專利名稱：源自蜘蛛毒素的避孕肽的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及具有避孕活性的肽。具體地，所述肽獲自來自蜘蛛Latrodectusmirabilis的毒素的分子級份。
背景技術：
避孕是使用不同的方法防止進行性行為時受精或懷孕。目前，有不同的方法來避免受精，其可分為屏障法和化學或激素法。殺精子劑是殺死或滅活精子的化學化合物，是化學方法中最主要的方法之一。從生理角度來看，殺精子劑必須影響精子運動性或通過影響電容性應答(capacitive response),通過阻斷與完全精子成熟相關的任何離子物質(zhì)(例如I丐)的特定電流來改變膜電位，阻斷孕酮受體或作為精子的趨化成分的物質(zhì)的受體。在一些國家已被使用的殺精子劑之一是壬苯醇醚_9，一種生物有機分子，其主要作為膜結(jié)構(gòu)的生物去污劑來發(fā)揮其作用。其引起構(gòu)成膜屏障的脂質(zhì)的部分消化。通過這種方式，該生物去污劑引起膜上形成微孔，破壞分隔細胞內(nèi)和細胞外空間的屏障，這最終建立引起細胞死亡的跨膜熱力學平衡。壬苯醇醚_9的藥學形式包括被用作屏障避孕法(安全套)的添加劑，作為潤滑劑和殺精子劑的一部分；陰道胚珠(vaginal ovules)含有168mg該物質(zhì)；避孕海綿含有1，OOOmg該物質(zhì)；用于陰道的潤滑凝膠和陰道隔。該分子的副作用已經(jīng)使美國食品與藥品管理局(FDA)拒絕批準其使用。這些不希望的效應的產(chǎn)生是由于壬苯醇醚-9引起其它細胞組織(在女性中為陰道粘膜、子宮頸和大陰唇及小陰唇的襯膜；在男性中為龜頭的被覆上皮和尿道外口 的被覆上皮的表面)中的臨床環(huán)境刺激，炎癥和角化病。因此，當該分子被應用至夫妻之一或夫妻二人的生殖器區(qū)域時，感染性傳播疾病(STD)的概率增大，一些WHO報告已經(jīng)將壬苯醇醚-9的反復使用與尿道感染聯(lián)系起來。例如，潤滑凝膠已經(jīng)被設計為在陰道內(nèi)使用。然而，一些人在直腸內(nèi)使用這些凝膠，這將促進直腸上皮的破壞，因為存在壬苯醇醚-9 (Phillips DM et al.2000)。殺精子劑可以是天然的或合成的。天然殺精子劑的例子是棉酚。從1950年以來，在中國即從棉籽中提取棉酚。該產(chǎn)物是強有力的男性避孕藥，因為其競爭性抑制乳酸脫氫酶，該酶在精細胞的產(chǎn)生中具有重要意義。其使用濃度為75至100 μ g，每月2次。與該分子結(jié)構(gòu)相關的問題是其在受試者中引起化學不孕，因此其不能作為化學殺精子劑被專利化，并且其還引起低鉀血癥，消化系統(tǒng)中的效應，疲乏和麻痹(在極端情況下)。Reddy et a 1., “Antimicrobial peptides: premises andpromises，，International Journal of Antimicrobial Agents 24 (2004) 536 - 547 進行的工作描述了抗微生物肽作為避孕藥的潛在應用，其改變通過精子膜的離子流動。該工作提及爪蟾抗菌肽(magainin)-A和乳鏈球菌素(nisin)作為此類肽的實例。然而，沒有提及從Latrodectus mirabilis毒素的級份獲得天然或合成類似物肽。Yeung 等人在 “Effects of the ion-channel blocker quinine on human spermvolume,kinematics and mucus penetration, and the involvementof potassiumchanneIs, MoIecuIar Human Reproduction Vol.7，N0.9pp.819-828，2001 中描述了奎寧對于不同離子通道的效應，特別是對于細胞體積的影響。他們提及:所述通道可以是潛在避孕藥的靶標，但是沒有給出應用實例，也沒有提示具有相似作用的其它的肽。特別地，沒有提及來自Latrodectus mirabilis毒素的提取物。專利申請EP448464A1描述了使用蛋白C3、C3b或iC3或其片段測定精子是否有頂體反應的方法。該文獻描述了針對所述蛋白或蛋白片段的抗體可用作男性或女性避孕疫苗。雖然該文獻提及了肽或蛋白替代物，但其目標是產(chǎn)生避孕疫苗，其與本發(fā)明是不同的，本發(fā)明涉及基于來自Latrodectus mirabilis毒素的提取物的殺精子劑或基于從所述提取物獲得的核苷酸序列的合成肽。美國專利US6897291B1描述了可用于鑒定潛在地可用作避孕藥的分子，然而該文獻沒有描述新的避孕藥或殺精子劑分子，而是僅描述了鑒定所述分子的方法。澳大利亞專利AU772403B2描述了基于FSP95的多肽，F(xiàn)SP95是位于精子尾巴中的蛋白，一旦精子獲能，其對于精子運動性具有作用。提及了所述肽的用途與避孕方法，但是所述公開物中沒有提供關于它們的有效性的信息，因為沒有描述生物學數(shù)據(jù)。美國專利申請US20040157292-A1、US20090104604-A1、US20060257868-A1、US20090249499-A1 描述了不同的離子通道(分別是 CatSperl、CatSper2、CatSper3、CatSper4)。所述通道用于診斷不育，所有這些文獻提及了包含所述通道的抑制劑的制劑作為可能的避孕藥的用途。特別地，提及了針對所述離子通道的抗體，但是沒有提示或提及避孕肽。美國專利申請US20070105188A1描述了鑒定潛在避孕分子的方法，但沒有描述此類分子?？傊F(xiàn)有技術中沒有具 有殺精子性質(zhì)的可用于制備有效的藥物產(chǎn)品來抑制精子的肽、有機或免疫抑制劑分子。


圖1:野生型肽的氨基酸序列(上部)和從所述肽設計的3個合成類似物。第三行，被稱作Ac-[Ala43]-AtX41-62-NH2，顯示了具有殺精子活性的被用于進行精子運動性測定的類似物的序列，其序列顯示于SEQ ID N0:2。圖2:總毒素(Vt)、級份(F)和設計的類似物在選擇的人類精子中的制動效應(游上來):在HTF培養(yǎng)基中溫育45分鐘(Log atx:測定的殺精子劑的濃度(mg/ml)的對數(shù))。類似物的IC50是39.81 μ g/ml。總毒素的IC50是17.8μ g/ml。圖3:曲線顯示了融合于雌性配子(倉鼠卵母細胞)的紋膜中的人類精子(sp)的數(shù)目。使用了 Yanagimachi et al.(1976)的技術,其為用于測試精子能育性的分離方法。每次進行一式三份重復，每組5個卵母細胞(n=15個卵母細胞/組)；對照組(中空條柱)中擠入卵母細胞的紋膜的精子的平均數(shù)目是2.75，當把含有總毒素(灰色條柱)或肽類似物(黑色條柱)的培養(yǎng)基放入精液中時，粘附的精子的數(shù)目小于1(對于實驗中所用的相同的卵母細胞群體)。這清楚地證明了在存在總毒素和肽類似物的情況下，精子的能育性分別降低90±0.1%和82±0.3%。實驗中所用的濃度是之前從進行性精子運動性劑量應答曲線(圖2)計算得出的IC50。發(fā)明簡述
為了更好地理解本發(fā)明的描述，非獲能的精子是無活性的細胞配子，其需要在從無活性細胞到有功能細胞的轉(zhuǎn)化過程中經(jīng)歷生物化學和電生理學變化，該過程被稱作獲能(capacitation)。本發(fā)明涉及從來自蜘蛛Latrodectus mirabilis (通用名:黑寡婦或紅腹蜘蛛)的毒素獲得的分子級份。所述分子級份使得可以開發(fā)一組具有生物藥物作用的合成肽產(chǎn)品，包括生物化學和電生理學變化，其通過改變能育性獲能潛力而影響成熟的射出的精子(阻止精子獲能)。因此，所述生物藥物作用對應于避孕作用，其中人類精子的能育性應答被抑制。本發(fā)明的避孕藥的活性物質(zhì)誘導精子中的生物化學改變，涉及細胞內(nèi)pH變化，細胞內(nèi)一氧化氮生成水平的改變，誘導細胞內(nèi)Ca2+濃度的改變，線粒體電位和膜電位的改變，以及細胞內(nèi)鉀和鈣離子電流的改變。

肽殺精子劑,對應于Latrodectus mirabilis毒素的分子級份中發(fā)現(xiàn)的肽的修飾，是可容易合成的低分子量化合物(2837Da)，其作用于鈣和鉀運動性膜機制，所述機制影響精子的能量和運動性質(zhì)并抑制它們的能育性?；钚晕镔|(zhì)是20個氨基酸的水溶性肽，其可使用冷凍干燥技術結(jié)晶。活性物質(zhì)可包括在用于表面使用的凝膠的制劑中或組合于加入到安全套中的油性制劑中。本發(fā)明的活性試劑影響能育性潛力而不改變細胞膜的完整性?；钚晕镔|(zhì)作為藥物試劑發(fā)揮作用，其抑制成熟的被射出的精子的電容性應答并將此類精子轉(zhuǎn)化為非能育性配子。發(fā)明詳述本發(fā)明涉及具有避孕性質(zhì)的活性試劑。所述活性試劑對應于來自蜘蛛Latrodectus mirabilis的毒素的分子級份。特別地,活性試劑是具有SEQ ID NO:1的序列或與其至少85%相似的序列的肽，其是通過化學合成或通過重組DNA技術獲得的。在優(yōu)選實施方式中，具有避孕性質(zhì)的活性劑是具有10至30個氨基酸、優(yōu)選20個氨基酸的肽。所述實施方式通過SEQ ID NO: 2所示的序列或與其至少85%相似的序列例示，其是通過化學合成或通過重組DNA技術獲得的。來自Latrodectus mirabilis的毒素的天然結(jié)構(gòu)具有高分子量(7843Da, SEQ IDNO:1)并具有3個半胱氨酸橋(如圖1所示，其在上部顯示了天然肽和設計的類似物肽)。所述結(jié)構(gòu)使得天然肽在生物技術上無法被轉(zhuǎn)化為藥物，因為蛋白折疊和正確形成二硫橋方面的內(nèi)在問題。因此，分離了包含活性物質(zhì)的片段，將位置43處的半胱氨酸替換為丙氨酸，從而除掉二硫橋以獲得“線性”肽。設計的類似物具有線性的四級和二級結(jié)構(gòu)。修飾的肽(SEQ IDN0:2)的分子表面上的電荷分布使得與細胞膜的粘附是非常有效率的，這使其在最大劑量能夠影響100%的精子(圖2)。細胞膜具有對于藥物結(jié)合敏感的受體或離子通道，其中主要分子具有電荷(由于通道的開啟誘導的去極化)。在另一個優(yōu)選實施方式中，殺精子劑活性試劑的使用也被考慮到用于制備組合物，其用作安全套、陰道胚珠、避孕海綿、陰道潤滑凝膠和隔、陰道膜或增壓膠和表面霜劑中的潤滑劑和殺精子劑。包含活性試劑的組合物除其它成分之外還包括凝膠成分，其被添加至安全套的內(nèi)偵牝或胚珠形式的凝膠-溶膠，于37° C溶解于陰道中。包含本發(fā)明的肽的藥物組合物可包含一種或多種選自下列的藥學上可接受的賦形劑或介質(zhì):溶劑、稀釋劑、懸浮劑、乳化劑、抗氧化劑、藥學防腐劑、著色劑、芳香劑、介質(zhì)、賦形劑油性基底，例如:水、甘油、丙二醇、羥基乙基纖維素、尿素醛、磷酸二氫鈉、三乙醇胺、carcomer、聚丙烯酸、磷酸氫二鈉、尼泊金丙酯、尼泊金甲酯等。上述賦形劑列舉僅是為了示例性目的，不是意在限制本發(fā)明的范圍，其中殺精子劑的活性物質(zhì)對應于本發(fā)明的肽，如隨附的權(quán)利要求中所述。
實施例實施例A:從Latrodectus mirabilis毒素獲得具有殺精子活性的活性物質(zhì)

為了獲得毒素，需要從蜘蛛Latrodectus mirabilis中提取包含毒素提取物的毒腺，其包含2至4μ1毒素/腺。為此，通過使用干冰將動物冷擊而將其殺死。從螯肢(攜帶那些腺的結(jié)構(gòu))提取腺。將腺等分于含有200 μ I蒸餾水的冷環(huán)境下(-4° C)的2.5ml的Eppendorf中。將通過這種方式獲得的生物材料儲存于冷室(-20° C)中的密閉容器中，以便隨后進行分級處理和冷凍-干燥過程。粗提取物的純化這樣進行:將粗制Latrodectus mirabilis毒素在SephadexG-50上進行色譜，回收率85%，將每個匯合物標記為Arachnotoxin=Atx I, 2，3，4。然后，將級份通過HPLC柱進行第二次色譜。分離峰并將其內(nèi)容物冷凍干燥。產(chǎn)率計算為每個級份中獲得的毫克數(shù)/100毫克用于純化的粗制毒素。在純化肽時，使用了制備型Waters色譜系統(tǒng)(型號Delta Prep 4000)，其偶聯(lián)于UV-VIS檢測器(型號486)、級份收集器PharmaciaLKB-Frac-200 和記錄模塊 Servogor 120。所使用的實驗設定為:柱:Vydac C18 (10x250mm)，300 A, 150 μ m溶劑:Α:0.1%TFA/H20B:0.1%TFA-60%ACN/H20梯度: 1-61%B，在60分鐘內(nèi)流速: IOmL/分鐘檢測波長:220nm在被鑒定為F50的級份(在色譜中獲得的)中，分離了 7850Da的片段，將其純化并測序，序列為69個氨基酸(SEQ ID NO:1)。使用BLAST分析該69個氨基酸的鏈，其顯示出與獲自蜘蛛Latrodectustredecimguttatus的α _黑寡婦蜘蛛毒素(Iatrotoxin)的末端鏈的高相似度。使用末端的20個氨基的片段(從Ser41至Lys52)(高度保守部分)，構(gòu)建了肽類似物，將43位的半胱氨酸替換為丙氨酸，從而除掉二硫橋以獲得“線性”肽。使用固相合成法人工合成用于本工作的肽。對于該方法，在作為固體支持物的樹脂MBAR、BAR和Rink上使用t-Boc和Fmoc法。使用2.5倍過量的Boc-aa和DIC/HOBt的DCM/DMF溶液(按體積1:1)偶聯(lián)I小時，并使用Kaiser測試法監(jiān)控。如果必要，使用2.5倍過量的Boc-aa和TBTU和/或BOP與過量的DIEA (pH為8.0-9.0)的DMS0/NMP溶液(按體積1:4)再偶聯(lián)I小時。如果必要，在一般合成中，進行3次連續(xù)再偶連，然后進行陽性茚三酮測試。最后，使用醋酸酐的DMF溶液(按體積1:4)使肽樹脂進行20分鐘的乙?；磻嵤├鼴:測定SEQ ID NO:1的野生型肽對于人類精子的殺精子效應通過測定人類精子的精子運動性來測定野生型肽和構(gòu)建的類似物的殺精子效應。為此,將 15mL HTF-0.1%BSA 介質(zhì)(0.02g BSA 在 20mL HTF 中)和 3mL HTF_1%BSA 介質(zhì)(0.04g BSA在4mL HTF中)置于試管中，并在37° C溫育。然后，將2.6mL的人精子樣品溫育25分鐘直至液化。一旦液化，將樣品分入3個15mL的錐形管中，每個管中含有2mL溫的HTF-0.1%BSA。將860 μ L液化的精子垂直地加入每個管的底部，輕微吸液以混勻混合物，避免形成氣泡。除掉大的結(jié)塊。然后，將樣品在1，SOOrpm離心8分鐘，棄上清，使用移液槍頭只在管壁處僅觸及介質(zhì)表面，吸出液體。將沉淀重懸于3mL HTF-0.1%BSA，打散，然后在1，800rpm離心10分鐘，然后除去上清液。將由此獲得的沉淀物重懸于ImL溫的HTF_1%BSA中，管處于垂直位置，并輕輕地加入介質(zhì)。然后，將制備物在37 ° C溫育I小時，管傾斜45 °角(游上來)。完成該階段之后，除掉精子云狀物，將上清液組合，然后在1，SOOrpm離心8分鐘，棄上清。然后計數(shù)精子，達到約10，000，000個所選精子/1^(10\106/11^)的數(shù)值。將不同濃度的總毒素和色譜純化中獲得的不同毒素級份以及構(gòu)建的類似物肽加入之前選擇并計數(shù)的精子樣品中，在HTF介質(zhì)中在37° C溫育45分鐘。取出一滴樣品并置于加溫至36-37° C的載玻片上，將加溫至相同溫度的蓋玻片放置于樣品上，在顯微鏡下觀察樣品，放大400倍，一直保持在加熱的板上。檢查整個視野，對按照直線漸進性移動并跨越觀察視野的精子進行主觀評分。變?yōu)閳A形或以振蕩途徑前進的精子被認為是不正常移動的精子。所顯示的百分率(圖2)是不具有漸進性線性運動的精子相對于接受的精子總數(shù)目的百分率，50%是最低可接受值，相對于實驗中使用的殺精子劑的濃度的對數(shù)(log ATX:總毒素、構(gòu)建的類似物或毒素的色譜級份F47、F48、F50)。實施例C:活性肽的化學合成使用t-Boc型化學合成法 合成肽，其開發(fā)了針對Ν-α -氨基的臨時保護基團，即不穩(wěn)定的?；?叔丁氧基羰基，和針對側(cè)鏈的保護基團，源自芐基(Bzl)，其對于弱酸(三氟乙酸；TFA)是抗性的，并通過強酸例如氫氟酸(HF)被除掉。在t-Boc方法中，Ν-α-氨基的脫保護這樣進行:使用TFA在二氯甲烷(DCM)中的30%-50%的梯度，隨后使用5%的TEA (四乙基銨)的DCM( 二氯甲烷)溶液至10%DIPEA(N，N- 二異丙基乙胺)的DCM溶液中和。使用50%TFA的DCM溶液，隨后使用10%的TEA中和來進行N- α -氨基的脫保護。在氨基酸偶聯(lián)步驟中，使用下列反應劑:Β0Ρ(苯并三唑-1-基氧(三二甲基胺)磷六氟磷酸酯)，存在DIPEA ;和TBTU(N，N，N’，N’-四甲基-O-(苯并三唑-1-基)脲)，存在DIPEA。在所有的情況下，使用2.5倍過量的當量，反應時間為I至2小時。在存在DIC/HOBt的情況下使用的溶劑系統(tǒng)是50%DCM的DMF( 二甲基甲酰胺)溶液，而對于B0P/DIPEA或TBTU/DIPEA，使用20%DMS0在NMP (N-甲基-吡咯烷酮)中的混合物。在第三偶聯(lián)替代方式失敗的情況下，將引入的氨基酸乙?；?。乙酰化這樣進行:以DMF中的20%乙酸酐+3滴Pyr反應20分鐘。在整個反應過程中，使用Kaiser測試法監(jiān)視偶聯(lián)和對應的氨基酸的脫保護。為了從樹脂釋放肽，通過以濃度為IOml/克肽基樹脂的無水HF處理從每個氨基酸除掉保護基，使用10%苯甲醚、硫酸二甲酯和苯甲硫醚。為此使用真空庫和Teflon瓶。反應在0° C進行，恒定攪拌2小時(因為在肽中存在大量精氨酸殘基)，對于TOS側(cè)保護基團(其對于使用HF的去除具有部分抗性)類似地重復該過程。在反應完成之后，通過抽真空除掉HF并以80mg碳酸氫鈉在800ml去離子水中的溶液進行中和。以乙醚(g)洗滌肽，其使樹脂沉淀，使用5%和50%的乙酸水溶液萃取粗肽。然后，將肽環(huán)化以形成二硫橋。用于該步驟的設備是3L的3開口的圓底燒瓶。將粗制肽溶解于400ml去離子水中，使用磁力攪拌、氧氣泵和pH計。將溶液在冷室中在8-10° C、7.0的恒定pH通氣72小時。通過RP-HPLC測定環(huán)化效率。最后,將肽冷凍干燥、純化并通過HPLC表征。實施例D:使用重組DNA技術產(chǎn)生殺精子肽(Ac-[Ala43]-Atx41-62_NH2)殺精子肽Ac-[Ala43]-Atx41-62-NH2(MW 2387.72Da)具有已知的氨基酸序列(SEQ ID NO 2)，這允許知曉編碼該肽的DNA序列(SEQ IDNO 4)?？梢酝ㄟ^常規(guī)DNA寡核苷酸合成方法組裝該序列，也可使用這些合成方法引入對應于用于亞克隆的質(zhì)粒載體的限制性位點。例如，質(zhì)粒載體PF25A和F允許在Sf21昆蟲細胞系或BL21Codon Plus細菌(獲自PROMEGA Corp.USA)中表達該肽。可以使用常規(guī)HPLC方法純化獲得的肽以分離該肽并根據(jù)產(chǎn)品要求獲得所需的量。實施例E:使用重組DNA技術產(chǎn)生天然肽野生型肽(MW 7843.70Da)具有已知的氨基酸序列(SEQ ID N01)，這允許知曉編碼該肽的DNA序列(SEQ ID NO 3)。 可以通過常規(guī)DNA寡核苷酸合成方法組裝該序列，也可使用這些合成方法引入對應于用于亞克隆的質(zhì)粒載體的限制性位點。例如，質(zhì)粒載體PF25A和F允許在Sf21昆蟲細胞系或BL2ICodon Plus細菌(獲自PROMEGACorp.USA)中表達該肽?？梢允褂贸Ｒ?guī)HPLC方法純化獲得的肽以分離該肽并根據(jù)產(chǎn)品要求獲得所需的量。實施例F:在存在Latrodectus mirabilis總毒素和構(gòu)建的類似物的情況下,精子的能育性降低根據(jù)最初由Yanagimachi et al.(1976)描述的方法在倉鼠卵母細胞中使用滲透測定法測定人類精子的能育性的降低。簡而言之，收集金倉鼠卵母細胞，取下它們的紋膜，然后將卵母細胞與濃度為IO7個精子/ml的之前獲能的人類精子一起溫育。溫育持續(xù)3-6小時。然后，洗滌卵母細胞以除去未滲透它們的精子，然后固定并以地衣紅染色。使用相差顯微鏡觀察卵母細胞，僅當它們包含解凝階段的頭部或在它們的細胞質(zhì)內(nèi)包含雄性前核時認為已經(jīng)被精子滲透。實施例G:用于表面施用本發(fā)明的殺精子劑的藥物組合物
成分％重量
根據(jù) SEQ ID NO:2 的肽 0.00365 苯甲酸08
尼泊金丙酯00權(quán)利要求
1.孕肽，其氨基酸序列與SEQID N0:1所示的氨基酸序列至少85%相同。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的避孕肽，其中所述肽具有與SEQID NO:2所示的氨基酸序列至少85%相同的氨基酸序列。
3.關于轉(zhuǎn)化微生物的核苷酸序列，其中所述序列包含SEQIDN0:3，與SEQ ID NO:1具有至少95%同一性的其類似物或衍生物，和合適的載體。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的用于轉(zhuǎn)化微生物的核苷酸序列，其中所述序列包含SEQID N0:4,與SEQ ID NO:2具有至少95%同一性的其類似物或衍生物，和合適的載體。
5.得根據(jù)權(quán)利要求1的避孕肽的方法，其中所述方法包括在微生物中克隆權(quán)利要求3的核苷酸序列。
6.得根據(jù)權(quán)利要求2的避孕肽的方法，其中所述方法包括在微生物中克隆權(quán)利要求4的核苷酸序列。
7.得根據(jù)權(quán)利要求2的避孕肽的方法，其中所述方法包括通過t-Boc型化學合成法獲得所述肽。
8.孕藥物組合物，其中所述組合物包含至少一種根據(jù)權(quán)利要求1和2的肽和一種或多種藥學上可接受的介質(zhì)。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的藥物組合物，其中所述藥學介質(zhì)選自:溶劑、稀釋劑、懸浮劑、乳化齊U、抗氧化齊U、藥學防腐齊U、著色齊U、香味齊U、介質(zhì)、油性基底，賦形劑例如:水、甘油、丙二醇、羥基乙基纖維素、尿素醛、磷酸二氫鈉、三乙醇胺、carcomer、聚丙烯酸、磷酸氫二鈉、尼泊金丙酯、尼泊金甲酯等。
10.權(quán)利要求1和2的肽的用途，其中所述肽用于制備用作避孕藥劑的藥物組合物。
11.權(quán)利要求10的肽的用途，其中所述肽用于制備用作殺精子劑的藥物組合物。
12.權(quán)利要求8和9的組合物的用途，其中所述肽用于制備用作避孕藥劑的藥物組合物。
13.權(quán)利要求12的組合物的用途，其中所述肽用于制備用作殺精子劑的藥物組合物。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有避孕性質(zhì)的活性試劑。所述活性試劑是來自蜘蛛Latrodectus mirabilis的毒素的分子級份?；钚栽噭┦蔷哂蠸EQ ID NO:1的序列或與其至少85%相似的序列的肽，其是通過化學合成或重組DNA技術獲得的。在優(yōu)選實施方式中，具有避孕性質(zhì)的活性試劑是具有10至30個氨基酸、優(yōu)選20個氨基酸的肽。所述優(yōu)選實施方式通過SEQ ID NO:2的序列或與其至少85%相似的序列例示，其是通過化學合成或重組DNA技術獲得的。本發(fā)明還涉及獲得避孕肽的方法，其包括在微生物中克隆核苷酸序列。避孕藥物組合物包括至少一種如上所述的肽和一種或多種藥學上可接受的載體。最后，本發(fā)明涉及肽的用途，其可用于制備適合用作避孕藥劑和用作殺精子試劑的藥物。
文檔編號A61K38/17GK103097402SQ201080066642
公開日2013年5月8日 申請日期2010年9月23日 優(yōu)先權(quán)日2010年3月23日
發(fā)明者F·羅梅羅梅希亞, R·桑切斯古鐵雷斯, E·布斯托斯奧夫雷貢, A·德米蘭達, A·魯?shù)婪品继┠?申請人:拉弗朗特拉大學, 智利大學, 圣保羅聯(lián)邦大學, 安德羅瑪克實驗室股份有限公司