含兩性離子的吖啶*化合物的制作方法
【專利說(shuō)明】含兩性離子的吖啶錯(cuò)化合物
[0001] 本申請(qǐng)是2010年11月12日申請(qǐng)的發(fā)明名稱為"含兩性離子的吖啶錯(cuò)化合物"、 國(guó)家申請(qǐng)?zhí)枮?01080052010. X的發(fā)明專利申請(qǐng)的分案申請(qǐng)。 發(fā)明領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及含有兩性離子的親水、化學(xué)發(fā)光n丫陡働化合物（acridinium compounds)。由于其親水性質(zhì)，這些吖啶働化合物顯示出與固相的低非特異性結(jié)合，并且對(duì) 于改善測(cè)定靈敏度潛在有用。
[0003] 發(fā)明背景
[0004] 化學(xué)發(fā)光卩丫陡鑄t酯（acridinium esters)已顯現(xiàn)為用于免疫測(cè)定以及核酸測(cè) 定的非常有用的標(biāo)記。來(lái)自吖啶II酯的光發(fā)射通過(guò)與堿性過(guò)氧化氫反應(yīng)觸發(fā)，這引起酚 酯鍵的分裂和其為光發(fā)射種類的激發(fā)態(tài)吖啶酮的形成。在苯酚離去基團(tuán)離開后二噁酮 (dioxetanone)中間產(chǎn)物的形成已在反應(yīng)機(jī)制中提出，并且假定是激發(fā)態(tài)吖啶酮的前體。取 決于反應(yīng)條件，來(lái)自吖啶隹翁酯的光發(fā)射的持續(xù)時(shí)間通常在數(shù)秒內(nèi)完成，并且可以使用光度 計(jì)進(jìn)行定量測(cè)量。吖啶織酯9-羧基苯基-N-甲基吖啶鐵溴化物在免疫測(cè)定中的應(yīng)用由 Simpson，J. S. A.等人（Nature第279卷，第646-647頁(yè)（1979)公開。然而，這種卩丫陡.鐵酯 是非常不穩(wěn)定的，從而限制其商業(yè)效用。這種不穩(wěn)定性起于在苯酚和吖啶鐵.環(huán)之間的不穩(wěn) 定9-羧基苯基酯連接的水解。
[0005] 在穩(wěn)定R丫陡鐵酯中的酸酯的嘗試中，Law等人（Journal of Bioluminescence and Chemiluminescence,第4卷，第88-89頁(yè)（1989)引入2個(gè)側(cè)接甲基，以穩(wěn)定這個(gè)酯鍵。發(fā) 現(xiàn)所得到的立體穩(wěn)定的吖啶隹貧酯，縮寫為DMAE-NHS [2 '，6 ' -二甲基-4' - (N-琥珀酰亞胺氧 羰基）苯基10-甲基吖啶錨-9-羧酸鹽]，具有與缺乏2個(gè)甲基的吖啶備酯相同的光輸出。 另一方面，當(dāng)與免疫球蛋白綴合時(shí)，前面一種化合物的穩(wěn)定性是極佳的，并且甚至在37°C在 pH 7下1周后也未顯示化學(xué)發(fā)光活性的喪失。相比之下，當(dāng)實(shí)施相同處理時(shí)，未被取代的吖 啶鶴I酯僅保留其10%的活性。
[0006] 為了減輕DMAE及其衍生物的疏水性質(zhì)，Law等人的美國(guó)專利號(hào)5, 656, 426公開 了命名為NSP-DMAE-NHS酯的親水形式的DMAE，其中N-甲基已由N-磺丙基（NSP)替換。 DMAE和NSP-DMAE目前在Siemens Healthcare Diagnostics的商業(yè)、自動(dòng)化免疫測(cè)定分析 儀ACS : 180?和Centaur ?中廣泛使用。
[0007] 為了進(jìn)一步增加NSP-DMAE的親水性，Natrajan等人在美國(guó)專利號(hào)6, 664, 043B2 中公開了具有與苯酚連接的親水改性劑例如聚乙二醇和陰離子精胺衍生物的NSP-DMAE衍 生物。稱為NSP-DMAE-HEG-戊二酸酯-NHS(縮寫為NSP-DMAE-HEG)且含有六乙二醇衍生物 (HEG)的一種此類吖啶輸酯的結(jié)構(gòu)在下述附圖中舉例說(shuō)明。在這種化合物中，a，《-二 氨基六乙二醇（二氨基-HEG)部分連接至苯酚，以增加吖啶鐵酯的水可溶性。戊二酸酯 部分連接至二氨基-HEG的末端并且轉(zhuǎn)化為NHS酯，以使得能夠標(biāo)記各種分子。除HEG外， 衍生自具有磺酸根和羧酸根基團(tuán)的精胺的陰離子改性劑也由Natrajan等人在美國(guó)專利號(hào) 6, 664, 043 B2 中公開。
[0008] 近來(lái)，Natrajan等人在美國(guó)專利號(hào)7, 309, 615 B2中描述了在吖啶儀|環(huán)的C2和/ 或C7上含有親水烷氧基（0R*)的親水、高量子產(chǎn)率吖啶鐵化合物，其中R*是包含磺丙基部 分或乙二醇部分或其組合的基團(tuán)。來(lái)自此類化合物增強(qiáng)的光輸出及其親水性質(zhì)使得其對(duì)于 改善免疫測(cè)定的靈敏度有用。稱為NSP-2,7-(0MHEG) 2-DMAE-AC-NHS(縮寫為HQYAE)的一 種此類化合物的結(jié)構(gòu)在下文舉例說(shuō)明。在美國(guó)專利號(hào)7, 309, 615 B2中描述的這種化合物 及其他化合物含有代替苯酚連接至吖啶鑄t環(huán)的聚乙二醇或陰離子磺酸根基團(tuán)
[0009]
[0010] 如上述專利中公開的在吖啶鐵酯的結(jié)構(gòu)中摻入聚乙二醇（PEG)部分和陰離子意 欲增加這些吖啶鐓酯的親水性質(zhì)以及降低衍生自這些化合物的綴合物的非特異性結(jié)合。在 使用固相例如顆?；蛭⒘康味ò宓臏y(cè)定中的非特異性結(jié)合是這些吖啶鐵酯綴合物與這些 固相的不需要的結(jié)合相互作用。這些不需要的結(jié)合相互作用一般增加測(cè)定的背景，導(dǎo)致在 測(cè)定中信噪比的凈降低且從而減少測(cè)定靈敏度。
[0011] 衍生抵抗蛋白質(zhì)吸收的惰性表面的聚乙二醇用途已在現(xiàn)有技術(shù)中描述。例如， Ostuni等在J. Am. Chem. Soc. 2000,17, 5605-5620中評(píng)估了連接至自裝配單層用于抵抗蛋 白質(zhì)吸收的眾多官能團(tuán)，并且觀察到賦予最佳抗性的聚乙二醇官能團(tuán)。更近來(lái)，Ladd等人 在Biomacromolecules 2008,9,1357-1361中；及其他人已報(bào)道兩性離子改良的親水表面 與PEG -樣對(duì)于蛋白質(zhì)吸收是惰性的，并且此外，已假定兩性離子比PEG在化學(xué)上更穩(wěn)定， 這是由于后者對(duì)于氧化切割的傾向。某些常見兩性離子例如磺基甜菜堿、羧基甜菜堿、磷基 甜菜堿（phosphobetaines)和氧化胺的結(jié)構(gòu)在下述附圖中舉例說(shuō)明。如同PEG,這些兩性離 子通常是電學(xué)中性的，由于在給定結(jié)構(gòu)內(nèi)正和負(fù)電荷的平衡（R1-R4 -般是烷基）。
[0012] 兩性離子的例子
[0013]
[0014] 其中氮原子是季氮的磺基甜菜堿在廣泛pH范圍內(nèi)維持其電學(xué)中性。另一方面，具 有三取代的氮的磺基甜菜堿在更高pH (pH >7)下可以獲得負(fù)電荷，因?yàn)樗鼈兛梢栽诘先?質(zhì)子化，從而中和其正電荷。類似地，羧基甜菜堿在更高pH下是電學(xué)中性的但可以在羧酸 根基團(tuán)上質(zhì)子化，并且在低pH (pH < 5)下獲得凈正電荷。
[0015] 用于在蛋白組學(xué)中應(yīng)用的兩性離子改良的突光染料近期已由Dratz和Grieco在 美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)?259333 A1 (2007年11月）中報(bào)道。觀察到由兩性離子染料標(biāo)記的蛋白 質(zhì)是水溶性的并且更順應(yīng)電泳分析，并且上述作者已請(qǐng)求保護(hù)使用兩性離子染料用于蛋白 質(zhì)分析的方法。
[0016] 現(xiàn)有技術(shù)未描述在化學(xué)發(fā)光吖啶鋒|酯中摻入電學(xué)中性、兩性離子官能團(tuán)，以改善 其性質(zhì)例如非特異性結(jié)合。此類化合物補(bǔ)充由Natrajan等人在美國(guó)專利號(hào)6, 664, 043 B2和美國(guó)專利號(hào)7, 309, 615 B2中描述的含PEG吖啶鐵酯，并且具有改善測(cè)定靈敏度的潛力。
[0017] 本領(lǐng)域存在關(guān)于用于免疫測(cè)定等的改善化學(xué)發(fā)光標(biāo)記的持續(xù)需要。因此，本發(fā)明 的目的是提供顯示出與固相減少的非特異性結(jié)合的化學(xué)發(fā)光吖啶錄t化合物。
[0018] 發(fā)明概述
[0019] 依照前述目的及其他，已驚奇地發(fā)現(xiàn)通過(guò)將兩性離子基團(tuán)摻入分子內(nèi)以增加其親 水性且因而減少與固相的非特異性結(jié)合，化學(xué)發(fā)光吖啶備I化合物的性質(zhì)得到改善。
[0020] 在本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了包含下述的化學(xué)發(fā)光吖啶縛t化合物：（i)連接至吖 啶養(yǎng)I核的氮原子的烴基團(tuán)，所述烴基團(tuán)任選由至多20個(gè)雜原子取代，和（ii)與取代的烴部 分連接的、吖啶鐵核的C9位置上的羧基或磺酰胺基團(tuán)，其中吖啶鐵化合物包含連接至吖啶 鑄t核的C2位置、吖啶錄|核的C 7位置、與羧基或磺酰胺基團(tuán)連接的烴部分、或連接至吖啶隹翁 核的氮原子的烴基團(tuán)的至少一個(gè)兩性離子官能團(tuán)；其中與不包含所述兩性離子官能團(tuán)的在 其他方面等同的吖啶隹貧化合物比較，所述吖啶纖化合物顯示出與固相減少的非特異性結(jié) 合。
[0021] 在一個(gè)實(shí)施方案中，化學(xué)發(fā)光吖啶鐵化合物是具有式I中所示的下述結(jié)構(gòu)的吖啶 鐠酯：
[0022]
[0023] 其中，
[0024] &是C i 35烷基、烯基、炔基或芳烷基，其各自可以含有至多20個(gè)雜原子，或橫丙基 或磺丁基，或&是基團(tuán)-R a_Z ;其中Ra是選自q 35烷基、烯基、炔基、芳基或芳烷基的二價(jià)基 團(tuán)，其各自任選含有至多20個(gè)雜原子；
[0025] 私和R3獨(dú)立地選自（i)氫、（ii)供電子基團(tuán)或（iii)基團(tuán)-Z ;
[0026] Z是下述形式的兩性離子基團(tuán)：
[0027]
[0028] X在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自鍵、-ch2-、氧、硫、-nrn-、酰胺（_NRn(C0)_)、氨基甲酸根 (_NR nC (〇)〇-)或脲基（_NRnC(0)NRn_);
[0029] R'和R"在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自Q 35烷基、烯基、炔基、芳基或芳烷基，其各自任 選含有至多20個(gè)雜原子；
[0030] Zi是基團(tuán)-Ra_Z2，其中Z2選自羧酸根（-C00 )、磺酸根（_S03 )、硫酸根（_0S03 )、磷 酸根（-〇P(〇) (0R) (〇 ))或氧離子（-0 );或在其中22是氧離子（-0 )的情況下，Ra可以是不 存在的；
[0031] n在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自1-12的整數(shù)；和
[0032] 心和1?8是相同或不同的，并且選自氧，C i 35烷基、烯基、炔基，烷氧基（_0R)，燒硫基 (-SR)或取代的氨基（_NR2);
[0033] R5、RjP R 7獨(dú)立地選自氫或基團(tuán)_ (CO) -R 15，條件是R5、RjP R 7中的2個(gè)是氫，并且 R5、&和R 7之一是所述基團(tuán)-(CO) -R 15;
[0034] R15是基團(tuán)-Z或基團(tuán)-X aR*，其中Xa是氧、硫或-NR N_，并且R*選自氫，Q 35烷基、烯 基、炔基、芳基或芳烷基，其各自任選含有至多20個(gè)雜原子，或R*是基團(tuán)-Ra-L，其中L是用 于與分析物、分析物類似物或關(guān)于分析物的結(jié)合配偶體形成綴合物的離去基團(tuán)；條件是當(dāng) R 15是基團(tuán)-Z時(shí)，那么X在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自鍵、-CH 2_、氧、硫或-NRn-;
[0035] R在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自Q35烷基、烯基、炔基、芳基或芳烷基，其各自含有至多 20個(gè)雜原子；和
[0036] #在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自氫，Ci 35烷基、烯基、炔基、芳基或芳烷基，其各自含有 至多20個(gè)雜原子；
[0037] 條件是1^、1?2、1?3、1?5、1? 6和1?7中的至少一個(gè)是基團(tuán)2。
[0038] 在另一個(gè)實(shí)施方案中，化學(xué)發(fā)光吖啶#翁化合物是具有式II中所示的下述結(jié)構(gòu)的 吖啶鋪磺酰胺：
[0039]
[0040]其中，
[0041] &是Ci35烷基、烯基、炔基或芳烷基，其各自可以含有至多20個(gè)雜原子，或橫丙基 或橫丁基，或Ri是基團(tuán) _R a_Z ;
[0042]私和R3獨(dú)立地選自⑴氫、（ii)供電子基團(tuán)或（iii)基團(tuán)_Z;
[0043] Y和Y'獨(dú)立地選自R、-Ra_Z或-Ra-L;其中L是包含離去基團(tuán)、親電子基團(tuán)或親核 基團(tuán)的可衍生官能團(tuán)，用于與分析物、分析物類似物或關(guān)于分析物的結(jié)合配偶體形成綴合 物；
[0044] Z是具有下述形式的兩性離子基團(tuán)：
[0045]
[0046] X在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自鍵、-CH2_、氧、硫、-NR"-、酰胺（-NRN(CO)-)、氨基甲酸 根（-NRNC(0)0-)或脲基（-NRNC(O)NRN-);
[0047] R'和R"在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自Q35烷基、烯基、炔基、芳基或芳烷基，其各自含 有至多20個(gè)雜原子；
[0048] Zi是基團(tuán)-Ra_Z2，其中Z2選自羧酸根（-C00 )、磺酸根（_S03 )、硫酸根（_0S03 )、磷 酸根（-0P(0) (0R) (〇 ))或氧離子（-0 );或在其中22是氧離子（-0 )的情況下，Ra可以是不 存在的；
[0049] n在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自1-12的整數(shù)；
[0050] R在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自Q35烷基、烯基、炔基、芳基或芳烷基，其各自含有至多 20個(gè)雜原子；
[0051] #在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自氫，C135烷基、烯基、炔基、芳基或芳烷基，其各自含有 至多20個(gè)雜原子；
[0052] 并且Ra是選自Ci35烷基、烯基、炔基、芳基或芳烷基的二價(jià)基團(tuán)，其各自任選含有 至多20個(gè)雜原子；
[0053] 條件是&、R2、R3、Y和Y'中的至少一個(gè)是所述兩性離子基團(tuán)Z。
[0054] 在本發(fā)明的另一個(gè)方面，提供了用于檢測(cè)分析物的試劑，其包含與分析物、分析物 類似物或關(guān)于分析物的結(jié)合配偶體結(jié)合的化學(xué)發(fā)光吖啶爾化合物，所述吖啶II化合物包含 (i)連接至吖啶働核的氮原子的烴基團(tuán)，所述烴基團(tuán)任選由至多20個(gè)雜原子取代，和（ii) 與取代的烴部分（任選由至多20個(gè)雜原子取代）連接的、吖啶懿t核的仏位置上的羧基或 磺酰胺基團(tuán)，其中所述吖啶鐵化合物包含連接至吖啶核的C2位置、吖啶鐵核的C7位置、 與羧基或磺酰胺基團(tuán)連接的烴基團(tuán)、或連接至吖啶鑄t核的氮原子的烴基團(tuán)的至少一個(gè)兩性 離子官能團(tuán)；其中與不包含所述兩性離子官能團(tuán)的在其他方面等同的吖啶德t化合物比較， 所述吖啶鐵化合物顯示出與固相減少的非特異性結(jié)合。
[0055] 在本發(fā)明的一個(gè)進(jìn)一步方面，提供了用于檢測(cè)或定量大分子分析物的測(cè)定，其包 含：(a)提供包含根據(jù)本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光吖啶鋒|化合物的綴合物，所述化學(xué)發(fā)光吖啶鑄|化 合物與對(duì)于分析物特異性的結(jié)合分子結(jié)合；(b)提供具有在其上固定了對(duì)于所述分析物特 異性的第二種結(jié)合分子的固體載體；（c)混合綴合物、固相和懷疑含有分析物的樣品以形 成結(jié)合復(fù)合物；（d)分離在固體載體上捕獲的結(jié)合復(fù)合物；(e)通過(guò)加入化學(xué)發(fā)光觸發(fā)試 劑，觸發(fā)來(lái)自步驟（d)的結(jié)合復(fù)合物的化學(xué)發(fā)光；（f)用光度計(jì)測(cè)量光發(fā)射的量；和（g)通 過(guò)比較由反應(yīng)混合物發(fā)射的光量與標(biāo)準(zhǔn)劑量應(yīng)答曲線，檢測(cè)分析物的存在或計(jì)算分析物的 濃度，所述標(biāo)準(zhǔn)劑量應(yīng)答曲線使發(fā)射的光量與分析物的已知濃度聯(lián)系。
[0056] 在另外一個(gè)方面，提供了用于檢測(cè)或定量小分子分析物的測(cè)定，其包含下述步驟： (a)提供分析物與根據(jù)本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光吖啶隹賞化合物的綴合物；(b)提供固定有對(duì)于分 析物特異性的結(jié)合分子的固體載體；（c)混合綴合物、固體載體和懷疑含有分析物的樣品 以形成結(jié)合復(fù)合物；(d)分離在固體載體上捕獲的結(jié)合復(fù)合物；（e)通過(guò)加入化學(xué)發(fā)光觸 發(fā)試劑，觸發(fā)來(lái)自步驟（d)的結(jié)合復(fù)合物的化學(xué)發(fā)光；（f)用光度計(jì)測(cè)量光量；和（g)通過(guò) 比較由反應(yīng)混合物發(fā)射的光量與標(biāo)準(zhǔn)劑量應(yīng)答曲線，檢測(cè)分析物的存在或計(jì)算分析物的濃 度，所述標(biāo)準(zhǔn)劑量應(yīng)答曲線使發(fā)射的光量與分析物的已知濃度聯(lián)系。
[0057] 在另外一個(gè)方面，提供了用于檢測(cè)小分子分析物的測(cè)定，其包含：(a)提供固定有 分析物或分析物類似物的固體載體；(b)提供對(duì)于分析物特異性的結(jié)合分子與根據(jù)本發(fā)明 的化學(xué)發(fā)光吖啶鐲|化合物的綴合物；(C)混合固相、綴合物和懷疑含有分析物的樣品以形 成結(jié)合復(fù)合物；（d)分離在固體載體上捕獲的結(jié)合復(fù)合物；(e)通過(guò)加入化學(xué)發(fā)光觸發(fā)試 劑，觸發(fā)⑷的結(jié)合復(fù)合物的化學(xué)發(fā)光；（f)用光度計(jì)測(cè)量光量；和（g)通過(guò)比較由反應(yīng)混 合物發(fā)射的光量與標(biāo)準(zhǔn)劑量應(yīng)答曲線，檢測(cè)分析物的存在或計(jì)算分析物的濃度，所述標(biāo)準(zhǔn) 劑量應(yīng)答曲線使發(fā)射的光量與分析物的已知濃度聯(lián)系。
[0058] 本發(fā)明的這些及其他方面通過(guò)參考下述詳述包括附加權(quán)利要求將得到更佳理解。
[0059] 附圖簡(jiǎn)述
[0060]圖1提供了本發(fā)明的多個(gè)示例性含兩性離子的吖啶鐵化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
[0061]圖2提供了本發(fā)明的其他示例性含兩性離子的吖啶鐵化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
[0062]圖3提供了本發(fā)明的另一個(gè)示例性含兩性離子的吖啶纖化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
[0063] 圖4是作為時(shí)間函數(shù)標(biāo)繪的，以相對(duì)光單位百分比（RLUs)表示的由對(duì)照 (NSP-DMAE-HEG)和示例性含兩性離子的吖啶鐵（NSP-DMAE-Z-NHS)綴合物發(fā)射的光的曲線 圖。
[0064] 圖5是作為時(shí)間函數(shù)標(biāo)繪的，以相對(duì)光單位百分比（RLUs)表示的由對(duì)照（HQYAE) 和與2種抗體的示例性含兩性離子的吖啶鐵（NSP-2,7-DMG-DMAE)綴合物發(fā)射的光的曲線 圖。
[0065]圖6是作為時(shí)間函數(shù)標(biāo)繪的，以相對(duì)光單位百分比（RLUs)表示的由對(duì)照 (NSP-DMAE-Z)和與抗TSH Mab的示例性含兩性離子的吖啶鐵（ZC6M-AE和ZC8M-AE)綴合 物發(fā)射的光的曲線圖。
[0066] 發(fā)明詳述
[0067] 本發(fā)明的主要目的是公開含兩性離子的吖啶轉(zhuǎn)|化合物的結(jié)構(gòu)，當(dāng)與缺乏這些結(jié)構(gòu) 特征的吖啶錫化合物比較時(shí)，其展示出與固相的低非特異性結(jié)合。本發(fā)明的另一個(gè)目的是 公開吖啶鎊|化合物的2類兩性離子修飾：(a)在吖啶鑄|環(huán)中含有兩性離子的吖啶備翁化合 物，和（b)含有連接至苯酚離去基團(tuán)的兩性離子的吖啶隹翁化合物。本發(fā)明的另一個(gè)目的是 公開當(dāng)與不含這種結(jié)構(gòu)修飾的吖啶鐵化合物比較時(shí)，來(lái)自具有連接至苯酚的兩性離子的吖 啶奢翁化合物的出乎意料更快的光發(fā)射。本發(fā)明的另外一個(gè)目的是證實(shí)含兩性離子的吖啶 鶴化合物與不含兩性離子的吖啶銅I化合物一樣穩(wěn)定，并且具有可比較的量子產(chǎn)率。
[0068] 根據(jù)本發(fā)明的化學(xué)發(fā)光吖啶織化合物可以是吖啶鐵酯、吖啶縛|磺酰胺等。在一個(gè) 實(shí)施方案中，化學(xué)發(fā)光吖啶鐵化合物包含（i)連接至吖啶it核的氮原子的烴基團(tuán)，所述烴 基團(tuán)任選由至多20個(gè)雜原子取代，和（ii)與取代的烴部分連接的、吖啶傳|核的C9位置上 的羧基或磺酰胺基團(tuán)，其中吖啶镥化合物包含連接至吖啶鐵核的(： 2位置、吖啶鐵核的(：7位 置、與羧基或磺酰胺基團(tuán)連接的烴部分、或連接至吖啶鐵核的氮原子的烴基團(tuán)的至少一個(gè) 兩性離子官能團(tuán)；其中與不包含所述兩性離子官能團(tuán)的在其他方面等同的吖啶鐵化合物 比較，所述吖啶織化合物顯示出與固相減少的非特異性結(jié)合。
[0069] 連接至氮原子的烴基團(tuán)任選由至多20個(gè)雜原子取代，并且因此自身可以構(gòu)成兩 性離子基團(tuán)，例如在磺丙基或磺丁基連接的環(huán)氮的情況下，其中存在在環(huán)季氮上的正電荷 和在103基團(tuán)上的負(fù)電荷。應(yīng)當(dāng)理解即使存在此類兩性離子基團(tuán)，根據(jù)本發(fā)明的化合物也 將另外包含至少一個(gè)兩性離子基團(tuán)。換言之，根據(jù)本發(fā)明的化合物將包含在除吖啶鐵核的 氮或加上吖啶f翁核的氮的原子上的正電荷。
[0070] 在一個(gè)實(shí)施方案中，化學(xué)發(fā)光吖啶鋒|化合物是具有式I中所示的下述結(jié)構(gòu)的吖啶 鐳酯：
[0071]
[0072] 其中，
[0073] &是C i 35烷基、烯基、炔基或芳烷基，其各自可以含有至多20個(gè)雜原子，或橫丙基 或磺丁基，或&是基團(tuán)-R a_Z ;其中Ra是選自q 35烷基、烯基、炔基、芳基或芳烷基的二價(jià)基 團(tuán)，其各自任選含有至多20個(gè)雜原子；
[0074] 私和R3獨(dú)立地選自⑴氫、（ii)供電子基團(tuán)或（iii)基團(tuán)-Z ;
[0075] Z是下述形式的兩性離子基團(tuán)：
[0076]
[0077] X在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自鍵、-ch2-、氧、硫、-nrn-、酰胺（_NRn(C0)_)、氨基甲酸根 (_NRnC (〇)〇-)或脲基（_NRnC(0)NRn_);
[0078] R'和R"在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自Q 35烷基、烯基、炔基、芳基或芳烷基，其各自任 選含有至多20個(gè)雜原子；
[0079] Zi是基團(tuán)-Ra_Z2，其中Z2選自羧酸根（-C00 )、磺酸根（_S03 )、硫酸根（_0S03 )、磷 酸根（-〇P(〇) (0R) (〇 ))或氧離子（-0 );或在其中22是氧離子（-0 )的情況下，Ra可以是不 存在的；
[0080] n在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自1-12的整數(shù)；和
[0081] 心和1?8是相同或不同的，并且選自氧，C i 35烷基、烯基、炔基，烷氧基（-0R)，燒硫基 (-SR)或取代的氨基（_NR2);
[0082] R5、RjP R 7獨(dú)立地選自氫或基團(tuán)_ (CO) -R 15，條件是R5、RjP R 7中的2個(gè)是氫，并且 R5、&和R 7之一是所述基團(tuán)-(CO) -R 15;
[0083] R15是基團(tuán)-Z或基團(tuán)-X aR*，其中Xa是氧、硫或-NR N_，并且R*選自氫，Q 35烷基、烯 基、炔基、芳基或芳烷基，其各自任選含有至多20個(gè)雜原子，或R*是基團(tuán)-Ra-L，其中L是用 于與分析物、分析物類似物或關(guān)于分析物的結(jié)合配偶體形成綴合物的離去基團(tuán)；條件是當(dāng) R 15是基團(tuán)-Z時(shí)，那么X在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自鍵、-CH 2_、氧、硫或-NRn-;
[0084] R在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自Ci 35烷基、烯基、炔基、芳基或芳烷基，其各自含有至多 20個(gè)雜原子；和
[0085] #在每次出現(xiàn)時(shí)獨(dú)立地選自氫，C i 35烷基、烯基、炔基、芳基或芳烷基，其各自含有 至多20個(gè)雜原子；
[0086] 條件是1^、1?2、1?3、1?5、1? 6和1?7中的至少一個(gè)是基團(tuán)2。
[0087] 在一個(gè)實(shí)施方案中，&、R2、私和1?6中的至少一個(gè)或確切地一個(gè)包含基團(tuán)-L 或-Ra-L，其中L是包含離去基團(tuán)、親電子基團(tuán)或親核基團(tuán)的可衍生官能團(tuán)，用于與分析物、 分析物類似物或關(guān)于分析物的結(jié)合配偶體形成綴合物。在某些實(shí)施方案中，L將選自：
[0089] 在某些實(shí)施方案中，R15將選自：
[0090] (1)-OH ；
[0091] (2) -0-N-琥珀酰亞胺基；
[0092] (3) -NH- (CH2) 5_C (0) -0-N-琥珀酰亞胺基；
[0093] (4) -NH- (CH2) 5-COOH;
[0094] (5) -NH- (C2H40)「C2H4NH-C (0)-(CH2) 3-C (0) -0-N-琥珀酰亞胺基，其中 i=1-5;
[0095] (6) -NH- (C2H40)(0)-(CH2) 3-C00H，其中 i=1-5;
[0096] (7)-順_((：21140) 1-(：2114順2，其中1 =