測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及食品領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的方法。更 具體地，本發(fā)明涉及用于測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的培養(yǎng)基及測(cè)定乳制品中非乳酸菌含 量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，添加益生菌的產(chǎn)品越來越多，不僅需要對(duì)產(chǎn)品中乳酸菌活菌數(shù)進(jìn)行檢測(cè)，還 需要對(duì)非乳酸菌進(jìn)行檢測(cè)，以符合限量標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定。
[0003] 然而，目前測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的方法仍有待改進(jìn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明旨在至少解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的技術(shù)問題之一。為此，本發(fā)明的一個(gè)目的 在于提供用于測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的培養(yǎng)基及測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的方法。 利用根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的用于測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的培養(yǎng)基及測(cè)定乳制品中非乳 酸菌含量的方法能夠準(zhǔn)確地測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量。
[0005] 需要說明的是，本發(fā)明是基于發(fā)明人的下列發(fā)現(xiàn)而完成的：
[0006] 目前，沒有一個(gè)明確的標(biāo)準(zhǔn)的非乳酸菌檢測(cè)方法。文獻(xiàn)《非乳酸菌污染菌菌落計(jì)數(shù) 方法》中，所需的培養(yǎng)基成分不全，無(wú)法滿足微生物的生長(zhǎng)繁殖，進(jìn)而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確 性較低。
[0007] 發(fā)明人經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)得到了最優(yōu)培養(yǎng)基配方，樣品經(jīng)稀釋后在該培養(yǎng)基上培養(yǎng)， 并對(duì)得到的菌落進(jìn)行計(jì)數(shù)，從而確定乳制品中非乳酸菌含量。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的用 于測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的培養(yǎng)基及測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的方法能夠準(zhǔn)確地 測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量。
[0008] 為此，在本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了一種用于測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量 的培養(yǎng)基。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述培養(yǎng)基包括:5. Og/l的胰蛋白胨;2.5g/l的酵母浸粉 或酵母浸膏；1. 〇g/L的葡萄糖；15 . Og/L的瓊脂；以及余量的水，所述瓊脂培養(yǎng)基的pH值為 6.8~7.2。發(fā)明人經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)得到最優(yōu)培養(yǎng)基成分，非乳酸菌能夠在此條件下生長(zhǎng)繁殖， 而乳酸菌無(wú)法生長(zhǎng)，從而能夠通過計(jì)數(shù)培養(yǎng)所得到的菌落數(shù)以確定非乳酸菌含量。由此，根 據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的用于測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的培養(yǎng)基能夠準(zhǔn)確地測(cè)定乳制品中非 乳酸菌含量。
[0009] 在本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提出了一種測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的方法。根 據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述方法包括：（1)將乳制品與緩沖液或生理鹽水進(jìn)行混合，得到樣品 勻液；（2)將樣品勻液進(jìn)行梯度稀釋，得到稀釋液；（3)將所述稀釋液涂布于前面所描述的所 述培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)；以及(4)基于所述培養(yǎng)的結(jié)果，確定所述乳制品中非乳酸菌含量。將 涂有稀釋液的培養(yǎng)皿進(jìn)行培養(yǎng)培養(yǎng)，乳酸菌無(wú)法生長(zhǎng)，得到的菌落均為非乳酸菌。由此，根 據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的方法能夠準(zhǔn)確地測(cè)定乳制品中非乳酸菌 含量。
[0010] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，針對(duì)固體或半固體乳制品，步驟（1)包括:將所述乳制品與 緩沖液或生理鹽水置于均質(zhì)袋中均質(zhì)混合1~2分鐘，得到所述樣品勻液，其中，所述乳制品 與緩沖液或生理鹽水的體積比為1:10。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測(cè)定乳制品中非乳酸菌 含量的方法能夠準(zhǔn)確地測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量。
[0011] 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述方法包括:將乳制品與緩沖液或生理鹽水進(jìn)行混合，得 到樣品勻液;將所述樣品勻液進(jìn)行第一稀釋，得到第一稀釋液，再將所述第一稀釋液進(jìn)行第 二稀釋，得到第二稀釋液;所述第一稀釋液和第二稀釋液均設(shè)至少兩組平行處理和1個(gè)空白 對(duì)照，其中空白對(duì)照取〇. lmL空白稀釋液涂布于含有所述培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上，平行處理均取 0. 1mL所述稀釋液涂布于含有所述培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上，并將培養(yǎng)皿置于29~31攝氏度下培 養(yǎng)70~74小時(shí)，計(jì)數(shù)培養(yǎng)皿上的菌落數(shù);按照公式Ν= Σ(：/(ηι+0.1 n2)d計(jì)算得到所述乳制品 中非乳酸菌含量，其中，N為所述乳制品中非乳酸菌數(shù)；Σ(：為所述培養(yǎng)皿上菌落數(shù)之和;m 為涂布有所述第一稀釋液的培養(yǎng)皿個(gè)數(shù);Π 2為涂布有所述第二稀釋液的培養(yǎng)皿個(gè)數(shù);d為所 述第一稀釋液相對(duì)于所述乳制品的稀釋度。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測(cè)定乳制品中非乳 酸菌含量的方法能夠準(zhǔn)確地測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量。
[0012] 在本發(fā)明的第三方面，本發(fā)明提出了一種測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的方法。根 據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，所述方法包括：以無(wú)菌吸管吸取25mL樣品置于盛有225mL生理鹽水的容 器中，混勻，制成1:10的樣品勻液;將所述樣品勻液進(jìn)行梯度稀釋，得到2~3個(gè)不同濃度的 稀釋液;針對(duì)每種稀釋液，均設(shè)至少兩個(gè)平行處理和1個(gè)空白對(duì)照，其中空白對(duì)照采用〇. lmL 空白稀釋液進(jìn)行平板培養(yǎng)基涂布，平行處理均取〇. lmL所述稀釋液涂布于平板培養(yǎng)基上;將 涂有稀釋液的平板培養(yǎng)基置于29~31攝氏度下培養(yǎng)70~74小時(shí)，計(jì)數(shù)平板培養(yǎng)基上的所有 菌落數(shù)，并基于計(jì)數(shù)結(jié)果確定乳制品中非乳酸菌含量，所述平板培養(yǎng)基是通過下列步驟獲 得的：將5.0g胰蛋白胨、2.5g酵母浸膏、l.Og葡萄糖及15.0g瓊脂混合，并用蒸餾水定容至 10001^，煮沸溶解，調(diào)節(jié)?田直至7.0±0.2，121°(：高壓滅菌151^11，無(wú)菌條件下趁熱倒入平皿 中，每個(gè)平皿倒入10~15mL，冷卻凝固。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測(cè)定乳制品中非乳酸菌 含量的方法能夠準(zhǔn)確地測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量。
[0013] 本發(fā)明的附加方面和優(yōu)點(diǎn)將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變 得明顯，或通過本發(fā)明的實(shí)踐了解到。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 下面詳細(xì)描述本發(fā)明的實(shí)施例。下面描述的實(shí)施例是示例性的，僅用于解釋本發(fā) 明，而不能理解為對(duì)本發(fā)明的限制。
[0015] 本發(fā)明提出了用于測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的培養(yǎng)基及測(cè)定乳制品中非乳酸 菌含量的方法，下面將分別對(duì)其進(jìn)行詳細(xì)描述。
[0016] 用于測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的培養(yǎng)基
[0017] 在本發(fā)明的第一方面，本發(fā)明提出了用于測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的培養(yǎng)基。 根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該培養(yǎng)基包括:5. Og/L的胰蛋白胨;2.5g/L的酵母浸粉或酵母浸膏； 1. 〇g/L的葡萄糖；15.0g/L的瓊脂；以及余量的水，瓊脂培養(yǎng)基的pH值為6.8~7.2。胰蛋白 胨、酵母浸粉或酵母浸膏的添加能夠?yàn)榉侨樗峋峁┨荚?、氮源和生長(zhǎng)因子。發(fā)明人意外地 發(fā)現(xiàn)，若只添加蛋白胨、酵母浸粉或酵母浸膏，不能滿足非乳酸菌的生長(zhǎng)繁殖，即部分非乳 酸菌未生長(zhǎng)或形成的菌落過小，不滿足計(jì)數(shù)要求，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏低。經(jīng)過深入研究發(fā)現(xiàn)， 通過向培養(yǎng)基中添加葡萄糖，以補(bǔ)充碳源，能夠促使非乳酸菌生長(zhǎng)繁殖，形成大小適宜的菌 落，從而保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。進(jìn)一步地，通過優(yōu)化得到各成分的添加比例及培養(yǎng)基的pH 值，在此最優(yōu)條件下能夠保證非乳酸菌正常生長(zhǎng)繁殖，并在培養(yǎng)基上形成大小適宜的菌落， 得到的檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性較高，穩(wěn)定性好。若pH值過低，容易使乳酸菌生長(zhǎng)繁殖，從而導(dǎo)致 檢測(cè)結(jié)果偏高。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的用于測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的培養(yǎng)基能夠 準(zhǔn)確地測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量。
[0018] 測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的方法
[0019] 在本發(fā)明的第二方面，本發(fā)明提出了一種測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的方法。根 據(jù)本發(fā)明的實(shí)施例，該方法包括：（1)將乳制品與緩沖液或生理鹽水進(jìn)行混合，得到樣品勻 液；（2)將樣品勻液進(jìn)行梯度稀釋，得到稀釋液；（3)將稀釋液涂布于前面所描述的培養(yǎng)基 上，進(jìn)行培養(yǎng)；以及(4)基于培養(yǎng)的結(jié)果，確定乳制品中非乳酸菌含量。將乳制品與緩沖液或 生理鹽水進(jìn)行混合及稀釋，并將得到的稀釋液涂布于前面所描述的培養(yǎng)基上，能夠使非乳 酸菌正常生長(zhǎng)繁殖，并在培養(yǎng)基上長(zhǎng)出大小適宜的菌落，通過計(jì)數(shù)菌落數(shù)，確定乳制品中非 乳酸菌含量。由此，根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例的測(cè)定乳制品中非乳酸菌含量的方法能夠準(zhǔn)確地測(cè) 定乳制品中非乳酸菌含量。