一種促進(jìn)Aβ聚集的化合物及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明屬于藥物領(lǐng)域，涉及一種促進(jìn)A β聚集的化合物及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 阿爾茲海默癥（Alzheimer's disease，AD)是一類神經(jīng)退行性疾病，其早期癥狀通 常表現(xiàn)為短時記憶的缺失，進(jìn)而發(fā)展為記憶混亂、失語、易怒、認(rèn)知功能障礙等，是目前最常 見的癡呆類型。.我國有超過600萬的老年癡呆的病人，約占世界患病總?cè)藬?shù)的四分之一。 據(jù)預(yù)測，隨著人口老齡化的加劇，到本世紀(jì)中葉全球?qū)谐^1億的老年癡呆癥患者。
[0003] 由淀粉樣小肽（Amyloid-beta, Αβ )在神經(jīng)細(xì)胞外的堆積形成的老年斑（senile plaque, SP)是阿爾茲海默癥的兩大重要病理特征之一。A β由其前體蛋白APP經(jīng)β-和 γ-分泌酶剪切形成，并分泌到細(xì)胞外，積累到一定程度后聚合形成寡聚體、原纖維和其 他形式中間體，最終形成成熟的纖維狀Αβ。早期觀點(diǎn)認(rèn)為纖維狀Αβ具有神經(jīng)毒性， 是引起神經(jīng)細(xì)胞死亡并最終導(dǎo)致AD發(fā)生的主要原因（I. Lorenzo and Yankner, 1996Α. Lorenzo,B. A. Yankner Amyloid fibril toxicity in Alzheimer ' s disease and diabetes Ann. NY Acad. Sci. ,77(1996)，pp. 89 - 95 ;2. Liu, Y. (1999)，"Understanding the biological activity of amyloid proteins in vitro:from inhibited cellular MTT reduction to altered cellular cholesterol homeostatis'，，Progress in Neuro -psychopharmacology&Biological Psychiatry, Vol. 23, pp. 377 - 95.)，所以在很長一段時 間內(nèi)抑制A β聚集是藥物篩選的重要靶點(diǎn)之一，但是相關(guān)研究的進(jìn)展甚微，篩選到的藥物 進(jìn)入臨床試驗后效果不佳。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種促進(jìn)A β聚集的化合物及其制備方法與應(yīng)用。
[0005] 本發(fā)明提供的促進(jìn)A β聚集的小分子化合物，其結(jié)構(gòu)式如式I所示化合物，
[0006]
[0007] 該化合物的命名為：2_(2, 3_dihyd;roxyphenyl) _5, 7-dimethoxychroman-4-〇ne ; 中文名：5, 7-雙甲氧基，2'，3<雙羥基二氫黃酮。
[0008] 另外，上述式I所示化合物藥學(xué)上可接受的鹽也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0009] 本發(fā)明還提供了一種制備式I所示化合物的方法，包括如下步驟：
[0010] 在酸作為催化劑的條件下，將式II所示化合物在乙醇水溶液中進(jìn)行脫保護(hù)反應(yīng)， 反應(yīng)完畢得到所述式I所示化合物；
[0011]
[0012] 上述方法中，所述酸為鹽酸；
[0013] 所述乙醇水溶液的質(zhì)量百分濃度為60-65%，具體為62% ;
[0014] 所述脫保護(hù)反應(yīng)步驟中，時間為lh_3h，具體為2h。
[0015] 另外，上述本發(fā)明提供的式I所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備下述產(chǎn)品 中的應(yīng)用，也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍：
[0016] 1)預(yù)防和/或治療老年癡呆癥的產(chǎn)品；
[0017] 2)促進(jìn)Αβ由單體向多聚體聚集的產(chǎn)品；
[0018] 3)抑制Αβ由單體向寡聚體聚集的產(chǎn)品。
[0019] 其中，所述Αβ為淀粉樣小肽；
[0020] 所述多聚體的分子量為62kDa至250kDa ;
[0021] 所述寡聚體的分子量為8kDa至56kDa。
[0022] 所述式I所示化合物溶于D-PBS中；
[0023] 所述式I所示化合物在D-PBS中的濃度具體不小于5 μ M，更具體為5 μ Μ-50 μ M。
[0024] 所述藥物可通過注射、噴射、滴鼻、滴眼、滲透、吸收、物理或化學(xué)介導(dǎo)的方法導(dǎo)入 機(jī)體如肌肉、皮內(nèi)、皮下、靜脈、粘膜組織；或是被其他物質(zhì)混合或包裹后導(dǎo)入機(jī)體。
[0025] 需要的時候，在上述藥物中還可以加入一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。所述載 體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面 活性劑、吸附載體、潤滑劑等。
[0026] 以式I所示化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽為活性成分制備的藥物可以制成注射 液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、口服液等多種形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學(xué)領(lǐng) 域的常規(guī)方法制備。
[0027] 本發(fā)明提供的式I所示化合物能夠通過加速Αβ由單體向毒性較低的多聚體聚 集，從而減少毒性高的寡聚體濃度，以達(dá)到治療的目的。
【附圖說明】
[0028] 圖1為WB檢測經(jīng)HFIP處理后處于A β單體狀態(tài)的A β ;
[0029] 圖2為WB檢測式I (ImM)與A β(50 μ Μ)單體37°C孵育24h的聚集效果；
[0030] 圖3為WB檢測不同濃度的式I與A β (50 μ M) 37°C孵育24h的聚集效果；
[0031] 圖4為THT熒光檢測式I對A β聚集的影響；
[0032] 圖5為ΑβδΟμΜ溶液與等摩爾濃度的式I進(jìn)行37°C孵育，分別在取0h、ld、3d、5d、 7d的樣品進(jìn)行dot-blot檢測的結(jié)果；
[0033] 圖6為式I對Αβ引起的細(xì)胞凋亡；
[0034] 圖7為MTT法檢測式I對SH-SY5Y細(xì)胞的毒性；
[0035] 圖8為MTT法檢測式I對神經(jīng)細(xì)胞的毒性；
[0036] 圖9為式I對Αβ引起的神經(jīng)元細(xì)胞存活率的影響。
【具體實施方式】
[0037] 下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步闡述，但本發(fā)明并不限于以下實施例。所 述方法如無特別說明均為常規(guī)方法。所述原材料如無特別說明均能從公開商業(yè)途徑獲得。
[0038] 實施例1、制備式I所示化合物
[0039] 以鹽酸作為催化劑，將式II所示化合物在質(zhì)量百分濃度為62%的乙醇水溶液中 進(jìn)行脫保護(hù)反應(yīng)2h，反應(yīng)完畢得到本發(fā)明提供的式I所示化合物0. 0516g，為棕黃色固體。
[0040]
[0041] 該化合物的1H-NMR 及 13C-NMR 檢測結(jié)果如下,H NMR (500MHz, DMS0-d6) δ 9. 51 (s, 1H) , 8. 69 (s, 1H) , 6. 89 (dd, J = 7. 8, 1. 3Hz , I Η) , 6. 79 (dd, J = 7. 8, I. 3Ηζ, 1Η), 6. 69 (t, J = 7. 8Hz, 1Η), 6. 22 (d, J = 2. 3Hz, 1Η), 6. 20 (d, J = 2. 3Hz, 1Η), 5. 67 (dd, J = 12. 7, 2. 8Hz, 1Η), 3. 81 (s, 3Η), 3. 78 (s, 3Η), 2. 95 (dd, J = 16. 3, 12. 7Hz, 1Η), 2. 59 (dd, J = 16. 3, 2. 8Hz, 1Η).
[0042] 13C NMR (126MHz, DMS0-d6) δ 188. 21，165. 37, 164. 67, 161. 80, 145. 15, 142. 43, 125 .88, 119. 05, 116. 87, 115. 06, 105. 31, 93. 66, 92. 82, 73. 94, 55. 87, 55. 72, 43. 81.
[0043] 由上可知，該化合物結(jié)構(gòu)正確，為式I所示目標(biāo)化合物。
[0044] 實施例2、實施例1所得式I所示化合物的活性評價實驗：
[0045] I. A β單體化處理
[0046] Amyloid β Peptide (1-42) (human)凍干粉購自 Abcam 公司。從-20 °C 冰箱中取 出 Αβ 1-42 干粉 lmg，加入 Iml HFIP(1, 1，1，3, 3, 3-hexafluor〇-2-p;ropanol) (Fluka)至終 濃度lmg/ml。室溫孵育lh，不時中速震蕩混勻。接著對Αβ溶液進(jìn)行IOmin水浴超聲，使 Αβ 1-42完全單體化。超聲后溶液13000g離心2