2?硫代喹唑啉二酮衍生物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥化工領(lǐng)域，具體而言是涉及2?硫代喹唑啉二酮衍生物和它們用于藥物的用途。確切而言，本發(fā)明涉及的化合物具有抑制聚(ADP?核糖)聚合酶活性的用途，該酶也稱聚(ADP?核糖)合成酶和聚ADP?核糖基轉(zhuǎn)移酶，普遍被稱為PARP。本發(fā)明化合物具有如下特征：式(1)化合物，A和D一起表示可被取代的稠合芳族環(huán)；X可以是NRX或CRXRY；如果X是NRX，則n是1或2；如果X是CRXRY，則n是1；RX可選自H、可被取代的C1?20烴基、C5?20芳基、C3?20雜環(huán)基、酰胺基、硫代酰胺基、酯、酰基以及磺?；?；RY取自H，羥基，氨基等；或者RX和RY可以一起構(gòu)成螺?C3?7環(huán)烴基或雜環(huán)基；R2和R3都是H，或是當(dāng)X＝CRXRY時(shí)，R2，R3，RX和RY與它們所連接的碳原子一起可以構(gòu)成可被取代的稠和芳香環(huán)；R1選自H或鹵素。
【專利說(shuō)明】
2-硫代喧性嘟二酬衍生物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥化工領(lǐng)域，具體而言是設(shè)及2-硫代哇挫嘟二酬衍生物和它們用于 藥物的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 本發(fā)明設(shè)及的化合物有抑制聚(ADP-核糖)聚合酶活性的用途，該酶也稱聚(ADP- 核糖)合成酶和聚ADP-核糖基轉(zhuǎn)移酶，普遍被稱為PARP。
[0003] 該酶是存在于多數(shù)真核細(xì)胞內(nèi)、具有多聚腺巧酸二憐酸核糖基(PAR)催化活性的 蛋白酶，參與單鏈DNA損傷的感知與修復(fù)。該酶家族約有18種亞型，根據(jù)同源性程度的不同， 將其分為 3 大組:PARP-1 組，包括 PARP-1 ~PARP-4，PARP-6，PARP-8 和 PARP-16; tankyrase 組， 包括PARP-fe~PARP-5C;第III組，包括PARP-7，PARP-9~PARP-15(Nguewa PA，Riertes MA， 化lladares B，et al.Prog Bio地ys Mol Biol ,2005,88(1):143-172)。
[0004] PARP-1是最先被發(fā)現(xiàn)的，在所有亞型中所占比例最大，發(fā)揮著90% W上的功能，包 括介導(dǎo)DNA修復(fù)、通過(guò)消耗細(xì)胞能量池導(dǎo)致細(xì)胞機(jī)能障礙與壞死、促進(jìn)炎癥基因轉(zhuǎn)錄等，設(shè) 及到多種疾病的治療，包括中風(fēng)、神經(jīng)退行性疾病、屯、肌缺血、癌癥、炎癥和糖尿病等 (Peralta-Leal A，Rodriguez-Vargas JM，Aguilar-Quesada R，et al.Free Radic Biol Med，2009,47(l):13-26)。
[0005] PARP-1主要由Ξ個(gè)區(qū)域組成：（1)約46kDa的N端DNA結(jié)合區(qū)，包括細(xì)胞調(diào)亡蛋白酶 切割位點(diǎn)（caspase-3cleavage site)、3個(gè)鋒指結(jié)構(gòu)W及核定位信號(hào)區(qū)（nuclear localization si即al)，運(yùn)個(gè)區(qū)域通過(guò)化I、Zn II結(jié)構(gòu)參與識(shí)別DNA的損傷W及介導(dǎo)PARP- 1與DNA的結(jié)合，Zn III則調(diào)節(jié)該區(qū)的活性；（2)-個(gè)2化化的中屯、自修飾區(qū)域，包含15個(gè)高度 保守的谷氨酸殘基，被認(rèn)為是自身聚腺巧二憐酸核糖化的祀位；（3)54kDa的C端催化區(qū)，包 括形成煙酷胺腺嚷嶺二核巧酸(NAD+)的結(jié)合位點(diǎn)和合成聚腺巧二憐酸核糖(PAR)的催化位 點(diǎn)（Langelier MF'Servent KM'Rogers EE，et al.J BioQiem，2008,283(7):4105-4114)。
[0006] PARP之所W成為腫瘤治療中的熱口位點(diǎn)之一，其理論依據(jù)是"合成致死"機(jī)制，即 兩個(gè)基因之間若存在"合成致死"作用，當(dāng)其中任何一個(gè)基因單獨(dú)受到抑制或發(fā)生突變時(shí)， 細(xì)胞的生存不受影響，但同時(shí)抑制兩個(gè)基因?qū)?dǎo)致細(xì)胞產(chǎn)生致死效應(yīng)。乳腺癌、卵巢癌等患 者的PARP與抑癌基因 BRCA-1/2就是一對(duì)合成致死基因。抑制PARP的活性，可導(dǎo)致BRCA1/2突 變的腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生"合成致死"的效應(yīng)。已有研究表明在DNA損傷后的同源重組修復(fù)中，缺乏 一些較為關(guān)鍵的基因蛋白（包括BRCA1、BRCA2、XRCC1、XRCC2、RAD51、NBS1、FANCA、FANCC、 CHK1、MRE11、RAD50、ATM、ATR等）的細(xì)胞對(duì)PARP抑制劑高度敏感，在PARP抑制劑的存在下無(wú) 法對(duì)損傷的DNA片段進(jìn)行有效的修復(fù)化ummar S，化enA，Pa;rchment RE.et al.BMC Med， 2012，10,25)。
[0007] 雖然根據(jù)很多研究表明PARP抑制劑單藥對(duì)于同源重組修復(fù)化R)缺陷的腫瘤細(xì)胞 具有合成致死作用，如化yant W及化rmer等的研究發(fā)現(xiàn)PARP抑制劑單藥對(duì)于BRCA巧郵RCA2 突變的乳腺癌及卵巢癌細(xì)胞有明顯的抑制作用（B巧ant皿，Schultz N，Thomas HD，et al.Pfe1:ure，2005,434(7035):9l3-9l7;F'a;rme;rH，MccabeN，LordCJ，etal.Na1:ure，2005， 434(7035): 917-921.)，但是，更多的研究的重點(diǎn)則放在將PARP抑制劑與DNA損傷藥物或放 療聯(lián)合應(yīng)用上，通過(guò)抑制由PARP介導(dǎo)的DNA的損傷修復(fù)，從而達(dá)到增強(qiáng)治療效果，并通過(guò)減 少用藥(或放療）劑量W達(dá)到降低毒副作用的效果(Damal G，DincalctI M.化r J Cancer, 2007,43(12)：1791-1801；Peralta LA,Rodriguez MI,Linares JL,et al.Free Radic Biol Med，2009,47(l):13-26;Chalmers AJ.化 Med Bull ,2009,89(1):23-40;Underhill C，Toulmonde M，Bonnefol H.Ann Oncol,2011,22(2):268-279)0
[000引奧拉帕尼(AZD-2281)是FDA批準(zhǔn)的第一個(gè)PARP-1抑制劑，主要用于晚期卵巢癌患 者。該藥于2014年12月批準(zhǔn)上市。
[0009] 本發(fā)明化合物可用于抑制PARP的活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的第一方面提供式(1)的化合物：
[0011]
[0012] 其中；
[0013] A和D-起表示可被取代的稠合芳族環(huán)；
[0014] X可 W 是 NRX或 CRXrY;
[001引如果X是NRX，則η是域2，如果X是CRXrY，則η是1;
[0016] RX可選自Η，可被取代的Cl-20控基、C日-20芳基、C3-2日雜環(huán)基、酷胺基、硫代酷胺基、醋、 酷基W及橫酷基；
[0017] rY取自H，徑基，氨基等；
[0018]或者rX和護(hù)可W-起構(gòu)成螺-C3-7環(huán)控基或雜環(huán)基；
[0019] R2和R3都是H，或是當(dāng)X = CRXrY時(shí)，R2，R3，RX和RY與它們所連接的碳原子一起可W構(gòu) 成可被取代的稠和芳香環(huán)；
[0020] 化選自Η或面素。
[0021] 進(jìn)一步的優(yōu)選：
[0022] 下列優(yōu)選能夠應(yīng)用于本發(fā)明的任一方面，只要適用的話。
[0023] 本發(fā)明中，由-A-D-代表的稠和芳環(huán)優(yōu)選為僅由碳環(huán)原子構(gòu)成，因而可W是苯、糞， 更優(yōu)選為苯。如上所述，運(yùn)些環(huán)可W被取代，但是在有些實(shí)施方案中優(yōu)選為連接的原子本身 連接于中屯、環(huán)幾基的間位。因而，如果稠和芳環(huán)是苯環(huán)，優(yōu)選的取代位置如下結(jié)構(gòu)式中的* 所示：
[0024]
[0025] 它通常被認(rèn)為2-硫代哇挫嘟二酬部分的6-位。
[0026] 如果由-A-D-代表的稠和芳環(huán)優(yōu)選為苯環(huán)，其取代的優(yōu)選為連接的原子為H、C1、F， 更優(yōu)選為F。
[0027] 化優(yōu)選為山(：1、。，更優(yōu)選為尸。
[002引優(yōu)選地，R2和化都是氨。
[00巧]當(dāng)n = 2時(shí)，X是NRX，rX優(yōu)選地選自下列基團(tuán)：H;可被取代的Ci-20控基；可被取代的 C5-20芳基;可被取代的C3-20雜環(huán)基;可被取代的醋基;可被取代的酷基;可被取代的酷胺基； 可被取代的硫代酷胺基;和可被取代的橫酷基。
[0030] 當(dāng)n = l時(shí)，X可 W是 NRX或 CRXrY。
[0031] 在其中X是NRX的實(shí)施方式中，RX優(yōu)選自下列基團(tuán)：Η;可被取代的Ci-20控基;可被取 代的Cs-20芳基;可被取代的C3-20雜環(huán)基;可被取代的醋基;可被取代的酷基;可被取代的酷胺 基;可被取代的硫代酷胺基;和可被取代的橫酷基。
[0032] 在其中X是CRXrY的實(shí)施方式中，RY優(yōu)選為氨;RX優(yōu)選自下列基團(tuán)：可被取代的。-20控 基;可被取代的C5-20芳基;可被取代的C3-20雜環(huán)基;可被取代的醋基;可被取代的酷基;可被 取代的酷胺基;可被取代的硫代酷胺基;和可被取代的橫酷基。
[0033] 本發(fā)明第二方面提供藥物組合物，包含第一方面化合物和藥學(xué)上可接受的載體或 稀釋劑。
[0034] 包括運(yùn)些取代基熟知的離子、鹽、溶劑合物和被保護(hù)形式。例如，對(duì)簇酸(-C00H)的 稱謂還包括陰離子(簇酸根)形式(-cocn、其鹽或溶劑合物W及其常規(guī)被保護(hù)形式。類似 地，對(duì)氨基的稱謂包括其質(zhì)子化物(-N+HRiR2)、氨基的鹽或溶劑合物W及氨基的常規(guī)保護(hù)形 式。類似地，對(duì)徑基的稱謂包括其陰離子形式(-(Π 、其鹽或溶劑形式W及徑基的常規(guī)被保 護(hù)形式。
[0035] 異構(gòu)體、鹽、溶劑合物和被保護(hù)形式。
[0036] 某些化合物可W存在一種或多種特定的幾何、旋光、對(duì)映、非對(duì)映、差向異構(gòu)、立體 異構(gòu)、互變異構(gòu)、構(gòu)象或端基異構(gòu)型，包括但不限于順式kis)與反式(trans)型;E-與Z-型； c-、t-與r-型；內(nèi)-與外-型；R-、S-與內(nèi)消旋-型;〇-與心型；d-與1-型；（+ )與（-)型；酬基、締 醇與締醇化物-型;順(syn)-與反(anti)-型;順錯(cuò)-與反錯(cuò)-型;α-與β-型；軸向-與平伏-型； 船-、椅-、扭曲-、信封-與半椅-型;及其組合，一下統(tǒng)稱為"異構(gòu)體"（或"異構(gòu)型"）。
[0037] 如果化合物是結(jié)晶的形式，則它可W存在多種不同的多晶型。
[0038] 注意的是除了下文關(guān)于互變異構(gòu)體的討論，特別要從本文所用的術(shù)語(yǔ)"異構(gòu)體"中 排除在外的是結(jié)構(gòu)(或構(gòu)造)異構(gòu)體。例如對(duì)甲氧基-0C曲的稱謂不被解釋為對(duì)其結(jié)構(gòu)異構(gòu) 體即徑甲基-C此0Η的稱謂。但是，對(duì)一類結(jié)構(gòu)的稱謂也可W包括屬于運(yùn)種類別的結(jié)構(gòu)異構(gòu) 體。例如，甲氧基苯基包括鄰-、間-、和對(duì)-甲氧基苯基;丙基包括正丙基和異丙基。
[0039] 上述的排除不包括互變異構(gòu)型，例如酬-、締醇-和締醇化物-形式。例如下列的互 變異構(gòu)對(duì)：酬/締醇、亞胺/締胺、酷胺/亞氨基醇、脈/脈、亞硝基/朽、硫酬/締硫醇、N-亞硝 基/徑基偶氮和硝基/酸式硝基。
[0040] 與本發(fā)明特別相關(guān)的是下列互變異構(gòu)對(duì)：
[0041]
[0042] 值得注意的是：在術(shù)語(yǔ)"異構(gòu)體"中特別包括具有一個(gè)或多個(gè)同位素取代的化合 物。例如，Η可W是任意同位素形式，包括1山皆(0)、化(1')。類似地，(：可^是任意同位素形式， 包括1?、1?、1化;0包括is〇、is〇;等等。
[0043] 除非有另有指定，對(duì)特定化合物的稱謂包括全部運(yùn)樣的異構(gòu)型，包括其(完全或部 分)外消旋和其它混合物。制備和分離運(yùn)類異構(gòu)體的方法是本領(lǐng)域中已知的，或者用已知方 式調(diào)整本文所教導(dǎo)的方法或已知方法而容易獲得的。
[0044] 除非有另有指定，對(duì)特定化合物的稱謂也包括其離子、鹽、溶劑合物和被保護(hù)的形 式W及它的不同多晶型。
[0045] 本發(fā)明的第Ξ方面提供用在人或動(dòng)物體治療方法中的第一方面的化合物。
[0046] 本發(fā)明的第四方面提供如本發(fā)明第一方面所定義的化合物在制備用于抑制PARP 活性的藥物中的用途。
[0047] 本發(fā)明的其他方面提供如本發(fā)明第一方面所定義的化合物在藥物制備中的用途， 該藥物治療:血管疾病;脈毒性休克;缺血損傷；神經(jīng)毒性；出血性休克；病毒感染;或著因 PARP活性抑制而改善的疾病。
[0048] 本發(fā)明的另一方面提供如本發(fā)明第一方面所定義的化合物在藥物制備中的用途， 該藥物用于癌癥療法的輔助手段或者用于強(qiáng)化電離放射或化學(xué)治療劑對(duì)腫瘤細(xì)胞的治療。
[0049] 本發(fā)明的其他方面提供因 PARP抑制而改善的疾病的治療，包括對(duì)需要治療的對(duì)象 給與治療有效量的如第一方面所定義的化合物，優(yōu)選藥物組合物的形式和癌癥的治療，包 括對(duì)需要治療的對(duì)象給予同時(shí)或先后與電離放射或化學(xué)治療劑組合的治療有效量的如第 一方面所定義的化合物、優(yōu)選藥物組合物形式。
[0050] 在本發(fā)明的其他方面中，化合物可W用于制備用于治療癌癥的藥物，該癌癥是同 源重組HR依賴性的DNA DSB修復(fù)活性缺陷的，或者用于治療癌癥患者，該癌癥是皿依賴性的 DNA DSB修復(fù)活性缺陷的，包括對(duì)所述患者給與治療有效量的化合物。
[0化1 ] 皿依賴性DNA DSB修復(fù)途徑經(jīng)由同源機(jī)理修復(fù)DNA的雙鏈斷鏈(DSB)，W生成連續(xù) 的DNA螺旋化.K.趾anna; S. P Jackson.化t. Genet. 2001，27 (3): 247-254)。皿依賴性DNA DSB修復(fù)途徑的組分包括但不限于W下幾種:ATM(NM_000051)、RAD51(NM_002875)、RAD51L1 (NM_002877)、RAD51C(NM_002876)、RAD51L3(NM_002878)、DMC 1(NM_007068)、XRCC2(NM_ 005431)、XRCC3(M1_005432)、RAD52(M1_002879)、RAD54L(應(yīng)_003579)、RAD54B(應(yīng)_ 012415)、BRCA 1(NM_007295)、BRCA2(NM_000059)、RAD50(NM_005732)、MRE11A(NM_005590) 和NBS1(NM_002485)。其它相關(guān)的參與皿依賴性DM DSB修復(fù)途徑中的蛋白質(zhì)包括如EMSY調(diào) 節(jié)因子等化U曲es-Davies L，Huntsman D，Ruas M，et al.Cell,2003,115:523-535)。皿的 詳細(xì)組分可見(jiàn)于相關(guān)文獻(xiàn)中（Wood 畑，Mitchell M，Sgou;ros J，Lind址 1 T.Science,2001， 291:1284-1289)。
[0052] HR依賴性DM DSB修復(fù)缺陷的癌癥可W包含或者由一種或多種運(yùn)樣的癌細(xì)胞組 成，它們相對(duì)于正常細(xì)胞而言通過(guò)該途徑修復(fù)DNA DSB的能力降低或者取消，即HR依賴性 DNA DSB修復(fù)途徑的活性可能在一種或多種癌細(xì)胞中降低或者取消。
[0化3] HR依賴性DNA DSB修復(fù)途徑的一種或多種組分的活性可能在患有HR依賴性DNA DSB修復(fù)缺的個(gè)體的一種或多種癌細(xì)胞中被消除。皿依賴性DNA DSB修復(fù)途徑的組分在本領(lǐng) 域中被充分表征，例如參見(jiàn)文獻(xiàn)（Wood RD，Mitchell M，Sgouros J，LindahlT.Science, 2001，291:1284-1289)所述W及包括上文索列舉的組分。
[0054] 在有些優(yōu)選的方案中，癌細(xì)胞可能具有BRCA巧日/或BRCA2缺陷的表型，即BRCA巧口/ 或BRCA2活性在癌細(xì)胞中被降低或消除。具有運(yùn)種表型的癌細(xì)胞可能是BRCA1和/或BRCA2缺 陷的，即BRCA1和/或BRCA2的表達(dá)/或活性可能在該癌細(xì)胞中被降低或消除，例如可W借助 編碼性核酸的突變或多態(tài)性，或者借助編碼調(diào)節(jié)因子的基因的擴(kuò)增、突變或多態(tài)性，例如編 碼服CA2調(diào)節(jié)因子的EMSY基因化U曲es-Davies L，Huntsman D，Ruas M，et al.Cell，2003， 115:523-535)。
[0055] BRCAl和BRCA2是已知的腫瘤抑制基因，它們的野生型等位基因經(jīng)常在雜合載體腫 瘤中喪失（Jasin M.，0ncogene，2002,21(58):8981-8993;Tutt A.，Ashwo;rth A.Trends Mol Med. ,2002,8(12) :571-576)eBRCAl和/或BRCA2突變與乳腺癌的關(guān)聯(lián)在本領(lǐng)域中已經(jīng) 被充分認(rèn)識(shí)(Radice P.J.E邱 Clin Cancer 1?63.，2002,21(3):9-12)。編碼服〔42結(jié)合因子 的EMSY基因的擴(kuò)增抑制也與乳腺癌和卵巢癌有關(guān)。
[0056] BRCA1和/或BRCA2中突變的載體也處于卵巢、前列腺和膜腺癌癥的升高風(fēng)險(xiǎn)中。
[0057] 在有些優(yōu)選的實(shí)施方案中，個(gè)體就BRCA1和/或BRCA2或其調(diào)節(jié)劑的一種或多種變 異，如突變和多態(tài)性而言是雜合的。BRCA1和BRCA2變異的檢測(cè)在本領(lǐng)域是熟知的 (Neuhausen S.L.，Ostrander E.A.Genet.Test,1992,1：75-83；Chappnis P.O.，F(xiàn)oulkes W.D.Cancer Treat Res.,2002,107:29-59;Janatova M.Neoplasm,2003,50(4):246-250: 化ncarkovaN. CeskaGynekol. 2003，6( 1): 11-16)。服CA2結(jié)合因子EMSY擴(kuò)增的測(cè)定描述可見(jiàn) 于 Hu 曲 es-Davies 的文章中（Hu 曲 es-Davies L，Huntsman D，Ruas M，et al.Cell，2003， 115:523-535)。
[0058] 與癌癥有關(guān)的突變和多態(tài)性可W通過(guò)檢測(cè)變異核酸序列的存在而在核酸水平上 檢測(cè)，或者通過(guò)檢測(cè)變異(即突變或等位基因變異)多膚的存在而在蛋白水平上檢測(cè)。
【附圖說(shuō)明】
[0059] 圖1~圖11顯示的是使用Alarm blue法測(cè)定部分受試樣品及陽(yáng)性對(duì)照AZD2281在 MDA-MB-436腫瘤細(xì)胞中的藥物濃度-細(xì)胞活力圖，用來(lái)測(cè)定受試樣品對(duì)腫瘤細(xì)胞的半抑制 濃度，即IC50。
【具體實(shí)施方式】
[0060] 在下文給出的合成路徑中，為方便起見(jiàn)，-A-D-稠合環(huán)被顯示為苯環(huán)。使用適當(dāng)?shù)?替代原料，利用下文所述的方法可W合成其中-A-D-稠合環(huán)不是苯環(huán)的化合物。
[0061] 本發(fā)明化合物可W運(yùn)樣合成:使用式1化合物(見(jiàn)下結(jié)構(gòu)式）：
[0062]
[0063] 其中化如前文所定義，與式2化合物(見(jiàn)下結(jié)構(gòu)式)反應(yīng)：
[0064]
[0065] 其中n、R2、R3和X如前文所定義，反應(yīng)可W運(yùn)樣進(jìn)行:在偶聯(lián)試劑系統(tǒng)存在下，例如 0-苯并Ξ氮挫-N，N，N/，滬-四甲基脈四氣棚酸醋(TBTU)、2-(7-偶氮苯并Ξ氮挫)-四甲基脈 六氣憐酸醋化ATU)、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽化DCIVI-^基苯并Ξ 氮挫化0BT)，在堿（例如N，N-二異丙基乙胺(DIEA))存在下，在溶劑如N，N-二甲基甲酯胺 (DM巧或二氯甲燒(DCM)中，在(TC至所用溶劑沸點(diǎn)的溫度范圍內(nèi)。
[0066] -般檢測(cè)方法：
[0067] 使用Agilent 1260型冊(cè)LC-MS(Agilent Dorshell 120EC-C18,2.7皿，4.6mmX 50mm;Agilent Qua化upole MS;VWD范圍190-400nm)進(jìn)行分析。流動(dòng)相A(含0.1 %甲酸的水） 和B(乙臘)按梯度使用：5%B達(dá)1分鐘，10分鐘后升至100%B，保持5分鐘，流速Iml/min，在 254nm下檢測(cè)。
[0068] 1H和/或"C-NMR利用化址er Ascend核磁共振譜儀分別在400MHz和75MHz下記錄。 化學(xué)位移按百萬(wàn)分之分?jǐn)?shù)(ppm)、相對(duì)于內(nèi)標(biāo)四甲基硅烷(TMS)的δ報(bào)告。除非另有規(guī)定，全 部樣品均溶于DMSO-d6或CDC13中測(cè)定。
[0069] 關(guān)鍵中間體的合成：
[0070] 2-氣-5-(6-氣-4-氧代-2-硫-3,4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基甲基)-苯甲酸(A)
[0071]
[0072] 將2-氨基-5-氣苯甲酸甲醋（10.0邑，59.12111111〇1)，2-氣-5-甲酯基苯甲臘（22.0邑， 147.80111111〇1)，無(wú)水醋酸（10.01111，174.85111111〇1)加入到3001111二氯甲燒中，加回流裝置，攬拌， 加熱至回流，反應(yīng)2~3小時(shí)。冷卻至室溫后，再將反應(yīng)液置于冰浴中，待溫度降至(TCW下， 在劇烈攬拌下分批加入棚氨化鋼(6.7g，177.36mmol)，加完后在室溫下反應(yīng)18小時(shí)。向反應(yīng) 液中加入300ml飽和氯化錠水溶液，分液，水相用二氯甲燒萃取2遍（150ml X 2)，合并有機(jī) 相，用大量飽和氯化鋼水溶液洗涂，無(wú)水硫酸鋼干燥，旋干有機(jī)相，真空干燥，得2-( 3-臘基- 4-氣節(jié)氨基)-5-氣苯甲酸甲醋（15.Og，產(chǎn)率84.0%)，為黃色固體(純度為99.0%)，m/z(M+ 1)+303,無(wú)需進(jìn)一步純化即可直接使用。
[0073] 將2-(3-臘基-4-氣節(jié)氨基)-5-氣苯甲酸甲醋（15.0g，49.65mmol)溶于500ml異丙 醇中，在室溫?cái)埌柘?，緩慢加?00ml氨氧化裡（12.5g，297.90mmol)水溶液，溶液由黃色變 為草綠色。由LC-MS監(jiān)測(cè)反應(yīng)，反應(yīng)2小時(shí)后反應(yīng)完全，加入大量水(大約1L)并用1N HC1調(diào)節(jié) 溶液PH，有大量淺黃色固體析出，繼續(xù)加入1N HC1直至沒(méi)有固體析出后，過(guò)濾，濾餅用大量 水潤(rùn)洗，再用少量乙醇潤(rùn)洗，真空干燥，得淺黃色2-(3-臘基-4-氣節(jié)氨基)-5-氣苯甲酸固體 12.2g(產(chǎn)率85.3%，純度96.4% )，m/z(M+l )+289，無(wú)需進(jìn)一步純化即可直接使用。
[0074] 將2-(3-臘基-4-氣節(jié)氨基)-5-氣苯甲酸（10.0 g，34.71mmol)加入150ml氯化亞諷 溶液中，加熱回流3小時(shí)。冷卻至室溫，旋干氯化亞諷，并用二氯甲燒帶旋3次（100ml X3)，加 入200ml丙酬溶解。將硫氯酸錠(3.1肖，40.73111111〇1)溶于1001111丙酬中。將硫氯酸錠丙酬溶液 緩慢滴加入上述溶液中，溶液顏色由血紅色逐漸變成黃色，并有大量黃色固體析出。反應(yīng)液 在室溫下繼續(xù)攬拌18小時(shí)后，過(guò)濾，濾餅先用大量水潤(rùn)洗，后用少量丙酬潤(rùn)洗，真空干燥得 2-氣-5-( 6-氣-4氧代-2-硫-3，4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基甲基)苯甲臘(8.4g，產(chǎn)率73.5 % )， 黃色固體粉末，m/z(M+l)+330,無(wú)需進(jìn)一步純化即可直接使用。
[00巧]將2-氣-5-( 6-氣-4氧代-2-硫-3，4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基甲基）苯甲臘（7 . Og， 21.26mmol)分批加入500ml氨氧化鋼(8.5g，212.56mmol)水溶液中，緩慢升溫至90°C，反應(yīng) 大約2小時(shí)，用LC-MS檢測(cè)，無(wú)原料后冷去至室溫，用1N肥1溶液調(diào)節(jié)PH，由大量固體析出，繼 續(xù)加1N HC1溶液直至無(wú)固體析出為止，過(guò)濾，濾餅用大量水潤(rùn)洗，再用少量乙醇潤(rùn)洗，真空 干燥，得淺黃色2-氣-5-(6-氣-4氧代-2-硫-3,4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基甲基）苯甲酸固體 (6.8g，產(chǎn)率92 %，純度為96.0 % )，m/z (M+1) +349，無(wú)需進(jìn)一步純化即可直接使用。
[0076] 1,4-二疊氮燒-1-基(2-四氨巧喃）甲酬(B)
[0077]
[007引將2-四氨巧喃甲酸（1.0g，8.61mmol)溶于10ml氯化亞諷中，加熱回流2小時(shí)。旋干 氯化亞諷，并用二氯甲燒帶2次（10ml X 2)，用10ml二氯甲燒溶解。將N-B0C高贓嗦（1.72g， 8.eimmol)溶于10ml二氯甲燒中，緩慢滴加入上面溶液中，室溫下攬拌2小時(shí)，旋干二氯甲 燒，真空干燥，得4-(四氨巧喃-2-甲酯基）-1,4-二疊氮燒-1-基-甲酸叔下醋（1.58g，產(chǎn)率 92.5 % )，棟色油狀液體，無(wú)需進(jìn)一步純化即可直接使用。
[0079] 將4-(四氨巧喃-2-甲酯基)-1,4-二疊氮燒-1-基-甲酸叔下醋（1. Og，5.04mmol)溶 于20ml無(wú)水甲醇中，在劇烈攬拌下通入干燥HC1氣體，持續(xù)通入1小時(shí)后，溶液中由大量白色 固體析出，停止通氣。再室溫?cái)埌?小時(shí)后，旋干反應(yīng)液。加入20ml飽和碳酸鋼水溶液，用二 氯甲燒萃取3遍(30ml X3)，合并有機(jī)相，先后用大量飽和碳酸鋼水溶液、氯化鋼飽和水溶液 潤(rùn)洗，有機(jī)相用無(wú)水Na2S〇4干燥，旋干，真空干燥，得1,4-二疊氮燒-1-基-(2-四氨巧喃）甲酬 棟色油狀液體(〇.95g，產(chǎn)率95.0%)，m/z(M+lΓl99，無(wú)需進(jìn)一步純化即可直接使用。其它胺 化合物用類似的方法合成或直接購(gòu)買。
[0080] 2-氣-5-(4-氧代-2-硫代-3,4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基-甲基)苯甲酸(C)和3-(4-氧 代-2-硫代-3,4-二氨-哇挫嘟-1-基-甲基)苯甲酸化）的合成參考2-氣-5-(6-氣-4-氧代-2- 硫-3,4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基甲基)-苯甲酸(A)的合成，只要將原料2-氨基-5-氣苯甲酸甲 醋/2-氣-5-甲酯基苯甲臘分別換成2-氨基苯甲酸甲醋/2-氣-5-甲酯基苯甲臘、2-氨基苯甲 酸甲醋/5-甲酯基苯甲臘即可。
[0081]
[0082] 實(shí)施例1:
[0083] 1-[3-(4-環(huán)戊基幾基-贓嗦-1-幾基)-4-氣-芐基]-6-氣-2-硫代-2,3-二氨-1H-哇 挫嘟-4-酬（1)的合成
[0084]
[00化]將2-氣-5-(6-氣-4-氧代-2-硫代-3，4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基-甲基）苯甲酸(A) (2.0g，5.74mmol)、環(huán)戊基-贓嗦-1-基-甲酬（1.3g，7.13mmol)、0-苯并ミ氮挫-N，N，N'，N'- 四甲基脈四氣棚酸醋(TBTU)(2.8g，8.72mmol)和N，N-二異丙基乙胺(2.2g，17.05mmol)加入 到二甲基甲酯胺（20ml)中，攬拌18小時(shí)。加入水（100ml )，在攬拌下，用1N HC1調(diào)節(jié)反應(yīng)液 PH，由大量固體析出，繼續(xù)滴加鹽酸直至無(wú)固體析出為止。過(guò)濾，濾餅先后用大量水，少量乙 醇潤(rùn)洗，真空干燥，得到1-[3-(4-環(huán)戊基幾基-贓嗦-1-幾基)-4-氣-芐基]-6-氣-2-硫代-2， 3-二氨-1H-哇挫嘟-4-酬（1)白色固體（2.74g，93%);iH-NMR(400M，DMS0-d6):12.99(s， lH)，7.78(d，lH，J = 細(xì)z)，7.64(t，lH，J = 細(xì)z)，7.46(s，lH)，7.34-7.29(m，3H)，5.79(s， 2H) ,3.57-2.89(m，SH)，1.75-1.52(m，8H)，1.26-1.24(m，lH);m/z(M+l)+513(99%純度）。
[0086]按照類似于上文所述的方式合成下列化合物，但是要使用適當(dāng)?shù)脑洗嫔衔闹?帶不同取代基的原料。所合成的化合物列在了下面。
[0089]
[0090] 實(shí)施例2:
[0091] i-[3-(4-環(huán)戊基幾基-[1，4]二氮雜環(huán)庚燒-1-幾基)-4-氣-芐基]-6-氣-2-硫代- 2，3-二氨-1H-哇挫嘟-4-酬(8)的合成
[0092]
[0093] 將2-氣-5-(6-氣-4-氧代-2-硫代-3，4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基-甲基）苯甲酸(A) (5.0g，14.36mmol)、環(huán)戊基-[1，4]二氮庚燒-1-基-甲酬(4.2g，21.40mmol)、0-苯并Ξ氮挫- N，N，N'，N'-四甲基脈四氣棚酸醋（TBTU)(6.9g，21.50mmol)和N，N-二異丙基乙胺（5.6g， 43.41mmol)加入到二甲基甲酯胺（30ml)中，攬拌18小時(shí)。加入水（100ml)，在攬拌下，用1N HC1調(diào)節(jié)反應(yīng)液PH，由大量固體析出，繼續(xù)滴加鹽酸直至無(wú)固體析出為止。過(guò)濾，濾餅先后用 大量水，少量乙醇潤(rùn)洗，真空干燥，得到1-[3-(4-環(huán)戊基幾基-[1，4]二氮雜環(huán)庚燒-1-幾 基)-4-氣-芐基]-6-氣-2-硫代-2，3-二氨-1H-哇挫嘟-4-酬(8)白色固體(6.73g，89 % );
[0094] lH-NMR(400M，DMS0-d6):12.97(s，lH)，7.78(d，lH，J = 細(xì)z)，7.64(t，lH，J = 細(xì)z)， 7.46-7.23(m，4H)，5.76(s，2H)，3.63-3.14(m，9H)，2.89-2.85(m，lH)，1.76-1.52(m，9H);m/ z(M+l)+527(98% 純度）。
[00%]所合成的化合物列在了下面。
[009引實(shí)施例3:
[0099] 6-氣-1-{4-氣-3-[4-(R比咯燒-1-幾基)-贓晚-1-幾基]-芐基}-2-硫代-2，3-二氨- 1H-哇挫嘟-4-酬（15)的合成
[0100]
[0101] 將2-氣-5-(6-氣-4-氧代-2-硫代-3，4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基-甲基）苯甲酸(A) (5. Og，14.36mmol)、贓晚-4-基-化咯燒-1-基-甲酬(3.9g，21.40mmol)、0-苯并Ξ氮挫-N，N， Ν'，N'-四甲基脈四氣棚酸醋（TBTU)(6.9g，21.50mmol)和N，N-二異丙基乙胺（5.6g， 43."mmol)加入到二甲基甲酯胺（30ml)中，攬拌18小時(shí)。加入水（100ml)，在攬拌下，用IN HC1調(diào)節(jié)反應(yīng)液PH，由大量固體析出，繼續(xù)滴加鹽酸直至無(wú)固體析出為止。過(guò)濾，濾餅先后用 大量水，少量乙醇潤(rùn)洗，真空干燥，得到6-氣氣-3-[4-(郵咯燒-1-幾基)-贓晚-1-幾 基]-芐基} -2-硫代-2，3-二氨-1H-哇挫嘟-4-酬（15)白色固體(7.36g，96 % )，m/z (M+1) +513 (99%純度）。
[0102] 實(shí)施例4:
[0103] 1-[3-(4-環(huán)戊基幾基-贓嗦-1-幾基)-4-氣-芐基]-2-硫代-2,3-二氨-1H-哇挫嘟- 4-酬（16)的合成
[0104]
[01 05] 將2-氣-5-(4-氧代-2-硫代-3，4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基-甲基）苯甲酸(C) (2.5g， 7.57mmol)、環(huán)戊基-贓嗦-1-基-甲酬（1.7g，9.33mmol)、0-苯并Ξ氮挫-N，N，N'，N'-四甲基 脈四氣棚酸醋（TBTU)(3.7g，11.53mmol)和N，N-二異丙基乙胺（3.0g，23.26mmol)加入到二 甲基甲酯胺（15ml)中，攬拌18小時(shí)。加入水(60ml)，在攬拌下，用1N肥1調(diào)節(jié)反應(yīng)液PH，由大 量固體析出，繼續(xù)滴加鹽酸直至無(wú)固體析出為止。過(guò)濾，濾餅先后用大量水，少量乙醇潤(rùn)洗， 真空干燥，得到1-[3-(4-環(huán)戊基幾基-贓嗦-1-幾基)-4-氣-芐基]-2-硫代-2,3-二氨-1H-哇 挫嘟-4-酬（16)白色固體(3.22g，86%)，m/z(M+l)+495(90%純度）。
[0106] 所合成的化合物列在了下面。
[0107]
[010 引
[0110] 實(shí)施例5:
[0111] 1-[ 3-(4-環(huán)戊基幾基-[1，4]二氮雜環(huán)庚燒-1-幾基)-4-氣-芐基]-2-硫代-2，3-二 氨-1H-哇挫嘟-4-酬(23)的合成
[0112]
[0113] 將2-氣-5-(4-氧代-2-硫代-3,4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基-甲基）苯甲酸(0(2.5邑， 7.57mmol)、環(huán)戊基-[l，4]二氮庚燒-1-基-甲酬（1.8g，9.17mmol)、0-苯并Ξ氮挫-N，N，N'， N/-四甲基脈四氣棚酸醋(TBTU)(3.7g，11.53mmol)和N，N-二異丙基乙胺(3.0g，23.26mmol) 加入到二甲基甲酯胺（15ml)中，攬拌18小時(shí)。加入水(60ml)，在攬拌下，用1N HC1調(diào)節(jié)反應(yīng) 液PH，由大量固體析出，繼續(xù)滴加鹽酸直至無(wú)固體析出為止。過(guò)濾，濾餅先后用大量水，少量 乙醇潤(rùn)洗，真空干燥，得到1-[3-(4-環(huán)戊基幾基-[1，4]二氮雜環(huán)庚燒-1-幾基）-4-氣-節(jié) 基]-2-硫代-2,3-二氨-1H-哇挫嘟-4-酬（23)白色固體(3.43g，89%)，m/z(M+l)+509(90% 純度）。
[0114]所合成的化合物列在了下面。
[011引 實(shí)施例6:
[0119] 1-[3-(4-環(huán)戊基幾基-贓嗦-1-幾基)-4-氣-芐基]-2-硫代-2,3-二氨-1H-哇挫嘟- 4-酬(30)的合成
[0120]
[01別]將3-(4-氧代-2-硫代-3,4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基-甲基）苯甲酸（D) (5. Og， 16. OOmmol)、環(huán)戊基-贓嗦-1-基-甲酬(3.5g，19.20mmol)、0-苯并Ξ氮挫-N，N，N'，N'-四甲 基脈四氣棚酸醋(TBTU)(7.7g，24.00mmol)和N，N-二異丙基乙胺(6.2g，48.00mmol)加入到 二甲基甲酯胺(30ml)中，攬拌18小時(shí)。加入水(60ml )，在攬拌下，用1N肥1調(diào)節(jié)反應(yīng)液PH，由 大量固體析出，繼續(xù)滴加鹽酸直至無(wú)固體析出為止。過(guò)濾，濾餅先后用大量水，少量乙醇潤(rùn) 洗，真空干燥，得到1-[3-(4-環(huán)戊基幾基-[1，4]二氮雜環(huán)庚燒-1-幾基)-芐基]-2-硫代-2， 3-二氨-1H-哇挫嘟-4-酬(37)白色固體(6.2g，81%)，m/z(M+l)+477(90%純度）。
[0122] 所合成的化合物列在了下面。
[0123]
[0124]
[0125] 實(shí)施例7:
[01%] i-[3-(4-環(huán)戊基幾基-[1，4]二氮雜環(huán)庚燒-1-幾基)-芐基]-2-硫代-2,3-二氨- 1H-哇挫嘟-4-酬(37)的合成
[0127]
[012引將3-(4-氧代-2-硫代-3,4-二氨-2H-哇挫嘟-1-基-甲基）苯甲酸（D)(2.4g， 7.68mmol)、環(huán)戊基-[l，4]二氮庚燒-1-基-甲酬（1.8g，9.17mmol)、0-苯并Ξ氮挫-N，N，N'， N'-四甲基脈四氣棚酸醋(TBTU)(3.7g，11.53mmol)和N，N-二異丙基乙胺(3.0g，23.26mmol) 加入到二甲基甲酯胺（15ml)中，攬拌18小時(shí)。加入水(60ml )，在攬拌下，用IN HC1調(diào)節(jié)反應(yīng) 液PH，由大量固體析出，繼續(xù)滴加鹽酸直至無(wú)固體析出為止。過(guò)濾，濾餅先后用大量水，少量 乙醇潤(rùn)洗，真空干燥，得到1-[3-(4-環(huán)戊基幾基-[1，4]二氮雜環(huán)庚燒-1-幾基)-芐基]-2-硫 代-2,3-二氨-1H-哇挫嘟-4-酬（37)白色固體(2.90g，77%)，m/z(M+l)+491(90%純度）。 [0129]所合成的化合物列在了下面。
[0132] 實(shí)施例8:
[0133] 為了評(píng)估化合物的抑制作用，利用下面測(cè)定法測(cè)定IC5〇(半抑制濃度)值。
[0134] 使用Alarm blue法測(cè)定受試樣品及陽(yáng)性對(duì)照AZD2281在MDA-MB-436腫瘤細(xì)胞中的 IC50，每個(gè)化合物均設(shè)置9個(gè)濃度梯度(包括0濃度），2復(fù)孔。
[01巧]104436細(xì)胞在161完全培養(yǎng)基(含有10%的胎牛血清，10011-1111/1青霉素，1004邑· ml/i鏈霉素）中，在37°C，5%C〇2，95%空氣培養(yǎng)條件下傳2~3代。
[0136] 實(shí)驗(yàn)第0天(DO)，將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，用0.25%的膜蛋白酶消化，制備成單細(xì) 胞懸液并計(jì)數(shù)，調(diào)整細(xì)胞濃度為1 X 1〇4細(xì)胞/mL，每孔10化L加入96孔細(xì)胞培養(yǎng)板內(nèi)，96孔板 置于相應(yīng)條件解箱內(nèi)培養(yǎng)過(guò)夜。
[0137] 陽(yáng)性對(duì)照AZD2281配制:稱取適量AZD2281，加入適量DMS0,滿旋振蕩使藥物完全溶 解，分裝后放入-80°C冰箱保存。
[0138] 受試品配制：稱取適量受試品，加入適量DMS0，滿旋振蕩使藥物完全溶解，分裝后 放入-80°C冰箱保存。
[0139] 鋪板次日（D1)，每孔加入1(Κ)化含系列濃度受試化合物的完全培養(yǎng)基或?qū)φ盏耐?全培養(yǎng)液;D4時(shí)，更換含有相應(yīng)藥物濃度的新鮮培養(yǎng)液。
[0140] D7時(shí)，采用Alarmar blue方法檢測(cè)各孔巧光強(qiáng)度，并計(jì)算IC50。
[0141] 1C日日由W下公式計(jì)算：
[0142]
[0143] Min、Max和Slope分別表示最小值、最大值和斜率。
[0144] 經(jīng)測(cè)定，部分化合物的IC5〇(nM)如下表：
[0145]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 式(1)化合物及其異構(gòu)體、鹽、溶劑合物、化學(xué)保護(hù)形式和前體藥物： 其中：A和D-起表示可被取代的稠合芳族環(huán)； X可 W 是NRX或 CRXrY; 如果X是NRX，則η是1或2，如果X是CRXrY，則η是1; RX可選自Η，可被取代的Cl-20控基、C5-20芳基、C3-20雜環(huán)基、酷胺基、硫代酷胺基、醋、酷基 W及橫酷基； RY取自Η，徑基，氨基等;或者rX和rY可W-起構(gòu)成螺-C3-7環(huán)控基或雜環(huán)基； R2和R3都是H，或是當(dāng)X = CRXrY時(shí)，R2，R3，RX和RY與它們所連接的碳原子一起可W構(gòu)成可 被取代的稠和芳香環(huán)； 化選自Η或面素。2. 根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中由-A-D-代表的稠合芳族環(huán)僅由可取代的碳環(huán)原子組 成。3. 根據(jù)權(quán)利要求2的化合物，其中由-A-D-代表的稠合芳族環(huán)是苯。4. 根據(jù)權(quán)利要求1至3任意一項(xiàng)的化合物，其中化選自H、C1和F。5. 根據(jù)權(quán)利要求1至4任意一項(xiàng)的化合物，其中R2和R3都是氨。6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5任意一項(xiàng)的化合物，其中n = 2，X是NRX，Rx可選自H、可選被取代的 Cl-20控基、可選被取代的C5-20芳基、可選被取代的C3-20雜環(huán)基、可選被取代的酷基、可選被取 代的硫代酷胺基、可選被取代的醋、可選被取代的酷基W及可選被取代的橫酷基。7. 根據(jù)權(quán)利要求1至5任意一項(xiàng)的化合物，其中n = l，X是NRX，Rx可選自H、可選被取代的 Cl-20控基、可選被取代的C5-20芳基、可選被取代的C3-20雜環(huán)基、可選被取代的酷基、可選被取 代的硫代酷胺基、可選被取代的醋、可選被取代的酷基W及可選被取代的橫酷基。8. 根據(jù)權(quán)利要求1至5任意一項(xiàng)的化合物，其中n=l，X是CRXrY，rY是氨，Rx可選自H、可選 被取代的Cl-20控基、可選被取代的C5-20芳基、可選被取代的C3-20雜環(huán)基、可選被取代的酷基、 可選被取代的硫代酷胺基、可選被取代的醋、可選被取代的酷基W及可選被取代的橫酷基。9. 藥物組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求1至8任意一項(xiàng)的化合物和藥學(xué)上可接受的載體或者 稀釋劑。10. 用在人或動(dòng)物體治療方法中的根據(jù)權(quán)利要求1至8任意一項(xiàng)的化合物。11. 權(quán)利要求1至8任意一項(xiàng)的化合物在制備用于抑制多聚腺巧二憐酸核糖聚合酶 (PARP)活性的藥物中的用途。12. 根據(jù)權(quán)利要求1至8任意一項(xiàng)的化合物在制備藥物中的用途，該藥物用于治療:血管 疾病;脈毒性休克;缺血損傷;神經(jīng)毒性；出血性休克;病毒感染;或著因 PARP活性抑制而改 善的疾病。13. 根據(jù)權(quán)利要求1至8任意一項(xiàng)的化合物在制備藥物中的用途，該藥物用于治療個(gè)體 的癌癥，其中所述的癌癥是HR依賴性的DNA DSB修復(fù)途徑缺陷的。14. 根據(jù)權(quán)利要求13的用途，其中所述癌癥包含一種或多種通過(guò)皿修復(fù)DNA DSB的能力 相對(duì)于正常細(xì)胞而言減低或取消的癌細(xì)胞。15. 根據(jù)權(quán)利要求14的用途，其中所述癌細(xì)胞具有BRCA1或BRCA2缺陷的表型。16. 根據(jù)權(quán)利要求15的用途，其中所述癌細(xì)胞是BRCA1或BRCA2缺陷的。17. 根據(jù)權(quán)利要求12至16任意一項(xiàng)的用途，其中所述個(gè)體就編碼皿依賴性DNA DSB修復(fù) 途徑組分的基因的突變而言是雜合的。18. 根據(jù)權(quán)利要求17的用途，其中所述個(gè)體是BRCA1和/或BRCA2突變而言是雜合的。19. 根據(jù)權(quán)利要求12至18任意一項(xiàng)的用途，其中所述癌癥是乳腺癌、卵巢癌、膜腺癌或 前列腺癌。20. 根據(jù)權(quán)利要求12至19任意一項(xiàng)的用途，其中所述治療進(jìn)一步包括給予電離放射或 化學(xué)治療劑。
【文檔編號(hào)】A61P31/00GK106083741SQ201610098627
【公開(kāi)日】2016年11月9日
【申請(qǐng)日】2016年2月22日 公開(kāi)號(hào)201610098627.4, CN 106083741 A, CN 106083741A, CN 201610098627, CN-A-106083741, CN106083741 A, CN106083741A, CN201610098627, CN201610098627.4
【發(fā)明人】王小龍, 李福衛(wèi), 唐小航, 劉志雄, 江紅葉
【申請(qǐng)人】南京中醫(yī)藥大學(xué)