專利名稱：抑制2型志賀毒素活性的多肽wa8及其編碼基因與應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及抑制2型志賀毒素活性的多肽WA8及其編碼基因與應用。
背景技術：
志賀毒素(ShigaToxin，Stx)，又稱志賀樣毒素(Shiga-like Toxin, Sit)作為腸 道病原菌產(chǎn)生的一類具有腸毒性、細胞毒性和神經(jīng)毒性的細菌外毒素，包括1型、2型志賀 毒素(Stxl，Stx2)，是急性細菌性痢疾、霍亂0139、0157:H7等新發(fā)腸道病原菌最為關鍵的 強致病毒力因子，可以引起出血性結腸炎(hemorrhagic colitis, HC)、血栓形成性血小板 減少性紫癜(TTP)以及高病死率的溶血性尿毒癥(hemolytic uremic syndrome,HUS)等嚴 重并發(fā)癥。而流行病學研究和臨床資料均表明，相比較Stxl，Stx2與感染并發(fā)癥，特別是 HUS發(fā)生的相關性更高，被認為是重要的防治藥物設計靶標。目前針對志賀毒素相關病原菌的重癥感染尚無特異有效的預防產(chǎn)品和急救治療 藥物。臨床普遍采用的抗生素治療已經(jīng)引起多重耐藥菌株的出現(xiàn)，造成抗生素治療的失效。 抗生素使用造成更加不利的后果是菌體崩解引發(fā)志賀毒素過量釋放，加大了由毒素引發(fā)各 種并發(fā)癥的風險。因此針對志賀毒素相關疾病的治療主張慎用抗生素，而應尋求特異性藥 物作為新的有效治療手段。Stx2(又稱Slt2)由1個志賀毒素A亞單位(Stx2A)和5個志賀毒素B亞單位 (Stx2B)組成，毒素通過Stx2B介導與真核細胞表面的Gb3受體結合，進而Stx2A作用于 細胞28S rRNA引起細胞病變。Stx2B與細胞Gb3受體的結合是毒素發(fā)揮作用的起始關鍵 環(huán)節(jié)，如能阻斷這種結合，將從根本上抑制Stx2分子毒性的發(fā)揮。國內(nèi)外研究方向主要集 中在毒素受體類似物和抗體治療方面。Mshikawa報道了能與Stx結合的多糖化合物，具 W^^W^n^TlSffl^ll (Nishikawa K, Matsuoka K, ffatanabe M, et al. Identification of the optimal structure required for a Shiga toxin neutralizer with oriented carbohydrates to function in the circulation. J Infect Dis 2005 ；191 2097-2105.) ；2002 年 Natori Y.報道了 Gb3 受體治療的實例(Natori Y. New drugs that prevent cytotoxicity of Shiga toxins. Nippon Rinsho. 2002. 60(6) :1131_1137.),包 括一種能在胃腸道途徑阻止毒素擴散的新制劑和另一種可在循環(huán)系統(tǒng)抑制志賀毒素毒性 的水溶性制劑。但是受體類多糖化合物的復雜制備工藝和副作用成為制約其發(fā)展的障礙。 最近，有學者報道可表達毒素模擬受體的益生菌具有顯著的毒素中和效果，可用于治療志 賀毒素相關疾病(Paton JC，Rogers TJ，Morona R，Paton AW. Oral administration of formaldehyde—killed recombinant bacteria expressing a mimic of the Shiga toxin receptor protects mice from fatal challenge with Shiga-toxigenic Escherichia coli. Infect Immun 2001 ;69 :1389-1393.)，但是這種活菌治療的安全性有待進一步考察 和驗證。在抗體治療方面，Sheorm等研究報道的單克隆抗體能夠阻斷Stx2與細胞受體的 結合，中禾口 Stx2 細胞毒f生(SheoranAS，Chapman—Bonof iglio S，Harvey BR, et al. Human antibody against shiga toxin 2administered to piglets after the onset of
3diarrhea due to Escherichia coli 0157 :H7prevents fatal systemic complications. Infect Immun 2005 ;73 :4607_4613.)，但臨床應用有待于抗體制備工藝的改進完善。近年來日益引起人們研究關注的肽類小分子物質(zhì)，作為藥物具有很鮮明的技術優(yōu) 勢，包括分子量小，結構相對簡單，可通過化學合成或基因工程方法進行大量低成本制備； 功能明確，免疫原性低，副作用小，安全性高；易于從多途徑吸收，給藥途徑可多樣化。小分 子肽成為新藥篩選的重要來源之一(李越希，黃培堂。多肽在生物醫(yī)藥和診斷試劑中的應 用。中國生化藥物雜志2001. 22(4) :208-210.)。其中利用噬菌體肽庫具有高容量的特點， 篩選具有毒素抑制作用的多肽分子就是可行的技術手段。目前針對志賀毒素的肽類抑制 劑鮮見報道。可參考的科學文獻主要為2006公開的Nishikawa K的研究報道(Nishikawa K, ffatanabe M, Kita E, et al. A multivalent peptide library approach identifes a novel Shiga toxin inhibitor that induces aberrant cellular transport of the toxin. Faseb J 2006 ;20 :2597_2599.)，以及 Miura Y 的研究報道(Miura Y, Sakaki A, Kamihira M, Iijima S, Kobayashi K. A globotriaosylceramide(Gb3Cer)mimic peptide isolated from phage display library expressed strong neutralization to Shiga toxins. Biochem Biophys Acta 2006 ；1760 :883_889.)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種抑制2型志賀毒素活性的多肽。本發(fā)明提供的多肽，命名為WA8(又名P8)，其氨基酸序列如序列表中序列2所示。本發(fā)明的另一目的在于提供上述的多肽的修飾體。本發(fā)明提供的多肽的修飾體是在上述多肽的N端和/或C端進行化學修飾或生物 修飾得到的。進一步，上述化學修飾可為乙?；揎椈虬滨；揎?。上述修飾體可為單肽或分支肽。上述多肽的編碼基因也屬于本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。含有上述基因的重組載體、重組菌或轉(zhuǎn)基因細胞系也屬于本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。上述多肽或者上述的修飾體在制備預防和/或治療由2型志賀毒素或產(chǎn)2型志賀 毒素的病原菌所引起疾病的藥物中的應用也屬于本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。上述病原菌為產(chǎn)2型志賀毒素的大腸桿菌、志賀氏痢疾菌或霍亂弧菌。具體地講，上述產(chǎn)2型志賀毒素大腸桿菌為腸出血性大腸桿菌0157。實驗證明本發(fā)明提供的多肽P8的濃度越大，其與Stx2B結合量越大。多肽P8與 Stx2結合的親和力常數(shù)KD 2. 48X10_5M。細胞毒性中和實驗發(fā)現(xiàn)P8的濃度為300yM時， 對Stx2細胞毒作用的抑制率達54%。多肽P8(300iimol/L)對FITC_Stx2B與HeLa細胞結 合的阻斷率為24. 8%。動物實驗發(fā)現(xiàn)安慰劑組動物在4-5天時全部死亡，不同劑量多肽 P1給藥組表現(xiàn)為不同程度的保護效應，當多肽的劑量達到llmg/kg，P8有80%保護率，多肽 P8對小鼠的保護效力具有劑量依賴性。


圖1為TF1 (又名P1)合成肽的質(zhì)量分析圖，A圖為質(zhì)譜分析圖，B圖為高效液相色譜分析圖。圖2為WA8(又名P8)合成肽的質(zhì)量分析圖，A圖為質(zhì)譜分析圖，B圖為高效液相色 譜分析圖。圖3為梯度濃度多肽(PI、P8)與Stx2B結合活性，隨著濃度增大，多肽PI、P8與 Stx2B結合量逐漸增大。圖4為多肽與Stx2的結合動力學曲線圖，BIAcore系統(tǒng)動態(tài)分析TF1 (又名P1)、 WA8(又名P8)合成肽與Stx2的梯度特異結合。其中曲線自下而上所示濃度由低到高倍增， A圖P1濃度范圍為0. 96-15. 38umol/L, B圖P8的濃度范圍為2. 44-39. 125umol/L,結果顯 示多肽能與Stx2特異結合，具有量效關系。圖5為TF1 (又名PI)、WA8 (又名P8)合成肽的體外細胞毒抑制效應的光鏡觀察 (X200)，A為對照組(PBS)，B為Stx2，C為Stx2與多肽(Plor P8)孵育后加入HeLa細胞。圖6為小鼠5LD50攻毒保護實驗結果，小鼠先腹腔給藥，20min后Stx2 (5LD50)腹 腔攻毒記錄存活率，圖A為對P1的藥效觀察，圖B為對P8的藥效觀察，給藥劑量范圍分別 為 0. 7mg/kg-llmg/kg0
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步說明，但本發(fā)明并不限于以下實施例。下述實施例中，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。實施例1、短肽TF1 (又名PI)、WA8(又名P8)的修飾、化學合成與結合活性分析一、短肽TF1 (又名PI)、WA8 (又名P8)的修飾、合成1、TF1、WA8合成肽序列的篩選Stx2B蛋白的制備以EHEC 0157 :H7菌(購自ATCC)為模板，用引物 5' -catatggctaaaggtaaaattgag-3‘ 禾口 5， gcggccgcgcctcagtcatcagtcatt-3‘ J" stx2B基因。利用pEASY-Tl克隆載體測序鑒定，測序結果表明，擴增產(chǎn)物的核苷酸序列 如GenbankNC_002655的第1353327位至第1353533位。將擴增產(chǎn)物插入pET22b+載 體(購自Novagen公司)的Nde I和Not I酶切位點構成重組質(zhì)粒pET22b_stx2B，然后 將pET22b-stx2B導入E. coli. BL21 (DE3)菌株(購自Transgen公司)構建重組工程菌 pET22b-stx2B/BL21 (DE3)。重組菌克隆接入含100ug/mL氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基，37°C水 浴過夜震蕩，次日按1 100比例轉(zhuǎn)接于三角燒瓶擴大培養(yǎng)。待茵體0D_至0.6，加入IPTG 至工作濃度為lmmol/L，繼續(xù)誘導表達5h，可以實現(xiàn)Stx2B的高效表達。誘導菌體超聲破碎 處理后，10000r/min離心lOmin，收集包涵體蛋白，以含6mol/L鹽酸胍的PBS溶液變性溶 解，將變性蛋白裝入透析袋，以含遞減濃度尿素(6，4，2，1，Omol/L)的Tris緩沖液(lOmmol/ L Tris，lmmol/L EDTA，0. 3mol/L精氨酸，lmmol/L還原型谷胱甘肽，0. 25mmol/L氧化型谷胱 甘肽，10%甘油，50mmol/L NaCI, pH 8.0)逐步透析，最后透析至 10mmol/L Tris, pH 8.0。 復性蛋白最后經(jīng)Q S印harose離子柱純化，洗脫液為lOmmol/L Tris-lmol/L NaCI，線性 洗脫。相關實驗研究細節(jié)已公開發(fā)表(Tu ff, Cai K，Gao X，Xiao L，Chen RC，Shi J, Liu H, Hou XJ, Wang Q, Wang H, Improved production of holotoxin Stx2with biological activities by using a single-promoter vector and an auto-induction expression system. Protein Expr. Purif. 2009,67(2) : 169-174)。
利用噬菌體展示技術，以重組Stx2B為靶標，通過親和淘選步驟，從隨機線性十二 肽庫中篩選獲得特異結合Stx2B的短肽。根據(jù)篩選出的與2型志賀毒素特異結合的短肽序 列，搜索出現(xiàn)頻率最高2個序列，命名為TFl (又名PI)、WA8 (又名P8)。利用protparam tool 軟件(http //www. expasy. org/tools/protparam. html)對短肽 TFl、WA8 的理化性質(zhì)進行 預測分析，結果顯示=TFl由12個氨基酸組成，分子式為C77H皿N17O18S1，分子量為1584. 8，理 論pi為5. 19 ；WA8由12個氨基酸組成，分子式為C79H96N16O18,分子量為1557. 7，理論pi為 6. 74。2、化學修飾及體外合成在不改變短肽一級結構的前提下，在短肽TF1、WA8的N端分別進行乙?；揎棧?增加短肽的水溶性和穩(wěn)定性。多肽的化學修飾合成由上海波泰生物科技公司完成。固相合 成法進行化學合成，并進行質(zhì)譜和HPLC質(zhì)量分析，如圖1、2所示，圖I-A顯示質(zhì)譜分析合成 肽TFl的分子量為1584. 9與理論值相符，圖I-B顯示HPLC質(zhì)量分析合成肽TFl的純度為 95. 1 % ；圖2-A顯示質(zhì)譜分析合成肽WA8的分子量為1557. 7與理論值基本相符，圖2-B顯 示HPLC質(zhì)量分析合成肽WA8的純度為95. 3%。短肽TFl (又名Pl)的氨基酸序列如序列表中序列1所示；WA8 (又名P8)的氨基 酸序列如序列表中序列2所示。二、短肽TFl (又名Pl)、WA8 (又名P8)的結合活性分析BIAcore 3000生物傳感器系統(tǒng)、CM5芯片及配套試劑為GE公司產(chǎn)品，抗組氨酸HRP 標記抗體購自Pierce公司(ELISA效價為1 2000)。大腸桿菌BL21 (DE3) pLysS感受態(tài)細 胞，大腸桿菌DH5 α和pEASY-Tl克隆載體購自北京TransGen生物技術公司。Taq DNA聚合 酶，T4DNA連接酶和限制性內(nèi)切酶購自NEB公司，PCR引物由Sunbio北京生物科技有限公司 合成，質(zhì)粒提取和純化試劑盒購自Biomed北京有限公司，5毫升HisTrap純化柱購自GE公 司，S-IOkDa的透析膜購自北京科海軍舟生物技術公司，表達載體pET32a購自Novagen公 司。1、ELISA分析多肽與Stx2B相互作用濃度梯度多肽4°C過夜包被(設置陰性對照BSA)，PBST洗滌，3% BSA封閉lh， PBST洗滌，加入步驟一制備得到的Stx2B蛋白，置37°C孵育1小時。然后洗滌，與多肽結合 的Stx2B采用抗組氨酸標簽抗體檢測，顯色，OD490讀數(shù)。如圖3所示，隨著多肽(Pl，P8)濃 度增大，與Stx2B結合量逐漸增大。2、TFUWA8合成肽與Stx2特異結合的SI3R動態(tài)分析Stx2 的制備以 EHEC 0157:H7 菌為模板，用引物 1 5，-GGGGGGAATTCATGAAGTGTAT ATTATTTAAATGGG-3 '和 2 5 ‘ -TTTTTTGTCGACTTAGTGGTGGTGGTGGTGGTGGTCATTATTAAACTGCACTT CAG-3’擴增全志賀毒素基因stx2。利用pEASY-Tl克隆載體測序鑒定，測序結果表明，擴增 產(chǎn)物的核苷酸序列如Genbank NC_002655的第1352290位至第1353527位。采用單啟動子 雙讀碼框的策略構建工程菌pET32a-StX2/plySS，具體是將擴增產(chǎn)物插入pET32a的EcoRI 和Sal I酶切位點構成重組質(zhì)粒pET32a-stx2，然后將pET32a-stx2導入E. coli. BL21 (DE3) PlysS菌株(購自Transgen公司)構建重組工程菌pET32a_stx2/plysS。其中，重組質(zhì)粒pET32a-stX2含有一個T7啟動子，全志賀毒素基因stx2克隆含 有兩個開放閱讀框(stx2a和stx2b)。添加IPTG至終濃度為lmmol/L進行誘導，30°C水浴振蕩培養(yǎng)5h，可以實現(xiàn)Stx2的高效可溶表達，Stx2經(jīng)鎳柱HisTrap純化后純度達90%以 上，具有生物學功能活性，相關實驗研究細節(jié)已公開發(fā)表(Tu W, Cai K, Gao X, XiaoL, Chen RC, Shi J, Liu H, Hou XJ, Wang Q, Wang H, Improved production of holotoxinStx2with biological activities by using a single-promoter vector and an auto-induction expression system. Protein Expr.Purif. 2009,67(2) : 169-174)。借助BIAcore生物傳感器系統(tǒng)，測定短肽與制備的Stx2特異結合活性。將Stx2 偶聯(lián)到芯片CM5的Fc4上，偶聯(lián)量為2235. 9RU，以EDC/NHS活化和乙醇胺封閉。測定不同 濃度的短肽(2倍比稀釋)與Stx2結合的動力學曲線。檢測在20yL/min流速下進行， 由Sensorgram記錄曲線分別觀察短肽TFl、WA8的動態(tài)結合過程。通過BIAevaluation 3. O軟件包分析，由Sensorgram記錄曲線中的結合(association)部分獲得Ka，解離 (dissociation)部分獲得Kd。對應梯度濃度多肽有不同的反應量。從分析結果報告中可 以讀取Ka、Kb、ΚΑ、KD數(shù)值。公式為R為某一時刻的SPR信號(RU，Req為多肽(analyte) 穩(wěn)定結合水平(RU)，Rmax為多肽的最大結合能力(RU)，t為時間，dR/dt為SI3R信號變換 率，C 為多肽濃度。Rmax= (MWanalyte/MWligand)RligandXSvalence, Ka = (dR/dt)/t， Kd = (dt/dR)/R, KD = Kd/Ka = CX (Rmax-Req)/Req。結果如圖4所示，Pl和P8的濃度范圍分別為0. 96-15. 38uM、2. 44-39. 125uM，測 算結果表明，Pl與Stx2結合的親和力常數(shù)KD 1. 25 X IO-6M ；P8與Stx2結合的親和力常數(shù) KD 2. 48 X IO^5M0實施例2、TFU WA8合成肽的體外細胞毒抑制活性及對毒素的靶細胞結合阻斷作 用HeLa細胞株、胰酶消化液和雙抗購自Hyclone公司，DMEM培養(yǎng)基購自GIBCO公司， 胎牛血清購自Biochorm公司，MTT為sigma公司產(chǎn)品，F(xiàn)ITC購自萊寶公司。細胞培養(yǎng)瓶、培 養(yǎng)板購自CORNING公司，CO2培養(yǎng)箱為日本SANYO公司產(chǎn)品，倒置光學顯微鏡為日本Olympus 產(chǎn)品，流式細胞儀為Coulter公司產(chǎn)品。一、細胞毒性中和實驗收集培養(yǎng)的對數(shù)期細胞(HeLa細胞)，調(diào)整細胞懸液濃度，每孔加入100 μ 1，鋪 板使待測細胞調(diào)密度至IO4/孔(邊緣孔用無菌？83填充)，5%0)2，371孵育過夜。終濃 度150uM的多肽(IOOul)與5CD50的Stx2 (2. 5ng)混合，同時設置一個正常對照組PBS， 設置一個只加Stx2的對照組，4°C過夜孵育。再加入96孔細胞培養(yǎng)板培養(yǎng)的細胞中，5% C02，37°C孵育72小時，倒置顯微鏡下觀察。棄去培養(yǎng)液，小心用PBS沖2_3遍后，每孔加入 50 μ 1 MTT溶液(5mg/ml)繼續(xù)培養(yǎng)4h，終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加入150ul 二 甲基亞砜，置搖床上低速振蕩5min，使結晶物充分溶解。在酶聯(lián)免疫檢測儀OD57tl處測量各 孔的吸光值，按以下公式計算抑制率抑制率％=[(多肽+StX2)0D57(l-StX20D57(l]/[正常 0D570-Stx20D570]。如圖5所示，相同濃度下，Pl比P8對Stx2的細胞毒作用的抑制率高，針 對大于細胞致死毒量的Stx2 (5 X CD50)，Pl的IC50 (半數(shù)抑制濃度)為180 μ Μ, Ρ8的IC50 為193 μ Μ，其中Pl的濃度為300 μ M時，對Stx2細胞毒作用的抑制率達82% ；P8的濃度為 300 μ M時，對Stx2細胞毒作用的抑制率可以達到54%。二、流式細胞分析多肽對Stx2B與細胞結合作用的影響HeLa細胞為Gb3+細胞，Stx2B為毒素的受體結合區(qū)，Stx2B可通過Gb3受體與HeLa細胞特異結合，利用此細胞模型可檢測多肽對Stx2B與HeLa細胞結合是否具有阻斷作用。 應用熒光素FITC標記毒素亞單位Stx2B制備FITC-Stx2B 將上述純化的蛋白樣品Stx2B 透析至碳酸鹽緩沖液(PH9. 2)，按0. 05mg FITC/mg蛋白的劑量加入DMSO溶解的FITC，室 溫避光攪拌2h，以磷酸鹽緩沖液(pH7. 2)透析，換液數(shù)次至不再有FITC析出，即制備的 FITC-Stx2B。將標記蛋白 FITC-Stx2B(5ug)和多肽(終濃度 300 μ M) (IOOul)孵育 4°C過 夜(注意避光)，然后加入細胞(細胞數(shù)量大約106)37°C孵育2h，1000r/min離心5min，PBS 洗滌和懸浮細胞，重復2次。細胞用40%多聚甲醛固定(4°C，10min)，離心，取細胞以PBS 懸浮，進行流式細胞檢測。剩余細胞以PBS懸浮，采用流式細胞術分析FITC-Stx2B與Hela 細胞的結合情況。實驗分為三組陰性對照細胞組(PBS) ；FITC-Stx2B組；FITC_Stx2B和 多肽組。細胞檢測結果顯示(圖略)FITC-Stx2B處理的HeLa細胞有97. 22%熒光結合， FITC-Stx2B與多肽TFl (又名Pl)孵育后處理的HeLa細胞有52. 77%熒光結合，可以計算 出多肽TFl (又名Pl) (300 μ mol/L)對FITC-Stx2B與HeLa細胞結合的阻斷率為45.7%,相 似的計算出多肽WA8(又名P8) (300 μ mol/L)對FITC_Stx2B與HeLa細胞結合的阻斷率為 24. 8%。實施例3、TF1、WA8合成肽對2型志賀毒素攻毒小鼠的保護效果雄性Balb/C(17-19g)小鼠，由軍事醫(yī)學科學院動物中心提供。試驗用多肽TFl (又 名Pl)和WA8 (又名P8)純度> 95% (g級)一、TF1、WA8合成肽在毒素攻擊小鼠致死模型上的保護作用1、2型志賀毒素粗制品的制備接種產(chǎn)2型志賀毒素0157大腸桿菌(購自ATCC)于LB培養(yǎng)基過夜培養(yǎng)，次日按 1 100比例接種至IL培養(yǎng)基，震蕩培養(yǎng)72h，5000rpm離心lOmin。菌體沉淀懸于PBS緩 沖液，超聲波破碎細胞，IOOOOrpm離心lOmin，上清滴加飽和硫酸銨溶液至50%濃度，收集 鹽析沉淀，以PBS溶解并透析完全，得到志賀毒素2型志賀毒素粗制產(chǎn)物。2、TF1、WA8合成肽的體內(nèi)志賀毒素毒性抑制效應雄性17_19g Balb/C小鼠隨機分六組，每組20只。多肽TFl (又名Pl)或WA8 (又 名P8)腹腔給藥，20min后用劑量為5LD50的2型志賀毒素粗制品(50ng)腹腔攻毒，同時 設置安慰劑對照組(生理鹽水)，攻毒組(Stx2)。連續(xù)觀察10天，每天兩次記錄各組動物 的存活情況。結果如附圖6顯示，Stx2(5LD50)腹腔攻毒，安慰劑組動物在4_5天時全部死 亡，不同劑量多肽(Pl或P8)給藥組表現(xiàn)為不同程度的保護效應，當多肽的劑量達到Ilmg/ kg，Pl可以對小鼠提供完全保護(見圖6A)，P8有80%保護率(圖6B)；多肽Pl或P8對小 鼠的保護效力具有劑量依賴性。
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權利要求
一種多肽，其氨基酸序列如序列表中序列2所示。
2.權利要求1所述的多肽的修飾體，其特征在于所述修飾體是在權利要求2所述多 肽的N端和/或C端進行化學修飾或生物修飾得到的。
3.如權利要求2所述的修飾體，其特征在于所述化學修飾為乙?；揎椈虬滨；揎棥?br> 4.如權利要求2所述的修飾體，其特征在于所述修飾體為單肽或分支肽。
5.權利要求1所述多肽的編碼基因。
6.含有權利要求5所述基因的重組載體、重組菌或轉(zhuǎn)基因細胞系。
7.權利要求1所述多肽或者權利要求2-4中任一所述的修飾體在制備預防和/或治療 由2型志賀毒素或產(chǎn)2型志賀毒素的病原菌所引起疾病的藥物中的應用。
8.如權利要求7所述的應用，其特征在于所述病原菌為產(chǎn)2型志賀毒素的大腸桿菌、 志賀氏痢疾菌或霍亂弧菌。
9.如權利要求8所述的應用，其特征在于所述產(chǎn)2型志賀毒素大腸桿菌為腸出血性 大腸桿菌0157。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種抑制2型志賀毒素活性的多肽WA8及其編碼基因與應用。本發(fā)明提供的多肽，命名為WA8(又名P8)，其氨基酸序列如序列表中序列2所示。該多肽P8可以做成藥物以預防和/或治療由2型志賀毒素或產(chǎn)2型志賀毒素的病原菌所引起疾病。
文檔編號C12N1/21GK101948512SQ20101029047
公開日2011年1月19日 申請日期2010年9月25日 優(yōu)先權日2010年9月25日
發(fā)明者侯曉軍, 劉越男, 史晶, 屠偉, 李濤, 王慧, 王琴, 蔡昆 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院微生物流行病研究所