一種可預防胃潰瘍的發(fā)酵乳桿菌Lactobacillus fermentum Lee及其保健用圖
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物技術領域，尤其涉及一種可預防胃潰瘍的發(fā)酵乳桿菌 LactobacillusfermentumLee及其用途。
【背景技術】
[0002] 乳桿菌與人類生活關系密切，是廣泛應用于食品發(fā)酵、工業(yè)乳酸發(fā)酵及醫(yī)療保健 領域中的有益微生物之一?，F已認識的乳桿菌屬和雙歧桿菌屬中的許多種都具有特定的優(yōu) 良性質和遺傳性狀，表現出極強的益生菌特性。乳桿菌不僅能夠提高食品營養(yǎng)價值，改善并 賦予食品風味，減少香精香料等在食品中的添加，延長保存時間，還可以改善食品的功能性 質。它能夠通過分解食物中的蛋白質、糖類、合成維生素，提高食物的消化率和生物價，促進 消化吸收，防治便秘，防治細胞老化。還能夠減少人體膽固醇含量，改善血脂，增強免疫功 能、抗變異原性、抗腫瘤、抗高血壓等。近年來，乳桿菌以其特殊的生理活性和營養(yǎng)功能而成 為益生菌的主要來源，正日益引起人們的重視。
[0003] 胃潰瘍是消化性潰瘍中最常見的一種，在我國發(fā)病率較高，可發(fā)生于任何年齡，尤 以青壯年居多。胃潰瘍表現為胃粘膜組織損傷，也會引發(fā)組織出現炎癥。胃潰瘍的臨床表 現為上腹疼痛呈反復周期性發(fā)作，多表現為鈍痛、灼痛或饑餓樣痛，絕大部分人可出現各種 消化不良的癥狀，但是有的也無任何癥狀，直至出現并發(fā)癥。嚴重的并發(fā)癥主要有出血、穿 孔、癌變等，若不及時處理，可導致2. 5%~8.0%的病死率。出現胃潰瘍的癥狀下由于胃部 不適，患者進食困難，慢性胃潰瘍患者長期進食困難，還會引起營養(yǎng)不良、免疫力下降等問 題。部分患者可出現潰瘍惡化，嚴重影響患者身體健康和生活質量。一般來說胃潰瘍本身 不會引起患者死亡，一般經藥物治療后，癥狀緩解或消失，但潰瘍愈合質量差，停藥后極易 復發(fā)，給患者的身心健康帶來極大的危害。因此，尋找一種能夠代替藥物來預防胃潰瘍的生 物制品有很大的現實意義，微生態(tài)療法恰是以一個嶄新的手段解決了傳統(tǒng)療法存在的多種 問題。
[0004] 國內外對乳酸菌的生理功能有大量的研究報道，但對乳酸菌預防胃潰瘍的功能性 研究報道很少。關于乳酸菌預防胃潰瘍的研究對食品科學、預防醫(yī)學和微生態(tài)學等許多學 科都有很大價值。發(fā)酵乳制品是人們攝入乳酸菌的一條重要渠道，篩選優(yōu)良的具有預防胃 潰瘍和安全的乳酸菌菌株，對于開發(fā)功能性乳制品、豐富現有乳制品種類、提高乳品的附加 值將具有重要意義。因此，具有預防胃潰瘍的乳酸菌具很大的研究和應用價值。
[0005] 在目前已經公開的文獻與專利或專利申請中，例如CN104489687A公開了一株副 干酪乳桿菌與中藥材提取物復配，可用于預防和治療非酒精性脂肪肝。CN104450586A公開 了一種干酪乳桿菌及其組合物，所提供的干酪乳桿菌對糖肽類、單環(huán)內酰胺類和碳青 霉烯類抗生素及磺胺具有耐受性，適用于食品、藥品和/或保健品中。CN103333847A公開一 株發(fā)酵乳桿菌，能夠促進體內膽固醇的轉化和分解，能有效降血脂。CN103756926A公開了一 株具有耐酸性，在體內外對銅離子有較好的耐受能力的植物乳桿菌，可用于制備緩解銅毒 性的藥物組合物和發(fā)酵食品中。CN1796540A公開了具有抗腸道致病菌和抗氧化特性的雙歧 桿菌及其用途，用于制備食品組合物或藥物組合物，殺死或抑制幽門螺旋桿菌或大腸桿菌， 治療由其引起的各種疾病。CN104430847A和CN104381440A采用相同發(fā)酵乳預防便秘保健 用途。但是，這些專利或專利申請沒有完全涉及具有預防胃潰瘍性能的微生物或其功能。因 此，目前還需要有一種具有預防胃潰瘍的微生物及其含有它們的食品。

【發(fā)明內容】

[0006] 為了解決上述問題，本發(fā)明的目的是提供一種可預防胃潰瘍的發(fā)酵乳桿菌及其用 途，主要提供一種可預防胃潰瘍的發(fā)酵乳桿菌菌株和提供一種所述發(fā)酵乳桿菌在發(fā)酵食品 中的用途。
[0007] 本發(fā)明提供的一種可預防胃潰瘍的發(fā)酵乳桿菌（LactobacillusfermentumLee) 已于2013年10月25日保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心（中國.武漢.武漢大學），保藏 編號CCTCCN0:M2013512。
[0008] 從自然發(fā)酵牦牛酸乳中篩選出一株發(fā)酵乳桿菌（Lactobacillusfermentum Lee)，利用形態(tài)特征、培養(yǎng)性狀和生理生化特征等微生物學特性對該乳酸桿菌 (LactobacillusfermentumLee)鑒定為發(fā)酵乳桿菌，該菌株已于2013年10月30日保藏 于中國典型培養(yǎng)物保藏中心（CCTCC)，保藏編號CCTCCM2013512。
[0009] 所述發(fā)酵乳桿菌的形態(tài)學特征具體為：
[0010] 菌體特征：呈革蘭氏染色陽性，細胞桿狀，菌體約0. 5-1. 0ym寬，1. 5-4ym長，成 單、成對或者成鏈，不形成芽孢，兩端圓形。
[0011] 菌落特征：在MRS培養(yǎng)基上形成明顯的菌落，直徑在0. 5-2. 0mm之間，圓形，邊緣整 齊，乳白色，透明，表面濕潤光滑，不產生色素。
[0012] 所述發(fā)酵乳桿菌體內耐受特征為：發(fā)酵乳桿菌的菌株耐酸性較強，在pH3. 0的人 工胃液下3h后存活率為40. 48±1. 84% ;在0. 3%濃度膽鹽下存活率達到60% ;發(fā)酵乳桿 菌細胞的疏水性為15. 17±6. 20%。
[0013] 本發(fā)明的目的還在于提供可預防胃潰瘍LactobacillusfermentumLee發(fā)酵乳桿 菌的保健用途：所述發(fā)酵乳桿菌制得的發(fā)酵乳桿菌工作發(fā)酵劑添加到乳制發(fā)酵食品中，所 述發(fā)酵乳桿菌工作發(fā)酵劑的制備步驟包括：將所述發(fā)酵乳桿菌的原始菌種接種于MRS液體 培養(yǎng)基中，在37°C條件下培養(yǎng)12-16h進行活化，連續(xù)活化兩代，然后將活化培養(yǎng)物按2-4% (體積）接種于MRS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)16-18h，在4°C條件下4000r/min離心15min，去除上清 夜，得到細胞沉淀，將沉淀用無菌脫脂乳制成懸浮液，得到工作發(fā)酵劑。
[0014] 所述乳制發(fā)酵食品包含乳酸菌奶飲料、乳粉、膠囊制品和發(fā)酵乳。
[0015] 所述含有發(fā)酵乳桿菌的乳酸菌奶飲料是按照下述步驟制備得到的：
[0016] 所述發(fā)酵乳桿菌的原始菌種在溫度_75°C下以30% (重量）甘油懸液形式保存， 或者在溫度4°C下以冷凍干燥菌粉的形式保存?zhèn)溆茫?br>[0017] 原料乳在95°C下加熱殺菌20min或在140°C下高溫熱殺菌2s，冷卻到4°C，加入所 述發(fā)酵乳桿菌工作發(fā)酵劑，使其濃度達到106cfu/mL以上，在4°C冷藏保存。
[0018] 所述含有發(fā)酵乳桿菌的乳粉是按照下述步驟制備得到的：
[0019] 所述發(fā)酵乳桿菌的原始菌種在溫度_75°C下以30% (重量）甘油懸液形式保存， 或者在溫度4°C下以冷凍干燥菌粉的形式保存?zhèn)溆茫?br>[0020] 原料乳在95°C下加熱殺菌20min或在140°C下高溫熱殺菌2s，然后冷卻到37°C， 再以原料乳體積的4%接菌量接種所述的發(fā)酵乳桿菌工作發(fā)酵劑，37°C下發(fā)酵16h，得到發(fā) 酵乳桿菌發(fā)酵乳；所述發(fā)酵乳桿菌發(fā)酵乳和滅菌后的原料乳按照1:3(V:V)配比加入，進行 均質，真空濃縮、噴霧干燥得到含發(fā)酵乳桿菌的乳粉。
[0021] 所述含有發(fā)酵乳桿菌的膠囊制品是按照下述步驟制備得到的：
[0022] 所述發(fā)酵乳桿菌的原始菌種在溫度_75°C下以30% (重量）甘油懸液形式保存， 或者在溫度4°C下以冷凍干燥菌粉的形式保存?zhèn)溆茫?br>[0023] 將原料乳在140°C高溫熱殺菌2s，然后冷卻至37°C，以原料乳體積的4%接菌量接 種所述發(fā)酵乳桿菌工作發(fā)酵劑，在37°C下發(fā)酵16h，得到發(fā)酵乳桿菌發(fā)酵乳；將所述發(fā)酵乳 桿菌發(fā)酵乳和滅菌后的原料乳按照以1:3(V:V))配比加入，均質，真空濃縮、噴霧干燥處理 后得到乳粉，將得到含有發(fā)酵乳桿菌的膠囊制品。
[0024] 所述含有發(fā)酵乳桿菌的發(fā)酵乳是按照下述步驟制備得到的：
[0025] 所述發(fā)酵乳桿菌的原始菌種在溫度_75°C下以30% (重量）甘油懸液形式保存， 或者在溫度4°C下以冷凍干燥菌粉的形式保存?zhèn)溆茫?br>[0026] 原料乳在95°C下加熱殺菌20min或在140°C下高溫熱殺菌2s，然后冷卻到37°C， 再按照3-5% (體積）加入發(fā)酵乳桿菌工作發(fā)酵劑，再加入3-5% (體積）可共生的用于制 備發(fā)酵乳制品的發(fā)酵劑，混勻后在37°C下混菌發(fā)酵至滴定酸度以乳酸計0. 6-0. 7%，然后 冷卻至4°C，再進行冷藏保存得到含有發(fā)酵乳桿菌的發(fā)酵乳。
[0027] 所述發(fā)酵乳桿菌工作發(fā)酵劑的制備方法包括：
[0028] 將所述發(fā)酵乳桿菌的原始菌種接種于12% (重量）的脫脂乳中，110°C滅菌 lOmin，在37°C條件下培養(yǎng)14-16h至凝乳，連續(xù)培養(yǎng)活化兩代，用作母發(fā)酵劑；將所述母 發(fā)酵劑按3-5% (體積）接種于滅菌乳中，培養(yǎng)14-16h至凝乳，此時該凝乳中的活菌數約 109cfu/mL，得到工作發(fā)酵劑，可以直接將這種工作發(fā)酵劑添加到食品中，或者與可共生的 制備發(fā)酵乳的商業(yè)發(fā)酵劑如保加利亞乳桿菌和嗜熱鏈球菌一起使用制備發(fā)酵乳；或
[0029] 將所述發(fā)酵乳桿菌的原始菌種接種于MRS液體培養(yǎng)基中，在37°C條件下培養(yǎng) 12-16h進行活化，連續(xù)活化兩代，然后將活化培養(yǎng)物按2-4% (體積）接種于