一種從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素a和粘桿菌素b的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素A和粘桿菌素B的方法，該方法首先將粘桿菌素發(fā)酵液的粘度降至400～500Pa.s，后降溫至0～10℃，調(diào)節(jié)pH至2～3，然后加入其重量的0.5%～0.8%的絮凝劑，充分攪拌后過濾，所得濾液降膜濃縮至其體積的30％～50％，之后進行二級逆流萃取，所得萃取液通過層析分離方式分離得到粘桿菌素Ａ溶液和粘桿菌素B溶液，分別將粘桿菌素Ａ溶液和粘桿菌素B溶液采用二級逆流反萃取、噴霧干燥后得到硫酸粘桿菌素A和硫酸粘桿菌素B的鹽粉末。本發(fā)明實現(xiàn)了粘桿菌素A和B的有效分離，提高了其質(zhì)量，使其含量分別在97%以上，總提取收率達到88～92%，降低生產(chǎn)成本；避免了重金屬和廢水的污染問題，降低了環(huán)保壓力。
【專利說明】一種從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素 A和粘桿菌素 B的 方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于抗生素提取、合成【技術(shù)領(lǐng)域】，特別是涉及一種從粘桿菌素發(fā)酵液中分 離粘桿菌素 A和粘桿菌素 B的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 粘桿菌素是由多粘芽肥桿菌變種粘菌素 （Bacillus polymyxa var. colistinus) 產(chǎn)生的堿性多肽類抗生素，其含有30多種不同成分的混和物，主要為粘桿菌素 A(多粘菌素 E1)和粘桿菌素 B (多粘菌素 E2)的混合物。對多數(shù)革蘭氏陰性菌有效。被視為"最后一線 藥物"。
[0003] 目前，國內(nèi)采用離子交換法、膜過濾方法或沉淀法提取粘桿菌素，存在的主要問題 是： 1采用膜過濾法提取粘桿菌素，首先提取過程中產(chǎn)生的廢水較多，其次膜過濾設(shè)備需 定期進行維護和保養(yǎng)，導(dǎo)致生產(chǎn)成本較高。
[0004] 2沉淀法和離子交換法提取粘桿菌素，其生產(chǎn)周期較長，工藝復(fù)雜，導(dǎo)致提取收率 較低，一般不超過80%。
[0005] 3采用以上工藝提取粘桿菌素，粘桿菌素 A和B組份總量不超過90%，雜質(zhì)含量偏 商。
[0006] 4以上方法不能有效地提取、分離粘桿菌素 A和B組份。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的就在于克服上述現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種有效提高提取收率，降 低成本，縮短生產(chǎn)周期，減少環(huán)境污染，實現(xiàn)穩(wěn)定、有效分離的從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘 桿菌素 A和粘桿菌素 B的方法。
[0008] 為實現(xiàn)上述目的所采取的技術(shù)方案為： 一種從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素 A和粘桿菌素 B的方法，其特征在于粘桿菌素 發(fā)酵液經(jīng)預(yù)處理、降膜濃縮、萃取、層析、反萃取、噴霧干燥后得到多粘素 E1和E2的鹽粉末。 [0009] 所述預(yù)處理是指將發(fā)酵液加入飲用水，發(fā)酵液的粘度將至400?500Pa. s ;溫度降 溫至0?l〇°C，加入10?15%的草酸溶液，調(diào)節(jié)pH至2?3 ;加入0. 5?0. 8%的絮凝劑， 攪拌20?30min并過濾，其中所述絮凝劑為氨甲基聚苯乙烯或陽離子聚丙烯酰胺。
[0010] 所述降膜濃縮是指利用逆流降膜濃縮蒸發(fā)設(shè)備，將粘桿菌素濾液體積濃縮30? 50%。
[0011] 所述萃取是指用高速離心分離機進行二級逆流萃取處理，將粘桿菌素從水相轉(zhuǎn)移 到復(fù)合有機溶媒項中，其萃取的工藝控制參數(shù)分別是： a萃取溫度：0?10°C ; b V枯桿麵濾液.V擁溶媒=1 . 5?10(L/L)，

【權(quán)利要求】
1. 一種從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素 A和粘桿菌素 B的方法，其特征在于其工藝 步驟為：首先將粘桿菌素發(fā)酵液的粘度降至400?500Pa. s，后降溫至O?KTC，調(diào)節(jié)pH至 2?3,然后加入其重量的0. 5%?0. 8%的絮凝劑，充分攪拌后過濾，所得濾液降膜濃縮至其 體積的30%?50%，之后啟動高速離心分離機進行二級逆流萃取，所得萃取液通過層析分 離方式分離得到粘桿菌素 A溶液和粘桿菌素 B溶液，分別將粘桿菌素 A溶液和粘桿菌素 B 溶液采用二級逆流反萃取、噴霧干燥后得到硫酸粘桿菌素 A和硫酸粘桿菌素 B的鹽粉末。
2. 按照權(quán)利要求1所述的從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素 A和粘桿菌素 B的方法， 其特征在于所述絮凝劑為氨甲基聚苯乙烯或陽離子聚丙烯酰胺。
3. 按照權(quán)利要求1所述的從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素 A和粘桿菌素 B的方法， 其特征在于所述高速離心分離機進行二級逆流萃取的工藝條件為： a萃取溫度：0?KTC， b V粘桿菌素濾液.V有機溶媒=1 . 5?10，
所述有機溶媒為醋酸丁酯和丁醇的混合物，其中丁醇的含量為5%?10%， c pH ：一級萃取pH控制在8?9,二級萃取pH控制在9?10， d萃余液效價低于1000u/ml。
4. 按照權(quán)利要求1所述的從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素 A和粘桿菌素 B的方法， 其特征在于所述層析是以DEAE高流速瓊脂糖微球為填充劑、醋酸丁酯為洗脫劑進行的，其 中填充劑用量為萃取液體積的3?5%，填充劑的徑高比控制在5 : 1，洗脫劑用量為萃取液 體積的40?50%，層析過程中，控制萃取液溫度0?KTC，每次萃取液上樣量為填充劑用量 20 ?30%。
5. 按照權(quán)利要求1所述的從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素 A和粘桿菌素 B的方法， 其特征在于所述二級逆流反萃取的控制參數(shù)為： a溫度控制在0?5°C; b pH :-級控制pH值3. 5?4. 5 ;二級控制pH值2. 0?3. 0 ; c效價：廢醋酸丁酯效價低于500 μ /ml ; d濃度：硫酸溶液濃度為3. 6?3.8% (W/V); e攪拌時間：加酸后攪拌時間：一級反萃取20?35min ;二級反萃取15?25min ; f澄明度：反萃取液澄清透明，無可見溶媒； g水相用量： 一級反卒?。篤硫酸濾液.V擁溶媒=1 . 3?5 (L/L) 一級反卒?。篤硫酸濾液.V有機溶媒=1 . 5?8(L/L)。
6. 按照權(quán)利要求1所述的從粘桿菌素發(fā)酵液中分離粘桿菌素 A和粘桿菌素 B的方法， 其特征在于所述噴霧干燥過程中，控制進料壓力：6?12MPa ;進料轉(zhuǎn)速：250?450r/min ; 進風溫度：140?160°C ;出風溫度：30?60°C ;塔內(nèi)溫度60?80°C。
【文檔編號】C07K1/36GK104231056SQ201410432706
【公開日】2014年12月24日 申請日期:2014年8月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月29日
【發(fā)明者】任勇, 奇乃, 李小萍, 董媛 申請人:寧夏泰瑞制藥股份有限公司