卻至室溫。反應混合物的HPLC分析指出在Rt = 15. 3分鐘洗脫的產(chǎn)物7c的徹底形成。使用YMC，Cls30X300mm柱和以20mL/分鐘溶劑流速 的10 - 100% B(A =具有0? 05% TFA的水，B =具有0? 05% TFA的MeCN)的30分鐘梯度 和在260nm的UV檢測，通過制備型HPLC純化產(chǎn)物。合并含有產(chǎn)物的HPLC級分，并且在減 壓下濃縮，以給出化合物7c。產(chǎn)量=6. 8mg(總共37% );觀察到MALDI-TOF MS 787. 8。
[0297] c)化合物 7d
[0298] 用二異丙基乙胺（7.5uL，5當量）和TSTU(13mg，5當量）處理化合物7c(6.8mg， 8. 6微摩爾）的DMF(1. 7mL)和水（0. 3mL)溶液。將反應在室溫攪拌。在30分鐘后，使用 Phenomenex，Cls4. 6mmX25cm 柱和以 1. OmL/ 分鐘流速的 10 - 100% B(A =具有 0? 05% TFA 的水，B =具有0. 05% TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV檢測，執(zhí)行小部分的反 應混合物的HPLC分析。觀察到在Rt = 16. 5分鐘洗脫的產(chǎn)物并且是主要組分。使用YMC， Cls30X300mm柱和以20mL/分鐘溶劑流速的10 - 100% B(A =具有0. 05% TFA的水，B = 具有0. 05 % TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV檢測，通過制備型HPLC純化產(chǎn) 物。合并含有產(chǎn)物7d的HPLC級分，在-80°C冷凍，并且凍干至干燥。產(chǎn)量=5mg(66% ); 觀察到 MALDI-TOF MS 885.0。
[0299] 下述反應描述了 ZC8M-AE-NHS，化合物7d的合成。
[0300]
[0301] 實施例8
[0302]AZC3-AE-NHS,化合物 8d 的合成
[0303]a)化合物 8a
[0304] 使用美國專利號7, 319, 041 B2中所述的反應，由2-芐氧基-7-甲氧基吖啶-9羧 酸和2,6-二甲基-4-羥基苯甲酸甲酯合成化合物2-羥基-7-甲氧基吖啶甲酯。用偶氮 二甲酸二異丙酯（23uL，2當量）處理2-羥基-7-甲氧基吖啶甲酯（25mg，0.058毫摩爾）、 3_二甲氨基-1-丙醇（13.6uL，2當量）和三苯基膦（30mg，2當量）的無水四氫呋喃（5mL) 溶液。將反應在氮下在室溫攪拌。在1小時后，將它如節(jié)段（a)、實施例5中所述操作。使 用 Phenomenex，C1S4. 6mmX25cm 柱和以 1. OmL/ 分鐘流速的 10 - 100% B(A =具有 0? 05% TFA的水，B =具有0. 05% TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV檢測，執(zhí)行小部 分的反應混合物的HPLC分析。觀察到在Rt = 20分鐘洗脫的產(chǎn)物并且是主要組分。產(chǎn)量 27mg(90%);觀察到 MALDI-TOF MS 517.9。
[0305]b)化合物 8c
[0306] 將化合物8a (27mg，52. 2微摩爾）、1，3-丙烷磺內酯（128mg，20當量）和2,6-二叔 丁基吡啶（80uL，7當量）在離子液體[BM頂][PF6] (0. 5mL)中的混合物在150°C加熱24小 時。隨后將反應冷卻至室溫，并且抽取小部分（l-2uL)，用甲醇稀釋并且如節(jié)段（a)中所述 通過HPLC分析。觀察到在Rt = 15. 2分鐘洗脫的吖啶it酯產(chǎn)物8b。將反應混合物如節(jié)段 (b)、實施例5中所述操作。將吖啶鐨酯8b在10mL IN HC1中在氮下回流2小時，并且冷卻 至室溫。反應混合物的HPLC分析指出在Rt = 13. 5分鐘洗脫的產(chǎn)物8c的徹底形成。使用 YMC，Cls30X300mm柱和以20mL/分鐘溶劑流速的10 - 100% B(A =具有0? 05% TFA的水， B =具有0. 05% TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV檢測，通過制備型HPLC純化 產(chǎn)物。合并含有產(chǎn)物的HPLC級分，并且在減壓下濃縮，以給出化合物8c。產(chǎn)量=22mg (總 共 56% );觀察到 MALDI-TOF MS 747. 4。
[0307]c)化合物 8d
[0308] 用二異丙基乙胺（26uL，5當量）和TSTU(44mg，5當量）處理化合物8c(22mg， 29. 5微摩爾）的DMF(3. 6mL)和水（0. 4mL)溶液。將反應在室溫攪拌。在30分鐘后，使用 Phenomenex，Cls4. 6mmX25cm 柱和以 1. OmL/ 分鐘流速的 10 - 100% B(A =具有 0? 05% TFA 的水，B =具有0. 05% TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV檢測，執(zhí)行小部分的反 應混合物的HPLC分析。觀察到在Rt = 14. 6分鐘洗脫的產(chǎn)物并且是主要組分。使用YMC， C1S30 X 300mm柱和以20mL/分鐘溶劑流速的10 - 100 % B (A =具有0. 05 % TFA的水，B =具 有0. 05% TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV檢測，通過制備型HPLC純化產(chǎn)物。 合并含有產(chǎn)物8d的HPLC級分，在-80°C冷凍，并且凍干至干燥。產(chǎn)量=17. 6mg(70% );觀 察到 MALDI-TOF MS 843. 9. 0。
[0309] 下述反應描述了 AZC3M-AE-NHS，化合物8d的合成。
[0310]
[0311] 實施例9
[0312]AZC6-AE-NHS,化合物 9d 的合成
[0313]a)化合物 9a
[0314] 用偶氮二甲酸二異丙酯（23uL，2當量）處理2-羥基-7-甲氧基吖啶甲酯（25mg， 0.058毫摩爾）、6_二甲氨基-1-己醇（17mg，2當量）和三苯基膦（30mg，2當量）的無水 四氫呋喃（3mL)溶液。將反應在氮下在室溫攪拌。在2小時后，將它如節(jié)段（a)、實施例5 中所述操作。使用Phenomenex，C 184. 6mmX25cm柱和以1. OmL/分鐘流速的10 - 100% B(A =具有0. 05% TFA的水，B =具有0. 05% TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV檢 測，執(zhí)行小部分的反應混合物的HPLC分析。觀察到在Rt = 22. 5分鐘洗脫的產(chǎn)物并且是主 要組分。產(chǎn)量 20mg(63%);觀察到 MALDI-TOF MS 559.8。
[0315]b)化合物 9c
[0316] 將化合物9&(2〇11^，35.9微摩爾）、1，3-丙烷磺內酯（8711^，20當量）和2,6-二叔 丁基吡啶（59uL，7當量）在離子液體[BM頂][PF6] (0. 5mL)中的混合物在150°C加熱24小 時。隨后將反應冷卻至室溫，并且抽取小部分（l-2uL)，用甲醇稀釋并且如節(jié)段（a)中所述 通過HPLC分析。觀察到在Rt = 15. 7分鐘洗脫的吖啶鐓酯產(chǎn)物9b (觀察到MALDI-TOF MS 803. 9)。將反應混合物如節(jié)段（b)、實施例5中所述操作。將吖啶鐵酯9b在10mL IN HC1中 在氮下回流2小時，并且冷卻至室溫。反應混合物的HPLC分析指出在Rt = 14. 9分鐘洗脫 的產(chǎn)物9c的徹底形成。使用YMC，Cls30X300mm柱和以20mL/分鐘溶劑流速的10 - 100% B (A =具有0. 05 % TFA的水，B =具有0. 05 % TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV 檢測，通過制備型HPLC純化產(chǎn)物。合并含有產(chǎn)物的HPLC級分，并且在減壓下濃縮，以給出 化合物 9c。產(chǎn)量=18. 3mg (總共 65% );觀察到 MALDI-TOF MS 790. 4。
[0317] c)化合物 9d
[0318] 用二異丙基乙胺（20uL，5當量）和TSTU(35mg，5當量）處理化合物9c(18.3mg， 23. 2微摩爾）的DMF(3. 6mL)和水（0. 4mL)溶液。將反應在室溫攪拌。在30分鐘后，使用 Phenomenex，Cls4. 6mmX25cm 柱和以 1. OmL/ 分鐘流速的 10 - 100% B(A =具有 0? 05% TFA 的水，B =具有0. 05% TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV檢測，執(zhí)行小部分的 反應混合物的HPLC分析。觀察到在Rt = 16分鐘洗脫的產(chǎn)物并且是主要組分。使用YMC， Cls30X300mm柱和以20mL/分鐘溶劑流速的10 - 100% B(A =具有0. 05% TFA的水，B = 具有0. 05 % TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV檢測，通過制備型HPLC純化產(chǎn) 物。合并含有產(chǎn)物9d的HPLC級分，在-80°C冷凍，并且凍干至干燥。產(chǎn)量=14mg(68%); 觀察到 MALDI-TOF MS 887.6。
[0319] 下述反應描述了 AZC6M-AE-NHS，化合物9d的合成。
[0321] 實施例10
[0322]NSP-2Z-DMAE-NHS,化合物 lOf 的合成
[0323]a)化合物 10a
[0324] 用二甲胺（20mL)mL)的四氫呋喃2. 0M溶液處理4-溴芐基溴化物（2g，8毫摩爾） 的無水四氫呋喃（10mL)溶液。將反應在室溫攪拌3天。隨后將反應混合物用乙酸乙酯 (75mL)稀釋且用100mL碳酸氫鈉飽和水溶液洗滌。將乙酸乙酯層分離且在無水硫酸鎂上干 燥。使用15%乙酸乙酯的己烷溶液在二氧化硅上的TLC分析顯示沒有原料和Rf = 0. 1的 極性產(chǎn)物形成。在減壓下濃縮乙酸乙酯溶液，以提供淡黃色油。產(chǎn)量=1.63g。
[0325]b)化合物 10b
[0326] 將靛紅（1. 12g，7. 6毫摩爾）的無水DMF(20mL)溶液在冰浴中在氮下冷卻，并且用 氫化鈉（0. 366g，1. 2當量，在礦物油中的60 %分散體）處理。將反應在冰浴中攪拌30分 鐘，并且隨后將化合物l〇a (1. 63g，7. 6毫摩爾）作為DMF (5mL)溶液連同碘化酮（2. 9g，2當 量）加入。將反應在140°C在氮下加熱24小時。隨后將它冷卻至室溫，用乙酸乙酯（30mL) 稀釋且過濾。使用10%甲醇的乙酸乙酯溶液作為洗脫劑在二氧化硅上的TLC顯示Rf~0. 1 的極性產(chǎn)物。將濾液在減壓下濃縮。將殘渣懸浮于100mL 10% K0H水溶液中，并且在氮下 回流4小時。隨后將反應混合物冷卻至室溫，并且用2N HC1酸化直至pH 5。出現(xiàn)黃色沉 淀物，其通過過濾收集且在真空下干燥。產(chǎn)量=〇.6g。這種化合物像這樣用于接下來的反 應。
[0327]c)化合物 10c
[0328] 在氮下用對甲苯磺酰氯（272mg，2當量）處理化合物10b(0. 2g，0. 714毫摩爾）的 無水吡啶（15mL)懸液。在短暫攪拌5分鐘后，加入2,6_二甲基-4-羥基苯甲酸甲酯（128mg， 0.714毫摩爾）。將所得到的反應在室溫攪拌3天。隨后將溶劑在減壓下去除，并且將殘渣 在乙酸乙酯（40mL)和IN HCl(50mL)之間分配。分離含有產(chǎn)物的HC1層，并且用乙酸乙酯 洗滌2次（2 X 40mL)。隨后將HC1溶液在冰浴中冷卻，并且用5 % K0H水溶液逐滴處理，直 至析出黃色沉淀物（pH~8)。將這種懸液用乙酸乙酯萃?。?X50mL)。將合并的乙酸乙酯 萃取物用水洗滌1次，并且在無水硫酸鎂上干燥。隨后將溶劑在減壓下去除，并且使用乙酸 乙酯作為洗脫劑，通過在二氧化硅上的快速層析純化粗產(chǎn)物。產(chǎn)量=95mg(30%);觀察到 MALDI-T0F MS 443. 7。
[0329]d)化合物10e
[0330] 將化合物10(3(2211^，49.5微摩爾）、1，3-丙烷磺內酯（12〇11^，20當量）和2,6-二 叔丁基吡啶（81. 5uL，7. 5當量）在離子液體[BM頂][PF6] (0? 5mL)中的混合物在150°C 加熱24小時。隨后將反應冷卻至室溫，并且抽取小部分（l-2uL)，用甲醇稀釋，并且使用 Phenomenex，C 1S4. 6mmX25cm 柱和以 1. OmL/ 分鐘流速的 10 - 70% B(A =具有 0? 05% TFA 的水，B =具有0. 05 % TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV檢測，通過HPLC進行分 析。觀察到在Rt = 17. 2分鐘洗脫的產(chǎn)物10d (~40 %轉化）。將反應混合物如節(jié)段（b)、 實施例5中所述操作。將吖啶鐠酯10d在10mL IN HC1中在氮下回流2小時，并且冷卻至 室溫。反應混合物的HPLC分析指出在Rt = 14. 0分鐘洗脫的產(chǎn)物10e的徹底形成。使用 YMC，Cls30X300mm柱和以20mL/分鐘溶劑流速的10 - 70% B(A =具有0. 05% TFA的水，B =具有0. 05 % TFA的MeCN)的30分鐘梯度和在260nm的UV檢測，通過制備型HPLC純化產(chǎn) 物。合并含有產(chǎn)物的HPLC級分，并且在減壓下濃縮，以給出化合物10e。產(chǎn)量=14. 5mg (總 共 44% );觀察到 MAIDI-TOF MS 673. 3。
[0331] c)化合物 10f
[0332] 用二異丙基乙胺（18. 8uL，5當量）和TSTU(32mg，5當量）處理化合物10e(14